CN112913565B - 一种杨树嫁接苗的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种杨树嫁接苗的制备方法,步骤为:以毛白杨组织培养苗为砧木,砧木的切面与砧木茎秆纵轴之间的夹角为30°,以青杨组织培养苗为接穗,接穗的切面与接穗茎秆纵轴之间的夹角为30°,将接穗的切面与砧木的切面涂6‑BA水溶液后对接,通过嫁接套管固定接口处后在温室中培养。该方法制备的杨树嫁接苗成活率高,抗病力强。
Description
技术领域
本发明属于木本植物嫁接领域,涉及一种杨树嫁接苗的制备方法,具体涉及一种以毛白杨作砧木、以青杨组培苗作为接穗的微嫁接方法。
背景技术
青杨是我国北方主要的建群树种之一,其适应能力强、生长迅速,普遍用于河滩绿化、固堤林。毛白杨是北方许多省份重要的乡土绿化树种,其适应性强,树形美观,抗病虫害能力强,材质好等特点。近年来,由于受气候异常,林木结构单一等因素影响,多地青杨生长慢、品种退化,且出现多种病虫害问题,亟待进行林木品种的改造。
组织培养是快速生产杨树苗的好办法,尤其是品质好难以繁殖的杨树品种,用组培繁殖苗速度快,成本低。
杨树微嫁接的难度在于:组培苗由于是在试管里繁殖,茎干细嫩,木质化程度较低,嫁接难度大;组培苗生长环境是在恒温恒湿的条件下,植株水嫩,对外界环境的适应性较差,因此要提高嫁接成活率必须解决以上二个难题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种杨树微嫁接方法以及嫁接杨树育苗方法,以解决现有杨树培育繁殖时间长、性状不稳定、成活率低的问题。该方法简单、有效、快速进行组培苗繁殖,把组培苗微嫁接到砧木上,嫁接和驯化的杨树种苗,既能使得嫁接苗抗多种疾病、提高生长势,又能降低杨树嫁接苗的生产成本,提高产量。
较为具体地,本发明提供了一种杨树嫁接苗的制备方法,所述制备方法为:以毛白杨为砧木,以青杨为接穗,嫁接所述砧木与所述接穗,得到所述杨树嫁接苗。
在一些实施方式中,所述制备方法包括如下步骤:
S1:将所述接穗的切面与所述砧木的切面对接;
S2:固定带有切面的所述接穗与带有切面的所述砧木,得到固定的砧木和接穗;
S3:培养所述固定的砧木和接穗,得到愈合的杨树嫁接苗。
在一些实施方式中,在步骤S1中,所述接穗的切面和/或所述砧木的切面涂有或浸有细胞分裂素溶液后进行所述对接。
在一些实施方式中,在步骤S1中,所述细胞分裂素溶液为含0.5-2mg/L6-BA的水溶液。
在一些实施方式中,在步骤S1中,在所述砧木的植株第4与第5真叶间切断所述砧木,得到所述砧木的切面。
在一些实施方式中,在步骤S1中,保留二叶一心,切断所述接穗的植株,得到所述接穗的切面。
在一些实施方式中,在步骤S1中,所述接穗的切面和/或所述砧木的切面是通过灭菌的嫁接刀切割得到的。
在一些实施方式中,在步骤S1中,所述接穗的切面与所述接穗茎秆纵轴之间的夹角为25-35°。
在一些实施方式中,在步骤S1中,所述砧木的切面与所述砧木茎秆纵轴之间的夹角为25-35°。
在一些实施方式中,在步骤S2中,所述固定是通过嫁接套管进行的。
在一些实施方式中,在步骤S2中,所述嫁接套管为弹性嫁接套管。
在一些实施方式中,在步骤S2中,所述嫁接套管为硅胶管。
在一些实施方式中,在步骤S2中,所述嫁接套管的内直径为所述砧木和所述接穗的外直径的90-100%。
在一些实施方式中,在步骤S2中,将带有切面的所述接穗与带有切面的所述砧木同时或相继插入所述嫁接套管。
在一些实施方式中,所述接穗的茎粗为2.0~2.5mm。
在一些实施方式中,所述砧木的茎粗为2.0~2.5mm。
在一些实施方式中,所述砧木为毛白杨组织培养苗,所述接穗为青杨组织培养苗。
在一些实施方式中,所述砧木的组织培养包括如下步骤:
Sa:将毛白杨叶片接种到毛白杨愈伤诱导培养基中诱导,得到毛白杨愈伤组织;
所述毛白杨愈伤诱导培养基以WPM培养基为基础培养基,其中含有6-10g/L琼脂,25-35g/L蔗糖,0.6-1.0mg/L NAA,PH为5.5-6.0;
Sb:将所述毛白杨愈伤组织接种到毛白杨生芽培养基中培养,得到带有不定芽的毛白杨幼苗;
所述毛白杨生芽培养基以WPM培养基为基础培养基,其中含有6-10g/L琼脂,25-35g/L蔗糖,0.3-0.8mg/L 6-BA,0.08-0.12mg/L NAA,PH为5.5-6.0。
在一些实施方式中,在步骤Sa中,培养温度为18-25℃,暗培养,培养时间为12-22天。
在一些实施方式中,在步骤Sa中,所述毛白杨叶片剪2-3口,所述毛白杨叶片的近轴面向上,接种到所述毛白杨愈伤诱导培养基中诱导。
在一些实施方式中,在步骤Sb中,培养温度为18-25℃,每日光照时间为14-18小时,光照强度为1500-2500lx,培养时间为20-30天。
在一些实施方式中,所述砧木的组织培养还包括如下步骤:
Sc:将带有所述不定芽的毛白杨幼苗在毛白杨生根培养基上培养,得到生根的毛白杨幼苗;
所述毛白杨生根培养基以WPM培养基为基础培养基,其中含有8-12g/L琼脂,15-25g/L蔗糖,0.3-0.8mg/L IBA,PH为5.5-6.0。
在一些实施方式中,在步骤Sc中,培养温度为18-25℃,每日光照时间为14-18小时,光照强度为1500-2500lx,培养时间为12-22天。
在一些实施方式中,所述毛白杨叶片是无菌毛白杨叶片。
在一些实施方式中,所述毛白杨叶片的灭菌方法为:将毛白杨叶片分别进行自来水冲洗,酒精浸泡,次氯酸钠溶液浸泡,无菌水冲洗。
在一些实施方式中,将毛白杨叶片分别进行自来水冲洗1-5遍,70-80wt%酒精浸泡15-45秒,1.5-2.5wt%次氯酸钠溶液浸泡1-5分钟,无菌水冲洗。
在一些实施方式中,所述毛白杨叶片是毛白杨枝条经水培得到的毛白杨叶片。
在一些实施方式中,所述接穗的组织培养包括如下步骤:
Si:将青杨叶片接种到青杨生芽培养基中,得到带有不定芽的青杨幼苗;
所述青杨生芽培养基以WPM培养基为基础培养基,其中含有6-10g/L琼脂,25-35g/L蔗糖,0.3-0.8mg/L 6-BA,0.03-0.08mg/L NAA,PH为5.5-6.0;
Sii:将所述带有不定芽的青杨幼苗接种于青杨增殖培养基上培养,得到青杨丛生苗;
所述青杨增殖培养基以WPM培养基为基础培养基,其中含有6-10g/L琼脂,25-35g/L蔗糖,0.03-0.08mg/L 6-BA,0.008-0.012mg/L NAA,PH为5.5-6.0。
在一些实施方式中,在步骤Si中,培养温度为18-25℃,每日光照时间为14-18小时,光照强度为1500-2500lx,培养时间为20-30天。
在一些实施方式中,在步骤Si中,青杨叶片的远轴面向下接种到所述青杨生芽培养基中。
在一些实施方式中,在步骤Sii中,培养温度为18-25℃,每日光照时间为14-18小时,光照强度为1500-2500lx,培养时间为12-22天。
在一些实施方式中,所述接穗的组织培养还包括如下步骤:
Siii:将所述青杨丛生苗接种于青杨生根培养基上培养,得到生根的青杨幼苗;
所述青杨生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基,其中含有8-12g/L琼脂,25-35g/L蔗糖,0.08-0.12mg/L IBA,PH为5.7-5.8。
在一些实施方式中,在步骤Siii中,培养温度为18-25℃,每日光照时间为14-18小时,光照强度为1500-2500lx,培养时间为12-22天。
在一些实施方式中,所述青杨叶片是无菌青杨叶片。
在一些实施方式中,所述青杨叶片的灭菌方法为:将青杨叶片分别进行自来水冲洗,酒精浸泡,次氯酸钠溶液浸泡,无菌水冲洗。
在一些实施方式中,将青杨叶片分别进行自来水冲洗1-5遍,70-80wt%酒精浸泡15-45秒,1.5-2.5wt%次氯酸钠溶液浸泡1-5分钟,无菌水冲洗。
在一些实施方式中,所述青杨叶片是青杨枝条经水培得到的青杨叶片。
在一些实施方式中,在步骤S3中,将所述固定的砧木和接穗的砧木部分插入毛白杨生根培养基中培养,得到愈合的杨树嫁接苗。
在一些实施方式中,所述毛白杨生根培养基以WPM培养基为基础培养基,其中含有8-12g/L琼脂,15-25g/L蔗糖,0.3-0.8mg/L IBA,PH为5.5-6.0。
在一些实施方式中,在步骤S3中,培养温度为18-25℃,每日光照时间为14-18小时,光照强度为1500-2500lx,培养时间为15-25天。
在一些实施方式中,所述制备方法还包括如下步骤:
对所述愈合的杨树嫁接苗进行练苗。
在一些实施方式中,所述练苗的步骤为:将装有所述愈合的杨树嫁接苗的组培瓶放入炼苗室下初步炼苗5-10天;松开组培瓶的瓶盖练苗3-5天;将瓶盖部分敞开炼苗4-8天。
在一些实施方式中,所述制备方法还包括如下步骤:
将经过练苗的所述愈合的杨树嫁接苗移栽到土壤当中进行保温培养。
在一些实施方式中,所述土壤包括按照质量比为1:1.8-2.2:0.9-1.1的珍珠岩,泥炭土和蛭石。
在一些实施方式中,所述土壤中还含有杀菌剂。
在一些实施方式中,所述保温培养的温度为25~28℃,时间为5-10天。
在一些实施方式中,所述制备方法还包括如下步骤:
将保温培养后的嫁接苗见光练苗10~30天后定植大田。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:1、用组培快繁替代了传统种苗的生产,不仅解决了种源问题,而且降低了生产成本,不受季节的限制,生产过程更加可控;2、组培苗微嫁接在不增加生产步骤和成本的同时,可以解决组培生长势的问题;3、由于砧木为毛白杨,抗病虫能力强,因此嫁接苗具有很强的抗逆性和抗病虫的优势,适用于广泛应用。
附图说明
图1为本发明的毛白杨作砧木与青杨组培苗作接穗进行微嫁接的方法的流程示意图。
图2为将毛白杨作砧木与青杨组培苗作接穗进行微嫁接成功的组培苗照片。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将结合附图对本发明实施方式作进一步地详细描述。
本发明提供了一种毛白杨作砧木与青杨组培苗作接穗进行微嫁接的方法,主要流程如图1所示。凡没有详细介绍来源和性质的材料,均按照本领域常规的材料来使用。凡没有详细描述的内容,均通过本领域常规方法操作。
材料
WPM培养基,具体包括无机盐:NH4NO3 400mg/L、Ca(NO3)2386mg/L、K2SO4 990mg/L、CaCl272.5 mg/L、KH2PO4 170mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、MgSO4180.7 mg/L、MnSO422.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、Fe2(SO4)3·7H2O 27.85mg/L、CuSO4·5H2O 0.25mg/L、Na2-EDTA 37.3mg/L,有机物:肌醇100mg/L、维生素B1 1mg/L、维生素B5 0.5mg/L、维生素B60.5mg/L、甘氨酸2.0mg/L。
1/2MS培养基,具体包括大量元素:950mg/L硝酸钾、166.1mg/L氯化钙、825mg/L硝酸铵、90.35mg/L硫酸镁、85mg/L磷酸二氢钾;微量元素:0.025mg/L硫酸铜、6.2mg/L硼酸、16.9mg/L硫酸锰、0.25mg/L钼酸钠、8.6mg/L硫酸锌、0.025mg/L氯化钴、0.83mg/L碘化钾;铁盐:27.8mg/LFeSO4·7H2O、37.26mg/L Na2-EDTA·2H2O;有机成分:2.0mg/L甘氨酸、100mg/L肌醇、0.50mg/L烟酸、0.1mg/L盐酸硫胺素(VB1)、0.5mg/L盐酸吡哆醇(VB6)。
毛白杨愈伤诱导培养基:基础培养基为WPM培养基,含有8.0g/L琼脂、30g/L蔗糖,培养基中的激素为NAA0.8mg/L,PH为5.7-5.8。
毛白杨愈伤继代培养基:基础培养基为WPM培养基,含有8.0g/L琼脂、30g/L蔗糖,培养基中的激素为NAA0.5mg/L,PH为5.7-5.8。
毛白杨生芽培养基:基础培养基为WPM培养基,含有8.0g/L琼脂、30g/L蔗糖,培养基中的激素为6-BA0.5mg/L,NAA0.1mg/L,PH为5.7-5.8。
毛白杨生根培养基:基础培养基为WPM培养基,含有10g/L琼脂、20g/L蔗糖,培养基中的激素为IBA0.5mg/L,PH为5.7-5.8。
青杨生芽培养基:基础培养基为WPM培养基,含有8.0g/L琼脂、30g/L蔗糖,培养基中的激素为6-BA0.5mg/L,NAA 0.05mg/L,PH为5.7-5.8。
青杨增殖培养基:基础培养基为WPM培养基,含有8.0g/L琼脂、30g/L蔗糖,培养基中的激素为6-BA 0.05mg/L,NAA 0.01mg/L,PH为5.7-5.8。
青杨生根培养基:基础培养基为1/2MS培养基,含有10g/L琼脂、30g/L蔗糖,培养基中的激素为IBA0.1 mg/L,PH为5.7-5.8。
实施例1:毛白杨幼苗的组织培养
(1)外植体消毒
将三月份的品种优良、健壮的毛白杨枝条作为备用外植体,置于温室中常规水培,每三天换一次水,实验前选取生长良好的叶片作为外植体材料。取水培新鲜叶片外植体材料,自来水冲洗3遍,将叶片浸入浓度为75wt%的酒精水溶液浸泡30秒,然后用2wt%浓度的次氯酸钠水溶液浸泡3分钟,最后用无菌水冲洗干净后备用。
(2)愈伤组织诱导培养
取步骤(1)灭菌后的水培叶片,保留部分叶柄,将叶片剪成小叶片或垂直于叶片中脉方向剪至过中脉,每个叶片剪2-3口,将叶片接种到毛白杨愈伤诱导培养基,叶片正面(近轴面)朝上,培养温度22±2℃、暗室中培养2-3周,叶片边缘分化出愈伤组织。
(3)愈伤组织继代培养
愈伤组织的选择:选择步骤(2)中长势好、生长力强、组织蓬松的愈伤组织,置于无菌室超净工作台上,往后的操作需要在超净工作台上进行无菌操作。
将选取的愈伤组织用无菌解剖刀分切成长宽为(0.5×0.5)cm大小的愈伤团,植入毛白杨愈伤继代培养基中,进行继代增殖培养。
将上述愈伤组织进行继代培养,暗室中培养20天,培养温度为23±2℃,观察愈伤组织增殖状态。
每20天继代一次。采用这种方式进行组培快繁,能够在4个月繁殖100倍,6个月繁殖1000倍。
(4)不定芽诱导
将步骤(2)或(3)中长势良好的愈伤组织于无菌超净工作台中,愈伤组织用无菌手术刀适当分切成长宽为(0.5×0.5)cm大小的愈伤团,分别转移至毛白杨生芽培养基中,在培养温度22±2℃、光暗周期为16/8h/d(即每天光照16h,暗培养8h)、光照强度2000lx的条件下培养愈伤组织25天左右,分化出不定芽。
(5)生根诱导
将步骤(4)中长势茁壮的生芽小苗切割后,将其接种于毛白杨生根培养基上进行培养以得到生根苗;培养条件为:在培养温度22±2℃、光暗周期为16/8h/d、光照强度2000lx的条件下培养3-4周。
待根生长至0.5cm-1cm时,即可作为砧木苗。此时毛白杨能吸收培养基的营养物质,嫁接过后,能及时恢复活力,促进切口的愈合。
实施例2:青杨幼苗的组织培养
(1)外植体消毒
将三月份的品种优良、健壮的青杨枝条作为外植体,为将三月份的毛白杨枝条作为外植体材料,置于温室中常规水培,每三天换一次水,实验前选取生长良好的叶片及茎段作为外植体备用材料。取水培新鲜叶片作为外植体材料,自来水冲洗3遍,将叶片浸入浓度为75wt%的酒精水溶液浸泡30秒,然后用2wt%浓度的次氯酸钠水溶液浸泡3分钟,最后用无菌水冲洗干净后备用。
(2)不定芽诱导
用无菌解剖刀把步骤(1)所得无菌叶片组织切成0.5-1.0cm2的小块,然后叶片背部(远轴面)朝下接种在青杨生芽培养基中,在培养温度22±2℃、光暗周期为16/8h/d、光照强度2000lx的条件下培养叶片组织25天左右,分化出不定芽。
(3)不定芽增殖培养
将步骤(2)中长势茁壮的生芽小苗切割后,将其接种于青杨增殖培养基上进行培养以得到粗壮丛生苗;培养条件为:在培养温度22±2℃、光暗周期为16/8h/d、光照强度2000lx的条件下培养3-4周。
(4)生根诱导
将步骤(3)中长势茁壮的丛生苗切割后,将其接种于青杨生根培养基上进行培养以得到生根苗;培养条件为:在培养温度22±2℃、光暗周期为16/8h/d、光照强度2000lx的条件下培养3-4周。
实施例3:杨树微嫁接苗的制备
微嫁接步骤如下:
(1)以实施例1所得毛白杨作为砧木苗,在超净工作台内取出毛白杨,第4与第5真叶间采用灭菌的嫁接刀以与茎秆纵轴30°夹角方向将茎秆斜切切断形成切面一,将带有所述切面一的茎秆插入嫁接弹性硅胶套管。
(2)再将实施例2所得青杨组培苗取出,选取与砧木苗高度和粗细基本一致的苗使用,采用灭菌的嫁接刀在与砧木苗茎秆直径相近的地方以与茎秆纵轴30°夹角将茎秆斜切形成切面二(留二叶一心),切面二处涂抹1mg/L6-BA水溶液,达到整个切面被浸湿的程度,将带有切面二的枝条插入所述嫁接硅胶套管,使切面一和切面二贴紧,待伤口愈合后即所获嫁接好的杨树组培苗。
接穗和砧木的茎干直径为2.0~2.5mm。嫁接硅胶套管的内部直径为2~2.5mm。嫁接套管的内部直径与组培苗的茎杆与砧木苗的茎杆的直径大小基本一致,根据组培苗的茎杆与砧木苗的茎杆的大小来选取嫁接硅胶套管的内部直径,这样有利于微嫁接后的伤口愈合。
嫁接套管为食品级弹性透明硅胶管,随着嫁接成功组培苗的生长,套管会自动脱落,无需人工摘除,省时省力,节约成本。
6-BA为细胞分裂素,有利于细胞分裂,促进细胞的增大增肥,从而有利于毛白杨和青杨组培苗切口的愈合。
将嫁接后杨树组培苗继续插入毛白杨生根培养基中培养,在培养温度22±2℃、光暗周期为16/8h/d、光照强度2000lx的条件下培养嫁接杨树组培苗20天左右。嫁接苗参见图2。在组培瓶内培养嫁接苗,可以保证空间处于无菌的状态,茎干明显强壮,细胞活力增强,使得嫁接伤口能够迅速愈合,保证了嫁接的成功率。而且可以大量繁殖,既解决空间资源问题,也提高了一些病虫害问题。
实施例4:杨树嫁接苗的栽培
嫁接苗栽培:将装有嫁接苗的组培瓶从组培室中取出,放入炼苗室下进行初步炼苗7天;然后松开组培瓶的瓶盖,但不去掉瓶盖,4天后,再将瓶盖部分敞开,然后在6天内将组培瓶盖逐渐敞开直至全部敞开。
炼苗完成后,取出嫁接苗,用流水将嫁接苗根部洗净,然后移栽至温室大棚内的土壤中培养;其中,土壤包括质量比为1:2:1的珍珠岩、泥炭土和蛭石,另加的多菌灵。移栽完成后,薄膜盖紧。当在温度较低的季节所述拱棚内采用地加温线进行保温,保持在25~28℃,保温时间为7天。保温结束后,于十天内逐渐去掉薄膜直至完全去掉,然后通风见光练苗,练苗15~20天后定植大田。
对比例1:激素的应用
按照实施例1-4的方法,在微嫁接步骤中分别不使用激素涂抹切面,以及用KT和ZT水溶液替换6-BA水溶液涂抹切面,进行微嫁接,统计成活率,结果参见表1。
本发明所统计的成活率均以在温室大棚炼苗结束后为终点进行的统计。
表1不同激素涂抹切面处对嫁接苗成活率的影响
由表1可知,不同激素涂抹切面处对嫁接苗成活率的影响。当切面处涂抹6-BA时,其他操作与实施例1-4相同,所得嫁接苗的存活率为76.67%,成活率显著高于其他处理。当切面处涂抹1mg/L ZT时,其他操作与实施例1-4相同,所得嫁接苗的存活率仅为50.00%,相较其他处理组,成活率最低。
对比例2:砧木和接穗来源的影响
以毛白杨扦插苗作为砧木苗,以青杨扦插苗作为接穗苗,按照实施例3的方法进行嫁接得到嫁接组培苗,然后按照实施例4中炼苗完成后,移栽至温室大棚内的土壤中,按照实施例4中的方法继续培养,直至完全去掉薄膜,统计嫁接苗的成活率,结果参见表2。
表2嫁接方法对杨树嫁接苗成活率的影响
由表2可见,所得组培苗嫁接苗的存活率为80.00%,高于传统嫁接模式,而且组培苗嫁接可以大量繁殖,节省空间和时间的成本,而且组培苗保持与母体一样的优质性状,防止植物病毒的危害,极大的提高了农业生产效率。
对比例3:是否采用生根砧木对嫁接苗的影响
在实施例1中,省略了步骤(5)生根诱导,将分化出不定芽的毛白杨幼苗作为砧木,其他操作与实施例1-4相同,将未生根的砧木与青杨进行嫁接,然后插入生根培养基中开始生根培养。统计嫁接苗的成活率,结果参见表3。
表3是否采用生根砧木对杨树嫁接苗成活率的影响
由表3可知,砧木是否生根对组培瓶内杨树嫁接成活率产生一定影响。当砧木为生根状态时,成活率高于砧木未生根的处理。当为未生根的砧木时,成活率为50.00%,主要表现为接穗叶片长势比较弱。当砧木生根时,成活率有76.67%,主要表现为接穗叶片长势比未生根处理的强,未出现假活和接穗脱落的现象。
对比例4:不同土壤基质对炼苗移栽的影响
与实施例1-4的差别仅在于练苗后移栽的土壤不同,统计成活率,结果参见表4。
表4不同基质配比对嫁接苗移栽成活率的影响
不同的基质在农业生产中起到不同的作用。珍珠岩主要有防止土壤板结的作用;泥炭土质量轻,能够有效保持水分、肥效,同时含有丰富的营养,是良好的栽培基质和土壤调节剂;蛭石主要起到疏松土壤、保持水分透气的作用。良好的配土比例能有效的提高组培苗炼苗移栽的成活率。从表4中可以看出,按照本发明实施例的处理方法显著性差异明显。当珍珠岩:泥炭土:蛭石比例为1:2:1时,移栽成活率显著高于其他处理;当珍珠岩:泥炭土比例为1:1时,移栽成活率最低。
由技术常识可知,本发明可以通过其它的不脱离其精神实质或必要特征的实施方案来实现。因此,上述公开的实施方案,就各方面而言,都只是举例说明,并不是仅有的。所有在本发明范围内或在等同于本发明的范围内的改变均被本发明包含。
Claims (13)
1.一种杨树嫁接苗的制备方法,所述制备方法为:以毛白杨为砧木,以青杨为接穗,嫁接所述砧木与所述接穗,得到所述杨树嫁接苗;所述砧木为毛白杨组织培养苗,所述接穗为青杨组织培养苗;
所述砧木的组织培养包括如下步骤:
Sa:将毛白杨叶片接种到毛白杨愈伤诱导培养基中诱导,得到毛白杨愈伤组织;
所述毛白杨愈伤诱导培养基以WPM培养基为基础培养基,其中含有6-10 g/L琼脂,25-35 g/L蔗糖,0.6-1.0 mg/L NAA,PH为5.5-6.0;
Sb:将所述毛白杨愈伤组织接种到毛白杨生芽培养基中培养,得到带有不定芽的毛白杨幼苗;
所述毛白杨生芽培养基以WPM培养基为基础培养基,其中含有6-10 g/L琼脂,25-35 g/L蔗糖,0.3-0.8 mg/L 6-BA,0.08-0.12 mg/L NAA,PH为5.5-6.0;
Sc:将带有所述不定芽的毛白杨幼苗在毛白杨生根培养基上培养,得到生根的毛白杨幼苗;
所述毛白杨生根培养基以WPM培养基为基础培养基,其中含有8-12 g/L琼脂,15-25 g/L蔗糖,0.3-0.8 mg/L IBA,PH为5.5-6.0;
所述接穗的组织培养包括如下步骤:
Si:将青杨叶片接种到青杨生芽培养基中,得到带有不定芽的青杨幼苗;
所述青杨生芽培养基以WPM培养基为基础培养基,其中含有6-10 g/L琼脂,25-35 g/L蔗糖,0.3-0.8 mg/L 6-BA,0.03-0.08 mg/L NAA,PH为5.5-6.0;
Sii:将所述带有不定芽的青杨幼苗接种于青杨增殖培养基上培养,得到青杨丛生苗;
所述青杨增殖培养基以WPM培养基为基础培养基,其中含有6-10 g/L琼脂,25-35 g/L蔗糖,0.03-0.08 mg/L 6-BA,0.008-0.012 mg/L NAA,PH为5.5-6.0;
Siii:将所述青杨丛生苗接种于青杨生根培养基上培养,得到生根的青杨幼苗;
所述青杨生根培养基以1/2 MS培养基为基础培养基,其中含有8-12 g/L琼脂,25-35g/L蔗糖,0.08-0.12 mg/L IBA,PH为5.7-5.8。
2.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括如下步骤:
S1:将所述接穗的切面与所述砧木的切面对接;
S2:固定带有切面的所述接穗与带有切面的所述砧木,得到固定的砧木和接穗;
S3:培养所述固定的砧木和接穗,得到愈合的杨树嫁接苗。
3.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,在步骤S1中,所述接穗的切面和/或所述砧木的切面涂有或浸有细胞分裂素溶液后进行所述对接;
在步骤S1中,所述细胞分裂素溶液为含0.5-2mg/L 6-BA的水溶液。
4.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,在步骤S1中,在所述砧木的植株第4与第5真叶间切断所述砧木,得到所述砧木的切面;
在步骤S1中,保留二叶一心,切断所述接穗的植株,得到所述接穗的切面;
在步骤S1中,所述接穗的切面和/或所述砧木的切面是通过灭菌的嫁接刀切割得到的;
在步骤S1中,所述接穗的切面与所述接穗茎秆纵轴之间的夹角为25-35°;
在步骤S1中,所述砧木的切面与所述砧木茎秆纵轴之间的夹角为25-35°;
在步骤S2中,所述固定是通过嫁接套管进行的;
在步骤S2中,所述嫁接套管为弹性嫁接套管;
在步骤S2中,所述嫁接套管为硅胶管;
在步骤S2中,所述嫁接套管的内直径为所述砧木和所述接穗的外直径的90-100%;
在步骤S2中,将带有切面的所述接穗与带有切面的所述砧木同时或相继插入所述嫁接套管;
所述接穗的茎粗为2.0~2.5mm;
所述砧木的茎粗为2.0~2.5mm。
5.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,
在步骤Sa中,培养温度为18-25℃,暗培养,培养时间为12-22天;
在步骤Sa中,所述毛白杨叶片剪2-3口,所述毛白杨叶片的近轴面向上,接种到所述毛白杨愈伤诱导培养基中诱导;
在步骤Sb中,培养温度为18-25℃,每日光照时间为14-18小时,光照强度为1500-2500lx,培养时间为20-30天;
在步骤Sc中,培养温度为18-25℃,每日光照时间为14-18小时,光照强度为1500-2500lx,培养时间为12-22天;
所述毛白杨叶片是无菌毛白杨叶片;
所述毛白杨叶片的灭菌方法为:将毛白杨叶片分别进行自来水冲洗,酒精浸泡,次氯酸钠溶液浸泡,无菌水冲洗;
将毛白杨叶片分别进行自来水冲洗1-5遍,70-80wt%酒精浸泡15-45秒,1.5-2.5wt%次氯酸钠溶液浸泡1-5分钟,无菌水冲洗;
所述毛白杨叶片是毛白杨枝条经水培得到的毛白杨叶片。
6.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,在步骤Si中,培养温度为18-25℃,每日光照时间为14-18小时,光照强度为1500-2500 lx,培养时间为20-30天;
在步骤Si中,青杨叶片的远轴面向下接种到所述青杨生芽培养基中;
在步骤Sii中,培养温度为18-25℃,每日光照时间为14-18小时,光照强度为1500-2500lx,培养时间为12-22天。
7.如权利要求1所述的制备方法,其特征在于,在步骤Siii中,培养温度为18-25℃,每日光照时间为14-18小时,光照强度为1500-2500 lx,培养时间为12-22天;
所述青杨叶片是无菌青杨叶片;
所述青杨叶片的灭菌方法为:将青杨叶片分别进行自来水冲洗,酒精浸泡,次氯酸钠溶液浸泡,无菌水冲洗;
将青杨叶片分别进行自来水冲洗1-5遍,70-80wt%酒精浸泡15-45秒,1.5-2.5wt%次氯酸钠溶液浸泡1-5分钟,无菌水冲洗;
所述青杨叶片是青杨枝条经水培得到的青杨叶片。
8.如权利要求2所述的制备方法,其特征在于,在步骤S3中,将所述固定的砧木和接穗的砧木部分插入毛白杨生根培养基中培养,得到愈合的杨树嫁接苗;
所述毛白杨生根培养基以WPM培养基为基础培养基,其中含有8-12 g/L琼脂,15-25 g/L蔗糖,0.3-0.8 mg/L IBA,PH为5.5-6.0;
在步骤S3中,培养温度为18-25℃,每日光照时间为14-18小时,光照强度为1500-2500lx,培养时间为15-25天。
9.如权利要求8所述的制备方法,其特征在于,所述制备方法还包括如下步骤:
对所述愈合的杨树嫁接苗进行练苗;
所述练苗的步骤为:将装有所述愈合的杨树嫁接苗的组培瓶放入炼苗室下初步炼苗5-10天;松开组培瓶的瓶盖练苗3-5天;将瓶盖部分敞开炼苗4-8天。
10.如权利要求9所述的制备方法,其特征在于,所述制备方法还包括如下步骤:
将经过练苗的所述愈合的杨树嫁接苗移栽到土壤当中进行保温培养。
11.如权利要求10所述的制备方法,其特征在于,所述土壤包括按照质量比为1:1.8-2.2:0.9-1.1的珍珠岩,泥炭土和蛭石。
12.如权利要求11所述的制备方法,其特征在于,所述土壤中还含有杀菌剂;
所述保温培养的温度为25~28℃,时间为5-10天。
13.如权利要求10所述的制备方法,其特征在于,所述制备方法还包括如下步骤:
将保温培养后的嫁接苗见光练苗10~30天后定植大田。
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