CN105359981A - 一种燕子掌种苗的组培方法 - Google Patents

一种燕子掌种苗的组培方法 Download PDF

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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
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Abstract

本发明公开了一种燕子掌种苗的组培方法，属于组培领域。本发明的一种燕子掌种苗的组培方法，包括外植体的选择、消毒、诱导培养、继代增殖培养、生根培养、炼苗、移植七个步骤。本发明提供一种燕子掌种苗的组培方法，以提高燕子掌的繁殖速度和成活率，扩大繁殖量，降低成本，同时将优良性状的种苗固定下来，满足优质种苗的大规模生产需要。

Description

一种燕子掌种苗的组培方法
技术领域
本发明涉及组培领域，具体涉及一种燕子掌种苗的组培方法。
背景技术
燕子掌，属景天科植物，植株呈多分枝的亚灌木状，茎明显，圆形，表皮绿色或者黄褐色，叶片上有小点点。肉质叶对生，在茎或分枝顶端密生长，肉质叶长卵形，稍内弯，轻微有叶尖，叶色绿色至红绿色，有光泽，温差大的时候叶片的边缘呈红色，叶心绿色，非常美丽，控水和强光照下整个植株呈现非常漂亮的红绿色，一般养殖的颜色为绿色带点红边，缺光状态下植株呈现绿色，花开簇状，小花白色或白粉色。燕子掌原产非洲南部，喜温暖、干燥、通风的环境，耐寒力差，喜阳光，稍耐半阴。宜于盆栽，可陈设于阳台上或在室内几桌上点缀，显得十分清秀典雅。且有研究报道，燕子掌提取物制药能有效的治疗糖尿病，也可提高免疫力。
燕子掌常通过扦插法和水插法繁殖。但扦插法和水插法繁殖速度较慢，对母本材料要求高，用量大，还受到季节的限制，难以进行规模化、标准化生产和优良品种的大面积推广。此外，目前应用的繁殖方法生产成本较高、培养周期长，难于将筛选的优良性状固定下来。因此，需要寻找一种新的成本低、时间短、成活率高，且能够将优良性状固定下来的无性繁殖方法来扩大燕子掌繁殖量，进行燕子掌种苗的工厂化生产，以满足市场需求。
发明内容
本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种燕子掌种苗的组培方法，以提高燕子掌的繁殖速度和成活率，扩大繁殖量，降低成本，同时将优良性状的种苗固定下来，满足优质种苗的大规模生产需要。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：
一种燕子掌种苗的组培方法，包括以下步骤：
（1）外植体的选择：采集当年新发的，健康、饱满的叶片作为外植体；
当年新发的叶片，组织细胞幼嫩，分化能力强，因此采用上述技术方案，可以提高繁殖速度，扩大繁殖量。
（2）消毒：在超净工作台上用70％的乙醇处理5s，再用0.1％的氯化汞
溶液消毒5～8分钟，无菌水清洗5～8次，用滤水纸吸干水分备用；
由于采用上述技术方案，外植体经消毒后既可达到无菌状态，又不受到消毒溶液的破坏；用滤水纸吸干水分的目的是防止细菌滋生。
（3）诱导培养：将步骤（2）所得的外植体接种在装有诱导培养基的培养瓶中诱导培养，培养条件为：温度25～28℃，光照强度2000～3000LX，光照时间10-12小时/天；所述诱导培养基为改良WPM+TDZ2.0～2.5mg/L+IBA0.4～0.5mg/L+琼脂7～8g/L+白糖25g/L，pH值为5.8～6.0；诱导培养10～15天，更新相同培养基，并在相同培养条件下继续培养至外植体萌发分化出0.5～1cm的不定芽；所述改良WPM的成分及其含量为：K2SO41900mg/L，NH4N03300mg/L，MgSO4·7H2O350mg/L，CaCl2·2H2O90mg/L，KH2PO4170mg/L，FeSO4·7H2O27.8mg/L，CuSO4·5H2O0.25mg/L，ZnSO4·7H2O8.6mg/L，Ca(NO3)2·4H2O278mg/L，Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，肌醇100mg/L，维生素B60.5mg/L，烟酸0.5mg/L，维生素B10.5mg/L，甘氨酸2mg/L。
根据燕子掌喜温暖、喜阳光的特性，采用上述技术方案，燕子掌外植体在上述培养条件和培养基成分及比例下，诱导周期短，分化出的不定芽数量多。
（4）继代增殖培养：将步骤(3)诱导培养获得的不定芽切成具1～3个不定芽的小块，接种在继代增殖培养基中继代扩繁，产生新丛芽，继代增殖培养条件为：温度25～28℃，光照强度2000～3000LX，光照时间10-12小时/天，继代周期为30-35天/次，所述继代增殖培养基配方为：改良WPM+TDZ1.5～2.0mg/L+KT0.3～0.5mg/L+IAA0.2～0.25mg/L+琼脂7～8g/L+白糖25g/L，pH值为5.8～6.0；所述改良WPM的成分及其含量为：K2SO41900mg/L，NH4N03300mg/L，MgSO4·7H2O350mg/L，CaCl2·2H2O90mg/L，KH2PO4170mg/L，FeSO4·7H2O27.8mg/L，CuSO4·5H2O0.25mg/L，ZnSO4·7H2O8.6mg/L，Ca(NO3)2·4H2O278mg/L，Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，肌醇100mg/L，维生素B60.5mg/L，烟酸0.5mg/L，维生素B10.5mg/L，甘氨酸2mg/L。
根据燕子掌喜温暖、喜阳光的特性，采用上述技术方案，燕子掌不定芽在上述培养条件和培养基成分及比例下，继代周期短，产生新丛芽的数量多。
（5）生根培养：在步骤（4）继代增殖培养获得的新丛芽中，选择高度在2cm以上的小芽转入生根培养基中进行生根培养，15-20天后得到生根的幼苗，生根培养条件为：温度25～28℃，光照强度2000～3000LX，光照时间10-12小时/天，所述生根培养基配方为：MS+IAA0.1～0.2g/L+NAA0.3～0.4g/L+琼脂7～8g/L+白糖20-30g/L，pH值为5.8～6.0；
根据燕子掌喜温暖、喜阳光的特性，由于采用上述技术方案，燕子掌新丛芽在上述培养条件和培养基成分及比例下，生根周期短，生根数量多。
（6）炼苗：将步骤（5）生根培养所得的幼苗从组培室取出后置于温棚中，放置3-5天，温棚条件为：温度白天25～28℃，夜间15-20℃，湿度白天60%-70%，夜间80%-90%。
燕子掌喜温暖、干燥的环境，由于采用上述技术方案，既适合燕子掌幼苗的生长，又可增强其适应性和抗逆性。
（7）移植：将步骤（6）炼苗后的幼苗从培养基中取出，洗净培养基后，移植到装有育苗基质的育苗杯，每一育苗杯内移入一株生根苗，移栽后浇少量水，之后每两天浇一次水，每7～10天喷施一次薄肥水，20天后，长出5-7个叶片，苗高达到5-10cm，即可得到组培商品苗。所述育苗杯内的育苗基质按如下方法配制而成：将腐叶土、园土、河砂、锯末，按腐叶土：园土：河砂：锯末的体积比为4:3:1:2的比例混合而成；所述育苗杯内育苗基质下有少量蹄片；所述薄肥水由豆饼、菜籽饼、棉籽饼、芝麻饼中的一种或多种兑水沤制，充分腐熟后兑水稀释而成。
根据燕子掌适合通透性好的土壤特性，采用上述育苗基质，有利用燕子掌幼苗的根系生长；育苗基质下放的少量蹄片，可提供长效基肥。根据燕子掌对肥水要求不多，甚至要控肥控水的特性，采用上述浇水和施肥方案，使燕子掌幼苗迅速长成茁壮的商品苗。
本发明采用组织培养的方法，通过消毒外植体，得到无菌系，继而利用不同种类和不同浓度的外源激素的配比，对组培苗进行诱导发芽、继代增殖、生长及生根，并对温度、光照、培养基、育苗基质的配比进行筛选、调控、最后确定最佳培养条件，使其能应用于工厂化生产。植物通过组培方法进行快速繁殖较为常见，但将燕子掌通过组培方法进行快速繁殖，属国内首例。与现有技术相比，本发明建立了燕子掌高效组培快繁体系，提高了燕子掌的繁殖速度和成活率，扩大了繁殖量，降低了成本，同时将优良性状的种苗固定下来，满足优质种苗的大规模工厂化生产。
具体实施方式
以下结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案
实施例一：
一种燕子掌种苗的组培方法，包括以下步骤：
（1）外植体的选择：采集当年新发的，健康、饱满的叶片作为外植体；
（2）消毒：在超净工作台上用70％的乙醇处理5s，再用0.1％的氯化
汞溶液消毒5分钟，无菌水清洗5次，用滤水纸吸干水分备用；
（3）诱导培养：将步骤（2）所得的外植体接种在装有诱导培养基的
培养瓶中诱导培养，培养条件为：温度25℃,光照强度2000LX,光照时间10小时/天；所述诱导培养基为改良WPM+TDZ2.0mg/L+IBA0.4mg/L+琼脂7g/L+白糖25g/L，pH值为5.8；同步进行诱导和增殖培养10天，更新相同培养基，并在相同培养条件下继续培养至外植体萌发分化出0.5～1cm的不定芽；所述改良WPM的成分及其含量为：K2SO41900mg/L，NH4N03300mg/L，MgSO4·7H2O350mg/L，CaCl2·2H2O90mg/L，KH2PO4170mg/L，FeSO4·7H2O27.8mg/L，CuSO4·5H2O0.25mg/L，ZnSO4·7H2O8.6mg/L，Ca(NO3)2·4H2O278mg/L，Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，肌醇100mg/L，维生素B60.5mg/L，烟酸0.5mg/L，维生素B10.5mg/L，甘氨酸2mg/L。
（4）继代增殖培养：将步骤(3)诱导培养获得的不定芽切成具2个不定
芽的小块，接种在继代增殖培养基中继代扩繁，产生新丛芽，继代增殖培养条件为：温度25℃,光照强度2000LX,光照时间10小时/天，继代周期为30天/次，所述继代增殖培养基配方为：改良WPM+TDZ1.5mg/L+KT0.3mg/L+IAA0.2mg/L+琼脂7g/L+白糖25g/L，pH值为5.8；所述改良WPM的成分及其含量为：K2SO41900mg/L，NH4N03300mg/L，MgSO4·7H2O350mg/L，CaCl2·2H2O90mg/L，KH2PO4170mg/L，FeSO4·7H2O27.8mg/L，CuSO4·5H2O0.25mg/L，ZnSO4·7H2O8.6mg/L，Ca(NO3)2·4H2O278mg/L，Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，肌醇100mg/L，维生素B60.5mg/L，烟酸0.5mg/L，维生素B10.5mg/L，甘氨酸2mg/L。
（5）生根培养：在步骤（4）继代增殖培养获得的新丛芽中，选择高
度在2cm以上的小芽转入生根培养基中进行生根培养，15天后得到生根的幼苗，生根培养条件为：温度25℃,光照强度2000LX,光照时间10小时/天，所述生根培养基配方为：MS+IAA0.1g/L+NAA0.3g/L+琼脂7g/L+白糖20g/L，pH值为5.8；
（6）炼苗：将步骤（5）生根培养所得的幼苗从组培室取出后置于温
棚中，放置3天，温棚条件为：温度白天25℃，夜间15℃，湿度白天70%，夜间90%。
（7）移植：将步骤（6）炼苗后的幼苗从培养基中取出，洗净培养基后，移植到装有育苗基质的育苗杯，每一育苗杯内移入一株生根苗，移栽后浇少量水，之后每两天浇一次水，每7天喷施一次薄肥水，20天后，长出5-7个叶片，苗高达到5-10cm，即可得到组培商品苗。所述育苗杯内的育苗基质按如下方法配制而成：将腐叶土、园土、河砂、锯末，按腐叶土：园土：河砂：锯末的体积比为4:3:1:2的比例混合而成；所述育苗杯内育苗基质下有少量蹄片；所述薄肥水由豆饼、菜籽饼、棉籽饼兑水沤制，充分腐熟后兑水稀释而成。
实施例二：
一种燕子掌种苗的组培方法，包括以下步骤：
（1）外植体的选择：采集当年新发的，健康、饱满的叶片作为外植体；
（2）消毒：在超净工作台上用70％的乙醇处理5s，再用0.1％的氯化汞
溶液消毒7分钟，无菌水清洗6次，用滤水纸吸干水分备用；
（3）诱导培养：将步骤（2）所得的外植体接种在装有诱导培养基的培养
瓶中诱导培养，培养条件为：温度26℃,光照强度2500LX,光照时间11小时/天；所述诱导培养基为改良WPM+TDZ2.3mg/L+IBA0.45mg/L+琼脂7.5g/L+白糖25g/L，pH值为5.9；同步进行诱导和增殖培养12天，更新相同培养基，并在相同培养条件下继续培养至外植体萌发分化出0.5～1cm的不定芽；所述改良WPM的成分及其含量为：K2SO41900mg/L，NH4N03300mg/L，MgSO4·7H2O350mg/L，CaCl2·2H2O90mg/L，KH2PO4170mg/L，FeSO4·7H2O27.8mg/L，CuSO4·5H2O0.25mg/L，ZnSO4·7H2O8.6mg/L，Ca(NO3)2·4H2O278mg/L，Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，肌醇100mg/L，维生素B60.5mg/L，烟酸0.5mg/L，维生素B10.5mg/L，甘氨酸2mg/L。
（4）继代增殖培养：将步骤(3)诱导培养获得的不定芽切成具2个不定芽
的小块，接种在继代增殖培养基中继代扩繁，产生新丛芽，继代增殖培养条件为：温度26℃,光照强度2500LX,光照时间11小时/天，继代周期为33天/次，所述继代增殖培养基配方为：改良WPM+TDZ1.5mg/L+KT0.3mg/L+IAA0.2mg/L+琼脂7.5g/L+白糖25g/L，pH值为5.9；所述改良WPM的成分及其含量为：K2SO41900mg/L，NH4N03300mg/L，MgSO4·7H2O350mg/L，CaCl2·2H2O90mg/L，KH2PO4170mg/L，FeSO4·7H2O27.8mg/L，CuSO4·5H2O0.25mg/L，ZnSO4·7H2O8.6mg/L，Ca(NO3)2·4H2O278mg/L，Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，肌醇100mg/L，维生素B60.5mg/L，烟酸0.5mg/L，维生素B10.5mg/L，甘氨酸2mg/L。
（5）生根培养：在步骤（4）继代增殖培养获得的新丛芽中，选择高度在
2cm以上的小芽转入生根培养基中进行生根培养，18天后得到生根的幼苗，生根培养条件为：温度26℃,光照强度2500LX,光照时间11小时/天，所述生根培养基配方为：MS+IAA0.15g/L+NAA0.35g/L+琼脂7.5g/L+白糖25g/L，pH值为5.9；
（6）炼苗：将步骤（5）生根培养所得的幼苗从组培室取出后置于温棚中，
放置4天，温棚条件为：温度白天26℃，夜间18℃，湿度白天65%，夜间85%。
（7）移植：将步骤（6）炼苗后的幼苗从培养基中取出，洗净培养基后，
移植到装有育苗基质的育苗杯，每一育苗杯内移入一株生根苗，移栽后浇少量水，之后每两天浇一次水，每8天喷施一次薄肥水，20天后，长出5-7个叶片，苗高达到5-10cm，即可得到组培商品苗。所述育苗杯内的育苗基质按如下方法配制而成：将腐叶土、园土、河砂、锯末，按腐叶土：园土：河砂：锯末的体积比为4:3:1:2的比例混合而成；所述育苗杯内育苗基质下有少量蹄片；所述薄肥水由菜籽饼、芝麻饼兑水沤制，充分腐熟后兑水稀释而成。
实施例三：
一种燕子掌种苗的组培方法，包括以下步骤：
（1）外植体的选择：采集当年新发的，健康、饱满的叶片作为外植体；
（2）消毒：在超净工作台上用70％的乙醇处理5s，再用0.1％的氯化汞
溶液消毒8分钟，无菌水清洗8次，用滤水纸吸干水分备用；
（3）诱导培养：将步骤（2）所得的外植体接种在装有诱导培养基的培养
瓶中诱导培养，培养条件为：温度28℃,光照强度3000LX,光照时间12小时/天；所述诱导培养基为改良WPM+TDZ2.5mg/L+IBA0.5mg/L+琼脂8g/L+白糖25g/L，pH值为6.0；同步进行诱导和增殖培养15天，更新相同培养基，并在相同培养条件下继续培养至外植体萌发分化出0.5～1cm的不定芽；所述改良WPM的成分及其含量为：K2SO41900mg/L，NH4N03300mg/L，MgSO4·7H2O350mg/L，CaCl2·2H2O90mg/L，KH2PO4170mg/L，FeSO4·7H2O27.8mg/L，CuSO4·5H2O0.25mg/L，ZnSO4·7H2O8.6mg/L，Ca(NO3)2·4H2O278mg/L，Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，肌醇100mg/L，维生素B60.5mg/L，烟酸0.5mg/L，维生素B10.5mg/L，甘氨酸2mg/L。
（4）继代增殖培养：将步骤(3)诱导培养获得的不定芽切成具2个不定芽
的小块，接种在继代增殖培养基中继代扩繁，产生新丛芽，继代增殖培养条件为：温度28℃,光照强度3000LX,光照时间12小时/天，继代周期为35天/次，所述继代增殖培养基配方为：改良WPM+TDZ2mg/L+KT0.5mg/L+IAA0.25mg/L+琼脂8g/L+白糖25g/L，pH值为6.0；所述改良WPM的成分及其含量为：K2SO41900mg/L，NH4N03300mg/L，MgSO4·7H2O350mg/L，CaCl2·2H2O90mg/L，KH2PO4170mg/L，FeSO4·7H2O27.8mg/L，CuSO4·5H2O0.25mg/L，ZnSO4·7H2O8.6mg/L，Ca(NO3)2·4H2O278mg/L，Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，肌醇100mg/L，维生素B60.5mg/L，烟酸0.5mg/L，维生素B10.5mg/L，甘氨酸2mg/L。
（5）生根培养：在步骤（4）继代增殖培养获得的新丛芽中，选择高度在
2cm以上的小芽转入生根培养基中进行生根培养，20天后得到生根的幼苗，生根培养条件为：温度28℃,光照强度3000LX,光照时间12小时/天，所述生根培养基配方为：MS+IAA0.2g/L+NAA0.4g/L+琼脂8g/L+白糖30g/L，pH值为6.0；
（6）炼苗：将步骤（5）生根培养所得的幼苗从组培室取出后置于温棚中，
放置5天，温棚条件为：温度白天28℃，夜间20℃，湿度白天60%，夜间80%。
（7）移植：将步骤（6）炼苗后的幼苗从培养基中取出，洗净培养基后，
移植到装有育苗基质的育苗杯，每一育苗杯内移入一株生根苗，移栽后浇少量水，之后每两天浇一次水，每10天喷施一次薄肥水，20天后，长出5-7个叶片，苗高达到5-10cm，即可得到组培商品苗。所述育苗杯内的育苗基质按如下方法配制而成：将腐叶土、园土、河砂、锯末，按腐叶土：园土：河砂：锯末的体积比为4:3:1:2的比例混合而成；所述育苗杯内育苗基质下有少量蹄片；所述薄肥水由豆饼、菜籽饼兑水沤制，充分腐熟后兑水稀释而成。
本发明并不局限于前述的具体实施例。本发明扩展到任何在本说明书中披露的新特征或任何新的组合，以及披露的任一新的方法或步骤或任何新的组合。

Claims (10)

1.一种燕子掌种苗的组培方法，包括以下步骤：
（1）外植体的选择：采集健康、饱满的叶片作为外植体；
（2）消毒：将步骤（1）所得的外植体在超净工作台上用70％的乙醇处理5s，再用0.1％的氯化汞溶液消毒5～8分钟，无菌水清洗5～8次，用滤水纸吸干水分备用；
（3）诱导培养：将步骤（2）所得的外植体接种在装有诱导培养基的培养瓶中诱导培养，培养条件为：温度25～28℃，光照强度2000～3000LX，光照时间10-12小时/天；诱导培养10～15天，更新相同培养基，并在相同培养条件下继续培养至外植体萌发分化出0.5～1cm的不定芽；
（4）继代增殖培养：将步骤（3）诱导培养获得的不定芽切成具有1～3个不定芽的小块，接种在继代增殖培养基中继代扩繁，产生新丛芽，继代增殖培养条件为：温度25～28℃，光照强度2000～3000LX，光照时间10-12小时/天，继代周期为30-35天/次；
（5）生根培养：在步骤（4）继代增殖培养获得的新丛芽中，选择高度在2cm以上的小芽转入生根培养基中进行生根培养，15-20天后得到生根的幼苗，生根培养条件为：温度25～28℃，光照强度2000～3000LX，光照时间10-12小时/天；
（6）炼苗：将步骤（5）生根培养所得的幼苗从组培室取出后置于温棚中，放置3-5天；
（7）移植：将步骤（6）炼苗后的幼苗从培养基中取出，洗净培养基后，移植到装有育苗基质的育苗杯，每一育苗杯内移入一株生根苗，移栽后浇少量水，之后每两天浇一次水，每7～10天喷施一次薄肥水，20天后，长出5-7个叶片，苗高达到5-10cm，即可得到组培商品苗。
2.如权利要求1所述的一种燕子掌种苗的组培方法，其特征在于：步骤（1）中所述叶片为当年新发的叶片。
3.如权利要求1所述的一种燕子掌种苗的组培方法，其特征在于：步骤（3）中所述诱导培养基为改良WPM+TDZ2.0～2.5mg/L+IBA0.4～0.5mg/L+琼脂7～8g/L+白糖25g/L，pH值为5.8～6.0。
4.如权利要求1所述的一种燕子掌种苗的组培方法，其特征在于：步骤（4）中所述继代增殖培养基配方为：改良WPM+TDZ1.5～2.0mg/L+KT0.3～0.5mg/L+IAA0.2～0.25mg/L+琼脂7～8g/L+白糖25g/L，pH值为5.8～6.0。
5.如权利要求3或4所述的一种燕子掌种苗的组培方法，其特征在于：所述改良WPM的成分及其含量为：K2SO41900mg/L，NH4N03300mg/L，MgSO4·7H2O350mg/L，CaCl2·2H2O90mg/L，KH2PO4170mg/L，FeSO4·7H2O27.8mg/L，CuSO4·5H2O0.25mg/L，ZnSO4·7H2O8.6mg/L，Ca(NO3)2·4H2O278mg/L，Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，肌醇100mg/L，维生素B60.5mg/L，烟酸0.5mg/L，维生素B10.5mg/L，甘氨酸2mg/L。
6.如权利要求1所述的一种燕子掌种苗的组培方法，其特征在于：步骤（5）中所述生根培养基配方为：MS+IAA0.1～0.2g/L+NAA0.3～0.4g/L+琼脂7～8g/L+白糖20-30g/L，pH值为5.8～6.0。
7.如权利要求1所述的一种燕子掌种苗的组培方法，其特征在于：步骤（6）中所述温棚条件为：温度白天25～28℃，夜间15-20℃，湿度白天60%-70%，夜间80%-90%。
8.如权利要求1所述的一种燕子掌种苗的组培方法，其特征在于：步骤（7）中所述育苗杯内的育苗基质按如下方法配制而成：将腐叶土、园土、河砂、锯末，按腐叶土：园土：河砂：锯末的体积比为4:3:1:2的比例混合而成。
9.如权利要求8所述的一种燕子掌种苗的组培方法，其特征在于：所述育苗基质下有少量的蹄片。
10.如权利要求1所述的一种燕子掌种苗的组培方法，其特征在于：步骤（7）中所述薄肥水由豆饼、菜籽饼、棉籽饼、芝麻饼中的一种或多种兑水沤制，充分腐熟后兑水稀释而成。
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