CN110810249B

CN110810249B - 一种促进乌饭树丛生芽伸长的培养基、制备方法及应用

Info

Publication number: CN110810249B
Application number: CN201911292473.2A
Authority: CN
Inventors: 蔡升; 蔡小宁; 续晨
Original assignee: Nanjing Xiaozhuang University
Current assignee: Nanjing Xiaozhuang University
Priority date: 2019-12-12
Filing date: 2019-12-12
Publication date: 2022-12-02
Anticipated expiration: 2039-12-12
Also published as: CN110810249A; AU2020101701A4

Abstract

本发明涉及植物组织培养技术领域，公开了一种促进乌饭树丛生芽伸长的培养基、制备方法及应用，所述培养基包括如下成分：基本培养基、植物生长调节剂、95～105g/L马铃薯、4.0～5.0g/L琼脂、25～35g/L蔗糖；pH为5.8～6.0。本发明以ZT为植物生长调节剂，其能够将氨基酸、生长素、无机盐等营养成分向处理部位调运，有利于刺激芽的生长；所述马铃薯含有淀粉、蛋白质、脂肪、粗纤维及多种微生物和无机盐等，不仅提供了丛生芽生长所需的各种营养物质，而且有利于丛生芽的进一步伸长。较现有的培养基，采用本发明的培养基能明显诱导乌饭树丛生芽的伸长，有效缩短育苗周期，对于乌饭树组培集约化生产具有重要意义。

Description

一种促进乌饭树丛生芽伸长的培养基、制备方法及应用

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种促进乌饭树丛生芽伸长的培养基、制备方法及应用。

背景技术

乌饭树(Vaccinium bracteatum Thunb.)又名南烛，属杜鹃花科越桔属(Vaccinium L.)常绿灌木或小乔木，多分布于我国南方地区，因人们有每年阴历三月初三和四月初八用其叶蒸乌饭食用而得名。乌饭树的浆果及叶片营养、药用价值极高，开发利用潜力巨大，且其主干直立、枝叶茂密、叶色浓绿、果实艳丽美观，观赏价值极高，是园林绿化树种新秀。目前，野生乌饭树在其分布区内零星分布，个体数量较少，加之人为干扰和果实鸟害、虫害的破坏，分布数量日益减少，若不加以保护、开发利用，很可能在其群落中渐失。现有技术报道了乌饭树种子萌发的方法，使其播种繁殖成为可能，但由于野生乌饭树所结果实较少，且较难采摘，故通过播种繁殖也较难实现大规模的发展。

植物组织培养是根据植物细胞具有“全能性”的理论，于近年来发展起来的一项无性繁殖途径，其在均一化苗木快速繁殖、无病毒苗培养、遗传育种、突变体的选择和利用、细胞融合和DNA的重组上具有突出地位。植物组织培养技术能有效扩增优良品种，在短期内提供大量优质乌饭树苗木，使乌饭树产业的迅速发展成为可能。然而现有研究和实践表明，乌饭树组培技术尚不成熟，现有的培养基并不能有效诱导乌饭树丛生芽的伸长。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有的培养基不能有效诱导乌饭树丛生芽伸长的缺陷，从而提供一种促进乌饭树组培丛生芽伸长的培养基；同时，本发明还提供了该培养基的制备方法及其应用。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种促进乌饭树丛生芽伸长的培养基，包括如下成分：基本培养基、植物生长调节剂、95～105g/L马铃薯、4.0～5.0g/L琼脂、25～35g/L蔗糖；pH为5.8～6.0。

进一步地，所述基本培养基为1.8～2.2g/L WPM培养基；所述植物生长调节剂为0.8～1.2mg/L ZT。

进一步地，所述马铃薯为边长为0.2～1.0cm的马铃薯方块。

更进一步地，所述方块为不规则方块。

更进一步地，所述培养基包括如下成分：2.0g/L WPM培养基、1.0mg/L ZT、100g/L马铃薯方块、4.5g/L琼脂、30g/L蔗糖；pH为5.8～6.0。

本发明还提供了一种上述促进乌饭树丛生芽伸长的培养基的制备方法，包括如下步骤：

(1)称取配方量的WPM培养基粉、蔗糖、琼脂、马铃薯及量取配方量的ZT水溶液；

(2)将所述WPM培养基粉、蔗糖及ZT水溶液加入水中，混合均匀，调节pH至5.8～6.0；

(3)加入所述琼脂，加热至所述琼脂完全融化，再加入所述马铃薯，密封、灭菌，即得。

更进一步地，所述步骤(1)还包括对所述马铃薯进行切块，得到边长为0.2～1.0cm马铃薯方块的步骤。

更进一步地，步骤(3)所述灭菌为采用压力为105kPa、温度为121℃的蒸汽灭菌至少15分钟。

本发明还提供了上述促进乌饭树丛生芽伸长的培养基或根据上述制备方法制备得到的促进乌饭树丛生芽伸长的培养基的应用，将所述乌饭树丛生芽接种于所述培养基上进行培养。

进一步地，所述培养条件为：光照强度1000～3000lx、光照时间12h/d、温度22～28℃、时间28～31天。

本发明中，ZT为Zeatin的缩写，中文为玉米素，为白色结晶或粉末。

本发明的技术方案，具有如下优点：

1.本发明提供的促进乌饭树丛生芽伸长的培养基，所述培养基包括基本培养基、植物生长调节剂、马铃薯、琼脂和蔗糖，所述培养基以ZT为植物生长调节剂，其能够将氨基酸、生长素、无机盐等营养成分向处理部位调运，有利于刺激芽的生长；所述马铃薯含有淀粉、蛋白质、脂肪、粗纤维及多种微生物和无机盐等，不仅提供了丛生芽生长所需的各种营养物质，而且有利于丛生芽的进一步伸长。较现有的培养基，采用本发明的培养基能明显诱导乌饭树丛生芽的伸长，有效缩短育苗周期，对于乌饭树组培集约化生产具有重要意义。

2.本发明提供的促进乌饭树丛生芽伸长的培养基的制备方法，将配方的各组分混合均匀后高压灭菌即得，原料易得，工序简便，可操作性强，便于大规模推广应用，对于乌饭树组培产业化水平提升具有重要意义。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是采用本发明实施例1的培养基培养乌饭树丛生芽30天后拍摄的照片；

图2是采用对比例1的培养基培养乌饭树丛生芽30天后拍摄的照片；

图3是采用对比例2的培养基培养乌饭树丛生芽30天后拍摄的照片。

具体实施方式

提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。

以下实施例中，WPM培养基粉购自于杭州木木生物科技有限公司；实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。

实施例1

本实施例提供了一种促进乌饭树丛生芽伸长的培养基，其组成为：2.0g/L WPM培养基+1.0mg/L ZT+100g/L马铃薯方块+4.5g/L琼脂+30g/L蔗糖；pH为5.8～6.0。其制备方法包括如下步骤：

(1)取洗净的马铃薯，切块，得到0.2～1.0cm的马铃薯方块；

(2)称取适量的ZT粉末，加少量1mol/L的氢氧化钠溶液溶解，然后加水定容，配制成0.1mg/L的ZT水溶液；

(3)分别称取2.0gWPM培养基粉、30g蔗糖、4.5g琼脂及100g马铃薯方块，量取10mLZT水溶液；

(4)将WPM培养基粉、蔗糖及ZT水溶液加入水中，混合均匀，调节pH至5.8～6.0；

(5)加入所述琼脂，加热至所述琼脂完全融化，分装至培养瓶中，再加入所述马铃薯方块，密封，采用压力为105kPa、温度为121℃的高压蒸汽进行灭菌20分钟，即得所述促进乌饭树丛生芽伸长的培养基。

实施例2

本实施例提供了一种促进乌饭树丛生芽伸长的培养基，其组成为：1.8g/L WPM培养基+0.8mg/L ZT+105g/L马铃薯方块+4.0g/L琼脂+25g/L蔗糖；pH为5.8～6.0。其制备方法包括如下步骤：

(1)取洗净的马铃薯，切块，得到0.2～1.0cm的马铃薯方块；

(3)分别称取1.8gWPM培养基粉、25g蔗糖、4.0g琼脂及105g马铃薯方块；量取8mLZT水溶液；

(5)加入所述琼脂，加热至所述琼脂完全融化，分装至培养瓶中，再加入所述马铃薯方块，密封，采用压力为105kPa、温度为121℃的高压蒸汽进行灭菌15分钟，即得所述促进乌饭树丛生芽伸长的培养基。

实施例3

本实施例提供了一种促进乌饭树丛生芽伸长的培养基，其组成为：2.2g/L WPM培养基+1.2mg/L ZT+95g/L马铃薯方块+4.5g/L琼脂+35g/L蔗糖；pH为5.8～6.0。其制备方法包括如下步骤：

(1)取洗净的马铃薯，切块，得到0.2～1.0cm的马铃薯方块；

(3)分别称取2.2gWPM培养基粉、35g蔗糖、4.5g琼脂、95g马铃薯方块，量取12mL ZT水溶液；

(5)加入所述琼脂，加热至所述琼脂完全融化，分装至培养瓶中，再加入所述马铃薯方块，密封，采用压力为105kPa、温度为121℃的高压蒸汽进行灭菌25分钟，即得所述促进乌饭树丛生芽伸长的培养基。

对比例1

本对比提供了一种培养基，其组成为：2.0g/L WPM培养基+1.0mg/L ZT+100g/L马铃薯汁+4.5g/L琼脂+30g/L蔗糖；pH为5.8～6.0。其制备方法包括如下步骤：

(1)将马铃薯洗净去皮，切成小块，再称取100g马铃薯切块，加水煮烂(煮沸20～30分钟，能被玻璃棒戳破即可)，用八层纱布过滤，得马铃薯汁；

(3)分别称取2.0gWPM培养基粉、30g蔗糖、4.5g琼脂及100g马铃薯汁，量取10mL ZT水溶液；

(5)加入所述琼脂，加热至所述琼脂完全融化，分装至培养瓶中，再加入所述马铃薯汁，密封，采用压力为105kPa、温度为121℃的高压蒸汽进行灭菌20分钟，即得所述培养基。

对比例2

本对比提供了一种培养基，其组成为：2.0g/L WPM培养基+1.0mg/L ZT+4.5g/L琼脂+30g/L蔗糖；pH为5.8～6.0。其制备方法包括如下步骤：

(1)称取适量的ZT粉末，加少量1mol/L的氢氧化钠溶液溶解，然后加水定容，配制成0.1mg/L的ZT水溶液；

(2)分别称取2.0gWPM培养基粉、30g蔗糖及4.5g琼脂，量取10mL ZT水溶液；

(3)将WPM培养基粉、蔗糖及ZT水溶液加入水中，混合均匀，调节pH至5.8～6.0；

(4)加入所述琼脂，加热至所述琼脂完全融化，分装至培养瓶中，密封，采用压力为105kPa、温度为121℃的高压蒸汽进行灭菌20分钟，即得所述培养基。

对比例3

本对比提供了一种培养基，其组成为：2.0g/L WPM培养基+2.0mg/L ZT+4.5g/L琼脂+30g/L蔗糖；pH为5.8～6.0。其制备方法包括如下步骤：

(2)分别称取2.0gWPM培养基粉、30g蔗糖、4.5g琼脂，量取20mL ZT水溶液；

实验例

将已诱导产生的乌饭树丛生芽分别转至本发明实施1、对比例1-3的培养基上，在光照强度2000lx、光照时间12h/d、温度25℃的条件下培养30天，观察丛生芽的生长情况，如下表1所示。实施例1及对比例1-2的培养基上培养30天后丛生芽的生长情况详见图1-3。

结合上表1及图1-3可知，采用本发明的培养基能明显促进丛生芽的伸长。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims

1.一种促进乌饭树丛生芽伸长的培养基，其特征在于，由如下成分组成：1.8~2.2g/LWPM培养基、0.8~1.2mg/L ZT、95~105g/L马铃薯方块、4.0~5.0g/L琼脂、25~35g/L蔗糖；pH为5.8~6.0；

所述培养基的使用条件为：光照强度1000~3000lx、光照时间12h/d、温度22~28℃、时间28~31天。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述马铃薯为边长为0.2~1.0cm的马铃薯方块。

3.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，由如下成分组成：2.0g/L WPM培养基、1.0mg/L ZT、100 g/L马铃薯方块、4.5 g/L琼脂、30 g/L蔗糖；pH为5.8~6.0。

4.一种权利要求1-3任一所述的促进乌饭树丛生芽伸长的培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）称取配方量的WPM培养基粉、蔗糖、琼脂、马铃薯及量取配方量的ZT水溶液，并对所述马铃薯进行切块，得到边长为0.2~1.0cm马铃薯方块；

（2）将所述WPM培养基粉、蔗糖及ZT水溶液加入水中，混合均匀，调节pH至5.8~6.0；

（3）加入所述琼脂，加热至所述琼脂完全融化，再加入所述马铃薯方块，密封、灭菌，即得。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述灭菌为采用压力为105kPa、温度为121℃的蒸汽灭菌至少15分钟。

6.权利要求1-3任一所述的促进乌饭树丛生芽伸长的培养基或根据权利要求4或5所述的制备方法制备得到的促进乌饭树丛生芽伸长的培养基的应用，其特征在于，将所述乌饭树丛生芽接种于所述培养基上进行培养。