CN102144541A - “三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法。该方法包括胚培养直接成苗、幼苗温室内穴盘种植和半成苗附生树干栽培等三个步骤，简化了铁皮石斛生产工艺技术，缩短了育苗时间，提高了铁皮石斛试管种苗的质量和移栽成活率。本方法中试管苗的生产时间为6～7个月，而常规的试管育苗时间需要10～12个月。通过本发明得到的铁皮石斛药材茎干粗短，石斛多糖含量高达36％～48％，其外型形态体现为“龙头凤尾”特征，是加工“龙头凤尾”铁皮枫斗的必备原料。本发明中的半成苗附生树干技术十分适合山区农户栽培铁皮石斛，投资小，收益高，农户不需建立温室，只要购买穴盘苗，且栽培技术容易掌握，该技术是服务“三农”的实用技术。

Description

“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法

技术领域

本发明属于植物組培养育苗及栽培技术领域，特别涉及一种“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法。

背景技术

铁皮石斛是一种兰科气生植物，是非常珍稀名贵的野生中药材，铁皮石斛加工为颖片又称为铁皮枫斗。“龙头凤尾”是铁皮枫斗之珍品。铁皮石斛性微寒，味甘，入肺、胃、肾经，有滋阴补肾，清热生津，益智安神，强精壮骨之功效。一千多年前，道家医学经典《道藏》将铁皮石斛列为“中华九大仙草”之首，民间更将其称为“救命仙草”。现代药理学分析表明，铁皮石斛含有多种生物碱、石斛宁碱、石斛奥可斯碱、石斛胺等；铁皮石斛提取的多糖具有增强T细胞、B细胞、NK细胞和巨噬细胞功能的作用，是一类前景可喜的重要免疫增强剂，并具有抗肿瘤、抗癌作用。在医学临床上，铁皮石斛常用于体质虚弱，病后康复及肿瘤癌症患者放化疗后的治疗上，也是养生滋补的佳品。野生铁皮石斛已经采摘怠尽，采用生物技术手段，通过组织培养生产铁皮石斛种苗是解决铁皮石斛资源的短缺的唯一手段。由于铁皮石斛的特殊性，至今对铁皮石斛的组织培养育苗和栽培技术生产研究不够深入，更没有涉及铁皮石斛品质的技术研究。如何生产“龙头凤尾”型铁皮石斛未见报道。现有关于铁皮石斛栽培的研究有：

专利申请号为200710066268.5，发明名称为“一种铁皮石斛全光照人工栽培方法”的专利申请公开了一种铁皮石斛的栽培方法，该发明是在设置有喷灌装置的栽培苗床中进行全光照条件下栽培铁皮石斛，喷水和定期喷施营养液。该方法除需要配置喷雾装置外，更需要配备性能可靠的喷雾装置；在全光照下，如果喷雾装置失灵，则导致铁皮石斛灼伤而生长受阻，因此会限制该方法的实用性发挥。

申请号为200810150738.0的国家专利申请，公开了一种铁皮石斛组培繁育及仿野生栽培方法。该发明在大棚内作畦仿野生生态栽培，畦的平面基层具有间隔透气孔，上层是栽培基质，幼苗按12×8cm的行、株距栽培。这种栽培方法实际上就是一种研究如何提高成活率的栽培技术，是常规的栽培方法，未涉及栽培质量研究。

申请号为200910036502.9国家专利申请公开了一种铁皮石斛种苗的繁殖方法，其特征是将生长健壮的铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)母株人工授粉得到的果实消毒杀菌后切开，种子萌发后形成原球茎并进一步形成小苗，再将试管繁殖来的小苗用试管开花培养基培养，开花后选择生长健壮的植株进行试管内人工授粉，果实成熟后切开进行无菌播种，使种子长成小植株。这种方法育苗速度慢，获得种源的操作烦琐，实用性差。因此该方法特别是试管内人工授粉技术很难实现商业化操作。

虽然对于铁皮石斛试管种苗的栽培试验研究较多，但仅限于组织培养育苗、栽培及提高移栽成活率等方面的研究，侧重于产量和栽培方法技术，对于铁皮石斛生产质量或者品质的研究还未涉及。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法。

本发明的另一目的在于提供所述“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法，包括以下步骤：

(1)第一步，胚培养成苗：将铁皮石斛成熟果荚表面消毒；在无菌操作条件下，切开果荚，收集种胚，将种胚均匀铺开于LCY培养基表面，试管培育，暗光下培养10～20天，种胚膨大，再按照白天(12小时)给予1000～1500Lux光照；当种胚萌发成绿色小芽，将绿色小芽转接到LVB培养基上培养至生根；然后将生根苗移植到LPY培养基上，待每簇苗长成5～6条根系，苗高9～10cm，将试管苗移入温室炼苗，控制光照1500～3000Lux，温度23～25℃；

LCY培养基为在LV培养基中添加椰子水和酵母提取物，其中每升LV培养基中含有质量百分比10～15％椰子水和2000～3000毫克酵母提取物；

LVB培养基为在LV培养基中添加香蕉泥，其中每升LV培养基中含有质量百分比10～15％香蕉泥；

LPY培养基为在LV培养基中添加去皮土豆泥和酵母提取物，其中每升LV培养基中含有质量百分比10～15％去皮土豆泥和2000～3000毫克酵母提取物；

LV培养基的组成为每升含有磷酸钙180～220毫克，硝酸钾500～550毫克，磷酸二氢钾230～270毫克，七水硫酸镁230～270毫克，硫酸铵480～520毫克，四水硫酸锰50～100毫克，七水硫酸亚铁25～30毫克，乙二氨四乙酸二钠35～40毫克，烟酸0.5毫克，盐酸硫胺素0.1毫克，盐酸吡哆醇0.5毫克，甘氨酸2毫克，蔗糖20000～30000毫克以及卡拉胶6000毫克；

(2)第二步，幼苗温室内穴盘移栽：洗净温室移栽苗根系上的培养基，用水苔顺根包裹移栽到穴盘中，置于温室苗床上培养；施3000～4000倍(质量比)花多多营养液，1次/周，保持温室内通风，控制光照1500～3000Lux，温度23～28℃，相对湿度75～90％，至移栽苗的根系布满穴盘；

(3)第三步，半成苗附生树干栽培：在粤北地区选择海拔高度为200～800米的林木区，清除地上杂草，再进行地面消毒；选择树干直径为20cm以上的树，去除小枝条，清洁树干，树干作为铁皮石斛附生栽培的支撑体；将步骤(2)得到的穴盘苗取出，附树干栽培，竹签钉植，用铁筛网环绕固定，定植株距×行距(层距)为(5～10)×(20～25)cm，株间空隙用水苔填充；保持空气相对湿度60～80％，温度为自然温度，常规管理，2年后采收二年生的铁皮石斛老茎，即得到“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料；

所述“龙头凤尾”优质铁皮石斛是茎干短而粗壮，其石斛多糖相当于干重质量36～48％的铁皮石斛；

步骤(1)中所述的消毒优选为用体积百分比70～75％乙醇溶液浸泡铁皮石斛成熟果荚5～10min后并用酒精灯火焰灼烧2～3秒钟；

步骤(1)中所述的试管优选为组织培养瓶；

步骤(1)中所述的种胚在LCY培养基上培养的时间优选为30～45天；

步骤(1)中所述的绿色小芽在LVB培养基上培养的时间优选为60～70天；

步骤(1)中所述的生根苗在LPY培养基上培养的时间优选为60～80天；

步骤(3)中所述的消毒优选通过石灰粉进行消毒。

所述“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法应用于培育“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料。

本发明原理：本发明通过“三步法”生产技术即：胚培养直接成苗、幼苗温室内穴盘种植、半成苗附生树干栽培(或者称为挂干栽培)等三个步骤，简化了铁皮石斛生产工艺技术，缩短了育苗时间，提高了铁皮石斛试管种苗的质量和移栽成活率；本方法的试管苗的生产时间为6～7个月，而常规的试管育苗时间需要10～12个月。

第一步，胚培养直接成苗。与传统的培养方法不同的是，试管育苗是采用胚培养直接成苗方法，并且在培养基配方中没有添加任何外源激素(无激素的培养基配方)，让铁皮石斛的胚在培养基上直接发育成苗；在一个铁皮石斛的果荚中有几十万个胚，只要每个胚都能够在培养基中直接成苗，那么快速繁殖的效果就达到了；铁皮石斛的胚没有胚乳，很难萌发成苗，传统的组织培养方法是采用植物激素和外加营养物质促进胚的萌发，经过原球茎途径进行增殖，然后促进原球茎长出芽和根达到快速繁殖的目的，而我们发现铁皮石斛的胚在激素的存在下经历原球茎途径发生畸变的可能性很高，所以在激素的培养基上虽然分化很快，但畸变的分化会影响试管苗种苗的质量，其后果是试管苗的淘汰高和移栽成活率低，导致铁皮石斛不能产业化生产；本方法采用特殊的LV培养基配方与天然的添加物成分解决了组织培养种苗质量的问题；椰子水和酵母提取物的结合分别在糖类、小肽类、氨基酸类、矿物质类等多方面提供胚萌发所需要的营养物质(特别是有机小分子物质)，充当了胚乳的作用，所以椰子水和酵母提取物的加入使胚能够直接萌发；在LVB培养基(LV培养基加入香蕉)上促进根的发生；在LPY培养基(LV培养基加入土豆和酵母提取物)上使试管苗生长健壮，去皮土豆是去掉土豆皮中的不利物质；所以在第一步的胚直接成苗中又包括发芽、长根和壮苗三个环节。

第二步，幼苗在温室内进行穴盘种植是为铁皮石斛的挂干栽培(第三步)做准备的，穴盘中种植可以保证幼苗的种植标准一致，可以做到对个体幼苗有针对性的管理，同时挂干栽培时种苗脱盆不会伤及根系。

第三步，通过野外挂干栽培方式，回归自然，使铁皮石斛在高海拔山区的天然气候条件下，有效的温差和四季交替有利于铁皮石斛多糖等药用有效成分的积累，同时铁皮石斛依附树干栽培，回归了铁皮石斛气生生长特性，也可以吸收树干上特有的微量元素，丰富铁皮石斛的药效成分；高海拔山区的昼夜温差大，湿度变化大，栽培铁皮石斛的生长环境与野生铁皮石斛的生长环境相似，加上人工管理，铁皮石斛的生长表现为药材茎干粗短，石斛多糖含量高，其外型形态表现为“龙头凤尾”特征；经过检测，石斛多糖含量达到36％(质量比)以上，是加工“龙头凤尾”铁皮枫斗的理想原料。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

(1)本发明是铁皮石斛从育苗到栽培的完整的技术路线，步骤简单，容易掌握，归纳为“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛技术，是铁皮石斛生产栽培的实用模式。“三步法”生产包括试管内直接成苗(未经过原球茎或者丛芽增殖阶段)、温室过渡培养、树干附生栽培三个步骤，该技术容易掌握，是生产的实用技术。

(2)本发明的种胚试管培育直接成苗技术的培养基配方技术独特，是无激素培养技术，在未加入任何外源激素的情况下，使试管育苗时间短、速度快、质量高，从种胚培养到试管苗出瓶为6～7个月，生产周期短(常规的试管育苗时间需要10～12个月)。

(3)本发明中树干附生栽培铁皮石斛是优质铁皮石斛的生产方法，生产出的铁皮石斛药材茎干粗短，石斛多糖含量高达36％～48％，其外型形态体现为“龙头凤尾”特征，是加工“龙头凤尾”铁皮枫斗的必备原料。

(4)树干附生栽培铁皮石斛十分适合山区农户栽培铁皮石斛，投资小，收益高，农户不需建立温室，只要购买穴盘苗，且栽培技术容易掌握，因此该技术是服务“三农”的实用技术。

(5)本发明是生产优质铁皮石斛的最佳方法。铁皮石斛挂干栽培方法的产量较高，按照直径为20cm的树干进行栽培，约栽培50株，二年后则每个树干的年栽培收获量为5000～7500克，采摘的铁皮石斛茎干粗短，石斛多糖含量达到36％以上，是加工“龙头凤尾”铁皮枫斗的最佳原料。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

(1)胚培养直接成苗：将铁皮石斛成熟果荚(铁皮石斛苗购自浙江乐清市兰花协会，为通过人工异花受粉后培育5个月获得的成熟果荚)经体积百分比75％酒精表面消毒7分钟，并用酒精灯火焰灼烧浸泡后的果荚2～3秒钟，手术刀片切开果荚，将种胚收集于无菌的血清瓶中，加入5ml无菌水稀释并悬浮，汲取悬浮液1ml，在无菌的LCY培养基表面均匀铺开，暗光下培养10天后种胚膨大，再给予白天(12小时)1000Lux光照。30天后种胚萌发成绿色小芽，将绿色小芽移植到LVB培养基上，60天后将生根苗转移至LPY培养基上，再60天后每簇苗平均长成5条根系，平均苗高9cm，将试管苗移入温室炼苗10天，控制光照1500～2000Lux，温度23～24℃。

LCY培养基为在LV-1培养基中添加椰子水和酵母提取物，其中每升LV-1培养基中含有质量百分比10％椰子水和2000毫克酵母提取物。

LVB培养基为在LV-1培养基中添加香蕉泥，其中每升LV-1培养基中含有质量百分比10％香蕉泥。

LPY培养基为在LV-1培养基中添加去皮土豆泥和酵母提取物，其中每升LV-1培养基中含有质量百分比10％去皮土豆泥和2000毫克酵母提取物。

LV-1培养基的组成为每升LV-1培养基中含有磷酸钙180毫克，硝酸钾500毫克，磷酸二氢钾230毫克，七水硫酸镁230毫克，硫酸铵480毫克，四水硫酸锰50毫克，七水硫酸亚铁25毫克，乙二氨四乙酸二钠35毫克，烟酸0.5毫克，盐酸硫胺素0.1毫克，盐酸吡哆醇0.5毫克，甘氨酸2毫克，蔗糖20000毫克，卡拉胶6000毫克。

LCY培养基、LVB培养基和LPY培养基的配制为在LV-1培养基添加相应物质，然后再用水定容，灭菌后使用。

(2)幼苗温室内穴盘移栽：将培养瓶内的铁皮石斛苗取出，洗净根系上的培养基，用水苔顺根包裹移栽到塑料穴盘中，温室内设通风装置，施3000倍(质量比)花多多营养液，1次/周，控制光照1500～2500Lux，温度23～26℃，湿度75～80％，穴盘苗移栽成活率达100％，80天后移栽苗的根系布满穴盘。

(3)半成苗附生树干栽培：在粤北地区选择海拔200米的林木区，清除地上杂草，石灰水喷撒进行地面消毒，选择直径约20cm的林木，去除小枝条，并对树干进行简单的清洁，树干作为铁皮石斛附生栽培的支撑体。将步骤(2)得到的穴盘苗脱出，附树干栽培，竹签钉植，用铁筛网环绕固定，定植株距×行距(层距)为5×20cm。配备喷雾装置保持空气相对湿度80％左右，自然温度，常规管理，2年可以采收老茎，每棵树平均产量为7500克，茎干平均长12.5厘米，粗度65毫米，检测药材铁皮石斛多糖(检测方法参照顾慧芬，中成药，1999年12期：44～45，下同)含量达到36％。

实施例2

(1)胚培养直接成苗：将铁皮石斛成熟果荚经体积百分比75％酒精表面消毒7分钟，并用酒精灯火焰灼烧浸泡后的果荚2～3秒钟，手术刀片切开果荚，将种胚收集于无菌的血清瓶中，加入5ml无菌水稀释并悬浮，汲取悬浮液1ml，在无菌的LCY培养基表面均匀铺开，暗光下培养20天后种胚膨大，再给予白天(12小时)1500Lux光照。45天后种胚萌发成绿色小芽，将绿色小芽移植到LVB培养基上，70天后将生根苗转移至LPY培养基上，再80天后每簇苗平均长成6条根系，平均苗高10cm，将试管苗移入温室炼苗10天，控制光照2000～3000Lux，温度23～25℃。

LCY培养基为在LV-2培养基中添加椰子水和酵母提取物，其中每升LV-2培养基中含有质量百分比15％椰子水和3000毫克酵母提取物。

LVB培养基为在LV-2培养基中添加香蕉泥，其中每升LV-2培养基中含有质量百分比15％香蕉泥。

LPY培养基为在LV-2培养基中添加去皮土豆泥和酵母提取物，其中每升LV-2培养基中含有质量百分比15％去皮土豆泥和3000毫克酵母提取物。

LV-2培养基的组成为每升LV-2培养基中含有磷酸钙220毫克，硝酸钾550毫克，磷酸二氢钾270毫克，七水硫酸镁270毫克，硫酸铵520毫克，四水硫酸锰100毫克，七水硫酸亚铁30毫克，乙二氨四乙酸二钠40毫克，烟酸0.5毫克，盐酸硫胺素0.1毫克，盐酸吡哆醇0.5毫克，甘氨酸2毫克，蔗糖30000毫克，卡拉胶6000毫克。

LCY培养基、LVB培养基和LPY培养基的配制为在LV-2培养基添加相应物质，然后再用水定容，灭菌后使用。

(2)幼苗温室内穴盘移栽：将培养瓶内的铁皮石斛苗取出，洗净根系上的培养基，用水草顺根包裹移栽到塑料穴盘中，施4000倍(质量比)花多多营养液，1次/周，保持温室内通风，控制光照2000～3000Lux，温度25～28℃，相对湿度80～90％；移栽成活率100％，70天后移栽苗的根系布满穴盘。

(3)半成苗附生树干栽培：在粤北地区寻找海拔800米的林木区，清除地上杂草，石灰水喷撒进行地面消毒，选择直径20cm以上的中、大树，去除小枝条，并对树干进行简单的清洁，树干作为铁皮石斛附生栽培的支撑体。将上述穴盘苗脱出，附树干栽培，竹签钉植，用铁筛网环绕固定，定植株距×行距(层距)为10×25cm，株间空隙用水苔填充；保持空气相对湿度70～80％，温度为自然温度，常规管理，2年可以采收老茎，每棵树平均产量为5000克，茎干长6.5厘米，粗度75毫米，检测药材铁皮石斛多糖达到48％。

实施例3

(1)胚培养直接成苗：将铁皮石斛成熟果荚经体积百分比75％酒精表面消毒7分钟，并用酒精灯火焰灼烧浸泡后的果荚2～3秒钟，手术刀片切开果荚，将种胚收集于无菌的血清瓶中，加入5ml无菌水稀释并悬浮，汲取悬浮液1ml，在无菌的LCY培养基表面均匀铺开，暗光下培养15天后种胚膨大，再给予1500Lux光照。40天后种胚萌发成绿色小芽，将绿色小芽移植到LVB培养基上，65天后将生根苗转移至LPY培养基上，再70天后每簇苗平均长成5.5条根系，平均苗高9.6cm，作为温室移栽苗。

LCY培养基为在LV-3培养基中添加椰子水和酵母提取物，其中每升LV-3培养基中含有质量百分比13％椰子水和2500毫克酵母提取物。

LVB培养基为在LV-3培养基中添加香蕉泥，其中每升LV-3培养基中含有质量百分比13％香蕉泥。

LPY培养基为在LV-3培养基中添加去皮土豆泥和酵母提取物，其中每升LV-3培养基中含有质量百分比13％去皮土豆泥和2500毫克酵母提取物。

LV-3培养基的组成为每升LV-3培养基中含有磷酸钙200毫克，硝酸钾525毫克，磷酸二氢钾250毫克，七水硫酸镁250毫克，硫酸铵500毫克，四水硫酸锰75毫克，七水硫酸亚铁27.8毫克，乙二氨四乙酸二钠37.3毫克，烟酸0.5毫克，盐酸硫胺素0.1毫克，盐酸吡哆醇0.5毫克，甘氨酸2毫克，蔗糖25000毫克，卡拉胶6000毫克。

LCY培养基、LVB培养基和LPY培养基的配制为在LV-3培养基添加相应物质，然后再用水定容，灭菌后使用。

(2)幼苗温室内穴盘移栽：将培养瓶内的铁皮石斛苗取出，洗净根系上的培养基，用水草顺根包裹移栽到塑料穴盘中，温室内设通风装置，保持空气相对湿度80％，施3500倍(质量比)花多多营养液，1次/周，常规管理，移栽成活率100％，85天根系布满穴盘。

(3)半成苗附生树干栽培：在粤北山区寻找海拔500米的林木区，清除地上杂草，石灰水喷撒进行地面消毒，选择直径20cm以上的中、大树，去除小枝条，并对树干进行简单的清洁，树干作为铁皮石斛附生栽培的支撑体。将上述穴盘苗脱出，附树干栽培，竹签钉植，用铁筛网环绕固定，定植株距×行距(层距)为5×20cm。配备喷雾装置保持空气湿度60～80％，常规管理，2年后采收老茎，每棵树平均产量为6500克，茎干长10.5厘米，粗度75毫米，检测药材铁皮石斛多糖达到40.2％。

实施例4

(1)与实施例3的培养基配方不同。在该实施例的培养基配方中，加入了外源激素，也就是将铁皮石斛的无菌胚播种在LV-3(磷酸钙200毫克/升，硝酸钾525毫克/升，磷酸二氢钾250毫克/升，七水硫酸镁250毫克/升，硫酸铵500毫克/升，四水硫酸锰75毫克/升，七水硫酸亚铁27.8毫克/升，乙二氨四乙酸二钠37.3毫克/升，烟酸0.5毫克/升，盐酸硫胺素0.1毫克/升，盐酸吡哆醇0.5毫克/升，甘氨酸2毫克/升，蔗糖25000毫克/升，卡拉胶6000毫克/升)+13％椰子水+萘乙酸0.2毫克/升的培养基上，产生原球茎，有接近30％的原球茎不能正常发育为完整的苗，在培养的过程中被淘汰。

(2)在幼苗温室内穴盘移栽(第二步)中，移栽的方法同实施例3，但移栽成活率仅85％，不能成活的苗是因为生长发育缓慢的原因。

实施例5

(1)胚培养直接成苗，同实施例3。

(2)幼苗温室内穴盘移栽，同实施例3。

(3)穴盘苗温室内换大盆移栽：在粤北山区海拔500米的建造的温室内，将穴盘苗换入直径5厘米的塑料大盆内，栽培基质为水苔，塑料盆周边开孔通气。保持空气相对湿度60～80％，温度25～26℃，光照3000～4000Lux，施4000倍(质量比)花多多营养液，1次/周。二年后采收二年生老茎，平均茎干长为15.5厘米，平均粗度为55毫米，检测药材铁皮石斛多糖含量为31.1％。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)胚培养成苗：将铁皮石斛成熟果荚表面消毒；在无菌操作条件下，切开果荚，收集种胚，将种胚均匀铺开于LCY培养基表面，试管培育，暗光下培养10～20天，种胚膨大，再按照白天12小时给予1000～1500Lux光照；当种胚萌发成绿色小芽，将绿色小芽转接到LVB培养基上培养至生根；然后将生根苗移植到LPY培养基上，待每簇苗长成5～6条根系，苗高9～10cm，将试管苗移入温室炼苗，控制光照1500～3000Lux，温度23～25℃；

LCY培养基为在LV培养基中添加椰子水和酵母提取物，其中每升LV培养基中含有质量百分比10～15％椰子水和2000～3000毫克酵母提取物；

LVB培养基为在LV培养基中添加香蕉泥，其中每升LV培养基中含有质量百分比10～15％香蕉泥；

LPY培养基为在LV培养基中添加去皮土豆泥和酵母提取物，其中每升LV培养基中含有质量百分比10～15％去皮土豆泥和2000～3000毫克酵母提取物；

LV培养基的组成为每升含有磷酸钙180～220毫克，硝酸钾500～550毫克，磷酸二氢钾230～270毫克，七水硫酸镁230～270毫克，硫酸铵480～520毫克，四水硫酸锰50～100毫克，七水硫酸亚铁25～30毫克，乙二氨四乙酸二钠35～40毫克，烟酸0.5毫克，盐酸硫胺素0.1毫克，盐酸吡哆醇0.5毫克，甘氨酸2毫克，蔗糖20000～30000毫克以及卡拉胶6000毫克；

(2)幼苗温室内穴盘移栽：洗净温室移栽苗根系上的培养基，用水苔顺根包裹移栽到穴盘中，置于温室苗床上培养；施3000～4000倍(质量比)花多多营养液，1次/周，保持温室内通风，控制光照1500～3000Lux，温度23～28℃，相对湿度75～90％，至移栽苗的根系布满穴盘；

(3)半成苗附生树干栽培：在粤北地区选择海拔高度为200～800米的林木区，清除地上杂草，再进行地面消毒；选择树干直径为20cm以上的树，去除小枝条，清洁树干，树干作为铁皮石斛附生栽培的支撑体；将步骤(2)得到的穴盘苗取出，附树干栽培，竹签钉植，用铁筛网环绕固定，定植株距×行距为(5～10)×(20～25)cm，株间空隙用水苔填充；保持空气相对湿度60～80％，温度为自然温度，常规管理，2年后采收二年生的铁皮石斛老茎，即得到“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料。

2.根据权利要求1所述“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的消毒为用体积百分比70～75％乙醇溶液浸泡铁皮石斛成熟果荚5～10min后并用酒精灯火焰灼烧2～3秒钟。

3.根据权利要求1所述“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的试管为组织培养瓶。

4.根据权利要求1所述“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的种胚在LCY培养基上培养的时间为30～45天。

5.根据权利要求1所述“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的绿色小芽在LVB培养基上培养的时间为60～70天。

6.根据权利要求1所述“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的生根苗在LPY培养基上培养的时间为60～80天。

7.根据权利要求1所述“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法，其特征在于：步骤(3)中所述的消毒为通过石灰粉进行消毒。

8.权利要求1～7任一项所述“三步法”生产“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料的方法应用于培育“龙头凤尾”优质铁皮石斛材料。