CN115885847B

CN115885847B - 一种用于观光木组培快繁的培养基及其应用、观光木组培快繁的方法

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Publication number: CN115885847B
Application number: CN202211409315.2A
Authority: CN
Inventors: 罗桂芬; 孙卫邦; 蔡磊; 杨佳俊
Original assignee: Kunming Institute of Botany of CAS
Current assignee: Kunming Institute of Botany of CAS
Priority date: 2022-11-11
Filing date: 2022-11-11
Publication date: 2023-09-19
Anticipated expiration: 2042-11-11
Also published as: CN115885847A

Abstract

本发明属于植物的组培快繁技术领域，具体涉及一种用于观光木组培快繁的培养基及其应用、观光木组培快繁的方法。本发明用于观光木组培快繁的培养基包括诱导‑分化培养基、增殖‑继代培养基和壮苗‑生根培养基，通过限定诱导‑分化培养基、增殖‑继代培养基和壮苗‑生根培养基的组成，能够使观光木的诱导率达到65％，增殖倍数达到4倍，生根率达到85％，提高观光木的繁殖数量和生长速率。

Description

一种用于观光木组培快繁的培养基及其应用、观光木组培快繁的方法

技术领域

本发明属于植物的组培快繁技术领域，具体涉及一种用于观光木组培快繁的培养基及其应用、观光木组培快繁的方法。

背景技术

观光木又名香花木、香木楠、宿轴木兰，为常绿乔木，木兰科单属种植物，是木兰科中较进化的种属。观光木是我国特有的古老孓遗树种，因纪念中国植物学家钟观光而得名。观光木根系发达涵养水源效果明显，具有鲜明的园艺特征是兼有赏花、观果功效的绿化树种。观光木主要分布于云、贵、湘、桂、闽、粤等热带至中亚热带南部地区，是中国中部和南方特有的著名园林绿化和香化植物，可广泛用于景区、行道、庭院等处绿化、孤植、列植和群植均成景观，也可在山上大面积造林作优质用材林。由于森林过度采伐，加之落花落果严重，且果实易被鼠食，天然更新不良，目前观光木已处于濒临绝灭的境地，被列为国家珍稀濒危二级保护植物，是一种典型的极小种群野生植物，扩大繁殖与保护意义重大。迄今为止，现有技术没有关于观光木组培快繁和相关的生物技术方面的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于观光木组培快繁的培养基及其应用、观光木组培快繁的方法，提高观光木的繁殖数量和生长速率，组培快繁效果好，成活率高。

本发明提供了一种用于观光木组培快繁的培养基，包括诱导-分化培养基、增殖-继代培养基和壮苗-生根培养基；

所述诱导-分化培养基以MS培养基为基础培养基，还包括0.1～2.0mg/L6-BA、0.1～1.0mg/LIAA、20～30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂；

所述增殖-继代培养基以MS培养基为基础培养基，还包括0.1～1.0mg/L6-BA、0.1～1.0mg/LIAA、20～30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂；

所述壮苗-生根培养基以MS培养基为基础培养基，还包括0.1～1.0mg/LIBA、0.1～1.0mg/LIAA、20～30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂。

本发明还提供了上述技术方案所述的培养基在观光木组培快繁中的应用。

本发明还提供了一种利用上述技术方案所述的培养基进行观光木组培快繁的方法，包括如下步骤：

依次利用诱导-分化培养基、增殖-继代培养基和壮苗-生根培养基培养观光木的外植体，得到组培苗；

将所述组培苗移栽至育苗基质中培养。

优选的，利用所述诱导-分化培养基培养的时间为50～60d，温度为23～30℃，光照强度为1000～1500lux；

利用所述增殖-继代培养基培养的时间为50～60d，温度为23～30℃，光照强度为1000～1500lux；

利用所述壮苗-生根培养基培养的时间为30～45d，温度为23～30℃，光照强度为1000～1500lux。

优选的，所述外植体包括观光木2～3年生苗幼嫩顶芽或侧芽。

优选的，所述育苗基质包括珍珠岩、腐殖土和生红土；所述珍珠岩、腐殖土和生红土的质量比为(1～2)：(1～3)：(1～3)。

优选的，所述育苗基质的湿度为50％～60％。

优选的，利用所述育苗基质培养的温度为20～30℃，遮光度为70～80％，空气湿度为70～80％。

优选的，利用所述诱导-分化培养基培养前，还包括对所述观光木的外植体进行消毒。

优选的，利用育苗基质培养前，还包括：利用800倍多菌灵对所述育苗基质进行消毒。

本发明提供了一种用于观光木组培快繁的培养基，包括诱导-分化培养基、增殖-继代培养基和壮苗-生根培养基。本发明通过限定诱导-分化培养基、增殖-继代培养基和壮苗-生根培养基的组成，能够使观光木的诱导率达到65％，增殖倍数达到4倍，生根率达到85％，提高观光木的繁殖数量和生长速率。

本发明将经上述培养基培养得到的组培苗移栽至育苗基质中培养，通过限定育苗基质的组成，培养30～45天即可使组培苗的移栽成活率达到95％，组培快繁效果好，成活率高。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1为实施例16观光木诱导情况；

图2为实施例24观光木繁殖情况；

图3和图4为实施例31观光木生根情况。

具体实施方式

所述诱导-分化培养基以MS培养基为基础培养基，还包括0.1～2.0mg/L 6-BA、0.1～1.0mg/LIAA、20～30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂；

所述增殖-继代培养基以MS培养基为基础培养基，还包括0.1～1.0mg/L 6-BA、0.1～1.0mg/LIAA、20～30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂；

所述壮苗-生根培养基以MS培养基为基础培养基，还包括0.1～1.0mg/L IBA、0.1～1.0mg/LIAA、20～30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂。

在本发明中，所述诱导-分化培养基以MS培养基为基础培养基，还包括0.1～2.0mg/L 6-BA、0.1～1.0mg/L IAA、20～30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂，优选为仅还含有0.1～2.0mg/L 6-BA、0.1～1.0mg/L IAA、20～30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂；所述诱导-分化培养基还含有的6-BA的浓度优选为0.2～1.8mg/L，进一步优选为0.5～1.5mg/L，更优选为0.8～1.2mg/L，最优选为1.0mg/L；所述诱导-分化培养基中还含有的IAA的浓度优选为0.2～0.8mg/L，进一步优选为0.4～0.6mg/L，更优选为0.5mg/LL；所述诱导-分化培养基中还含有的蔗糖的浓度优选为30g/L；所述诱导-分化培养基中还含有的琼脂的浓度优选为5g/L。

在本发明中，所述诱导-分化培养基的pH优选为5.8～6.4，进一步优选为6.0。本发明将6-BA和IAA作为诱导分化阶段培养基成分，严格控制6-BA和IAA的配比能够提高诱导率。

在本发明中，所述增殖-继代培养基以MS培养基为基础培养基，还包括0.1～1.0mg/L 6-BA、0.1～1.0mg/L IAA、20～30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂，优选为仅还含有0.1～1.0mg/L 6-BA、0.1～1.0mg/L IAA、20～30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂；所述增殖-继代培养基还含有的6-BA的浓度优选为0.2～0.8mg/L，进一步优选为0.4～0.6mg/L，更优选为0.5mg/L；所述增殖-继代培养基还含有的IAA的浓度优选为0.2～0.8mg/L，进一步优选为0.4～0.6mg/L，更优选为0.5mg/L；所述增殖-继代培养基还含有的蔗糖的浓度优选为30g/L；所述增殖-继代培养基还含有的琼脂的浓度优选为5g/L。

在本发明中，所述增殖与继代培养基的pH优选为5.8～6.4，进一步优选为6.0。本发明将6-BA和IAA作为增殖与继代培养基成分，严格控制6-BA和IAA的配比能够提高增殖倍数。本发明在具体实施过程中，优选保证所述诱导-分化培养基和所述增殖-继代培养基中所含的6-BA和/或IAA的浓度不同。

在本发明中，所述壮苗-生根培养基以MS培养基为基础培养基，还包括0.1～1.0mg/L IBA、0.1～1.0mg/L IAA、20～30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂，优选为仅还含有0.1～1.0mg/L IBA、0.1～1.0mg/L IAA、20～30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂；所述壮苗-生根培养基还含有的IBA的浓度优选为0.2～0.8mg/L，进一步优选为0.4～0.6mg/L，更优选为0.5mg/L；所述壮苗-生根培养基还含有的IAA的浓度优选为0.2～0.8mg/L，进一步优选为0.4～0.6mg/L，更优选为0.5mg/L；所述壮苗-生根培养基还含有的蔗糖的浓度优选为30g/L；所述壮苗-生根培养基还含有的琼脂的浓度优选为6g/L。

在本发明中，所述壮苗-生根培养基的pH优选为5.8～6.4，进一步优选为6.0。本发明将IBA和IAA作为壮苗-生根培养基成分，严格控制IBA和IAA的配比能够提高移栽成活率。

本发明还提供了上述技术方案所述培养基在观光木组培快繁中的应用。利用本发明所述培养基培养观光木能够诱导观光木分化，实现快速增殖，提高观光木移栽成活率。

将所述组培苗移栽至育苗基质中培养。

利用上述技术方案所述培养基培养观光木的外植体。本发明所述外植体优选包括观光木2～3年生苗的幼嫩顶芽或侧芽。本发明以2～3年生苗幼嫩顶芽和侧芽为外植体，能够提高诱导分化效率。

利用上述技术方案所述培养基培养观光木的外植体前，本发明优选对所述外植体进行消毒，得到消毒后的外植体。本发明所述消毒分别第一消毒、第二消毒和第三消毒；所述第一消毒优选使用质量浓度为1％的肥皂水，所述第一消毒的时间优选为10min，第一消毒的方式优选为浸泡；所述第二消毒优选使用体积浓度为75％的酒精，所述第二消毒的时间优选为10s，第二消毒的方式优选为浸泡；所述第三消毒优选使用体积浓度为0.1％的升汞，所述第三消毒的时间优选为8min，第三消毒的方式优选为浸泡。本发明质量浓度为1％的肥皂水能够清洗外植体的表面，体积浓度为75％的酒精浸润外植体，体积浓度为0.1％的升汞进入外植体的组织，杀死真菌和细菌，肥皂水、酒精和升汞相互补充，共同实现外植体消毒。

得到消毒后的外植体后，本发明优选利用上述技术方案所述诱导-分化培养基培养消毒后的外植体，得到分化后的外植体。本发明所述培养的温度优选为23～30℃，进一步优选为25～28℃，更优选为26～27℃；所述培养的光照强度优选为1000～1500lux，进一步优选为1200～1450lux，更优选为1300～1400lux，最优选为1350lux；所述培养的时间优选为50～60d，进一步优选为52～58d，更优选为55～56d。本发明所述培养的光照时间优选为10h。本发明所述培养优选使用组培瓶。本发明所述诱导-分化培养基培养能够诱导外植体分化，诱导一周后外植体开始萌发，诱导率为50％。本发明在具体实施过程中，当外植体基部出现褐化时，优选更换新的诱导-分化培养基，进行后续的培养。

得到分化后的外植体后，本发明优选利用上述技术方案所述增殖-继代培养基培养分化后的外植体，得到增殖后的外植体。本发明所述培养的温度优选为23～30℃，进一步优选为25～28℃，更优选为26～27℃；所述培养的光照强度优选为1000～1500lux，进一步优选为1200～1450lux，更优选为1300～1400lux，最优选为1350lux；所述培养的时间优选为50～60d，进一步优选为52～58d，更优选为55～56d。本发明所述培养的光照时间优选为10h。本发明所述培养优选使用组培瓶。本发明在具体实施过程中无需更换培养基，使用一次本发明所述增殖-继代培养基能够使分化后的外植体增殖，增殖倍数为5。

得到增殖后的外植体后，本发明优选利用上述技术方案所述壮苗-生根培养基培养增殖后的外植体，得到组培苗。本发明所述培养的温度优选为23～30℃，进一步优选为25～28℃，更优选为26～27℃；所述培养的光照强度优选为1000～1500lux，进一步优选为1200～1450lux，更优选为1300～1400lux，最优选为1350lux；所述培养的时间优选为30～45d，进一步优选为35～40d。本发明所述培养的光照时间优选为10h。本发明所述培养优选使用组培瓶。本发明在具体实施过程中无需更换培养基，使用一次本发明所述壮苗-生根培养基即可使增殖后的外植体生根，生根率达到40～85％。本发明优选在所述培养的过程中，优选进行炼苗，进一步优选培养23～38d后将含有增殖后的外植体的培养瓶放在遮光率为75％～85％大棚中炼苗；所述炼苗的时间优选为7d。

得到所述组培苗后，本发明优选从组培瓶中取出所述组培苗，移栽至育苗基质中培养。本发明所述育苗基质优选包括珍珠岩、腐殖土和生红土；所述珍珠岩、腐殖土和生红土的质量比优选为(1～2)：(1～3)：(1～3)，进一步优选为1：2：3；所述育苗基质的湿度优选为50％～60％，进一步优选为55％。本发明所述培养的温度优选为20～30℃，进一步优选为22～28℃，更优选为25～26℃；所述培养的遮光度优选为70～80％，进一步优选为72～78％，更优选为75％；所述培养的空气湿度优选为70～80％，进一步优选为72～78％，更优选为75％。本发明所述培养优选在大棚中进行。本发明将所述组培苗移栽至育苗基质中培养前，优选对所述育苗基质进行消毒，所述消毒的方式优选包括：利用800倍多菌灵进行喷施拌土后密封7d，用1mol/L的氢氧化钠溶液或1mol/L的盐酸溶液调节pH至5.8。本发明将珍珠岩、腐殖土和生红土三种基质配合使用，能够增加基质疏松度和根部透气性，也为根部提供足够的营养，同时红土为土层深部土壤，带菌量较少，有利于无菌苗的生长，培养30d即可使组培苗的成活率达到95％。

本发明建立了观光木组培快繁方法，步骤简单，50～60天后诱导率65％，再50～60天增殖倍数为4，再30～45天生根率达到85％，再30～45天移栽成活率为95％，极大地提高了观光木的繁殖系数，使观光木成苗容易，繁殖速率高，解决了观光木分布狭窄、种群数量极少等问题，填补了观光木在生物技术上的研发空白，为该物种的保护、引种驯化、遗传性息的保存、园林园艺及其科研价值的发挥利用提供了非常有效的繁殖方法。

为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的一种用于观光木组培快繁的培养基及其应用、观光木组培快繁的方法进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

如无特殊说明，本发明具体实施过程中使用的培养基成分均是常规获得。

实施例1

一种用于观光木组培快繁的培养基，由诱导-分化培养基、增殖-继代培养基和壮苗-生根培养基组成；

诱导-分化培养基以MS培养基为基础培养基，添加6-BA、IAA、蔗糖和琼脂，得到的诱导-分化培养基中6-BA、IAA、蔗糖和琼脂的浓度依次为0.5mg/L，0.5mg/L，30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂，pH为5.8；

增殖-继代培养基以MS培养基为基础培养基，添加6-BA、IAA、蔗糖和琼脂，得到的增殖-继代培养基中6-BA、IAA、蔗糖和琼脂的浓度依次为0.2mg/L，0.2mg/L，30g/L蔗糖和5g/L琼脂，pH为5.8；

壮苗-生根培养基以MS培养基为基础培养基，添加IBA、IAA、蔗糖和琼脂，得到的壮苗-生根培养基中IBA、IAA、蔗糖和琼脂的浓度依次为0.5mg/L，0.5mg/L，30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂，pH为5.8。

实施例2

按照实施例1的方式制备用于观光木组培快繁的培养基，其中实施例2～5的增殖-继代培养基、壮苗-生根培养基与实施例1相同，与诱导-分化培养基中激素的浓度不同；实施例6～12的诱导-分化培养基、壮苗-生根培养基与与实施例1相同，增殖-继代培养基中激素的浓度不同；实施例13～15的诱导-分化培养基、增殖-继代培养基与实施例1相同，壮苗-生根培养基中激素的浓度不同，具体列于表1中。

表1实施例1～15用于观光木组培快繁的培养基的组成

实施例16

取观光木的幼嫩顶芽和侧芽为外植体，用1％肥皂水浸泡10分钟，经流水冲洗干净后，拿到超净台上，剪成带单个节的茎段，用75％的酒精消毒10s，无菌水冲洗3遍后，用0.1％升汞溶液进行表面消毒5min，无菌水清洗3～5次，接种于实施例2诱导-分化培养基中，具体的，每个组培瓶接种1个节，每个组培瓶(规格为200mL～300mL)中40mL诱导-分化培养基(共计20瓶)，在光强度为1000～1500lux，光照时间10小时/h，温度为23～30℃的条件下培养。

实施例17

同实施例16，区别在于，接种于实施例3诱导-分化培养基中。

实施例18

同实施例16，区别在于，接种于实施例1诱导-分化培养基中。

实施例19

同实施例16，区别在于，接种于实施例4诱导-分化培养基中。

实施例20

同实施例16，区别在于，接种于实施例5诱导-分化培养基中。

测试例1

实施例16～20培养60d后，统计各实施例诱导率情况，结果如表2。

表2不同处理方式观光木茎段诱导情况

注：诱导率＝(顶芽或侧芽萌发的组培瓶个数/20)×100％。

根据表2可以看出，本发明诱导-分化培养基能够诱导观光木的幼嫩顶芽和侧芽分化，分化率为50～65％，其中以实施例16使用的诱导-分化培养基(MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L IAA+30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂)的诱导分化效果最好，到65％。

实施例21

在实施例16的基础上进行如下步骤：

将经诱导分化后的外植体取出，去除外植体上残留的诱导-分化培养基，分割成单芽，将单芽接种至含有增殖-继代培养基(具体组方如实施例6所示)的组培瓶中，每个组培瓶接种1个经诱导分化后的外植体，每个组培瓶中(规格为200mL～300mL)中40mL增殖-继代培养基(共计20瓶)，在光强度为1000～1500lux，光照时间10小时/d，温度为23～30℃的条件下培养。

实施例22

同实施例21，区别在于增殖-继代培养基的组方如实施例7所示。

实施例23

同实施例21，区别在于增殖-继代培养基的组方如实施例8所示。

实施例24

同实施例21，区别在于增殖-继代培养基的组方如实施例1所示。

实施例25

同实施例21，区别在于增殖-继代培养基的组方如实施例9所示。

实施例26

同实施例21，区别在于增殖-继代培养基的组方如实施例10所示。

实施例27

同实施例21，区别在于增殖-继代培养基的组方如实施例11所示。

实施例28

同实施例21，区别在于增殖-继代培养基的组方如实施例12所示。

测试例2

实施例21～28培养60d后，统计各实施例观光木的增殖情况，结果如表3。

表3不同处理方式观光木增殖情况

注：“-”表示无愈伤组织；“+”表示愈伤组织直径＜0.1cm；“++”表示愈伤组织直径为0.2～0.5cm；“+++”表示愈伤组织直径＞0.5cm。

根据表3可以看出，本发明增殖-继代培养基能够实现观光木的增殖培养，其中以实施例24使用的诱导-分化培养基(MS+0.2mg/L 6-BA+0.2mg/LIAA+30g/L蔗糖和5g/L琼脂)的增殖效果最好，芽节数量(包含顶芽)5个，植株叶片伸展，生长速度最快，株高4.5cm。

实施例29

在实施例21的基础上进行如下步骤：

将经增殖-继代培养基的外植体取出，清洗外植体上残留的增殖-继代培养基，切取约2cm的顶芽，接种至含有壮苗-生根培养基(具体组方如实施例13所示)的组培瓶(规格为200mL～300mL)中，每个组培瓶接种1个经增殖-继代后的顶芽，每个组培瓶中40mL壮苗-生根培养基(共计20瓶)，在光强度为1000～1500lux，光照时间10小时/h，温度为23～30℃的条件下培养。

实施例30

同实施例39，区别在于壮苗-生根培养基的组方如实施例14所示。

实施例31

同实施例39，区别在于壮苗-生根培养基的组方如实施例1所示。

实施例32

同实施例39，区别在于壮苗-生根培养基的组方如实施例15所示。

测试例3

实施例29～32培养45d后，统计各实施例观光木的生根情况，结果如表4。

表4不同处理方式观光木生根情况

根据表4可以看出，本发明壮苗-生根培养基能够促进观光木生根，其中以实施例31使用的壮苗-生根培养基(MS+0.5mg/L IBA+0.5mg/L IAA+30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂)和32使用的壮苗-生根培养基(MS+0.5mg/L IBA+0.5mg/LIAA+30g/L蔗糖和5～6g/L琼脂)的生根率最高，均为85％，并且实施例31使用的壮苗-生根培养基观光木的株高为4.0cm。

实施例33

在实施例29的基础上进行如下步骤：

经生根后的生根瓶苗提前一周置放于大棚炼苗，准备育苗基质，育苗基质由珍珠岩、腐殖土和生红土组成，其中珍珠岩、腐殖土和生红土的体积比为1：2：3，将800倍多菌灵喷施到育苗基质，拌土，用塑料膜密封消毒7天后调节pH至5.8，开瓶取苗，轻轻洗净基部培养基，移栽至消毒过的育苗基质中，及时喷水并覆盖塑料膜保湿在温度20～30℃，遮光度在75％～85％，空气湿度70～80％，基质湿度50～60％的条件下培养。

对比例1

同实施例31，区别在于育苗基质为生红土。

对比例2

同实施例31，区别在于育苗基质为珍珠岩。

对比例3

同实施例31，区别在于育苗基质由腐殖土和生红土组成，腐殖土和生红土的以及比为1：2。

测试例4

实施例33、对比例1～3培养45d后，统计各处理组观光木的成活率，结果如表5。

表5不同处理方式观光木成活率

根据表5可以看出，本发明将珍珠岩、腐殖土和生红土三种基质配合使用，能够提高观光木移栽成活率，达到95％。

尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims

1.培养基在观光木组培快繁中的应用，其特征在于，所述培养基包括诱导-分化培养基、增殖-继代培养基和壮苗-生根培养基；

所述诱导-分化培养基以MS培养基为基础培养基，还包括0.1~2.0mg/L 6-BA、0.1~1.0mg/L IAA、20~30g/L蔗糖和5~6g/L琼脂；

所述增殖-继代培养基以MS培养基为基础培养基，还包括0.1~1.0mg/L 6-BA、0.1~1.0mg/L IAA、20~30g/L蔗糖和5~6g/L琼脂；

所述壮苗-生根培养基以MS培养基为基础培养基，还包括0.1~1.0mg/L IBA、0.1~1.0mg/L IAA、20~30g/L蔗糖和5~6g/L琼脂；

外植体为观光木2~3年生苗幼嫩顶芽或侧芽。

2.一种观光木组培快繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：

将所述组培苗移栽至育苗基质中培养；

所述外植体为观光木2~3年生苗幼嫩顶芽或侧芽。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，利用所述诱导-分化培养基培养的时间为50~60d，温度为23~30℃，光照强度为1000~1500lux；

利用所述增殖-继代培养基培养的时间为50~60d，温度为23~30℃，光照强度为1000~1500lux；

利用所述壮苗-生根培养基培养的时间为30~45d，温度为23~30℃，光照强度为1000~1500lux。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述育苗基质包括珍珠岩、腐殖土和生红土；所述珍珠岩、腐殖土和生红土的质量比为（1~2）：（1~3）：（1~3）。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述育苗基质的湿度为50%~60%。

6.根据权利要求2或5所述的方法，其特征在于，利用所述育苗基质培养的温度为20~30℃，遮光度为70~80%，空气湿度为70~80%。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，利用所述诱导-分化培养基培养前，还包括对所述观光木的外植体进行消毒。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，利用育苗基质培养前，还包括：利用800倍多菌灵对所述育苗基质进行消毒。