CN103416310B - 用于金线莲有机组织培养的培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物组织培养领域，具体而言，涉及一种用于金线莲有机组织培养的培养基。该用于金线莲有机组织培养的培养基，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉100-120g/L，去皮土豆50-80g/L，去皮胡萝卜10-60g/L，西红柿10-45g/L，洋葱10-15g/L，琼脂4-8g/L，活性炭1-4g/L，pH5.4-6.2。本发明提供的用于金线莲有机组织培养的培养基不会造成无机肥离子过量堆积、植物激素和植物类激素的残留，能够直接用作药物使用，缩短了金线莲的生产周期，提高了经济效益。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养领域，具体而言，涉及一种用于金线莲有机组织培养的培养基。
背景技术
相关技术中，金线莲组织培养使用的培养基一般含有香蕉、土豆、无机肥、植物激素、植物类激素、琼脂和活性炭等物质。其中，无机肥主要是为金线莲组培苗的培养提供无机营养，使植物正常生长，植物激素和植物类激素主要是促进金线莲组织培养的初始培养物--带节茎段脱分化和再分化，长出根、茎、叶等器官，生长成为一棵完整的植株。
但是，使用上述培养基进行金线莲组织培养，会造成金线莲组培苗中堆积过量的无机肥离子、残留植物激素和植物类激素，进而使得到的金线莲组培苗不宜直接用作药物使用，还需要将组培苗在大棚中进行土培半年左右的时间，以降低单位重量的金线莲中无机肥离子、植物激素和植物类激素的含量，延长了生产周期，降低了经济效益。
发明内容
本发明的目的在于提供用于金线莲有机组织培养的培养基，以解决上述的问题。
在本发明的实施例中提供了一种用于金线莲有机组织培养的培养基，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉100-120g/L，去皮土豆50-80g/L，去皮胡萝卜10-60g/L，西红柿10-45g/L，洋葱10-15g/L，琼脂4-8g/L，活性炭1-4g/L，pH5.4-6.2。
在本发明的实施例中还提供了另一种用于金线莲有机组织培养的培养基，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉100-120g/L，去皮土豆50-80g/L，去皮胡萝卜15-17g/L，西红柿10-15g/L，洋葱10-12g/L，去皮红薯20-40g/L，鸡蛋黄5-10g/L，去皮芋头5-10g/L，琼脂4-8g/L，活性炭1-4g/L，pH5.4-6.2。
在本发明的实施例中还提供了另一种用于金线莲有机组织培养的培养基，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉100-120g/L，去皮土豆60-80g/L，去皮胡萝卜10-15g/L，西红柿15-25g/L，洋葱10-15g/L，黑糖5-10g/L，大米15-20g/L，琼脂4-8g/L，活性炭1-4g/L，pH5.4-6.2。
在本发明的实施例中还提供了另一种用于金线莲有机组织培养的培养基，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉100-120g/L，去皮土豆50-80g/L，去皮胡萝卜40-50g/L，西红柿25-35g/L，洋葱10-12g/L，去皮芋头65-75g/L，海带5-15g/L，黄豆15-20g/L，大米10-30g/L，琼脂4-8g/L，活性炭1-4g/L，pH5.4-6.2。
在本发明的实施例中还提供了另一种用于金线莲有机组织培养的培养基，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉100-120g/L，去皮土豆40-50g/L，去皮胡萝卜10-20g/L，西红柿10-35g/L，洋葱10-12g/L，去皮红薯25-35g/L，去皮、去核苹果100-120g/L，去皮葡萄20-30g/L，鸡蛋黄5-7g/L，生的猪肝2-5g/L，琼脂4-8g/L，活性炭1-4g/L，pH5.4-6.2。
本发明中，金线莲有机组织培养的培养基主要选取香蕉、苹果、土豆、胡萝卜等物质为原料，不添加任何无机肥、植物生长激素和植物类激素物质，依靠培养基中各原料组成成分之间的配合和相互作用，为金线莲组织培养提供细胞生长和分化必需的成分，使初始培养物--金线莲带节茎段能够正常的分化和生长，培养4-8个月收苗时，得到生物学性状与无机组织培养相似或更优的金线莲组培苗，且不会造成无机肥离子过量堆积、植物激素和植物类激素的残留，能够直接用作药物使用，缩短了金线莲的生产周期，提高了经济效益。
具体实施方式
下面通过具体的实施例子对本发明做进一步的详细描述。
本发明实施例提供了一种用于金线莲有机组织培养的培养基，所谓有机组织培养是指植物组织培养中使用的培养基不含有无机肥、植物生长激素和植物类激素物质，组成培养基的原料均为天然有机物质。本发明中，金线莲有机组织培养的培养基主要选取香蕉、苹果、土豆、胡萝卜等物质为原料，不添加任何无机肥、植物生长激素和植物类激素物质，依靠培养基中各原料组成成分之间的配合和相互作用，为金线莲组织培养提供细胞生长和分化必需的成分，使初始培养物--金线莲带节茎段能够正常的分化和生长，培养4-8个月收苗时，得到生物学性状与无机组织培养相似或更优的金线莲组培苗，且不会造成无机肥离子过量堆积、植物激素和植物类激素的残留，能够直接用作药物使用，缩短了金线莲的生产周期，提高了经济效益。
实施例1-4提供的有机培养基中的原料配比如表1所示。
表1实施例1-4提供的有机培养基配比（g/L）
| 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | |
| 去皮香蕉 | 100 | 110 | 120 | 100 |
| 去皮土豆 | 70 | 80 | 50 | 60 |
| 去皮胡萝卜 | 10 | 30 | 60 | 20 |
| 西红柿 | 45 | 30 | 10 | 40 |
| 洋葱 | 10 | 12 | 5 | 8 |
| 活性炭 | 1 | 2 | 4 | 3 |
| 琼脂 | 4 | 5 | 8 | 6 |
实施例5-8提供的有机培养基中的原料配比如表2所示。
表2实施例5-8提供的有机培养基配比（g/L）
实施例9-12提供的有机培养基中的原料配比如表3所示。
表3实施例9-12提供的有机培养基配比（g/L）
| 实施例9 | 实施例10 | 实施例11 | 实施例12 | |
| 去皮香蕉 | 120 | 100 | 110 | 100 |
| 去皮土豆 | 50 | 80 | 70 | 60 |
| 大米 | 20 | 15 | 16 | 18 |
| 去皮胡萝卜 | 15 | 15 | 13 | 10 |
| 西红柿 | 15 | 25 | 20 | 18 |
| 洋葱 | 15 | 13 | 10 | 13 |
| 黑糖 | 10 | 5 | 6 | 8 |
| 活性炭 | 1 | 2 | 4 | 3 |
| 琼脂 | 4 | 6 | 8 | 7 |
实施例13-16提供的有机培养基中的原料配比如表4所示。
表4实施例13-16提供的有机培养基配比（g/L）
| 实施例13 | 实施例14 | 实施例15 | 实施例16 | |
| 去皮香蕉 | 110 | 100 | 120 | 110 |
| 去皮土豆 | 80 | 50 | 70 | 70 |
| 大米 | 30 | 30 | 10 | 20 |
| 去皮胡萝卜 | 50 | 45 | 40 | 45 |
| 西红柿 | 30 | 35 | 25 | 25 |
| 洋葱 | 10 | 11 | 12 | 10 |
| 海带 | 10 | 10 | 15 | 5 |
| 去皮芋头 | 65 | 75 | 70 | 68 |
| 黄豆 | 20 | 15 | 20 | 18 |
| 活性炭 | 1 | 3 | 4 | 2 |
| 琼脂 | 4 | 6 | 8 | 6 |
实施例17-20提供的有机培养基中的原料配比如表5所示。
表5实施例17-20提供的有机培养基配比（g/L）
本发明实施例1-20提供的用于金线莲组织培养的有机培养基，按照如下方法进行制备：
按照配比称取原料；
然后对原料进行处理，其中，去皮香蕉、去皮去核苹果、去皮去籽葡萄、西红柿、去皮胡萝卜、洋葱、海带等原料直接磨碎成泥状，去皮土豆、去皮红薯、去皮芋头、生的猪肝等原料煮熟后再磨碎成泥状，大米、黄豆等原料直接粉碎，过200目筛，鸡蛋黄可以从生鸡蛋中取也可以将鸡蛋煮熟后取鸡蛋黄并将其磨碎；
将处理后的原料均加入少量水中，再加入配比量的琼脂和活性炭，搅拌均匀，加水至混合液的量为1000ml，搅拌均匀，调节pH5.4-6.2。
按照本领域常规的培养基分装方法，将培养基分装于组培瓶中，然后于121℃、0.13MP条件下蒸煮15-30min对培养基灭菌。
其中，组培瓶的瓶盖采用无毒的塑料盖，不采用聚硫橡胶盖。
对比例
用于金线莲组织培养的培养基，由下述浓度的物质组成(g/L)：
1/2MS培养基，添加去皮香蕉：100(或去皮土豆100)，6-苄基氨基腺嘌呤：3ppm，萘乙酸：0.5ppm，吲哚乙酸：0.3ppm，室内植物保养用的肥料花宝一号1.5，活性炭1，蛋白胨2.5，琼脂6。
本对比例提供的用于金线莲组织培养的培养基，按照如下方法进行制备：
按照配比称取原料；
将去皮香蕉磨碎成泥状，将土豆煮熟后再磨碎成泥状，将上述香蕉泥和土豆泥均加入少量水中，搅拌均匀，再按照配比加入其他原料，最后加入琼脂、活性炭，搅拌均匀，加水至混合液的量为1000ml，搅拌均匀，调节pH5.4-6.2。
本发明实施例1-20和对比例所用的原料均为市售产品。
本发明实施例1-20和对比例中所用的原料规格和来源如表6所示。
表6实施例1-20和对比例中所用的原料规格和来源
采用实施例9-12提供的有机培养基，制得金线莲无菌苗，并得到无菌苗的带节茎段。具体按照如下方法进行：取成熟的金线莲果夹（一般果夹形成后51-55天最适宜），先用75%酒精泡30秒至1分种，再放在84消毒液中振荡12分钟，然后取出果夹，用滤纸吸干表面水分，用接种针取出果夹中的种子，按照常规的接种方法撒在有机培养基上，之后，按照常规的种苗培养方法进行培养，种子发芽成植株后，即为无菌苗，从无菌苗上直接取带节茎段。
在超净工作台中将金线莲无菌苗的带节茎段接于灭菌后的培养基上（一般650ml8号组培瓶，每瓶接种20段）。
将接种后组培瓶置于大棚或者培养室内进行培养。大棚或培养室的温度为20-30℃，光照强度为1000-2000勒克斯，光照时间为8-12h每天，湿度30%至100%。在上述条件下，培养4个月。
期间观察金线莲组培苗的生长情况，发现，实施例1-20的组培苗的生长情况相似，其与对比例得到的组培苗的生长情况进行比较，如表7所示。
表7实施例与对比例得到的组培苗生长情况
期间观察金线莲组培苗的生长情况，发现使用对比例提供的培养基进行培养相比，使用实施例1-20提供的培养基进行有机培养的金线莲在前两个月的生长速度较慢，但是后两个半月的生长速度明显提高，培养4个半月后，使用实施例1-20提供的培养基进行有机培养的金线莲高度与使用对比例提供的培养基进行培养的金线莲高度均为8cm（金线莲的高度是指从生长点到茎顶端的长度），但是有机组织培养得到的金线莲根多，叶大，木质化程度高，其他生长性状也近似或优于相关技术得到的组培苗。满足现有技术中组培苗收苗的条件。可见，本发明实施例提供的金线莲有机组织培养的培养基即使不添加无机肥，植物激素和植物类激素，在培养基中接种的金线莲带节茎段也能正常的脱分化和再分化形成根、茎、叶等器官，并且也能够正常生长成为一棵完整的植株，从而得到生物学性状与无机组织培养相似或更优的金线莲组培苗。可见，本发明实施例提供的培养基在保证金线莲生长性状的基础上，也使得金线莲组培苗不会造成无机肥料离子过量堆积、植物激素和植物类激素等物质的残留，能够直接用作药物使用，不必再经过半年的土培以降低单位重量的金线莲中无机肥离子、植物激素和植物类激素的含量，缩短了生产周期。而相关技术中，由于组织培养的培养基中添加了无机肥、植物激素和植物类激素，在组培苗中有残留，从而还需要将培养合格的组培苗在大棚中土培半年左右，以降低单位重量的金线莲中残留的无机肥、植物激素和植物类激素的量，达到标准后，才能用作药物使用。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.用于金线莲有机组织培养的培养基，其特征在于，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉100-120g/L，去皮土豆50-80g/L，去皮胡萝卜10-60g/L，西红柿10-45g/L，洋葱10-15g/L，琼脂4-8g/L，活性炭1-4g/L，pH5.4-6.2；
所述培养基是由将上述原材料中的去皮香蕉、去皮胡萝卜、西红柿、洋葱直接磨碎成泥状，去皮土豆煮熟后磨成泥状，再加入琼脂和活性炭即得。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉100g/L，去皮土豆70g/L，去皮胡萝卜10g/L，西红柿20g/L，洋葱10g/L，琼脂4g/L，活性炭1g/L，pH5.4-6.2。
3.用于金线莲有机组织培养的培养基，其特征在于，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉100-120g/L，去皮土豆50-80g/L，去皮胡萝卜15-17g/L，西红柿10-15g/L，洋葱10-12g/L，去皮红薯20-40g/L，鸡蛋黄5-10g/L，去皮芋头5-10g/L，琼脂4-8g/L，活性炭1-4g/L，pH5.4-6.2；
所述培养基是由将上述原材料中的去皮香蕉、去皮胡萝卜、西红柿、洋葱直接磨碎成泥状，去皮土豆、去皮红薯、去皮芋头煮熟后磨成泥状，鸡蛋黄从生鸡蛋中取或将鸡蛋煮熟后取鸡蛋黄并将其磨碎，再加入琼脂和活性炭即得。
4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉100g/L，去皮土豆60g/L，去皮胡萝卜17g/L，西红柿10g/L，洋葱12g/L，去皮红薯40g/L，鸡蛋黄5g/L，去皮芋头5g/L，琼脂8g/L，活性炭3g/L，pH5.4-6.2。
5.用于金线莲有机组织培养的培养基，其特征在于，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉100-120g/L，去皮土豆60-80g/L，去皮胡萝卜10-15g/L，西红柿15-25g/L，洋葱10-15g/L，黑糖5-10g/L，大米15-20g/L，琼脂4-8g/L，活性炭1-4g/L，pH5.4-6.2；
所述培养基是由将上述原材料中的去皮香蕉、去皮胡萝卜、西红柿、洋葱直接磨碎成泥状，去皮土豆煮熟后磨成泥状，大米直接粉碎过200目筛，再加入琼脂和活性炭即得。
6.根据权利要求5所述的培养基，其特征在于，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉100g/L，去皮土豆80g/L，去皮胡萝卜15g/L，西红柿25g/L，洋葱13g/L，黑糖5g/L，大米15g/L，琼脂6g/L，活性炭2g/L，pH5.4-6.2。
7.用于金线莲有机组织培养的培养基，其特征在于，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉100-120g/L，去皮土豆50-80g/L，去皮胡萝卜40-50g/L，西红柿25-35g/L，洋葱10-12g/L，去皮芋头65-75g/L，海带5-15g/L，黄豆15-20g/L，大米10-30g/L，琼脂4-8g/L，活性炭1-4g/L，pH5.4-6.2；
所述培养基是由将上述原材料中的去皮香蕉、去皮胡萝卜、西红柿、洋葱、海带直接磨碎成泥状，去皮土豆、去皮芋头煮熟后磨成泥状，黄豆、大米直接粉碎过200目筛，再加入琼脂和活性炭即得。
8.根据权利要求7所述的培养基，其特征在于，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉110g/L，去皮土豆80g/L，去皮胡萝卜50g/L，西红柿30g/L，洋葱10g/L，去皮芋头65g/L，海带10g/L，黄豆20g/L，大米30g/L，琼脂4g/L，活性炭1g/L，pH5.4-6.2。
9.用于金线莲有机组织培养的培养基，其特征在于，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉100-120g/L，去皮土豆40-50g/L，去皮胡萝卜10-20g/L，西红柿10-35g/L，洋葱10-12g/L，去皮红薯25-35g/L，去皮、去核苹果100-120g/L，去皮葡萄20-30g/L，鸡蛋黄5-7g/L，生的猪肝2-5g/L，琼脂4-8g/L，活性炭1-4g/L，pH5.4-6.2；所述培养基是由将上述原材料中的去皮香蕉、去皮胡萝卜、西红柿、去皮、去核苹果、去皮葡萄、洋葱直接磨碎成泥状，去皮土豆、去皮红薯、生的猪肝煮熟后磨成泥状，鸡蛋黄从生鸡蛋中取或将鸡蛋煮熟后取鸡蛋黄并将其磨碎，再加入琼脂和活性炭即得。
10.根据权利要求9所述的培养基，其特征在于，所述培养基由下述浓度的原料组成：去皮香蕉100g/L，去皮土豆50g/L，去皮胡萝卜15g/L，西红柿10g/L，洋葱10g/L，去皮红薯30g/L，去皮、去核苹果100g/L，去皮葡萄20g/L，鸡蛋黄7g/L，生的猪肝5g/L，琼脂4g/L，活性炭3g/L，pH5.4-6.2。
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