CN108077070A - 一种槭树组织培养用培养基及培养方法 - Google Patents
一种槭树组织培养用培养基及培养方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种槭树组织培养用培养基及其组织培养方法，该培养基包括种子萌发培养基、芽诱导培养基和生根培养基，进一步的还包括愈伤组织诱导培养基；所述愈伤组织诱导培养基的成分包括1/2MS+0.05mg/L TDZ+0.1mg/L 6‑BA+0.8mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂。本发明方法采用槭树的种子作为外植体，不需要考虑外植体的采取时期，方法简单，增殖系数高，生根率高，为大规模工厂化生产育苗提供了技术支持。
Description
技术领域
本发明涉及一种槭树组织培养用培养基及培养方法，属于植物组织培养技术领域。
背景技术
槭树姿态优美，叶形独特，叶片颜色多种多样，是一种极具观赏价值的彩色树种，被广泛应用于城市园林绿化，既起到妆点城市的作用，又起到净化空气的作用。但是目前槭树存在苗木价高，种植困难，不能适应大规模工厂化生产育苗的问题，并且由于木本植物繁殖困难，目前关于槭树组织培养方面的研究并不太多。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种槭树组织培养用培养基及其培养方法，以提高槭树的增殖系数和生根率，为大规模工厂化生产育苗提供技术支持。
为解决以上技术问题，本发明的技术方案首先提供了一种槭树组织培养用培养基，它包括种子萌发培养基、芽诱导培养基和生根培养基；
所述种子萌发培养基的成分包括MS+0.05mg/L TDZ+0.5mg/L GA3+6g/L琼脂；
所述芽诱导培养基的成分包括1/2MS+0.05mg/L TDZ+0.1mg/L 6-BA+0.1mg/L IAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂；
所述生根培养基的成分包括1/2MS+0.2mg/L IBA+0.1mg/L NAA+0.1mg/L IAA+20g/L蔗糖+6g/L琼脂。
进一步的，本发明槭树组织培养用培养基还包括愈伤组织诱导培养基，所述愈伤组织诱导培养基的成分包括1/2MS+0.05mg/L TDZ+0.1mg/L 6-BA+0.8mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂。
同时，本发明还提供了一种槭树组织培养方法，它包括以下步骤：
(1)外植体的选择：选择槭树当年所结种子作为组织培养外植体材料；
(2)外植体的处理：在超净工作台上将剥去外壳的槭树种子放入酒精溶液中振荡10～20s后取出，无菌水冲洗3次，再转入升汞溶液中振荡7min取出，无菌水冲洗5次，然后将槭树种子浸泡在无菌水中,放入摇床中摇24h后取出，用无菌纸擦掉种皮；
(3)种子萌发培养：将步骤(2)处理好的种子接种到上述的种子萌发培养基上进行培养，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h；
(4)丛生芽培养：切取步骤(3)种子萌发出的含有腋芽的茎段接种到上述的芽诱导培养基上进行丛生芽诱导培养，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h；
(5)生根培养：将步骤(4)芽诱导培养基上生长为2～3cm的丛生芽剪下接种到上述的生根培养基上进行生根培养，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h。
进一步的，本发明方法还包括不定芽培养和生根培养步骤，具体为将步骤(3)种子萌发出的未含有腋芽的茎段和叶片接种到权利要求2所述的愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织培养，然后将培养得到的愈伤组织接种到权利要求1所述的芽诱导培养基上培养得到不定芽，最后将不定芽接种到权利要求1所述的生根培养基上进行生根培养。
进一步的，所述步骤(2)中酒精溶液的体积浓度为75％。
进一步的，所述步骤(2)中升汞溶液的质量浓度为0.1％。
进一步的，所述步骤(2)中无菌水每次冲洗的时间为20～30s。
进一步的，所述步骤(2)中摇床的转速为100rpm。
与现有技术相比，本发明提供了一种用于槭树组织培养的培养基及其组织培养方法，该培养基包括种子萌发培养基、愈伤组织诱导培养基、芽诱导培养基和生根培养基，采用槭树当年所结种子作为外植体材料，通过适当的处理后接种到种子萌发培养基上，种子萌发成苗，其萌发率高达80％以上，为后续增殖系数的提高和生根率的提高提供基础，含有腋芽的茎段进行丛生芽培养、未含腋芽的茎段和叶片进行愈伤组织不定芽培养得到丛生芽和不定芽，后续经生根培养15天后生根，为槭树种植提供了大量的苗木资源。本发明方法采用槭树的种子作为外植体，不需要考虑外植体的采取时期，方法简单，增殖系数高，生根率高，为大规模工厂化生产育苗提供了技术支持。
附图说明
图1为槭树种子接种到种子萌发培养基上后种子萌发的示意图；
图2为槭树丛生芽诱导生长情况示意图；
图3为槭树不定芽诱导生长情况示意图；
图4为槭树生根培养生根情况示意图。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。
一、本发明方法步骤简介
本发明提供的槭树的组织培养方法，包括以下步骤：
1、外植体的选择和处理
选择槭树当年所结种子作为组织培养外植体材料；在超净工作台上将剥去外壳的槭树种子放入体积浓度75％的酒精溶液中振荡10～20s后取出，无菌水冲洗3次，再转入质量浓度0.1％的升汞溶液中振荡7min取出，无菌水冲洗5次，无菌水每次冲洗的时间为20～30s，然后将槭树种子浸泡在无菌水中,放入摇床中摇24h后取出，摇床转速控制为100rpm，然后用无菌纸擦掉种子表面的种皮。
2、种子萌发培养
将步骤1处理好的种子接种到种子萌发培养基(MS+0.05mg/L TDZ+0.5mg/L GA3+6g/L琼脂)上进行种子萌发培养，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h，7天后种子萌发成苗，参见图1，种子萌发率为83％。
3、丛生芽诱导培养和不定芽诱导培养
切取步骤2种子萌发的苗，将含有腋芽的茎段接种到芽诱导培养基(1/2MS+0.05mg/L TDZ+0.1mg/L 6-BA+0.1mg/L IAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂)上培养，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h，30天后有丛生芽的形成，参见图2，增殖系数为5；将未含有腋芽的茎段和叶片接种到愈伤组织诱导培养基(1/2MS+0.05mg/L TDZ+0.1mg/L 6-BA+0.8mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂)上进行愈伤组织培养，30天后形成愈伤组织，然后将培养得到的愈伤组织接种到芽诱导培养基(1/2MS+0.05mg/L TDZ+0.1mg/L 6-BA+0.1mg/L IAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂)上培养得到不定芽，参见图3。
4、生根培养
切取步骤3培养得到的丛生芽和不定芽接种到生根培养基(1/2MS+0.2mg/L IBA+0.1mg/L NAA+0.1mg/L IAA+20g/L蔗糖+6g/L琼脂)上进行生根培养，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h，15天后有根生长，参见图4。
二、最优方案确定
(1)种子萌发培养基的确定
将上述步骤1处理好的种子分别接种到下述培养基(均添加6g/L琼脂)中,按照步骤2的培养条件培养7天，观察其种子萌发情况，具体见下表1。
表1.不同浓度的GA3对槭树种子萌发的影响
(2)丛生芽诱导基的确定
切取上述步骤2种子萌发的苗，将含有腋芽的茎段分别接种到下述不同成分的培养基(均添加有30g/L蔗糖和6g/L琼脂)上,培养30天后观察其增殖情况，具体见下表2。
表2.不同基础培养基对槭树丛生芽诱导的影响
(3)愈伤组织诱导培养基的确定
切取上述步骤2种子萌发的苗，将未含有腋芽的茎段和叶片分别接种到下述不同成分的培养基(均添加有30g/L蔗糖和6g/L琼脂)上,培养30天后观察其愈伤组织形成情况，具体见下表3。
表3.不同浓度TDZ对槭树愈伤组织诱导的影响
(4)生根培养基的确定
将上述步骤3培养得到的丛生芽和不定芽分别接种到下表中不同成分的生根培养基(均添加有20g/L蔗糖和6g/L琼脂)上,培养15天，观察其生长情况，计算其生根率，具体见下表4。
表4.不同植物生长调节剂组成对槭树生根培养的影响
综上，本发明提供的槭树组织培养用培养基及组织培养方法，增殖系数高，生根率高，为大规模工厂化生产育苗提供了技术支持。
前述MS均指现有植物组培领域中常规使用的培养基MS组分，1/2MS即指常规使用的培养基MS组分中大量元素减半、其余成分保持不变。
WPM指现有植物组培领域中常规使用的培养基WPM组分。
GA3为市售赤霉素GA3，是一种植物生长调节剂，主要用于促进作物的生长发育，提早成熟，提高产量和打破种子、块茎、鳞茎等器官的休眠，促进发芽、分蘖、抽苔，提高果实结果率，生理作用主要有:改变某些作物雌、雄花比例，诱导单性结实，加速果实生长，促进座果；打破种子休眠，提早种子发芽，加快茎的伸长及有些作物的抽苔；扩大叶面积，加快幼枝生长，有利于代谢产物在韧皮部内积累，活化形成层；抑制成熟和衰老，控制侧芽休眠及块茎的形成。
TDZ是一种市售的新型植物生长调节剂，具有很强的细胞分裂素活性(CTK)，它的CTK活性要比一般CTK高几十倍至几百倍，研究表明:它可以促进植物芽的再生和繁殖，打破芽的休眼，促进种子萌发，促进愈伤组织生长，延缓植物衰老等，并且可以对其它的植物生长调节剂和生理活性物质的作用来调节植物的生长发育过程，是一个作用力很强的植物生长调节剂。
NAA为市售萘乙酸，是一种促进植物根系生长的植物生长调节剂，具有促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根，增加坐果，防止落果，改变雌、雄花比率等作用。
6-BA为市售6-苄氨基腺嘌呤，是一种细胞分裂素类植物生长调节剂，主要作用是促进芽的形成，诱导愈伤组织发生。
IAA为市售吲哚乙酸，是一种植物生长素，具有促进和抑制生长的作用。
IBA为市售吲哚丁酸，是一种植物生长素类似物，用于促使插条生根，具有促进植物主根生长，提高发芽率、成活率的作用。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种槭树组织培养用培养基，其特征在于：包括种子萌发培养基、芽诱导培养基和生根培养基；
所述种子萌发培养基的成分包括MS+0.05mg/L TDZ+0.5mg/L GA3+6g/L琼脂；
所述芽诱导培养基的成分包括1/2MS+0.05mg/L TDZ+0.1mg/L 6-BA+0.1mg/L IAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂；
所述生根培养基的成分包括1/2MS+0.2mg/L IBA+0.1mg/L NAA+0.1mg/L IAA+20g/L蔗糖+6g/L琼脂。
2.根据权利要求1所述的一种槭树组织培养用培养基，其特征在于：还包括愈伤组织诱导培养基，所述愈伤组织诱导培养基的成分包括1/2MS+0.05mg/L TDZ+0.1mg/L 6-BA+0.8mg/L NAA+30g/L蔗糖+6g/L琼脂。
3.一种槭树组织培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)外植体的选择：选择槭树当年所结种子作为组织培养外植体材料；
(2)外植体的处理：在超净工作台上将剥去外壳的槭树种子放入酒精溶液中振荡10～20s后取出，无菌水冲洗3次，再转入升汞溶液中振荡7min取出，无菌水冲洗5次，然后将槭树种子浸泡在无菌水中,放入摇床中摇24h后取出，用无菌纸擦掉种皮；
(3)种子萌发培养：将步骤(2)处理好的种子接种到权利要求1所述的种子萌发培养基上进行培养，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h；
(4)丛生芽培养：切取步骤(3)种子萌发出的含有腋芽的茎段接种到权利要求1所述的芽诱导培养基上进行丛生芽诱导培养，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h；
(5)生根培养：将步骤(4)芽诱导培养基上生长为2～3cm的丛生芽剪下接种到权利要求1所述的生根培养基上进行生根培养，培养条件为温度25±2℃，光照2000Lx，光周期14/10h。
4.根据权利要求3所述的一种槭树组织培养方法，其特征在于：还包括不定芽培养和生根培养步骤，具体为将步骤(3)种子萌发出的未含有腋芽的茎段和叶片接种到权利要求2所述的愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织培养，然后将培养得到的愈伤组织接种到权利要求1所述的芽诱导培养基上培养得到不定芽，最后将不定芽接种到权利要求1所述的生根培养基上进行生根培养。
5.根据权利要求3所述的一种槭树组织培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中酒精溶液的体积浓度为75％。
6.根据权利要求3所述的一种槭树组织培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中升汞溶液的质量浓度为0.1％。
7.根据权利要求3所述的一种槭树组织培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中无菌水每次冲洗的时间为20～30s。
8.根据权利要求3所述的一种槭树组织培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中摇床的转速为100rpm。
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