CN106342688A - 蓝莓种苗的脱毒繁育方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及蓝莓种苗繁育技术领域，具体是涉及一种蓝莓种苗的脱毒繁育方法。选长势旺盛的幼嫩枝条，除去所有叶片，切取除顶芽外的第3～10节茎段作外植体；依次对外植体进行灭菌、初代培养、继代培养、生根培养。本发明的蓝莓种苗的脱毒繁育方法，是利用蓝莓的茎段或茎尖作为材料，在MS和MPS培养基上添加相应组合比例的激素，快速繁殖蓝莓植株体。同时，本发明筛选出适宜蓝莓外植体的培养条件等影响因素，进一步探索不同的激素对；蓝莓外植体组织培养、所育苗质量的影响及生根情况，探索最适合蓝莓外植体组织培养的激素组合及比例，并未今后蓝莓的育种工作奠定基础。

Description

蓝莓种苗的脱毒繁育方法
技术领域
本发明涉及蓝莓种苗繁育技术领域，具体是涉及一种蓝莓种苗的脱毒繁育方法。
背景技术
蓝莓果实中含有丰富的营养成分，具有防止脑神经老化、保护视力、强心、抗癌、软化血管、增强人机体免疫等功能，营养成分高。其中，由于蓝莓富含花青素，具有活化视网膜功效，可以强化视力，防止眼球疲劳而备受注目。也是世界粮农组织推荐的五大健康水果之一。并且据美国、日本、欧洲科学家研究，经常食用蓝莓制品，还可明显地增强视力，消除眼睛疲劳。医学临床报告也显示，蓝莓中的花青素可以促进视网膜细胞中的视紫质再生，预防近视，增进视力。
如何深入开展对蓝莓组织培养体系的研究，以期产业化快速培育蓝莓种苗，是现阶段蓝莓培育工作的重点课题之一。
发明内容
本发明的目的在于提供一种蓝莓种苗的脱毒繁育方法，可实现快速繁殖蓝莓植株体。
为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：
一种蓝莓种苗的脱毒繁育方法，步骤如下：
①、外植体的选择
选长势旺盛的幼嫩枝条，除去所有叶片，切取除顶芽外的第3～10节茎段作外植体；
②、外植体的灭菌
切取2～4cm带顶芽的幼嫩茎段，去叶片留叶柄，用清水洗干净，然后进行灭菌处理，灭菌后将茎段切成1～2个腋芽的小段；
③、初代培养
对外植体进行初代培养，所用基本培养基为：WPM+蔗糖+琼脂+激素；
④、继代培养
将丛生芽切割1～3cm茎段，每瓶接种4～5节，转入继代增殖培养基中继代增殖培养，3个月后观察实验情况，再进行继代增殖培养；
⑤、生根培养
在继代增殖培养基中生长的苗，一部分用以继续增殖，另外转入生根培养基进行生根培养；取1～3cm长的新梢接种到生根培养基上，接种后首先黑暗处理18～22天，然后转到光照下培养，30～40天可以移栽。
作为本发明的蓝莓种苗的脱毒繁育方法的优选技术方案：
步骤②中的灭菌处理具体为：先用75％酒精浸泡25～35s，再用0.1％升汞溶液消毒7～10min，接着用无菌水冲洗3～5次，最后用滤纸吸去水分。
步骤③中所用基本培养基中蔗糖浓度为2～3％，琼脂浓度为0.60～0.65％，激素为0.5～5.0mg/L的6-BA(6-苄氨基嘌呤)、0.01～0.05mg/L的德卡林碱和0.05～0.25mg/L的NAA(萘乙酸)。
步骤③中初代培养的综合培养条件为：pH值为4.0～5.0，121℃、131kpa的条件下灭菌15～25min，培养温度为24～26℃，空气相对湿度为55～65％，光照强度为1200～1600lx，光照10～12h/d。
步骤⑤中生根培所用培养基为1/2WPM+NAA 0.15mg/L。
本发明的蓝莓种苗的脱毒繁育方法，其有益效果表现在：
本发明的蓝莓种苗的脱毒繁育方法，是利用蓝莓的茎段或茎尖作为材料，在MS和MPS培养基上添加相应组合比例的激素，快速繁殖蓝莓植株体。同时，本发明筛选出适宜蓝莓外植体的培养条件等影响因素，进一步探索不同的激素对；蓝莓外植体组织培养、所育苗质量的影响及生根情况，探索最适合蓝莓外植体组织培养的激素组合及比例，并未今后蓝莓的育种工作奠定基础。
具体实施方式
以下将结合实施例，对本发明进行较为详细的说明。但是，实施例内容仅是对本发明所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明的构思或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。
实施例1
①、外植体的选择
试验证明：带叶柄的叶片出芽率更高，此外，蓝莓的外植体材料还可以选择剪去茎段两端多余部分后的中间部分。所以，选长势旺盛的幼嫩枝条，除去所有叶片，切取除顶芽外的第3～10节茎段作外植体。
②、外植体的灭菌
切取4cm带顶芽的幼嫩茎段，去叶片留叶柄，用清水洗干净，用75％酒精浸泡30s，0.1％升汞溶液消毒7min，无菌水冲洗3次，用滤纸吸去水分，将茎段切成1～2个腋芽的小段。
③、初代培养
外植体的初代培养所用基本培养基为：WPM+蔗糖+琼脂+激素，其中蔗糖浓度为3％，琼脂浓度为0.62％，激素为2.5mg/L的6-BA(6-苄氨基嘌呤)、0.03mg/L的德卡林碱和0.05mg/L的NAA(萘乙酸)。
综合培养条件为：pH值为5.0，121℃、131kpa的条件下灭菌25min，培养温度为25℃，空气相对湿度为55％，光照强度为1200lx，光照12h/d。
④、继代培养
将丛生芽切割2cm茎段，每瓶接种4节，转入继代增殖培养基中继代增殖培养，3个月后观察实验情况，再进行继代增殖培养。
⑤、生根培养
在继代增殖培养基中生长的苗，一部分用以继续增殖，另外转入生根培养基进行生根培养(生根培养基为1/2WPM+NAA 0.15mg/L)。取1cm长的新梢接种到生根培养基上，接种后首先黑暗处理22天，然后转到光照下培养，40天进行移栽。
实施例2
①、外植体的选择
试验证明：带叶柄的叶片出芽率更高，此外，蓝莓的外植体材料还可以选择剪去茎段两端多余部分后的中间部分。所以，选长势旺盛的幼嫩枝条，除去所有叶片，切取除顶芽外的第3～10节茎段作外植体。
②、外植体的灭菌
切取2cm带顶芽的幼嫩茎段，去叶片留叶柄，用清水洗干净，用75％酒精浸泡35s，0.1％升汞溶液消毒9min，无菌水冲洗4次，用滤纸吸去水分，将茎段切成1～2个腋芽的小段。
③、初代培养
外植体的初代培养所用基本培养基为：WPM+蔗糖+琼脂+激素，其中蔗糖浓度为2％，琼脂浓度为0.65％，激素为5.0mg/L的6-BA(6-苄氨基嘌呤)、0.05mg/L的德卡林碱和0.15mg/L的NAA(萘乙酸)。
综合培养条件为：pH值为4.0，121℃、131kpa的条件下灭菌15min，培养温度为26℃，空气相对湿度为60％，光照强度为1400lx，光照10h/d。
④、继代培养
将丛生芽切割3cm茎段，每瓶接种5节，转入继代增殖培养基中继代增殖培养，3个月后观察实验情况，再进行继代增殖培养。
⑤、生根培养
在继代增殖培养基中生长的苗，一部分用以继续增殖，另外转入生根培养基进行生根培养(生根培养基为1/2WPM+NAA 0.15mg/L)。取2cm长的新梢接种到生根培养基上，接种后首先黑暗处理18天，然后转到光照下培养，30天进行移栽。
实施例3
①、外植体的选择
试验证明：带叶柄的叶片出芽率更高，此外，蓝莓的外植体材料还可以选择剪去茎段两端多余部分后的中间部分。所以，选长势旺盛的幼嫩枝条，除去所有叶片，切取除顶芽外的第3～10节茎段作外植体。
②、外植体的灭菌
切取3cm带顶芽的幼嫩茎段，去叶片留叶柄，用清水洗干净，用75％酒精浸泡25s，0.1％升汞溶液消毒10min，无菌水冲洗5次，用滤纸吸去水分，将茎段切成1～2个腋芽的小段。
③、初代培养
外植体的初代培养所用基本培养基为：WPM+蔗糖+琼脂+激素，其中蔗糖浓度为2.5％，琼脂浓度为0.60％，激素为0.5mg/L的6-BA(6-苄氨基嘌呤)、0.01mg/L的德卡林碱和0.25mg/L的NAA(萘乙酸)。
综合培养条件为：pH值为4.5，121℃、131kpa的条件下灭菌20min，培养温度为24℃，空气相对湿度为65％，光照强度为1600lx，光照11h/d。
④、继代培养
将丛生芽切割1cm茎段，每瓶接种5节，转入继代增殖培养基中继代增殖培养，3个月后观察实验情况，再进行继代增殖培养。
⑤、生根培养
在继代增殖培养基中生长的苗，一部分用以继续增殖，另外转入生根培养基进行生根培养(生根培养基为1/2WPM+NAA 0.15mg/L)。取3cm长的新梢接种到生根培养基上，接种后首先黑暗处理20天，然后转到光照下培养，35天进行移栽。

Claims (5)

1.一种蓝莓种苗的脱毒繁育方法，其特征在于步骤如下：
①、外植体的选择
选长势旺盛的幼嫩枝条，除去所有叶片，切取除顶芽外的第3～10节茎段作外植体；
②、外植体的灭菌
切取2～4cm带顶芽的幼嫩茎段，去叶片留叶柄，用清水洗干净，然后进行灭菌处理，灭菌后将茎段切成1～2个腋芽的小段；
③、初代培养
对外植体进行初代培养，所用基本培养基为：WPM+蔗糖+琼脂+激素；
④、继代培养
将丛生芽切割1～3cm茎段，每瓶接种4～5节，转入继代增殖培养基中继代增殖培养，3个月后观察实验情况，再进行继代增殖培养；
⑤、生根培养
在继代增殖培养基中生长的苗，一部分用以继续增殖，另外转入生根培养基进行生根培养；取1～3cm长的新梢接种到生根培养基上，接种后首先黑暗处理18～22天，然后转到光照下培养，30～40天可以移栽。
2.如权利要求1所述的一种蓝莓种苗的脱毒繁育方法，其特征在于：步骤②中的灭菌处理具体为：先用75％酒精浸泡25～35s，再用0.1％升汞溶液消毒7～10min，接着用无菌水冲洗3～5次，最后用滤纸吸去水分。
3.如权利要求1所述的一种蓝莓种苗的脱毒繁育方法，其特征在于：步骤③中所用基本培养基中蔗糖浓度为2～3％，琼脂浓度为0.60～0.65％，激素为0.5～5.0mg/L的6-BA(6-苄氨基嘌呤)、0.01～0.05mg/L的德卡林碱和0.05～0.25mg/L的NAA(萘乙酸)。
4.如权利要求1所述的一种蓝莓种苗的脱毒繁育方法，其特征在于：步骤③中初代培养的综合培养条件为：pH值为4.0～5.0，121℃、131kpa的条件下灭菌15～25min，培养温度为24～26℃，空气相对湿度为55～65％，光照强度为1200～1600lx，光照10～12h/d。
5.如权利要求1所述的一种蓝莓种苗的脱毒繁育方法，其特征在于：步骤⑤中生根培所用培养基为1/2WPM+NAA 0.15mg/L。
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