CN104521759B - 一种通脱木组织培养快速繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

一种通脱木组织培养快速繁殖方法，属于农业种植技术领域，该方法是以通脱木幼叶、幼茎或幼芽作为外植体，经表面消毒、愈伤组织诱导、丛芽分化培养与增殖、生根诱导、炼苗与移栽而成。本发明首次建立了通脱木的组织培养快速繁殖技术体系，操作方法简便易行，繁殖系数高，每60天可增殖20‑25倍，组培苗生根率达98%以上，炼苗移栽成活率达92%以上，能进行规模化生产。

Description

一种通脱木组织培养快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及农业种植技术领域，具体为一种野生药用植物通脱木的组织培养快速繁殖方法。
背景技术
通脱木(Tetrapanax papyriferus )为伞形目五加科通脱木属，落叶灌木或小乔木。树干通直不分枝，叶大多裂，伞形花序，茎粗壮形，髓白色，俗称“通草”，在我国陕西南部及其以南地区有分布。通脱木具有重要的园林观赏与药用价值，具有利尿、清热解毒和消肿通乳等功效。将茎的髓部组织取出，可制作外科敷料，同时也是制作宣纸的原料，可做水彩画纸。由于通脱木种子播种后难以萌发成苗，目前多通过根蘖移植。由于近年来通脱木药材市场看好，野生资源遭到滥采，造成野生通脱木资源逐渐匮乏。
植物组织培养又称离体培养，是通过无菌操作，在人工控制条件下将植物活器官、组织或细胞置于培养基内进行连续培养成细胞、组织或个体。植物组织培养具有不受气候、土壤、时间等条件限制、生长周期短及繁殖系数高的优点，可以大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地。目前尚没有发现报道通脱木组织培养的相关文献。
在组织培养过程中，培养基不同激素配比、不同外植体的取材都会影响愈伤组织的形成和植株再生。因此，开展不同植物生长调节剂对通脱木愈伤组织形成与再分化的影响研究，有利于筛选出一种高效快速的通脱木再生方法，为通脱木的规模化生产研究奠定良好基础。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：针对上述现有技术中通脱木种子难以萌发成苗，分根繁殖又受季节因素限制的不足，提供一种通脱木组织培养快速繁殖方法。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种通脱木组织培养快速繁殖方法，该方法步骤如下：
（1）外植体的选取：选取通脱木幼叶（长、宽为0.5-1.5cm大小）、幼茎（切成1-2cm长的小段）或幼芽作为外植体，消毒后以无菌水冲洗3-5次；其中，消毒是先以70%体积浓度的酒精进行表面消毒10-30秒后，再以0.1%质量浓度的升汞消毒5-12min；
（2）愈伤组织诱导：将消毒后的外植体接种到添加有1.5-3.0mg/L NAA和1.0-2.0mg/L 6-BA的MS固体培养基中，进行愈伤组织诱导培养20-30天。培养条件：温度22-26℃，光照每天14h，光照强度1400-2000lx；
（3）丛生芽的诱导：将培养好的愈伤组织或幼芽接种到添加有0.05-0.20mg/L NAA和1.0-2.0mg/L 6-BA的MS固体培养基中，进行芽分化诱导培养20-30天。培养条件：温度22-26℃，光照每天14h，光照强度1400-2000lx；
（4）芽增殖与壮苗：将培养好的丛生芽接种到添加有0.04-0.06mg/L NAA、1.0-2.0mg/L 6-BA、0.05-0.5mg/L GA3的MS固体培养基中，进行芽苗增殖和壮苗培养15-25天。培养条件：温度22-26℃，光照每天14h，光照强度1400-2000lx；
（5）生根诱导：切取培养好的壮苗转接入添加有0.2-0.4mg/L NAA的1/2 MS固体培养基中，生根诱导培养15-25天，获得生根的试管苗。培养条件：温度22-26℃，光照每天14h，光照强度1400-2000lx；
（6）炼苗和移栽：将试管苗转移到炼苗室内，炼苗至完全成活后连同营养基质一起移栽到大田。其中，炼苗是于炼苗室内，将试管苗于自然光下放置3-5天，然后打开瓶盖继续放置2-3天，再从瓶中取出试管苗，洗净附着在试管苗根部的琼脂培养基，移栽到泥炭土：河沙：蛭石按1：1：1的体积比配制成的基质中，定植后浇透水，期间控制温度为18-25℃，空气相对湿度为80-90%，培养2-3周。
上述各步骤中用到的MS固体培养基中还添加有7-8g/L琼脂和30g/L蔗糖，pH为5.8。
本发明首次建立了通脱木的组织培养快速繁殖技术体系，本操作方法简便易行，繁殖系数高，每60天可增殖20-25倍，组培苗生根率达98%以上，炼苗移栽成活率达92%以上，为规模化种植提供了种苗和技术保障，为实现野生资源的开发利用和种质保存奠定了技术基础。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
以下实施例所用的MS固体培养基中均添加有7.5g/L琼脂和30g/L蔗糖，pH为5.8。
实施例1
选取通脱木幼嫩叶片作为外植体，切成长、宽为0.5-1.5cm大小，以70%体积浓度的酒精进行表面消毒30s后，再以0.1%质量浓度的升汞消毒10min，无菌水冲洗4次后接种到MS固体培养基+1.5mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA的愈伤组织诱导培养基中，于22-26℃进行愈伤组织诱导培养25天（光照每天14小时，光照强度为1700lx）；将培养好的愈伤组织转接到MS固体培养基+0.05mg/L NAA +1.0mg/L 6-BA的丛芽分化培养基中，于22-26℃培养25天（光照每天14小时，光照强度为1700lx）；将培养好的丛生芽接种到MS固体培养基+0.05mg/L NAA+1.5mg/L 6-BA+0.1mg/L GA3的增殖和壮苗培养基中，于22-26℃进行芽苗增殖和壮苗培养20天（光照每天14小时，光照强度为1700lx）；切取培养好的壮苗转接1/2MS固体培养基+0.3mg/L NAA的生根培养基中于22-26℃诱导生根20天（光照每天14小时，光照强度为1700lx），得生根的试管苗，将试管苗转移到炼苗室自然光下放置4天，然后打开瓶盖继续放置2天，然后从瓶中取出试管苗，洗净附着在试管苗根部的琼脂培养基，移栽到泥炭土：河沙：蛭石（体积比为1：1：1）配制成的基质中，定植后浇透水，期间控制温度为18-25℃，空气相对湿度为80-90%，培养2周，待其完全成活后连同营养基质一起移栽到大田。
实施例2
选取通脱木幼茎作为外植体，幼茎切成1-2cm长的小段，以70%体积浓度的酒精进行表面消毒20秒后，再以0.1%质量浓度的升汞消毒12min，无菌水冲洗5次后接种到MS固体培养基+2.0mg/L NAA+1.5mg/L 6-BA的愈伤组织诱导培养基中，于22-26℃进行愈伤组织诱导培养20天（光照每天14小时，光照强度为2000lx）；将培养好的愈伤组织转接到MS固体培养基+0.1mg/L NAA+1.5mg/L 6-BA的丛芽分化培养基中于22-26℃培养20天（光照每天14小时，光照强度为2000lx）；将培养好的丛生芽接种到MS固体培养基+0.04mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+0.05mg/L GA3的增殖和壮苗培养基中，于22-26℃进行增殖和壮苗培养15天（光照每天14小时，光照强度为2000lx）；切取培养好的壮苗转接1/2MS固体培养基+0.2mg/L NAA的生根培养基中于22-26℃诱导生根15天（光照每天14小时，光照强度为2000lx），获得生根的试管苗，将试管苗转移到炼苗室自然光下放置3天，然后打开瓶盖继续放置3天，然后从瓶中取出试管苗，洗净附着在试管苗根部的琼脂培养基，移栽到泥炭土：河沙：蛭石（体积比为1：1：1）配制成的基质中，定植后浇透水，期间控制温度为18-25℃，空气相对湿度为80-90%，培养3周，待其完全成活后连同营养基质一起移栽到大田。
实施例3
挑选通脱木根上萌发的幼芽，用刀片从幼芽基部切下，作为外植体，以70%体积浓度的酒精进行表面消毒10s后，再以0.1%质量浓度的升汞消毒5min，无菌水冲洗3次后接种到MS固体培养基+3.0mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA的愈伤组织诱导培养基中，于22-26℃进行愈伤组织诱导培养30天（光照每天14小时，光照强度为1400lx）；将诱导获得的愈伤组织转接到MS固体培养基+0.20mg/L NAA +2.0mg/L 6-BA的丛芽分化培养基中于22-26℃培养30天（光照每天14小时，光照强度为1400lx）；将培养好的丛生芽接种到MS固体培养基+0.06mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA+0.5mg/L GA3的增殖和壮苗培养基中，于22-26℃进行增殖和壮苗培养25天（光照每天14小时，光照强度为1400lx）；将培养好的壮苗转接1/2MS固体培养基+0.4mg/L NAA的生根培养基中于22-26℃诱导生根25天（光照每天14小时，光照强度为1400lx），得生根的试管苗，将试管苗转移到炼苗室自然光下放置5天，然后打开瓶盖继续放置2天，然后从瓶中取出试管苗，洗净附着在试管苗根部的琼脂培养基，移栽到泥炭土：河沙：蛭石（体积比为1：1：1）配制成的基质中，定植后浇透水，期间控制温度为18-25℃，空气相对湿度为80-90%，培养2.5周，待其完全成活后连同营养基质一起移栽到大田。

Claims (3)

1.一种通脱木组织培养快速繁殖方法，其特征在于，该方法步骤如下：
(1)外植体的选取：选取通脱木幼叶、幼茎或幼芽作为外植体，将外植体先以70％体积浓度的酒精进行表面消毒10-30s后，再以0.1％质量浓度的升汞消毒5-12min，无菌水冲洗3-5次；
(2)愈伤组织诱导：将消毒后的外植体接入添加有1.5-3.0mg/L NAA和1.0-2.0mg/L 6-BA的MS固体培养基中进行愈伤组织诱导培养20-30天，培养条件：温度22-26℃，光照每天14h，光照强度1400-2000lx；
(3)丛生芽的诱导：将培养好的愈伤组织或幼芽接种到添加有0.05-0.20mg/L NAA和1.0-2.0mg/L 6-BA的MS固体培养基中，进行芽分化诱导培养20-30天，培养条件：温度22-26℃，光照每天14h，光照强度1400-2000lx；
(4)芽增殖与壮苗：将培养好的丛生芽接种到添加有0.04-0.06mg/L NAA、1.0-2.0mg/L 6-BA、0.05-0.5mg/L GA3的MS固体培养基中，进行芽苗增殖和壮苗培养15-25天，培养条件：温度22-26℃，光照每天14h，光照强度1400-2000lx；
(5)生根诱导：切取培养好的壮苗转接入添加有0.2-0.4mg/L NAA的1/2MS固体培养基中，进行生根诱导培养15-25天，获得生根的试管苗，培养条件：温度22-26℃，光照每天14h，光照强度1400-2000lx；
(6)炼苗和移栽：将试管苗转移到炼苗室内，炼苗至完全成活后连同营养基质一起移栽到大田。
2.如权利要求1所述的一种通脱木组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤(2)-(5)中的MS固体培养基中还添加有7-8g/L琼脂和30g/L蔗糖，pH为5.8。
3.如权利要求1所述的一种通脱木组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤(6)中的炼苗是在炼苗室内，将试管苗自然光下放置3-5天，然后打开瓶盖继续放置2-3天，再从瓶中取出试管苗，洗净附着在试管苗根部的琼脂培养基，移栽到泥炭土∶ 河沙∶ 蛭石按1∶ 1∶ 1的体积比配制成的基质中，定植后浇透水，期间控制温度为18-25℃，空气相对湿度为80-90％，培养2-3周。
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