CN110521600B - 一种利用姜荷花花梗建立高效无菌再生体系的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用姜荷花花梗建立高效无菌再生体系的方法，涉及组织培养技术领域，该方法具体包括以下步骤：(1)建立无菌外植体；(2)不定芽诱导培养；(3)不定芽增殖培养；(4)生根培养；(5)组培苗的炼苗与移栽。本发明外植体选用健壮、无病斑的姜荷花花梗，取材、接种等操作方便，材料多；花梗带菌较少，外建污染率可控制在5％～15％；本发明不定芽诱导成功率达90％以上，通过特有的培养基配方，使得不定芽诱导率提高了3～5倍，诱导时间缩短20d左右，本发明具有取材方便、操作简单、污染率低、启动速度快、种苗质量好、移栽成活率可达到100％等优势，本方法简单易行、条件宽松，效果显著，利与推广。
Description
技术领域
本发明涉及组织培养技术领域，具体是一种利用姜荷花花梗建立高效无菌再生体系的方法。
背景技术
姜荷花为姜科姜黄属多年生草本球根花卉，本属全世界有60多种，主要分布于东南亚热带、亚热带地区，澳大利亚北部也有分布。姜荷花是本属植物中最具观赏性的高档切花之一，原产泰国清迈等地。其叶片碧绿，花序为穗状花序，花梗长，高出叶面，花梗上端有9～12片鲜艳的卵形粉红色苞片，形似荷花的花冠，是主要的观赏部位。易于盆栽和切花观赏，因其花形独特、花色鲜艳、花期较长，深受人们青睐，在闽南地区自然花期为6～11月，可弥补我国夏季花卉市场切花种类及产量的不足，极具市场开发前景。
但是，目前市场上的姜荷花主要通过地下球茎繁殖，其繁殖系数较低，速度慢且易造成种性退化，无法满足现有市场的需求。因此，本领域技术人员提供了一种利用姜荷花花梗建立高效无菌再生体系的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用姜荷花花梗建立高效无菌再生体系的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种利用姜荷花花梗建立高效无菌再生体系的方法，该方法具体包括以下步骤：
(1)建立无菌外植体：选取健壮、生长力旺盛、无病斑的姜荷花开花植株，切下刚盛开的花序，在自来水下冲洗并切去花苞，切取花梗，长度为3～5cm，冲洗并处理干净后，用滤纸吸干外植体表面水分，再用浓度为75％的酒精浸泡30～50s，无菌水冲洗2次，放入浓度为0.1％的氯化汞中灭菌10～15min，无菌水冲洗4～5次后，备用；
(2)不定芽诱导培养：在超净台上，将灭菌后的花梗先切去两端与消毒液接触部分，然后切成1～2cm长，接入诱导培养基中，先暗培养14d，然后在温度25±2℃、光强2000Lx、光照12h/d的条件下培养20～30d，培养至花梗上有3～5个不定芽；
(3)不定芽增殖培养：将上述步骤(2)中的不定芽接种至增殖培养基中，在温度25±2℃、光强2000Lx、光照12h/d的条件下培养10～20d，直至形成不定芽苗，并长至3.0～5.0cm；
(4)生根培养：将上述步骤(3)中的增殖苗接种至生根培养基中，培养10～20d，瓶苗长至5.0～8.0cm，具有3～5条根时，即成可以出瓶移栽的组培苗；
(5)组培苗的炼苗与移栽：将上述组培苗移至大棚温室中，先炼苗5d，再拧松瓶盖炼苗5d后，出瓶、将根部培养基洗净后，用水草移栽，按常规肥水管理至成苗；
其中，所述步骤(2)中的诱导培养基包括以下组分：1/2MS、6-BA1.0～3.0mg/L、KT0.5～1.0mg/L、NAA0.05～0.1mg/L、白糖20～30g/L和琼脂粉5～8g/L；
所述步骤(3)中的增殖培养基包括以下组分：MS、6-BA1.0～3.0mg/L、KT0.5～1.0mg/L、NAA0.05～0.1mg/L、白糖20～30g/L和琼脂粉5～8g/L；
所述步骤(4)中的生根培养基包括以下组分：1/2MS、NAA0.1～1.0mg/L、白糖20～30g/L、琼脂粉5～8g/L和活性炭1～2g/L。
作为本发明再进一步的方案：所述步骤(2)中诱导培养基的PH值为5.6～6.0。
作为本发明再进一步的方案：所述步骤(3)中增殖培养基的PH值为5.6～6.0。
作为本发明再进一步的方案：所述步骤(4)中的培养条件为：温度25±2℃、光强2000Lx、光照12h/d。
作为本发明再进一步的方案：所述步骤(4)中生根培养基的PH值为5.6～6.0。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明外植体选用健壮、无病斑的姜荷花花梗，取材、接种等操作方便，材料多；花梗带菌较少，外建污染率可控制在5％～15％；本发明不定芽诱导成功率达90％以上，通过特有的培养基配方，使得不定芽诱导率提高了3～5倍，诱导时间缩短20d左右，从而显著提高姜荷花组织培养的启动速度；本发明通过对生根培养基成分的调节，显著提高了种苗的质量，同时，选择适宜的移栽基质，使移栽成活率可达100％，本方法简单易行、操作方便、条件宽松、污染率低、效果显著，利与推广。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例中，
实施例1
一种利用姜荷花花梗建立高效无菌再生体系的方法，该方法具体包括以下步骤：
(1)建立无菌外植体：选取健壮、生长力旺盛、无病斑的姜荷花开花植株，切下刚盛开的花序，在自来水下冲洗并切去花苞，切取花梗，长度为3～5cm，冲洗并处理干净后，用滤纸吸干外植体表面水分，再用浓度为75％的酒精浸泡30s，无菌水冲洗2次，放入浓度为0.1％的氯化汞中灭菌10min，无菌水冲洗4次后，备用；
(2)不定芽诱导培养：在超净台上，将灭菌后的花梗先切去两端与消毒液接触部分，然后切成1～2cm长，接入诱导培养基中，先暗培养14d，然后在温度25±2℃、光强2000Lx、光照12h/d的条件下培养20d，培养至花梗上有3～5个不定芽；
(3)不定芽增殖培养：将上述步骤(2)中的不定芽接种至增殖培养基中，在温度25±2℃、光强2000Lx、光照12h/d的条件下培养10d，直至形成不定芽苗，并长至3.0～5.0cm；
(4)生根培养：将上述步骤(3)中的增殖苗接种至生根培养基中，培养10d，瓶苗长至5.0～8.0cm，具有3～5条根时，即成可以出瓶移栽的组培苗；
(5)组培苗的炼苗与移栽：将上述组培苗移至大棚温室中，先炼苗5d，再拧松瓶盖炼苗5d后，出瓶、将根部培养基洗净后，用水草移栽，按常规肥水管理至成苗。
进一步的，步骤(2)中的诱导培养基包括以下组分：1/2MS、6-BA1.0mg/L、KT0.5mg/L、NAA0.05mg/L、白糖20g/L和琼脂粉5g/L。
再进一步的，步骤(2)中诱导培养基的PH值为5.6。
再进一步的，步骤(3)中的增殖培养基包括以下组分：MS、6-BA1.0mg/L、KT0.5mg/L、NAA0.05mg/L、白糖20g/L和琼脂粉5g/L。
再进一步的，步骤(3)中增殖培养基的PH值为5.6。
再进一步的，步骤(4)中的培养条件为：温度25±2℃、光强2000Lx、光照12h/d。
再进一步的，步骤(4)中的生根培养基包括以下组分：1/2MS、NAA0.1mg/L、白糖20g/L、琼脂粉5g/L和活性炭1g/L。
再进一步的，步骤(4)中生根培养基的PH值为5.6。
实施例2
一种利用姜荷花花梗建立高效无菌再生体系的方法，该方法具体包括以下步骤：
(1)建立无菌外植体：选取健壮、生长力旺盛、无病斑的姜荷花开花植株，切下刚盛开的花序，在自来水下冲洗并切去花苞，切取花梗，长度为3～5cm，冲洗并处理干净后，用滤纸吸干外植体表面水分，再用浓度为75％的酒精浸泡50s，无菌水冲洗2次，放入浓度为0.1％的氯化汞中灭菌15min，无菌水冲洗5次后，备用；
(2)不定芽诱导培养：在超净台上，将灭菌后的花梗先切去两端与消毒液接触部分，然后切成1～2cm长，接入诱导培养基中，先暗培养14d，然后在温度25±2℃、光强2000Lx、光照12h/d的条件下培养30d，培养至花梗上有3～5个不定芽；
(3)不定芽增殖培养：将上述步骤(2)中的不定芽接种至增殖培养基中，在温度25±2℃、光强2000Lx、光照12h/d的条件下培养20d，直至形成不定芽苗，并长至3.0～5.0cm；
(4)生根培养：将上述步骤(3)中的增殖苗接种至生根培养基中，培养20d，瓶苗长至5.0～8.0cm，具有3～5条根时，即成可以出瓶移栽的组培苗；
(5)组培苗的炼苗与移栽：将上述组培苗移至大棚温室中，先炼苗5d，再拧松瓶盖炼苗5d后，出瓶、将根部培养基洗净后，用水草移栽，按常规肥水管理至成苗。
进一步的，步骤(2)中的诱导培养基包括以下组分：1/2MS、6-BA3.0mg/L、KT1.0mg/L、NAA0.1mg/L、白糖30g/L和琼脂粉8g/L。
再进一步的，步骤(2)中诱导培养基的PH值为6.0。
再进一步的，步骤(3)中的增殖培养基包括以下组分：MS、6-BA3.0mg/L、KT1.0mg/L、NAA0.1mg/L、白糖30g/L和琼脂粉8g/L。
再进一步的，步骤(3)中增殖培养基的PH值为6.0。
再进一步的，步骤(4)中的培养条件为：温度25±2℃、光强2000Lx、光照12h/d。
再进一步的，步骤(4)中的生根培养基包括以下组分：1/2MS、NAA1.0mg/L、白糖30g/L、琼脂粉8g/L和活性炭2g/L。
再进一步的，步骤(4)中生根培养基的PH值为6.0。
实施例3
一种利用姜荷花花梗建立高效无菌再生体系的方法，该方法具体包括以下步骤：
(1)建立无菌外植体：选取健壮、生长力旺盛、无病斑的姜荷花开花植株，切下刚盛开的花序，在自来水下冲洗并切去花苞，切取花梗，长度为3～5cm，冲洗并处理干净后，用滤纸吸干外植体表面水分，再用浓度为75％的酒精浸泡40s，无菌水冲洗2次，放入浓度为0.1％的氯化汞中灭菌12min，无菌水冲洗5次后，备用；
(2)不定芽诱导培养：在超净台上，将灭菌后的花梗先切去两端与消毒液接触部分，然后切成1～2cm长，接入诱导培养基中，先暗培养14d，然后在温度25±2℃、光强2000Lx、光照12h/d的条件下培养25d，培养至花梗上有3～5个不定芽；
(3)不定芽增殖培养：将上述步骤(2)中的不定芽接种至增殖培养基中，在温度25±2℃、光强2000Lx、光照12h/d的条件下培养15d，直至形成不定芽苗，并长至3.0～5.0cm；
(4)生根培养：将上述步骤(3)中的增殖苗接种至生根培养基中，培养15d，瓶苗长至5.0～8.0cm，具有3～5条根时，即成可以出瓶移栽的组培苗；
(5)组培苗的炼苗与移栽：将上述组培苗移至大棚温室中，先炼苗5d，再拧松瓶盖炼苗5d后，出瓶、将根部培养基洗净后，用水草移栽，按常规肥水管理至成苗。
进一步的，步骤(2)中的诱导培养基包括以下组分：1/2MS、6-BA2.0mg/L、KT0.8mg/L、NAA0.07mg/L、白糖25g/L和琼脂粉6.5g/L。
再进一步的，步骤(2)中诱导培养基的PH值为5.8。
再进一步的，步骤(3)中的增殖培养基包括以下组分：MS、6-BA2.0mg/L、KT0.7mg/L、NAA0.07mg/L、白糖25g/L和琼脂粉6.5g/L。
再进一步的，步骤(3)中增殖培养基的PH值为5.8。
再进一步的，步骤(4)中的培养条件为：温度25±2℃、光强2000Lx、光照12h/d。
再进一步的，步骤(4)中的生根培养基包括以下组分：1/2MS、NAA0.5mg/L、白糖25g/L、琼脂粉6.5g/L和活性炭1.5g/L。
再进一步的，步骤(4)中生根培养基的PH值为5.8。
综上所述，本发明具有取材方便、操作简单、污染率低、启动速度快、种苗质量好、移栽成活率可达到100％等优势，本方法简单易行、条件宽松，效果显著，利与推广。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (5)
1.一种利用姜荷花花梗建立高效无菌再生体系的方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：
(1)建立无菌外植体：选取健壮、生长力旺盛、无病斑的姜荷花开花植株，切下刚盛开的花序，在自来水下冲洗并切去花苞，切取花梗，长度为3～5cm，冲洗并处理干净后，用滤纸吸干外植体表面水分，再用浓度为75％的酒精浸泡30～50s，无菌水冲洗2次，放入浓度为0.1％的氯化汞中灭菌10～15min，无菌水冲洗4～5次后，备用；
(2)不定芽诱导培养：在超净台上，将灭菌后的花梗先切去两端与消毒液接触部分，然后切成1～2cm长，接入诱导培养基中，先暗培养14d，然后在温度25±2℃、光强2000Lx、光照12h/d的条件下培养20～30d，培养至花梗上有3～5个不定芽；
(3)不定芽增殖培养：将上述步骤(2)中的不定芽接种至增殖培养基中，在温度25±2℃、光强2000Lx、光照12h/d的条件下培养10～20d，直至形成不定芽苗，并长至3.0～5.0cm；
(4)生根培养：将上述步骤(3)中的增殖苗接种至生根培养基中，培养10～20d，瓶苗长至5.0～8.0cm，具有3～5条根时，即成可以出瓶移栽的组培苗；
(5)组培苗的炼苗与移栽：将上述组培苗移至大棚温室中，先炼苗5d，再拧松瓶盖炼苗5d后，出瓶、将根部培养基洗净后，用水草移栽，按常规肥水管理至成苗；
其中，所述步骤(2)中的诱导培养基包括以下组分：1/2MS、6-BA1.0～3.0mg/L、KT0.5～1.0mg/L、NAA0.05～0.1mg/L、白糖20～30g/L和琼脂粉5～8g/L；
所述步骤(3)中的增殖培养基包括以下组分：MS、6-BA1.0～3.0mg/L、KT0.5～1.0mg/L、NAA0.05～0.1mg/L、白糖20～30g/L和琼脂粉5～8g/L；
所述步骤(4)中的生根培养基包括以下组分：1/2MS、NAA0.1～1.0mg/L、白糖20～30g/L、琼脂粉5～8g/L和活性炭1～2g/L。
2.根据权利要求1所述的一种利用姜荷花花梗建立高效无菌再生体系的方法，其特征在于，所述步骤(2)中诱导培养基的p H值为5.6～6.0。
3.根据权利要求1所述的一种利用姜荷花花梗建立高效无菌再生体系的方法，其特征在于，所述步骤(3)中增殖培养基的p H值为5.6～6.0。
4.根据权利要求1所述的一种利用姜荷花花梗建立高效无菌再生体系的方法，其特征在于，所述步骤(4)中的培养条件为：温度25±2℃、光强2000Lx、光照12h/d。
5.根据权利要求1所述的一种利用姜荷花花梗建立高效无菌再生体系的方法，其特征在于，所述步骤(4)中生根培养基的p H值为5.6～6.0。
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