CN103404438A - 一种鸡爪槭种子组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种鸡爪槭种子组织培养方法，它包括以下步骤：种子储藏：于每年10月份采集鸡爪槭成熟种子，将种子与沙子混合后放置于4℃的冰箱中储藏；种子消毒：将储藏的种子取出冲洗后剥离种子外壳，用酒精和升汞消毒；启动培养：启动培养基为1/2MS+GA30.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为6～7；初代培养：将萌发的种子接种于初代培养基中培养，初代培养基为1/2MS+GA30.5mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为6～7；继代培养：截取经初代培养的组培苗，使每个节段含有2～5个腋芽，将节段转移至继代培养基中培养，继代培养基为1/2MS+TDZ0.1mg/L+KT0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为6～7。本发明方法培养流程简单，操作方便，为鸡爪槭工厂化育苗提供了技术支持。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鸡爪槭种子组织培养方法。
背景技术
鸡爪槭（Acer paimatum）别名雅枫，系槭树科槭树属，是城市景观中名贵的观赏树种。原产中国长江流域，日本、朝鲜半岛也有分布。我国主要分布于长江流域各省，多生于海拔1200m以下山地、丘陵之林缘或疏林中。鸡爪槭属落叶小乔木，高约8m，树皮深灰色，当年生枝紫色或淡紫绿色；多年生枝淡灰色、紫色或深紫色。鸡爪槭叶对生，直径7-10厘米，基部截形，掌状深裂，裂片5-9个，通常7裂，裂片卵状长圆形或披针性，顶端锐尖或长锐尖，边缘有不整齐的重锯齿，嫩叶密生柔毛。叶片在春天先红后绿，到秋季变成红色。伞房花序顶生，发叶后开花，花紫红色。翅果初为紫红色，成熟后为棕黄色，小坚果球形，直径7毫米，脉纹显著；翅与小坚果共长2-2.5厘米，宽1厘米，张开成钝角。花期5月，果期9月。
鸡爪槭喜温暖、湿润气候及半阴环境，不耐涝，较耐旱，在阳光直射处孤植夏季易遭日灼之害；适生于肥沃、湿润而排水良好之土壤，耐寒性不强，酸性、中性及石灰质土均能适应，是近年来竞相培育的优良观赏树种。
鸡爪槭具有极高的观赏价值，对城市景观的表现具有相当重要的作用，高速公路绿化带、公园、广场、小区绿地等地方随处可见到其优美的身姿。我国著名的苏州古典园林中的留园西部假山周围遍植鸡爪槭，春夏绿叶如盖，秋季红叶似火，与山水、亭台构成一副绝妙的美景；南京的植物园红枫园极具特色，树体高大，气势非凡的鸡爪槭是其主体树种。鸡爪槭不仅能给城市绿化增加了绿量，而且能给城市风景增添绚丽多姿的色彩，极大地丰富城市景观，使城市景观充满活力与生机；同时，该植物具有较高的药用价值，其枝条、叶片可熬制成药，具有行气止痛，去毒消肿等功效。因此栽鸡爪槭具有很高的园林观赏价值和良好的经济效益。
组织培养是指在无菌条件下利用人工培养基对植物组织进行培养，是生物工程研究的基础，是进行遗传转化和植物改良研究的基本环节。相比利用幼穗、叶、茎等为外植体的组织培养方法，以种子为外植体进行组织培养具有不受季节限制和取材方便的优点。中国专利CN102067758A公布了鸡爪槭的组织培养快速繁殖方法，该方法是采用NN69为基本培养基，通过一系列的灭菌过程后，对鸡爪槭茎段进行离体培养，利用激素调控，建立起鸡爪槭的快速繁殖体系，成功地培养出完整的生根的再生植株，移栽成活率达到90%左右。该方法虽然克服了鸡爪槭常规育苗周期长，扦插繁殖系数低等缺点，实现了鸡爪槭苗木的工厂化生产，但是该方法采用茎为外植体，取材受季节的限制，且不方便。
发明内容
本发明的目的即在于克服现有技术的不足，提供一种鸡爪槭种子组织培养方法，该方法培养流程简单，操作方便，为鸡爪槭工厂化育苗提供了技术支持。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种鸡爪槭种子组织培养方法，它包括以下步骤：
S1. 种子储藏：于每年10月份采集鸡爪槭成熟种子，将种子与沙子混合，混合体积为1:3，沙子的湿度为手握成团而不滴水，松开时裂开，混合后放置于4℃的冰箱中储藏；
S2. 种子消毒：将储藏的种子取出，于流水中冲洗5～10min，在超净工作台内用手术刀和镊子剥离种子外壳，用75%酒精处理15～20s，然后放入0.1%的升汞中处理5～10min，无菌水冲洗4～6次；
S3. 启动培养：将消毒后的种子接种于启动培养基中培养，其中，启动培养基为1/2MS+GA3 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为6～7，培养条件为：光照强度2800～3200LX，光照14～18h，温度22～26℃，培养3～4周，经启动培养，种子开始萌发；
S4. 初代培养：将萌发的种子接种于初代培养基中培养，其中，初代培养基为1/2MS+ GA3 0.5mg/L+NAA 0.05 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为6～7，培养条件为：光照强度2800～3200LX，光照14～18h，温度22～26℃，培养6～7周，经初代培养，鸡爪槭植株开始生根，生根数为2～4，根长3～5cm，植株生长4～6cm，增殖系数为3～5；
S5. 继代培养：截取经初代培养的组培苗，使每个节段含有2～5个腋芽，将节段转移至继代培养基中培养，其中，继代培养基为1/2MS+TDZ 0.1mg/L+KT 0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为6～7，培养条件为：光照强度2800～3200LX，光照14～18h，温度22～26℃，培养6～7周，经继代培养后，在植株的叶腋处将重新分化出新的腋芽。
本发明的有益效果是：本发明采用鸡爪槭种子组织培养方法，既可繁殖优良品种，又可从种子实生苗中选择优异鸡爪槭株；由于是以种子为外植体进行组织培养，克服了季节的限制，取材也方便。本发明方法培养流程简单，操作方便，为鸡爪槭工厂化育苗提供了技术支持。
附图说明
图1为启动培养基中的鸡爪槭种子示意图；
图2为启动培养后的鸡爪槭无菌实生苗示意图；
图3为采用节段法继代培养的鸡爪槭组培苗示意图；
图4为继代培养后的鸡爪槭组培苗示意图；
图5为鸡爪槭继代培养组培苗根系示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所述。
实施例1：一种鸡爪槭种子组织培养方法，它包括以下步骤：
S1. 种子储藏：于每年10月份采集鸡爪槭成熟种子，将种子与沙子混合，混合体积为1:3，沙子的湿度为手握成团而不滴水，松开时裂开，混合后放置于4℃的冰箱中储藏；
S2. 种子消毒：将储藏的种子取出，于流水中冲洗5min，在超净工作台内用手术刀和镊子剥离种子外壳，用75%酒精处理15s，然后放入0.1%的升汞中处理5min，无菌水冲洗4次；
S3. 启动培养：将消毒后的种子接种于启动培养基中培养，其中，启动培养基为1/2MS+GA3 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为6，培养条件为：光照强度2800LX，光照14h，温度22℃，培养3周，经启动培养，种子开始萌发；
S4. 初代培养：将萌发的种子接种于初代培养基中培养，其中，初代培养基为1/2MS+ GA30.5mg/L+NAA0.05 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为6，培养条件为：光照强度2800LX，光照14h，温度22℃，培养6周，经初代培养，鸡爪槭植株开始生根，生根数为2，根长3cm，植株生长4cm，增殖系数为3；
S5. 继代培养：截取经初代培养的组培苗，使每个节段含有2个腋芽，将节段转移至继代培养基中培养，其中，继代培养基为1/2MS+TDZ0.1mg/L+KT0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为6，培养条件为：光照强度2800LX，光照14h，温度22℃，培养6周，经继代培养后，在植株的叶腋处将重新分化出新的腋芽。
实施例2：一种鸡爪槭种子组织培养方法，它包括以下步骤：
S1. 种子储藏：于每年10月份采集鸡爪槭成熟种子，将种子与沙子混合，混合体积为1:3，沙子的湿度为手握成团而不滴水，松开时裂开，混合后放置于4℃的冰箱中储藏；
S2. 种子消毒：将储藏的种子取出，于流水中冲洗10min，在超净工作台内用手术刀和镊子剥离种子外壳，用75%酒精处理20s，然后放入0.1%的升汞中处理10min，无菌水冲洗6次；
S3. 启动培养：将消毒后的种子接种于启动培养基中培养，其中，启动培养基为1/2MS+GA30.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为7，培养条件为：光照强度3200LX，光照18h，温度26℃，培养4周，经启动培养，种子开始萌发；
S4. 初代培养：将萌发的种子接种于初代培养基中培养，其中，初代培养基为1/2MS+ GA30.5mg/L+NAA0.05 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为7，培养条件为：光照强度3200LX，光照18h，温度26℃，培养7周，经初代培养，鸡爪槭植株开始生根，生根数为4，根长5cm，植株生长6cm，增殖系数为5；
S5. 继代培养：截取经初代培养的组培苗，使每个节段含有5个腋芽，将节段转移至继代培养基中培养，其中，继代培养基为1/2MS+TDZ0.1mg/L+KT0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为7，培养条件为：光照强度3200LX，光照18h，温度26℃，培养7周，经继代培养后，在植株的叶腋处将重新分化出新的腋芽。
实施例3：一种鸡爪槭种子组织培养方法，它包括以下步骤：
S1. 种子储藏：于每年10月份采集鸡爪槭成熟种子，将种子与沙子混合，混合体积为1:3，沙子的湿度为手握成团而不滴水，松开时裂开，混合后放置于4℃的冰箱中储藏；
S2. 种子消毒：将储藏的种子取出，于流水中冲洗8min，在超净工作台内用手术刀和镊子剥离种子外壳，用75%酒精处理18s，然后放入0.1%的升汞中处理7min，无菌水冲洗5次；
S3. 启动培养：将消毒后的种子接种于启动培养基中培养，其中，启动培养基为1/2MS+GA30.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为7，培养条件为：光照强度3000LX，光照15h，温度24℃，培养3.5周，经启动培养，种子开始萌发；
S4. 初代培养：将萌发的种子接种于初代培养基中培养，其中，初代培养基为1/2MS+ GA30.5mg/L+NAA0.05 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为6，培养条件为：光照强度3100LX，光照15h，温度24℃，培养6.5周，经初代培养，鸡爪槭植株开始生根，生根数为3，根长4cm，植株生长5cm，增殖系数为4；
S5. 继代培养：截取经初代培养的组培苗，使每个节段含有3个腋芽，将节段转移至继代培养基中培养，其中，继代培养基为1/2MS+TDZ0.1mg/L+KT0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为6，培养条件为：光照强度2900LX，光照15h，温度23℃，培养6.5周，经继代培养后，在植株的叶腋处将重新分化出新的腋芽。
实施例4：一种鸡爪槭种子组织培养方法，它包括以下步骤：
S1. 种子储藏：于每年10月份采集鸡爪槭成熟种子，将种子与沙子混合，混合体积为1:3，沙子的湿度为手握成团而不滴水，松开时裂开，混合后放置于4℃的冰箱中储藏；
S2. 种子消毒：将储藏的种子取出，于流水中冲洗5min，在超净工作台内用手术刀和镊子剥离种子外壳，用75%酒精处理20s，然后放入0.1%的升汞中处理7min，无菌水冲洗4次；
S3. 启动培养：将消毒后的种子接种于启动培养基中培养，其中，启动培养基为1/2MS+GA30.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为7，培养条件为：光照强度3000LX，光照14h，温度26℃，培养3周，经启动培养，种子开始萌发；
S4. 初代培养：将萌发的种子接种于初代培养基中培养，其中，初代培养基为1/2MS+ GA30.5mg/L+NAA0.05 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为7，培养条件为：光照强度3200LX，光照15h，温度22℃，培养7周，经初代培养，鸡爪槭植株开始生根，生根数为3，根长5cm，植株生长5cm，增殖系数为4；
S5. 继代培养：截取经初代培养的组培苗，使每个节段含有3个腋芽，将节段转移至继代培养基中培养，其中，继代培养基为1/2MS+TDZ0.1mg/L+KT0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为6，培养条件为：光照强度3200LX，光照14h，温度21℃，培养6周，经继代培养后，在植株的叶腋处将重新分化出新的腋芽。
Claims (2)
1.一种鸡爪槭种子组织培养方法，其特征在于，它包括以下步骤：
S1. 种子储藏：于每年10月份采集鸡爪槭成熟种子，将种子与沙子混合，混合体积为1:3，混合后放置于4℃的冰箱中储藏；
S2. 种子消毒：将储藏的种子取出，于流水中冲洗5～10min，在超净工作台内用手术刀和镊子剥离种子外壳，用75%酒精处理15～20s，然后放入0.1%的升汞中处理5～10min，无菌水冲洗4～6次；
S3. 启动培养：将消毒后的种子接种于启动培养基中培养，其中，启动培养基为1/2MS+GA3 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为6～7，培养条件为：光照强度2800～3200LX，光照14～18h，温度22～26℃，培养3～4周，经启动培养，种子开始萌发；
S4. 初代培养：将萌发的种子接种于初代培养基中培养，其中，初代培养基为1/2MS+GA3 0.5mg/L+NAA 0.05 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为6～7，培养条件为：光照强度2800～3200LX，光照14～18h，温度22～26℃，培养6～7周，经初代培养，鸡爪槭植株开始生根，生根数为2～4，根长3～5cm，植株生长4～6cm，增殖系数为3～5；
S5. 继代培养：截取经初代培养的组培苗，使每个节段含有2～5个腋芽，将节段转移至继代培养基中培养，其中，继代培养基为1/2MS+TDZ 0.1mg/L+KT 0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为6～7，培养条件为：光照强度2800～3200LX，光照14～18h，温度22～26℃，培养6～7周，经继代培养后，在植株的叶腋处将重新分化出新的腋芽。
2.根据权利要求1所述的一种鸡爪槭种子组织培养方法，其特征在于，所述步骤S1中沙子的湿度为手握成团而不滴水，松开时裂开。
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