CN112913694A - 一种用于蓝莓茎段组织快繁的培养基及组织快繁方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于蓝莓茎段组织快繁的培养基组合，其中，预培养培养基以含2‑(N‑吗啡啉)乙磺酸的MS培养基为基础培养基，包括：0.1‑0.5mg/L IAA、0.05‑0.6mg/L CPPU；快速培养培养基以含2‑(N‑吗啡啉)乙磺酸的MS培养基为基础培养基，包括：0.2‑0.5mg/L ZT；苗生长培养基以含2‑(N‑吗啡啉)乙磺酸的MS培养基为基础培养基，包括：0.1‑2.0mg/L 2‑ip；以及生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，包括：0.3‑4.0mg/L NAA。本发明还公开了使用前述培养基组合进行蓝莓茎段组织快繁的方法，该方法繁殖速度快。

Description

一种用于蓝莓茎段组织快繁的培养基及组织快繁方法
技术领域
本发明属于植物组织培养领域，涉及一种用于蓝莓茎段组织快繁的培养基及组织快繁方法。
背景技术
蓝莓(Vaccinium Spp)为杜鹃花科越橘属多年生低灌木。原生于北美州与东亚，分布于朝鲜、蒙古、欧洲、北美洲以及中国黑龙江、内蒙古、吉林长白山等地区。蓝莓果实中营养丰富，富含花青素，具有防止脑神经老化、强心、抗癌、软化血管、增强人体免疫等功能。因为其具有较高的保健价值而风靡世界，是世界粮食及农业组织推荐的五大健康水果之一。
申请号为201710196339.7的中国专利申请公开了用于蓝莓组织培养的初代、继代培养基，但该方法不能充分满足蓝莓组织培养的需求。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明第一方面提供了一种用于蓝莓茎段组织快繁的培养基组合，所述培养基组合包括预培养培养基、快速培养培养基、苗生长培养基和生根培养基；
所述预培养培养基以含2-(N-吗啡啉)乙磺酸的MS培养基为基础培养基，所述预培养培养基包括：0.1-0.5mg/L(比如，0.12mg/L、0.14mg/L、0.16mg/L、0.18mg/L、0.20mg/L、0.22mg/L、0.24mg/L、0.26mg/L、0.28mg/L、0.30mg/L、0.32mg/L、0.34mg/L、0.36mg/L、0.38mg/L、0.40mg/L、0.42mg/L、0.44mg/L、0.46mg/L、0.48mg/L)IAA、0.05-0.6mg/L(比如，0.06mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L、0.12mg/L、0.14mg/L、0.16mg/L、0.18mg/L、0.20mg/L、0.22mg/L、0.24mg/L、0.26mg/L、0.28mg/L、0.30mg/L、0.32mg/L、0.34mg/L、0.36mg/L、0.38mg/L、0.40mg/L、0.42mg/L、0.44mg/L、0.46mg/L、0.48mg/L、0.50mg/L、0.52mg/L、0.54mg/L、0.56mg/L、0.58mg/L)CPPU；
所述快速培养培养基以含2-(N-吗啡啉)乙磺酸的MS培养基为基础培养基，所述快速培养培养基包括：0.2-0.5mg/L(比如，0.22mg/L、0.24mg/L、0.26mg/L、0.28mg/L、0.30mg/L、0.32mg/L、0.34mg/L、0.36mg/L、0.38mg/L、0.40mg/L、0.42mg/L、0.44mg/L、0.46mg/L、0.48mg/L)ZT；
所述苗生长培养基以含2-(N-吗啡啉)乙磺酸的MS培养基为基础培养基，所述苗生长培养基包括：0.1-2.0mg/L(比如，0.2mg/L、0.3mg/L、0.4mg/L、0.5mg/L 0.6mg/L、0.7mg/L、0.8mg/L、0.9mg/L、1.0mg/L、1.1mg/L、1.2mg/L、1.3mg/L、1.4mg/L、1.5mg/L、1.6mg/L、1.7mg/L、1.8mg/L、1.9mg/L)2-ip；以及
所述生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，所述生根培养基包括：0.3-4.0mg/L(比如，0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L、1.2mg/L、1.4mg/L、1.6mg/L、1.8mg/L、2.0mg/L、2.2mg/L、2.4mg/L、2.6mg/L、2.8mg/L、3.0mg/L、3.2mg/L、3.4mg/L、3.6mg/L、3.8mg/L)NAA。
在一些实施方式中，所述预培养培养基还包括：25-150mg/L的NaCl。
在一些实施方式中，所述预培养培养基包括：50-100mg/L的NaCl。
在一些实施方式中，所述预培养培养基包括：0.15-0.3mg/L IAA、0.05-0.3mg/LCPPU。
在一些实施方式中，所述预培养培养基包括：0.2mg/L IAA、0.1mg/LCPPU。
在一些实施方式中，所述预培养培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为30-50mg/L。
在一些实施方式中，所述预培养培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为40mg/L。
在一些实施方式中，所述预培养培养基中，所述MS培养基包括4-8g/L琼脂、15-30g/L蔗糖。
在一些实施方式中，所述预培养培养基中，pH＝5.0-5.5。
在一些实施方式中，所述快速培养培养基还包括：0.5-1.5mg/L腐胺和/或0.5-1.5mg/L精胺。
在一些实施方式中，所述快速培养培养基还包括：0.5-1.5mg/L亚精胺。
在一些实施方式中，所述快速培养培养基包括：0.3-0.5mg/L ZT。
在一些实施方式中，所述快速培养培养基包括：0.4mg/L ZT。
在一些实施方式中，所述快速培养培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为30-50mg/L。
在一些实施方式中，所述快速培养培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为40mg/L。
在一些实施方式中，所述快速培养培养基中，所述MS培养基包括4-8g/L琼脂、25-35g/L蔗糖。
在一些实施方式中，所述快速培养培养基中，pH＝5.0-5.5。
在一些实施方式中，所述苗生长培养基包括：0.3-0.7mg/L2-ip。
在一些实施方式中，所述苗生长培养基包括：0.5mg/L 2-ip。
在一些实施方式中，所述苗生长培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为30-50mg/L。
在一些实施方式中，所述苗生长培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为40mg/L。
在一些实施方式中，所述苗生长培养基中，所述MS培养基包括4-8g/L琼脂、25-35g/L蔗糖。
在一些实施方式中，所述苗生长培养基中，pH＝5.0-5.5。
在一些实施方式中，所述生根培养基包括：1.0-3.0mg/L NAA。
在一些实施方式中，所述生根培养基包括：2.0mg/L NAA。
在一些实施方式中，所述生根培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为30-50mg/L。
在一些实施方式中，所述生根培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为40mg/L。
在一些实施方式中，所述生根培养基中，所述1/2MS培养基包括4-8g/L琼脂、25-35g/L蔗糖。
在一些实施方式中，所述生根培养基中，pH＝5.0-5.5。
本发明第二方面提供了一种蓝莓茎段组织快繁的方法，所述方法包括如下步骤：
S1：将带有芽点的无菌蓝莓茎段接种到本发明第一方面所述的培养基组合中的所述预培养培养基中进行预培养，得到经预培养的蓝莓茎段；
S2：将所述经预培养的蓝莓茎段接种到本发明第一方面所述的培养基组合中的所述快速培养培养基中进行快速培养，得到经快速培养的蓝莓苗；
S3：将所述经快速培养的蓝莓苗接种到本发明第一方面所述的培养基组合中的所述苗生长培养基中进行继续培养，得到进一步培养的蓝莓苗；
S4：将所述进一步培养的蓝莓苗接种到本发明第一方面所述的培养基组合中的所述生根培养基中进行继续培养，得到蓝莓组织培养苗。
在一些实施方式中，在步骤S1中，所述无菌蓝莓茎段来自蓝莓组织培养苗。
在一些实施方式中，在步骤S1中，所述预培养的条件为，10-20℃下黑暗环境培养1-4小时，再在光照条件下培养1-3天。
在一些实施方式中，在步骤S1中，所述光照时间为每日14-18小时。
在一些实施方式中，在步骤S1中，所述光照强度为1500-3000lx。
在一些实施方式中，在步骤S1中，在光照条件下培养中，培养环境湿度为50-70％。
在一些实施方式中，在步骤S2中，培养温度为20-28℃。
在一些实施方式中，在步骤S2中，培养光照时间为每日14-18小时。
在一些实施方式中，在步骤S2中，培养光照强度为1500-3000lx。
在一些实施方式中，在步骤S2中，培养环境湿度为50-70％。
在一些实施方式中，在步骤S2中，培养时间为15-20天。
在一些实施方式中，在步骤S3中，培养温度为20-28℃。
在一些实施方式中，在步骤S3中，培养光照时间为每日14-18小时。
在一些实施方式中，在步骤S3中，培养光照强度为1500-3000lx。
在一些实施方式中，在步骤S3中，培养环境湿度为50-70％。
在一些实施方式中，在步骤S3中，培养时间为10-20天。
在一些实施方式中，在步骤S4中，培养温度为20-28℃。
在一些实施方式中，在步骤S4中，培养光照时间为每日14-18小时。
在一些实施方式中，在步骤S4中，培养光照强度为1500-3000lx。
在一些实施方式中，在步骤S4中，培养环境湿度为50-70％。
在一些实施方式中，在步骤S4中，培养时间为20-30天。
在一些实施方式中，所述方法还包括将所述蓝莓组织培养苗进行炼苗和移栽，得到蓝莓栽培植株。
在一些实施方式中，所述炼苗的步骤包括：将所述蓝莓组织培养苗的培养瓶内保持65-75％的湿度0.5-1.5天，再在通风条件下保持55-65％的湿度5-9天。
在一些实施方式中，所述炼苗的步骤中，光照时间为每日14-18小时。
在一些实施方式中，所述炼苗的步骤中，光照强度为1500-3000lx。
在一些实施方式中，将经过练苗后的所述的蓝莓植株的根部清理去掉培养基，进行所述移栽。
在一些实施方式中，移栽所用培养土为质量用量比为1：0.5-1.5：0.5-1的蛭石、营养土和苔藓。
本发明与已有发明相比有益效果：
目前蓝莓组培苗的生产多采用切取蓝莓苗进行扩繁的继代繁殖方式，随着继代时间的增长，苗子的状态和质量会逐渐下降，需要定期更新母本苗子，且培养一批苗子的时间较长，在7-8周。本发明以蓝莓组培苗茎段为材料进行组培苗生产，一瓶培养基中可以放置150个茎段，每一个茎端都可长成至少一株蓝莓苗，缩短了扩繁时间，提高了繁殖效率；预培养时，通过给予茎段轻微的逆境胁迫，使得长出的组培苗更加健壮旺盛，培养出的蓝莓苗生长快、质量好；通过快速培养基，提高组培苗的生长速度；此外，仅需5周左右的时间便可对培养的组培苗进行生根炼苗，极大地缩短了组培苗的培育时间。
在本发明实施例2和3中，没有经过愈伤诱导步骤，也没有经过愈伤组织生芽步骤，蓝莓苗子是直接从蓝莓茎段上萌发出来的，因为每个蓝莓的茎段上都有至少一个芽点，可以萌发为蓝莓苗，本发明以蓝莓的茎段为材料进行扩繁，而非目前普遍采用的、常规的完整组培苗材料，这是本发明根据蓝莓组培苗的生长特性而改良的扩繁方式，这种方法比本发明实施例1等常规的蓝莓快繁方式明显缩短扩繁时间，且每株苗子都是从一个芽点生长而来，保证了苗子的质量。
附图说明
图1示出了黑暗预处理后的茎段。
图2示出了经过预处理的蓝莓茎段。
图3示出了快速培养5d的蓝莓茎段。
图4示出了快速培养13d的蓝莓茎段，腋芽已经明显萌发。
图5示出了快速培养15d的蓝莓茎段萌发情况。
图6示出了快速培养基上培养20d的蓝莓茎段。图7示出了移到生长培养基上培养的蓝莓茎段。
图8示出了在生长培养基上生长10d的蓝莓茎段。
图9示出了在生长培养基上生长20d的蓝莓茎段。
图10示出了对比例中快速培养15d的蓝莓茎段的萌发情况。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明实施方式作进一步地详细描述。
本发明没有详细描述的步骤均为本领域常规操作，没有详细记录的材料均为本领域常规材料。
定义：培养一批苗子的时间是指从开始培养到生根之前的时间，即为，从预培养到长成可以生根的组培苗的时间间隔，或者为两次继代之间的时间间隔。
实施例1：蓝莓常规组织培养
(一)外植体的选择
母株选择大田种植的蓝莓(品种：JE)，选取生长健壮的一年生待萌发枝条，用剪刀剪下。
(二)外植体的预处理
将外植体的顶芽剪掉，用封口膜将顶部的伤口封住，将枝条放在清水中培养7天(室温22-24℃，光强1500-3000lx，相对湿度60-70％，16/8h光周期)，至芽将要萌发的状态。用细毛刷蘸取洗洁精将枝条和芽表面的灰尘清洗干净，将枝条放在流水下冲洗30分钟，用剪刀将枝条剪成带芽的小茎段，然后置于无菌室超净工作台上，往后的操作需要在超净工作台上进行无菌操作。
(三)外植体的消毒
准备浓度为75v/v％的酒精和2w/v％的次氯酸钠100ml，分别加入1-2滴吐温-20，摇匀备用。
将带芽的小茎段用含有吐温-20的75v/v％酒精消毒20s，用灭菌的去离子水清洗三次，然后用含有吐温-20的2w/v％次氯酸钠消毒8min，消毒完后用灭菌的去离子水清洗5次，至无明显的次氯酸钠味道。用灭菌的滤纸吸去芽上多余的水分，备用。
(四)外植体的培养
在灭菌的滤纸板上用解剖镊子轻轻的将芽外部的鳞片剥掉，将外植体接种到含有0.5mg/L IBA的初代培养基(WPM培养基，含30g/L的蔗糖，7g/L的琼脂，pH5.2)上，使外植体发芽。(培养条件为：22-25℃，光强1500-3000lx，相对湿度60-70％，16/8h光周期)。
(五)组培苗的继代增殖
待芽长到1.5-2cm时在超净台中将芽剪下，放到含0.5mg/L IBA、0.2mg/L 6-BA、0.2-0.4mg/L ZT的(根据不同品种苗子的长势，ZT的用量可适度调整)增殖培养基(WPM培养基，含30g/L的蔗糖，7g/L的琼脂，pH5.2)上进行继代扩繁，依据组培苗的生长情况，每6-8周继代一次。(培养条件为：22-25℃，光强1500-3000lx，相对湿度60-70％，16/8h光周期)。
(六)生根培养
选取生长6-7周的步骤(五)的健壮组培苗，将底部的愈伤团切掉，放到含0.8mg/LNAA的培养基(1/2MS培养基，含20g/L的蔗糖，6g/L的琼脂，pH5.2-5.4)中进行生根培养(培养条件为：22-25℃，光强1500-3000lx，相对湿度60-70％，16/8h光周期)。4-5周后可进行炼苗。
(七)炼苗培养
将生根的组培苗的组培瓶盖打开至半开状态，放到炼苗室中培养1d(相对湿度80％，光照强度1500lx，22-24℃)，之后将组培瓶盖打开，在炼苗室中培养6d，期间依据苗子的生长状态逐步降低空气湿度(从最初的80％逐渐降至50％，每2-3d降一次)和逐渐增加光照强度(从最初的1500lx逐渐增至3000lx，每两天增强一次)，温度从22℃逐渐提高为25℃。16/8h光周期。
(八)移栽
将经炼苗后的蓝莓植株从瓶中取出，去掉培养基，用水清洗根部，种于营养钵中。移栽所用的培养土为蛭石：营养土：苔藓(1：1：1)，注意营养土的pH要控制在5.3-5.6。
实施例2：蓝莓组织培养
(一)含MES的MS培养基的配方
本发明含2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)的MS基础培养基配方参见表1。
表1.含2-(N-吗啡啉)乙磺酸(MES)的MS基础培养基配方
Figure BDA0003024793270000081
(二)预培养培养基的配制与蓝莓预培养
(1)预培养培养基的配制：
本发明的1-9号预培养培养基均以表1所示含MES的MS基础培养基为基础培养基，pH5.2，配方中其他成分如表2中2-4列所示。
(2)蓝莓预培养
具体操作方法如下：将实施例1步骤(六)所得蓝莓无菌组培苗的茎段摆放于1-4号预培养培养基上进行预培养。每个蓝莓的茎段上有至少一个芽点。茎段之间的间隔不小于0.5mm，放于16℃下黑暗处理2h(2-4h皆可)，其中一瓶的照片见图1。之后放于每日16小时光照/8小时黑暗，相对湿度60％环境下培养2d(1-2d)。其中一瓶的照片见图2(未萌发)，统计快速培养过程中茎段的萌发率和芽萌发后的状态，培养效果参见表2。
通过以上试验中摸索的1-4号的预培养培养基，选出最优激素组合为1号预培养培养基中的激素组合。
用相同的方法进行预培养，差别在于将前述1号预培养培养基换成5号预培养培养基，培养效果参见表2。萌发率仅降低了1％，生长状态相差不大，为节约成本故选择蔗糖浓度为10g/L进行进一步试验。
在5号预培养培养基的基础上添加三个浓度的NaCl的6-8号预培养培养基进行盐胁迫，预培养条件与1-4号预培养培养基组相同，培养效果参见表2。由此可见，相对于使用5号预培养培养基的预培养，200mg/L的NaCl胁迫会明显恶化培养效果，而50mg/L的NaCl和100mg/L的NaCl胁迫生长状态相差不大，而萌发率会明显变高，100mg/L的NaCl胁迫的培养效果最好。
表2.预培养培养基和培养效果
Figure BDA0003024793270000091
Figure BDA0003024793270000101
注：“+”表示芽的生长状态
+表示状态不好，生长慢
++表示状态一般
+++表示状态好，生长较快
“-”表示芽受胁迫的状态
-表示轻微的胁迫表型
--表示严重的胁迫表型
本步骤使用蓝莓无菌组培苗是为了省去外植体消毒处理步骤，提高效率，增加无菌效果，促进生产的连续化。本发明亦可采用健壮幼嫩的蓝莓茎段，通过常规消毒，获得无菌蓝莓茎段，进行后续的操作。
亦可采用实施例1步骤(三)所得茎段，进行后续的操作。
(三)快速培养培养基的配制与快速培养
(1)快速培养培养基的配制
本步骤的1-6号快速培养培养基均以含MES的MS培养基为基础培养基，其中含有30g/L的蔗糖，7g/L的琼脂，pH5.2，配方中其他成分如表3所示。
(2)快速培养
具体操作方法如下：预培养结束后，将使用7号预培养培养基预培养的茎段分别转移到1-2号快速培养培养基上，茎段之间间隔不小于0.5mm，放于24℃，每日16小时光照/8小时黑暗，光照强度1500-3000lx，相对湿度60％的环境下进行培养15-20d。其中一瓶的快速培养5d照片见图3、其中一瓶的快速培养13d照片见图4、其中一瓶的快速培养15d照片见图5、其中一瓶的快速培养20d照片见图6，培养效果参见表3。
由此可见，2号快速培养培养基培养的效果更好。
用相同的方法进行快速培养，差别在于将2号快速培养培养基中添加不同的添加物，形成3-6号快速培养培养基，培养效果参见表3。
由此可见，与2号快速培养培养基培养的效果相比，4号快速培养培养基培养的效果变差，3、5号快速培养培养基培养的效果相当，6号快速培养培养基培养的效果更好。
表3.快速培养基与培养效果
Figure BDA0003024793270000111
注：+表示苗子的生长速度
+表示长势一般，生长较慢，
++表示长势较好，生长较快
+++表示长势好，生长快
(四)苗生长培养基的配制与苗生长
(1)苗生长培养基
本步骤的1-5号茎段生长培养基均以含MES的MS培养基为基础培养基，包含30g/L的蔗糖，7g/L的琼脂，pH5.2，配方中其他成分如表4所示。
(2)苗生长
具体操作方法如下：快速培养结束后，将使用6号快速培养培养基培养的蓝莓苗密集摆放的茎段分别转移到1-5号苗生长培养基上，并放于24℃，每日16小时光照/8小时黑暗，光照强度1500-3000lx，相对湿度60％的环境下进行培养，15d左右即可进行生根培养。
其中三瓶的培养照片见图7和图8-9，培养效果参见表4。
由此可见，2号苗生长培养基培养效果最好。
注：以上茎段在摆放时可根据茎段的大小和长短适当调整每个培养基上茎段摆放的数量和间隔。
表4.苗生长培养基和培养效果
编号 不同激素组合 组培苗生长状况
1 0.1mg/L异戊烯腺嘌呤 +
2 0.5mg/L异戊烯腺嘌呤 +++
3 1.0mg/L异戊烯腺嘌呤 ++
4 1.5mg/L异戊烯腺嘌呤 ++
5 2.0mg/L异戊烯腺嘌呤 +
注：“+”表示苗子的生长状况
+表示长势一般，生长较慢，植株中庸，叶片较小
++表示长势较好，植株较为健壮
+++表示长势好，健壮，叶片大而有光泽、叶色嫩绿
如果步骤(二)中预培养阶段使用的是组培苗以外的外植体茎段，则需经过以下一步：
待腋芽萌发并生长到1-1.5cm时，将其切下，放到新的苗生长培养基上进行培养。
(五)生根培养基的配制
本步骤的1-4号生根培养基均以1/2MS培养基为基础培养基，包含2.0mg/L的NAA、20g/L的蔗糖、6.0g/L的琼脂，ph5.2-5.4，配方中其他成分如表5所示。
具体操作方法如下：将步骤(四)中2号苗生长培养基培养的长势茁壮的蓝莓苗苗切割后，将其分别移至表5所示4种蓝莓生根培养基中，每瓶8-10株，培养环境为24℃，光照强度1500-3000lx，每日16h光照/8小时黑暗，培养20-30天，观察小苗生根状况并记录生根率。生根率参见表5。
由此可见，使用3号生根培养基培养的效果最好。
1/2MS培养基具体还包括大量元素：950mg/L硝酸钾、166.1mg/L氯化钙、825mg/L硝酸铵、90.35mg/L硫酸镁、85mg/L磷酸二氢钾；微量元素：0.025mg/L硫酸铜、6.2mg/L硼酸、16.9mg/L硫酸锰、0.25mg/L钼酸钠、8.6mg/L硫酸锌、0.025mg/L氯化钴、0.83mg/L碘化钾；铁盐：27.8mg/LFeSO4·7H2O、37.26mg/L Na2-EDTA·2H2O；有机成分：2.0mg/L甘氨酸、100mg/L肌醇、0.50mg/L烟酸、0.1mg/L盐酸硫胺素(VB1)、0.5mg/L盐酸吡哆醇(VB6)。
表5.生根培养基
编号 NAA(mg/L) 生根率(％) 生长状态
1 0.5 68％ 生根慢
2 1.0 71％ 不定根较多
3 2.0 93％ 生根时间较短，不定根较多
4 3.0 83％ 生根时间较短，不定根较多
(六)炼苗
将步骤(五)的生根蓝莓植株进行炼苗培养，炼苗的步骤包括：准备已经生根的蓝莓组培苗，将组培瓶瓶盖打开，在其中加入15ml的无菌水，置于湿度为70％的环境中，1天后，将组培瓶中的水倒掉，重新加入20ml无菌水，将湿度调整为60％并进行通风，7天后进行移栽，期间可以更换一次无菌水。以上的光暗周期均为16h光/8h黑暗。
(七)移栽
将经炼苗后的蓝莓植株从瓶中取出，去掉培养基，用水清洗根部，种于营养钵中。移栽所用的培养土为蛭石：营养土：苔藓(1：1：1)，注意营养土的pH要控制在5.3-5.6。
实施例3：蓝莓组织培养(通过外植体培养)
(一)外植体的选择和处理
取大田种植蓝莓(品种：JE)当年生的嫩枝，将叶片去掉，用软毛牙刷蘸取洗洁精将枝条表面的灰尘等杂质清洗干净，放在流水下冲洗30-40min。
(二)外植体的消毒
1、准备浓度为75v/v％(70v/v％-75v/v％)的酒精100ml，加入1-2滴吐温-20，摇匀备用；准备浓度为2w/v％(1.5w/v-％-2.5w/v％)的次氯酸钠溶液100ml，加入1-2滴吐温-20备用；
2、将枝条剪成长度适中的茎段，保证每一段枝条都包含有一个腋芽，且腋芽距茎段下端至少0.5cm。
3、将剪好的茎段放入提前准备好的75v/v％的酒精中消毒20s(20-40s，不超过1min)，缓慢摇动已以达到更好的消毒效果。
4、将酒精倒掉，加入灭菌的去离子水清洗2次(2-3次)。
5、加入准备好的次氯酸钠溶液消毒5min(5-8min)，缓慢摇动已以达到更好的消毒效果。
6、倒掉次氯酸钠溶液，用灭菌的去离子水清洗4-5次，至无次氯酸钠的味道，将茎段放于灭菌的滤纸板上吸去多余的水分，备用。
(三)外植体的预培养
将茎段摆放于茎段预培养培养基上进行预培养，其中预培养培养基以含MES的MS培养基为基础培养基(成分参见表1)，包含0.2mg/L的IAA、0.1mg/L的CPPU、10g/L的蔗糖、100mg/L的NaCl，7g/L的琼脂，pH5.2。茎段之间的间隔不小于0.5mm，放于16℃下黑暗处理2h(2-4h)，之后放于每日16小时光照/8小时黑暗，光照强度1500-3000lx，相对湿度60％环境下培养2d(1-2d)。
(四)茎段快速培养
预培养结束后，将茎段转移到快速培养基上，其中快速培养培养基以含MES的MS培养基为基础培养基，包含0.4mg/L的ZT、1mg/L的腐胺，1mg/L的亚精胺，1mg/L的精胺、30g/L的蔗糖，7g/L的琼脂，pH5.2。茎段之间间隔不小于0.5mm，放于24℃，16小时光照/8小时黑暗，光照强度1500-3000lx，相对湿度60％的环境下进行培养15-20d。
(五)茎段生长培养
快速培养结束后，将密集摆放的茎段转移到苗生长培养基上，其中苗生长培养基以含MES的MS培养基为基础培养基，包含0.5mg/L异戊烯腺嘌呤、30g/L的蔗糖，7g/L的琼脂，pH5.2。并放于24℃，每日16小时光照/8小时黑暗，光照强度1500-3000lx，相对湿度60％的环境下进行培养，15d左右即可进行生根培养。
注：以上茎段在摆放时可根据茎段的大小和长短适当调整每个培养基上茎段摆放的数量和间隔。
(六)生根培养
将步骤(五)中长势茁壮的蓝莓苗切割后，将其分别移至生根培养基中进行生根培养，其中生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，包含2.0mg/L的NAA、20g/L的蔗糖、6.0g/L的琼脂，ph5.2-5.4。每瓶8-10株，培养环境为24℃，光照强度1500-3000lx，16h光照/8小时黑暗，培养20-30天。
(七)炼苗
炼苗的步骤包括：准备已经生根的蓝莓组培苗，将组培瓶瓶盖打开，在其中加入15ml的无菌水，置于湿度为70％的环境中，1天后，将组培瓶中的水倒掉，重新加入20ml无菌水，将湿度调整为60％并进行通风，7天后进行移栽，期间可以更换一次无菌水。以上的光暗周期均为16h光/8h黑暗。
(八)移栽
将经炼苗后的蓝莓植株从瓶中取出，去掉培养基，用水清洗根部，种于营养钵中。移栽所用的培养土为蛭石：营养土：苔藓(1：1：1)，注意营养土的pH要控制在5.3-5.6。
实施例3以外植体做材料进行培养，观察到了褐化情况，因而影响最终的成活率和生产效率，增加工作量和工作时间，故本方法虽然也适用于外植体茎段，最佳的材料还是组培苗茎段。
对比例：蓝莓组织培养
与实施例2的区别仅在于，未对蓝莓进行预培养。
本对比例中的快速培养中，其中一瓶的快速培养15d照片见图10，图6和图10分别为本对比例和实施例2快速培养15d后蓝莓茎段的萌发情况，本实施例中，由于未对蓝莓进行预培养，在快速培养阶段，快速培养培养基预培养的茎段发芽速度慢，且发芽率低。
由技术常识可知，本发明可以通过其它的不脱离其精神实质或必要特征的实施方案来实现。因此，上述公开的实施方案，就各方面而言，都只是举例说明，并不是仅有的。所有在本发明范围内或在等同于本发明的范围内的改变均被本发明包含。

Claims (10)

1.一种用于蓝莓茎段组织快繁的培养基组合，所述培养基组合包括预培养培养基、快速培养培养基、苗生长培养基和生根培养基；
所述预培养培养基以含2-(N-吗啡啉)乙磺酸的MS培养基为基础培养基，所述预培养培养基包括：0.1-0.5mg/L IAA、0.05-0.6mg/L CPPU；
所述快速培养培养基以含2-(N-吗啡啉)乙磺酸的MS培养基为基础培养基，所述快速培养培养基包括：0.2-0.5mg/L ZT；
所述苗生长培养基以含2-(N-吗啡啉)乙磺酸的MS培养基为基础培养基，所述苗生长培养基包括：0.1-2.0mg/L 2-ip；以及
所述生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，所述生根培养基包括：0.3-4.0mg/LNAA。
2.如权利要求1所述的培养基组合，其特征在于，所述预培养培养基还包括：25-150mg/L的NaCl；
优选地，所述预培养培养基包括：50-100mg/L的NaCl；
优选地，所述预培养培养基包括：0.15-0.3mg/L IAA、0.05-0.3mg/L CPPU；
优选地，所述预培养培养基包括：0.2mg/L IAA、0.1mg/L CPPU；
优选地，所述预培养培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为30-50mg/L；
优选地，所述预培养培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为40mg/L；
优选地，所述预培养培养基中，所述MS培养基包括4-8g/L琼脂、15-30g/L蔗糖；
优选地，所述预培养培养基中，pH＝5.0-5.5。
3.如权利要求1所述的培养基组合，其特征在于，所述快速培养培养基还包括：0.5-1.5mg/L腐胺和/或0.5-1.5mg/L精胺；
优选地，所述快速培养培养基还包括：0.5-1.5mg/L亚精胺；
优选地，所述快速培养培养基包括：0.3-0.5mg/L ZT；
优选地，所述快速培养培养基包括：0.4mg/L ZT；
优选地，所述快速培养培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为30-50mg/L；
优选地，所述快速培养培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为40mg/L；
优选地，所述快速培养培养基中，所述MS培养基包括4-8g/L琼脂、25-35g/L蔗糖；
优选地，所述快速培养培养基中，pH＝5.0-5.5；
优选地，所述苗生长培养基包括：0.3-0.7mg/L2-ip；
优选地，所述苗生长培养基包括：0.5mg/L 2-ip；
优选地，所述苗生长培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为30-50mg/L；
优选地，所述苗生长培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为40mg/L；
优选地，所述苗生长培养基中，所述MS培养基包括4-8g/L琼脂、25-35g/L蔗糖；
优选地，所述苗生长培养基中，pH＝5.0-5.5；
优选地，所述生根培养基包括：1.0-3.0mg/L NAA；
优选地，所述生根培养基包括：2.0mg/L NAA；
优选地，所述生根培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为30-50mg/L；
优选地，所述生根培养基中，2-(N-吗啡啉)乙磺酸的浓度为40mg/L；
优选地，所述生根培养基中，所述1/2MS培养基包括4-8g/L琼脂、25-35g/L蔗糖；
优选地，所述生根培养基中，pH＝5.0-5.5。
4.一种蓝莓茎段组织快繁的方法，所述方法包括如下步骤：
S1：将带有芽点的无菌蓝莓茎段接种到权利要求1-3中任一项所述的培养基组合中的所述预培养培养基中进行预培养，得到经预培养的蓝莓茎段；
S2：将所述经预培养的蓝莓茎段接种到权利要求1-3中任一项所述的培养基组合中的所述快速培养培养基中进行快速培养，得到经快速培养的蓝莓苗；
S3：将所述经快速培养的蓝莓苗接种到权利要求1-3中任一项所述的培养基组合中的所述苗生长培养基中进行继续培养，得到进一步培养的蓝莓苗；
S4：将所述进一步培养的蓝莓苗接种到权利要求1-3中任一项所述的培养基组合中的所述生根培养基中进行继续培养，得到蓝莓组织培养苗。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤S1中，所述无菌蓝莓茎段来自蓝莓组织培养苗。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，在步骤S1中，所述预培养的条件为，10-20℃下黑暗环境培养1-4小时，再在光照条件下培养1-3天；
优选地，在步骤S1中，所述光照时间为每日14-18小时；
优选地，在步骤S1中，所述光照强度为1500-3000lx；
优选地，在步骤S1中，在光照条件下培养中，培养环境湿度为50-70％；
优选地，在步骤S2中，培养温度为20-28℃；
优选地，在步骤S2中，培养光照时间为每日14-18小时；
优选地，在步骤S2中，培养光照强度为1500-3000lx；
优选地，在步骤S2中，培养环境湿度为50-70％；
优选地，在步骤S2中，培养时间为15-20天；
优选地，在步骤S3中，培养温度为20-28℃；
优选地，在步骤S3中，培养光照时间为每日14-18小时；
优选地，在步骤S3中，培养光照强度为1500-3000lx；
优选地，在步骤S3中，培养环境湿度为50-70％；
优选地，在步骤S3中，培养时间为10-20天；
优选地，在步骤S4中，培养温度为20-28℃；
优选地，在步骤S4中，培养光照时间为每日14-18小时；
优选地，在步骤S4中，培养光照强度为1500-3000lx；
优选地，在步骤S4中，培养环境湿度为50-70％；
优选地，在步骤S4中，培养时间为20-30天。
7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将所述蓝莓组织培养苗进行炼苗和移栽，得到蓝莓栽培植株。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述炼苗的步骤包括：将所述蓝莓组织培养苗的培养瓶内保持65-75％的湿度0.5-1.5天，再在通风条件下保持55-65％的湿度5-9天。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述炼苗的步骤中，光照时间为每日14-18小时；
优选地，所述炼苗的步骤中，光照强度为1500-3000lx。
10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，将经过练苗后的所述的蓝莓植株的根部清理去掉培养基，进行所述移栽；优选地，移栽所用培养土为质量用量比为1：0.5-1.5：0.5-1的蛭石、营养土和苔藓。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115918535B (zh) * 2022-12-02 2023-10-03 浙江省农业科学院 一种蓝莓无糖组培的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102187813A (zh) * 2011-03-31 2011-09-21 中国农业大学 蓝莓组织培养的方法及其专用培养基
CN103125395A (zh) * 2013-03-18 2013-06-05 南京斯摩尼生物科技有限公司 一种促进木本植物不定根发生和生长的培养基及其应用
CN106171980A (zh) * 2016-07-12 2016-12-07 安徽师范大学 蓝莓组织培养方法
CN106342688A (zh) * 2016-08-29 2017-01-25 盛林蓝莓集团股份有限公司 蓝莓种苗的脱毒繁育方法
CN108651277A (zh) * 2017-03-29 2018-10-16 北京林业大学 用于蓝莓组织培养的初代、继代培养基

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102187813A (zh) * 2011-03-31 2011-09-21 中国农业大学 蓝莓组织培养的方法及其专用培养基
CN103125395A (zh) * 2013-03-18 2013-06-05 南京斯摩尼生物科技有限公司 一种促进木本植物不定根发生和生长的培养基及其应用
CN106171980A (zh) * 2016-07-12 2016-12-07 安徽师范大学 蓝莓组织培养方法
CN106342688A (zh) * 2016-08-29 2017-01-25 盛林蓝莓集团股份有限公司 蓝莓种苗的脱毒繁育方法
CN108651277A (zh) * 2017-03-29 2018-10-16 北京林业大学 用于蓝莓组织培养的初代、继代培养基

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
沙玉芬等: "蓝莓茎段组培快繁技术研究", 《安徽农业科学》 *
王大平: "不同因素对兔眼蓝莓离体培养芽诱导效果的影响", 《安徽农业科学》 *
茨韦特科夫？约旦等: "引进国外蓝莓品种的组织培养及快繁技术研究", 《黑龙江农业科学》 *

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