CN111657144A - 一种南高丛蓝莓品种‘奥尼尔’的组培快繁方法 - Google Patents

一种南高丛蓝莓品种‘奥尼尔’的组培快繁方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种南高丛蓝莓品种‘奥尼尔’的组培快繁方法，涉及蓝莓繁育技术领域，通过消毒处理诱导丛生芽的产生，并对获得的丛生芽进行瓶内生根培养，快速获得大量‘奥尼尔’的种苗，克服了常规扦插繁殖慢以及瓶外生根率低等问题。采用本发明所述组培快繁方法，经诱导培养60d后，原球茎增殖系数达到8.6，丛生芽表现最好，叶色深绿；经生根培养90d后试管苗叶片呈深绿色，有效生根率达96.3％，生根数量平均12.7条/株，平均根长43.3mm；对得到的生根试管苗进行室外移栽驯化后，移栽成活率高达92％，具有繁殖速度快、产量大、种苗质量优、需时短、实际操作性强等特点，能在较短时间内获得大量‘奥尼尔’种苗。

Description

一种南高丛蓝莓品种‘奥尼尔’的组培快繁方法
技术领域
本发明属于蓝莓繁育技术领域，具体涉及一种南高丛蓝莓品种‘奥尼尔’的组培快繁方法。
背景技术
蓝莓(Blueberry)属于杜鹃花科(Ericaceae)越橘属(Vaccinium)多年生落叶或常绿浆果类灌木，果肉细腻、酸甜、风味独特，被誉为“水果皇后”。蓝莓果浆中富含大量的脂肪、蛋白质、花青素、黄酮类、多酚类和多种维生素等成分，具有较高的营养价值和保健功效，在抗衰老、改善视力、抗癌等方面有特效，因此，被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一，具有较高的深加工应用前景。
蓝莓栽培品种主要有高丛蓝莓、矮丛蓝莓和兔眼蓝莓三大品种，‘奥尼尔’属南高丛蓝莓品种，具有树势强、产量较高、成熟期早、口感佳、适合鲜果销售、观光采摘等特点，因此市场价格较高，备受消费者喜爱。‘奥尼尔’常规的繁育方式有扦插等，但繁殖系数低、生根速度慢、易携带病毒，难以满足市场需求，而采用植物组织快繁技术可以提高繁殖系数，短期之内能获得大量的无病毒种苗且保持品种的优良性，因此，可采用该技术缓解目前‘奥尼尔’种苗市场供应困难的局面。但‘奥尼尔’属弱根系植物，不同的培养方式影响组培苗的生长，如培养基的选择和激素添加等，对‘奥尼尔’的增殖系数和生根率影响很大，如何确定其最适生长条件，是制约了组培苗产业化进程的关键。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种南高丛蓝莓品种‘奥尼尔’的组培快繁方法，可快速获得大量‘奥尼尔’的种苗，克服了常规扦插繁殖慢以及瓶外生根率低等问题，且获得生根试管苗移栽成活率高。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种南高丛蓝莓品种‘奥尼尔’的组培快繁方法，包括以下步骤：(1)以消毒后的奥尼尔带腋芽幼茎作为外植体，接种于丛生芽诱导培养基中进行诱导培养，得丛生芽；所述丛生芽诱导培养基以WPM培养基为基本培养基，还包括：NAA0.1mg/L、ZT1.0～2.0mg/L、琼脂6.0g/L和蔗糖20g/L，pH值为5.4；
(2)待所述丛生芽长出6～7片叶子、高7～8cm时，将所述丛生芽在200～1000mg/L的IBA溶液中浸蘸20s，转接到生根培养基中进行生根培养，得生根试管苗，所述生根培养基以WPM培养基为基本培养基，还包括：IBA0～0.5mg/L、琼脂6.0g/L和蔗糖20g/L，pH值为5.4。
优选的，步骤(1)所述消毒包括利用体积百分含量为75％的乙醇水溶液浸泡45～60s，清水冲洗1～2次后再利用体积百分含量为5％的次氯酸钠水溶液浸泡7～12min，清水冲洗5～6次。
优选的，步骤(1)所述奥尼尔带腋芽幼茎采集自两年生奥尼尔植株。
优选的，在步骤(2)所述IBA溶液浸蘸前，还包括将所述丛生芽截成2～3cm。
优选的，步骤(1)所述诱导培养和步骤(2)所述生根培养的光照时间均为12h，光照强度均为1500～2000Lx，温度均为25±2℃。
优选的，在步骤(2)得到所述生根试管苗后，还包括室外移栽驯化。
优选的，所述室外移栽驯化包括：将得到的生根试管苗于春季3～4月，转移到室外开瓶驯化7～10d后，洗净根部培养基，移栽到经多菌灵消毒预先处理的移栽基质中，遮阴处理7～10d，再置于塑料大棚中。
本发明提供了一种南高丛蓝莓品种‘奥尼尔’的组培快繁方法，通过消毒处理诱导丛生芽的产生，并对获得的丛生芽进行瓶内生根壮苗培养，快速获得大量‘奥尼尔’的种苗，克服了常规扦插繁殖慢以及瓶外生根率低等问题。采用本发明所述组培快繁方法，经诱导培养60d后，原球茎增殖系数达到8.6，丛生芽表现最好，叶色深绿；经生根培养90d后试管苗叶片呈深绿色，有效生根率(生根条数≥3条/株)达96.3％，生根数量平均12.7条/株，平均根长43.3mm；对得到的生根试管苗进行室外移栽驯化后，移栽成活率高达92％，具有繁殖速度快、产量大、种苗质量优、需时短、实际操作性强等特点，能在较短时间内获得大量‘奥尼尔’种苗，应用前景非常广阔。
附图说明
图1为脱毒茎段在丛生芽诱导培养基(激素种类和含量为：NAA0.1mg/L+6-BA1.5mg/L)中生长60d的丛生芽增殖情况；
图2为脱毒茎段在丛生芽诱导培养基(激素种类和含量为：NAA0.1mg/L+ZT1.5mg/L)中生长60d的丛生芽增殖情况；
图3为丛生芽直接接种到瓶内生根培养基中90d后的生长情况；
图4为丛生芽通过500mg/LIBA浸蘸接种到瓶内生根培养基中90d后的生长情况；
图5为生根的试管苗在沙土基质移栽90d后的生长情况；
图6为生根的试管苗在腐殖土质移栽90d后的生长情况；
图7为生根的试管苗在水苔鲜移栽90d后的生长情况。
具体实施方式
本发明提供了一种南高丛蓝莓品种‘奥尼尔’的组培快繁方法，包括以下步骤：(1)以消毒后的奥尼尔带腋芽幼茎作为外植体，接种于丛生芽诱导培养基中进行诱导培养，得丛生芽；所述丛生芽诱导培养基以WPM培养基为基本培养基，还包括：NAA0.1mg/L、ZT1.0～2.0mg/L、琼脂6.0g/L和蔗糖20g/L，pH值为5.4；
(2)待所述丛生芽长出6～7片叶子、高7～8cm时，将所述丛生芽在200～1000mg/L的IBA溶液中浸蘸20s，转接到生根培养基中进行生根培养，得生根试管苗，所述生根培养基以WPM培养基为基本培养基，还包括：IBA0～0.5mg/L、琼脂6.0g/L和蔗糖20g/L，pH值为5.4。
本发明以消毒后的奥尼尔带腋芽幼茎作为外植体，接种于丛生芽诱导培养基中进行诱导培养，得丛生芽；所述丛生芽诱导培养基以WPM培养基为基本培养基，还包括：NAA0.1mg/L、ZT1.0～2.0mg/L、琼脂6.0g/L和蔗糖20g/L，pH值为5.4。本发明所述消毒优选包括利用体积百分含量为75％的乙醇水溶液浸泡45～60s，清水冲洗1～2次后再利用体积百分含量为5％的次氯酸钠水溶液浸泡7～12min，清水冲洗5～6次。本发明在所述消毒前，优选还包括利用洗洁精清洗所述奥尼尔带腋芽幼茎，而后用流水冲洗1～2h。
本发明优选采集两年生奥尼尔植株上的带腋芽幼茎作为外植体前体，所述外植体前体优选的包含1个腋芽，长度2～3cm。本发明对所述外植体前体经过所述清洗和消毒后作为外植体，接种于丛生芽诱导培养基中进行诱导培养，所述诱导培养优选在LED光源下进行，光照时间12h，光强1500～2000Lx，温度25±2℃。本发明所述丛生芽诱导培养基以WPM培养基为基本培养基，本发明对所述WPM培养基的来源并没有特殊限定，利用本领域的常规市售WPM培养基即可，优选的包括以下成分：(1)K2SO4990mg/L、(2)MgSO4·7H2O370mg/L、(3)KH2PO4170mg/L、(4)NH4N03400mg/L、(5)MnSO4·H2O22.3mg/L、(6)ZnSO4·7H2O8.6mg/L、(7)H3BO36.2mg/L、(8)CuSO4·5H2O0.25mg/L、(9)Na2MoO4·2H2O0.25mg/L、(10)Ca(NO3)2·4H2O556mg/L、(11)FeSO4·7H2O37.3mg/L、(12)肌醇100.0mg/L、(13)甘氨酸2.0mg/L、(14)B1(盐酸硫胺素)1.0mg/L、(15)B6(盐酸吡哆醇)0.5mg/L、(16)B5(泛酸)0.5mg/L。本发明所述丛生芽诱导培养基中还包括NAA(0.1mg/L)和ZT(1.0～2.0mg/L)，所述NAA和ZT可共同刺激‘奥尼尔’细胞分化和促进愈伤组织形成芽，同时促进侧芽生长和产生不定芽分化，可以极大促进丛生芽形成和生长；高浓度的ZT(玉米素)可促进产生不定芽分化。将所述外植体在所述丛生芽诱导培养基中生长60d后，所述丛生芽诱导培养基优选为含NAA(0.1mg/L)和ZT(1.5mg/L)，原球茎增殖系数达到8.6，丛生芽表现最好，叶色深绿，苗壮。
得丛生芽后，本发明待所述丛生芽长出6～7片叶子、高7～8cm时，将所述丛生芽在200～1000mg/L的IBA溶液中浸蘸20s，转接到生根培养基中进行生根培养，得生根试管苗，所述生根培养基以WPM培养基为基本培养基，还包括：IBA0～0.5mg/L、琼脂6.0g/L和蔗糖20g/L，pH值为5.4。本发明待所述丛生芽长出6～7片叶子、高7～8cm时，将所述丛生芽截成2～3cm，并将所述2～3cm的丛生芽置于200～1000mg/L的IBA溶液中浸蘸20s，所述IBA溶液的浓度优选为500mg/L。本发明利用高浓度的IBA溶液浸蘸，高效诱导‘奥尼尔’不定根形成。本发明将浸蘸后的丛生芽转接到生根培养基中进行生根培养，所述生根培养基中包括0～0.5mg/L的IBA，优选为0.2mg/L。本发明所述生根培养基中低浓度IBA可添加促进根的生长和伸长。本发明所述生根培养优选在LED光源下进行，光照时间12h，光强1500～2000Lx、温度25±2℃。本发明在所述优选高浓度IBA(500mg/L)浸蘸处理后，在所述生根培养基中进行生根培养90d后，试管苗叶片呈深绿色，有效生根率(生根条数≥3条/株)达96.3％，生根数量平均12.7条/株，平均根长43.3mm。
本发明在得到所述生根试管苗后，优选还包括室外移栽驯化，所述室外移栽驯化优选包括：将得到的生根试管苗于春季3～4月，转移到室外开瓶驯化7～10d后，洗净根部培养基，移栽到经多菌灵消毒预先处理的移栽基质中，遮阴处理7～10d，再置于塑料大棚中。本发明所述遮阴处理优选利用透光塑料杯遮盖阳光，所述透光塑料杯具有透光、底部透气、保水保湿度高、便捷等特点，提高移栽成活率。本发明在所述塑料大棚中培养60d后，成活率达92％，苗长势良好，叶片深绿，植株健壮。本发明所述移栽基质优选包括3种，其中一种为河沙、珍珠岩和蛭石的混合基质，且河沙、珍珠岩和蛭石的体积比优选为1:1:1；一种为腐殖土、珍珠岩和蛭石的混合基质，且腐殖土、珍珠岩和蛭石的体积比优选为1:1:1；另一种为单一基质水苔鲜。
下面结合实施例对本发明提供的南高丛蓝莓品种‘奥尼尔’的组培快繁方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
步骤1：外植体脱毒处理
采集两年生‘奥尼尔’幼茎，先用洗洁精清洗‘奥尼尔’茎段，再用流水冲洗3h，然后用75％v/v酒精浸泡60s，接着用无菌水冲洗2次，再用5％的次氯酸钠浸泡10min，然后用无菌水冲洗6次，得到带腋芽‘奥尼尔’茎段；
步骤2：丛生芽的诱导培养(标号①和②表示对比试验，其中①为对比例，②为试验例)
①将步骤1得到的消毒后的带腋芽‘奥尼尔’茎段，接种于丛生芽诱导培养基(由WPM、NAA0.1mg/L、6-BA1.5mg/L琼脂6.0g/L和蔗糖20g/L组成，pH值为5.4)中进行光照培养，得到丛生芽；丛生芽诱导培养基中生长60d的丛生芽增殖情况如图1所示，增殖系数达到3.0；
②将步骤1得到的消毒后的带腋芽‘奥尼尔’茎段，接种于丛生芽诱导培养基(由WPM、NAA0.1mg/L、ZT1.5mg/L琼脂6.0g/L和蔗糖20g/L组成，pH值为5.4)中进行光照培养，得到丛生芽；丛生芽诱导培养基中生长60d的丛生芽增殖情况如图2所示，增殖系数达到8.6；
步骤3：瓶内生根诱导培养(标号①和②表示对比试验，其中①为对比例，②为试验例)
①当步骤2以试验例②诱导出的丛生芽长出6～7片叶子、高7～8cm时，将丛生芽剪成2～3cm，转接到生根壮苗培养基(由WPM、IBA0.2mg/L、琼脂6.0g/L和蔗糖20g/L组成，pH为5.4)中，进行光照培养，得到生根试管苗；在生根培养基培养中90d后的生长情况如图3所示，有效生根率达到22.5％，生根数量平均3.1条/株，平均根长42.3mm；
②当步骤2以试验例②诱导出的丛生芽长出6～7片叶子、高7～8cm时，将丛生芽剪成2～3cm，在高浓度的IBA(500mg/L)中浸蘸20s，再转接到生根壮苗培养基(由WPM、IBA0.2mg/L、琼脂6.0g/L和蔗糖20g/L组成，pH为5.4)中，进行光照培养，得到生根试管苗；在生根培养基培养中90d后的生长情况如图4所示，生根率达到96.3％，生根数量平均12.7条/株，平均根长43.3mm；
步骤4：室外移栽驯化(标号①、②和③表示不同移栽基质的对比试验)
①将步骤3以试验例②得到的生根试管苗于春季3～4月，从组培室转移到室外开瓶驯化7d后，洗净根部培养基，移栽到经多菌灵消毒预先处理的移栽基质(河沙：珍珠岩：蛭石＝1:1:1(V/V))中，用透光的塑料杯遮盖7d后，可将塑料杯移走，再置于塑料大棚中，浇水、保湿至成苗、出圃；生根的试管苗移栽90d后的生长情况如图5所示，移栽成活率高达92％，苗长势良好，叶片深绿，植株健壮。
②将步骤3以试验例②得到的生根试管苗于春季3～4月，从组培室转移到室外开瓶驯化7d后，洗净根部培养基，移栽到经多菌灵消毒预先处理的移栽基质(腐殖土：珍珠岩：蛭石＝1:1:1(V/V))中，用透光的塑料杯遮盖7d后，可将塑料杯移走，再置于塑料大棚中，浇水、保湿至成苗、出圃；生根的试管苗移栽90d后的生长情况如图6所示，移栽成活率高达89％，苗长势良好，叶片深绿，植株健壮。
③将步骤3以试验例②得到的生根试管苗于春季3～4月，从组培室转移到室外开瓶驯化7d后，洗净根部培养基，移栽到经多菌灵消毒预先处理的移栽基质(水苔鲜)中，用透光的塑料杯遮盖7d后，可将塑料杯移走，再置于塑料大棚中，浇水、保湿至成苗、出圃；生根的试管苗移栽90d后的生长情况如图7所示，移栽成活率达82％，苗长势良好，叶片深绿，植株健壮。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种南高丛蓝莓品种‘奥尼尔’的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以消毒后的奥尼尔带腋芽幼茎作为外植体，接种于丛生芽诱导培养基中进行诱导培养，得丛生芽；所述丛生芽诱导培养基以WPM培养基为基本培养基，还包括：NAA 0.1mg/L、ZT 1.0～2.0mg/L、琼脂6.0g/L和蔗糖20g/L，pH值为5.4；
(2)待所述丛生芽长出6～7片叶子、高7～8cm时，将所述丛生芽在200～1000mg/L的IBA溶液中浸蘸20s，转接到生根培养基中进行生根培养，得生根试管苗，所述生根培养基以WPM培养基为基本培养基，还包括：IBA0～0.5mg/L、琼脂6.0g/L和蔗糖20g/L，pH值为5.4。
2.根据权利要求1所述组培快繁方法，其特征在于，步骤(1)所述消毒包括利用体积百分含量为75％的乙醇水溶液浸泡45～60s，清水冲洗1～2次后再利用体积百分含量为5％的次氯酸钠水溶液浸泡7～12min，清水冲洗5～6次。
3.根据权利要求1所述组培快繁方法，其特征在于，步骤(1)所述奥尼尔带腋芽幼茎采集自两年生奥尼尔植株。
4.根据权利要求1所述组培快繁方法，其特征在于，在步骤(2)所述IBA溶液浸蘸前，还包括将所述丛生芽截成2～3cm。
5.根据权利要求1所述组培快繁方法，其特征在于，步骤(1)所述诱导培养和步骤(2)所述生根培养的光照时间均为12h，光照强度均为1500～2000Lx，温度均为25±2℃。
6.根据权利要求1所述组培快繁方法，其特征在于，在步骤(2)得到所述生根试管苗后，还包括室外移栽驯化。
7.根据权利要求6所述组培快繁方法，其特征在于，所述室外移栽驯化包括：将得到的生根试管苗于春季3～4月，转移到室外开瓶驯化7～10d后，洗净根部培养基，移栽到经多菌灵消毒预先处理的移栽基质中，遮阴处理7～10d，再置于塑料大棚中。
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