CN104542284A - 一种露珠杜鹃的组培快速繁殖方法 - Google Patents

一种露珠杜鹃的组培快速繁殖方法 Download PDF

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张启翔
郭颖
罗乐
程堂仁
潘会堂
王佳
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Abstract

本发明提供了一种露珠杜鹃组培快速繁殖方法，该方法采用组织培养技术，对种子播种出的无菌苗的带芽茎段进行丛生芽诱导，继而长成完整植物。按照本发明提供的方法进行露珠杜鹃的组织培养，露珠杜鹃种子的萌发率可达45～60％，同时污染率可以控制在35％以下；在丛生芽的诱导阶段，20左右即开始出现不定芽，一个半月后，丛生芽明显增多，诱导率最高可达100％；在丛生芽的繁殖和伸长培养阶段，芽苗生长健壮，单株可高达3cm，繁殖系数高达4.6；在生根培养阶段，15天左右即开始有根长出，40天后生根率可达85％以上，根长可至3～4cm；可以成功实现露珠杜鹃的组培快速繁殖。

Description

一种露珠杜鹃的组培快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术，具体涉及一种露珠杜鹃的组培快速繁殖方法。
背景技术
露珠杜鹃(Rhododendron irroratum Franch)属于杜鹃花科(Ericaceae)杜鹃花属常绿无鳞杜鹃亚属，露珠杜鹃亚组中美丽、黄色大花型种类。它主要分布在四川西南部，贵州西北部及云南北部地区海拔1800～2000m的山顶灌木林中或稀草地上，常绿灌木或小乔木，高达4～8m。花期3～5月，果期9～10月，是美丽的观赏花木。露珠杜鹃是优良的、有待研究开发的园林绿化树种，可引种驯化成为露地栽培的园艺观赏植物，是杜鹃育种的重要种质资源。
露珠杜鹃具有很大的观赏价值，近年来，关于同属其他种植物的研究颇多，但露珠杜鹃的研究报道很少，主要是在栽培方面。露珠杜鹃的种子和扦插繁殖，由于出苗率低、常绿阔叶杜鹃枝条粗壮、稀少，扦插生根困难，移栽成活率低，又受季节和资源的限制，很难大规模育苗。为了更好的保护、开发、利用露珠杜鹃资源，研究露珠杜鹃组培快繁技术具有重要意义。由于露珠杜鹃对于生长条件有严格的要求，其组培快速繁殖具有一定的困难，目前未见相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种培养周期短、不受季节限制、并且产量较高的露珠杜鹃带芽茎段组培快速繁殖方法，以克服现有技术的不足。
本发明提供了一种露珠杜鹃组培快速繁殖方法。该方法采用组织培养技术，对种子播种出的无菌苗的带芽茎段进行丛生芽诱导，继而长成完整植物。
具体而言，本发明提供的方法包括以下步骤：
(1)在无菌条件下，将当年的露珠杜鹃种子在75％酒精中浸泡25～35s，用无菌水洗净种子表面残留的酒精，在2％次氯酸钠溶液中浸泡8～12min，用无菌水洗净种子表面残留的次氯酸钠溶液，用无菌滤纸吸干种子表面水分，备用；
(2)在无菌条件下，将经步骤(1)处理后的种子抖撒在WPM培养基上，在温度24～26℃、光照时间11～13h/d、光照强度1950～2050lx的条件下进行无菌培养，种子完全萌发至无菌苗长度为2～3cm；
(3)在无菌条件下，从步骤(2)所得无菌苗上剪取1～2cm的带芽茎段接入培养基中，所述培养基包含以下成分：WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.1～1mg/L；在温度24～26℃、光照时间11～13h/d、光照强度1950～2050lx的条件下进行无菌培养，至长出丛生芽；
(4)在无菌条件下，取步骤(3)所得丛生芽，切割成单芽，转接到培养基上，所述培养基包含以下成分：WPM培养基，TDZ0.1～0.2mg/L，吲哚乙酸0.1～0.5mg/L，赤霉素3mg/L；在温度24～26℃、光照时间11～13h/d、光照强度1950～2050lx的条件下进行无菌培养，丛生芽增殖、伸长；
(5)从经步骤(4)培养后的丛生芽中选出健康芽苗，将内有芽苗的封口培养瓶在室内放置2～3天后，每天打开培养瓶口1～2h并重复2～3天，将芽苗移至培养瓶外，将芽苗基部的培养基洗净，移栽入基质中，所述基质由等体积的草炭与珍珠岩组成；在温度19～21℃、湿度60～70％、光照时间11～13h/d、光照强度1950～2050lx的条件下进行培养，至生根。
本发明所述步骤(1)中，种子在2％次氯酸钠溶液中浸泡的时间优选为10min。
所述步骤(2)中，优选培养基的组成为：WPM培养基，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L。
所述步骤(3)中，优选培养基的组成为：：WPM培养基，TDZ0.2mg/L，吲哚乙酸0.1mg/L，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L。
所述步骤(4)中，优选培养基的组成为：：WPM培养基，TDZ0.2mg/L，吲哚乙酸0.1mg/L，赤霉素3mg/L，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L。
由于露珠杜鹃在自然状态下生长于酸性土壤中，本发明所述各个步骤的培养基/基质为酸性环境，pH值优选为5.4～5.6。
本发明提供的方法可以成功实现露珠杜鹃的组培快速繁殖。按照本发明提供的方法进行露珠杜鹃的组织培养，露珠杜鹃种子的萌发率可达45～60％，同时污染率可以控制在35％以下；在丛生芽的诱导阶段，20左右即开始出现不定芽，一个半月后，丛生芽明显增多，诱导率最高可达100％；在丛生芽的繁殖和伸长培养阶段，芽苗生长健壮，单株可高达3cm，繁殖系数高达4.6；在生根培养阶段，15天左右即开始有根长出，40天后生根率可达85％以上，根长可至3～4cm。本发明提供的方法易于控制，效果显著。
附图说明
图1，为实施例1中，步骤(2)所述抖撒在培养基上的种子；
图2，为实施例1中，步骤(2)所述开始萌发的种子，有少量无菌苗出现；
图3，为实施例1中，步骤(2)所得无菌苗；
图4，为实施例1中，步骤(3)所得丛生芽；
图5，为实施例1中，经步骤(4)培养所得丛生芽；
图6，为实施例1中，步骤(5)所述在基质中栽培的芽苗；
图7，为实施例1中，步骤(5)所得40天后生出的须根，根长3～4cm。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
按照以下步骤快速繁殖露珠杜鹃：
(1)在无菌条件下，将当年的露珠杜鹃种子在75％酒精中浸泡30s，用无菌水洗净种子表面残留的酒精，在2％次氯酸钠溶液中浸泡10min，用无菌水洗净种子表面残留的次氯酸钠溶液，用无菌滤纸吸干种子表面水分，备用；
(2)在无菌条件下，将经步骤(1)处理后的种子抖撒在pH5.5的培养基上，所述培养基由以下成分组成：WPM培养基，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L；在温度25℃、光照时间12h/d、光照强度2000lx的条件下进行无菌培养，种子完全萌发至无菌苗长度为2～3cm；发芽率为59.7％，污染率为13.2％；
(3)在无菌条件下，从步骤(2)所得无菌苗上剪取长1～2cm的带芽茎段接入pH5.5的培养基中，所述培养基由以下成分组成：WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.1mg/L，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L；在温度25℃、光照时间12h/d、光照强度2000lx的条件下进行无菌培养；10天后，芽点开始膨大，培养至20天开始出现不定芽，一个半月后，丛生芽明显增多，诱导率达到了100％，繁殖系数为3.5；
(4)在无菌条件下，取步骤(3)所得丛生芽，切割成单芽，转接到pH5.5的培养基上，所述培养基由以下成分组成：WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.1mg/L，赤霉素3mg/L，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L；温度25℃、光照时间12h/d、光照强度2000lx的条件下进行无菌培养；40天后基部长出丛生芽，芽苗生长健壮，单株可达3cm左右，繁殖系数为4.6；
(5)从经步骤(4)培养后的丛生芽中选出颜色嫩绿的健康芽苗，将内有芽苗的封口培养瓶在室内放置3天后，每天打开培养瓶口1h并连续重复3天，将芽苗移至培养瓶外，将芽苗基部的培养基洗净，移栽入pH5.5的基质中，所述基质由等体积的草炭与珍珠岩组成；置于人工气候箱中，在温度25℃、湿度65％、光照时间12h/d、光照强度2000lx的条件下进行培养；15天后，基部开始有根长出，40天后，生根率为85.7％，生根数量大于15条，有须根，根长3～4cm。
实施例2
与实施例1相比，区别仅在于，步骤(1)所述在2％次氯酸钠溶液中浸泡的时间为8min；步骤(2)所得种子的发芽率为61.8％，污染率为36.3％。
实施例3
与实施例1相比，区别仅在于，步骤(1)所述在2％次氯酸钠溶液中浸泡的时间为12min；步骤(2)所得种子的发芽率为43.6％，污染率为9.6％。
实施例4
与实施例1相比，区别仅在于，步骤(3)所述培养基组成为：WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸1mg/L，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L；该步骤丛生芽诱导率为74％，繁殖系数为2.3。
实施例5
与实施例1相比，区别仅在于，步骤(4)所述培养基组成为：WPM培养基，TDZ 0.1mg/L，吲哚乙酸0.5mg/L，赤霉素3mg/L，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L；该步骤单株可达2.5～3cm，繁殖系数为4.3。
根据以上实施例所得结果可知，本发明提供的方法可以成功实现露珠杜鹃的组培快速繁殖。
对比例1
与实施例1相比，区别仅在于：步骤(1)所述在2％次氯酸钠溶液中浸泡的时间为6min；步骤(2)所得种子的发芽率为45.5％，污染率为59.7％。
对比例2
与实施例1相比，区别仅在于：步骤(1)所述在2％次氯酸钠溶液中浸泡的时间为14min；步骤(2)所得种子的发芽率仅为28％。
对比例3
与实施例1相比，区别仅在于：步骤(3)所述培养基中，由ZT代替TDZ；当ZT浓度为0.1mg/L时，该步骤丛生芽的诱导率仅为8.33％，当ZT浓度为1mg/L时，该步骤丛生芽的诱导率仅为25％。
对比例4
与实施例1相比，区别仅在于：步骤(3)所述培养基中，由浓度为0.5mg/L的2ip代替TDZ；该步骤丛生芽的诱导率仅为7.7％.
对比例5
与实施例1相比，区别仅在于：降低步骤(4)所述培养基中赤霉素的浓度；当赤霉素浓度为0时，该步骤所得丛生芽不伸长；当培养基中赤霉素浓度为1mg/L，该步骤所得丛生芽高度仅可达0.5～1cm。
对比例6
与实施例1相比，区别仅在于，步骤(5)所述基质中，由蛭石代替草炭，该步骤所得生根率仅为37.5％，根长1～1.5cm。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (8)

1.一种露珠杜鹃组培快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)在无菌条件下，将当年的露珠杜鹃种子在75％酒精中浸泡25～35s，用无菌水洗净种子表面残留的酒精，在2％次氯酸钠溶液中浸泡8～12min，用无菌水洗净种子表面残留的次氯酸钠溶液，用无菌滤纸吸干种子表面水分，备用；
(2)在无菌条件下，将经步骤(1)处理后的种子抖撒在WPM培养基上，在温度24～26℃、光照时间11～13h/d、光照强度1950～2050lx的条件下进行无菌培养，种子全部萌发至无菌苗长度为2～3cm；
(3)在无菌条件下，从步骤(2)所得无菌苗上剪取1～2cm的带芽茎段接入培养基中，所述培养基包含以下成分：WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.1～1mg/L；在温度24～26℃、光照时间11～13h/d、光照强度1950～2050lx的条件下进行无菌培养，至长出丛生芽；
(4)在无菌条件下，取步骤(3)所得丛生芽，切割成单芽，转接到培养基上，所述培养基包含以下成分：WPM培养基，TDZ0.1～0.2mg/L，吲哚乙酸0.1～0.5mg/L，赤霉素3mg/L；在温度24～26℃、光照时间11～13h/d、光照强度1950～2050lx的条件下进行无菌培养，丛生芽增殖、伸长；
(5)从经步骤(4)培养后的丛生芽中选出健康芽苗，将内有芽苗的封口培养瓶在室内放置2～3天后，每天打开培养瓶口1～2h并重复2～3天，将芽苗移至培养瓶外，将芽苗基部的培养基洗净，移栽入基质中，所述基质由等体积的草炭与珍珠岩组成；在温度19～21℃、湿度60～70％、光照时间11～13h/d、光照强度1950～2050lx的条件下进行培养，至生根。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述在2％次氯酸钠溶液中浸泡的时间为10min。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述培养基由以下成分组成：WPM培养基，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述培养基由以下成分组成：WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.1mg/L，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述培养基由以下成分组成：WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.1mg/L，赤霉素3mg/L，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L。
6.根据权利要求1～5任意一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)、(3)、(4)所述培养基的pH值为5.4～5.6。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(5)所述基质的pH值为5.4～5.6。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤:
(1)在无菌条件下，将当年的露珠杜鹃种子在75％酒精中浸泡30s，用无菌水洗净种子表面残留的酒精，在2％次氯酸钠溶液中浸泡10min，用无菌水洗净种子表面残留的次氯酸钠溶液，用无菌滤纸吸干种子表面水分，备用；
(2)在无菌条件下，将经步骤(1)处理后的种子抖撒在pH5.4～5.6的培养基上，所述培养基由以下成分组成：WPM培养基，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L；在温度25℃、光照时间12h/d、光照强度2000lx的条件下进行无菌培养，种子完全萌发至无菌苗长度为2～3cm；
(3)在无菌条件下，从步骤(2)所得无菌苗上剪取长1～2cm的带芽茎段接入pH5.4～5.6的培养基中，所述培养基由以下成分组成：WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.1mg/L，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L；在温度25℃、光照时间12h/d、光照强度2000lx的条件下进行无菌培养，至长出丛生芽；
(4)在无菌条件下，取步骤(3)所得丛生芽，切割成单芽，转接到pH5.4～5.6的培养基上，所述培养基由以下成分组成：WPM培养基，TDZ 0.2mg/L，吲哚乙酸0.1mg/L，赤霉素3mg/L，蔗糖30mg/L，琼脂7.5mg/L；温度25℃、光照时间12h/d、光照强度2000lx的条件下进行无菌培养，丛生芽增殖、伸长；
(5)从经步骤(4)培养后的丛生芽中选出健康芽苗，将内有芽苗的封口培养瓶在室内放置3天后，每天打开培养瓶口1h并重复3天，将芽苗移至培养瓶外，将芽苗基部的培养基洗净，移栽入pH5.4～5.6的基质中，所述基质由等体积的草炭与珍珠岩组成；温度25℃、湿度60～70％、光照时间12h/d、光照强度2000lx的条件下进行培养，至生根。
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