CN103651147A - 黄金锦络石的组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种植物的组织培养方法，具体涉及金叶络石的组织培养方法，属于生物技术领域。按照本发明提供的技术方案，黄金锦络石的组织培养方法，其通过无菌材料的选取、诱导培养、增殖培养、生根培养和炼苗与移栽得到黄金锦络石。本发明克服了黄金锦络石扦插繁殖率低，成活率不高等特点，导致黄金锦络石的价格偏高等缺点，通过组织培养的方法提高黄金锦络石的繁殖系数，促进生长和提高成活率。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物的组织培养方法，具体涉及金叶络石的组织培养方法，属于生物技术领域。
背景技术
黄金锦络石是夹竹桃科络石属，亚洲络石的变种。新叶橘黄色，老叶亮绿色，由于新叶向老叶过渡，整株植物叶色呈现花斑状，包含3~4种不同的颜色，是优良的园林绿化色叶植物。黄金锦络石适应性强，在干旱、水涝、寒冷和高温的条件下均能保持一定的生命力。此外，黄金锦络石具有蔓性的特点，园林上广泛用于地被和垂直绿化，也可做盆栽观赏。但由于其扦插繁殖率低，成活率不高等特点，导致黄金锦络石的价格偏高，制约了黄金锦络石的推广速度。
发明内容
本发明的目的在于克服上述不足之处，通过组织培养的方法提高黄金锦络石的繁殖系数，促进生长和提高成活率。
按照本发明提供的技术方案，黄金锦络石的组织培养方法，步骤为：
（1）无菌材料的选取：选取生长健壮，带有腋芽的一年生黄金锦络石枝条为外植体；在自来水下用洗涤剂冲洗2h后，在超净工作台上用质量浓度为75%的酒精消毒10~40s，然后用无菌水冲洗3~5遍，再用质量浓度为5%~30%的次氯酸钠溶液消毒10~30min，然后用无菌水冲洗4~6遍，用无菌滤纸吸干多余分水分后备用；
（2）诱导培养：将步骤（1）中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段，每个茎段带有腋芽；将茎段接种到不定芽的诱导培养基上；培养30天时间，培养条件温度在23~26℃，光照强度为1500~2000Lux，光照时间12h；
（3）增殖培养：将步骤（2）中长出的不定芽切下，接种到增殖培养基上， 7天之后，芽基部会长出多个丛生芽，28天转接一次，将丛芽单个切下，接入新的增殖培养基中继续培养；培养条件温度在23~26℃，光照强度为1500~2000Lux，光照时间12h；
（4）生根培养：选取步骤（3）中生长健壮，高度2~4cm的丛生苗切成单株接种到生根培养基上；30天后，基部长出主根和须根，主根长度达到3~6cm；
（5）炼苗与移栽：将步骤（4）中高度大于3cm，叶片数在4~6片、根系长度在2~5cm的组培苗进行炼苗；打开瓶盖7天，使其适应外界环境；7天后洗掉根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡5~30min，移栽至大棚内，适度遮光，即可。
步骤（2）所述诱导培养基为MS培养基：+0.5~1.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤；+0.1~1.0mg/L 萘乙酸；+0.1~0.5mg/L苯基噻二唑基脲；+30g/L蔗糖；+7g/L琼脂粉，调节pH为5.8。
步骤（3）所述增殖培养基为MS培养基：+0.5~3.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤；+0.1~0.5mg/L萘乙酸；+30g/L蔗糖；+7g/L琼脂粉，调节pH为5.8。
步骤（4）所述生根培养基为1/2MS培养基：+0.1～1.0 mg/L吲哚丁酸；+0.1～0.5 mg/L 萘乙酸；+30 g/L蔗糖；+7g/L琼脂粉；+1%~4%活性炭，调节pH为5.8。
本发明的有益效果：本发明克服了黄金锦络石扦插繁殖率低，成活率不高等特点，导致黄金锦络石的价格偏高等缺点，通过组织培养的方法提高黄金锦络石的繁殖系数，促进生长和提高成活率。
具体实施方式
实施例1
黄金锦络石的组织培养方法，该方法包括以下几个步骤：
（1）无菌材料的获得：选取生长健壮，带有腋芽的一年生枝条为外植体。在自来水下用洗涤剂冲洗2h后，在超净工作台上用75%的酒精消毒20s，然后用无菌水冲洗3遍，再用质量浓度为5%次氯酸钠溶液消毒20分钟，然后用无菌水冲洗4遍，用无菌滤纸吸干多余分水分后备用。
（2）诱导培养：将步骤（1）中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段，每个茎段带有腋芽。将茎段接种到不定芽的诱导培养基上，诱导培养基的为MS+0.5mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.1mg/L 萘乙酸+0.1mg/L苯基噻二唑基脲+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.8。培养30天时间，培养条件温度在25℃，光照强度为1500Lux，光照时间12h。
（3）增殖培养：将步骤（2）中长出的不定芽切下，接种到增殖培养基上，增殖培养基为MS+1.5 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.2 mg/L 萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.8。7天之后，芽基部会长出多个丛生芽，28天转接一次，将丛芽单个切下，接入新的增殖培养基中继续培养。培养条件温度在25℃，光照强度为1500Lux，光照时间12h。
（4）生根培养：选取步骤（3）中生长健壮，高度2cm的丛生苗切成单株接种到生根培养基上。生根培养基为1/2MS+0.1 mg/L 吲哚丁酸+0.1 mg/L 萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+1%活性炭，pH5.8。30天后，基部长出主根和须根，主根长度达到4cm。
（5）炼苗与移栽：将高度大于3cm，叶片数在4片、根系长度在2cm的组培苗进行炼苗。打开瓶盖7天，使其适应外界环境。7天后洗掉根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡5分钟，移栽至大棚内，适度遮光。
实施例2
黄金锦络石的组织培养方法，该方法包括以下几个步骤：
（2）无菌材料的获得：选取生长健壮，带有腋芽的一年生枝条为外植体。在自来水下用洗涤剂冲洗2h后，在超净工作台上用75%的酒精消毒30s，然后用无菌水冲洗4遍，再用质量浓度为10%次氯酸钠溶液消毒10分钟，然后用无菌水冲洗4遍，用无菌滤纸吸干多余分水分后备用。
（2）诱导培养：将步骤（1）中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段，每个茎段带有腋芽。将茎段接种到不定芽的诱导培养基上，诱导培养基的为MS+1.5mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.2mg/L 萘乙酸+0.6mg/L苯基噻二唑基脲+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.8。培养30天时间，培养条件温度在26℃，光照强度为2500Lux，光照时间12h。
（3）增殖培养：将步骤（2）中长出的不定芽切下，接种到增殖培养基上，增殖培养基为MS+2.0 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.5 mg/L 萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.8。7天之后，芽基部会长出多个丛生芽，28天转接一次，将丛芽单个切下，接入新的增殖培养基中继续培养。培养条件温度在26℃，光照强度为2000Lux，光照时间12h。
（4）生根培养：选取步骤（3）中生长健壮，高度2cm的丛生苗切成单株接种到生根培养基上。生根培养基为1/2MS+0.2 mg/L 吲哚丁酸+0.5 mg/L 萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+2%活性炭，pH5.8。30天后，基部长出主根和须根，主根长度达到4cm。
（5）炼苗与移栽：将高度大于3cm，叶片数在5片、根系长度在3cm的组培苗进行炼苗。打开瓶盖7天，使其适应外界环境。7天后洗掉根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡10分钟，移栽至大棚内，适度遮光。
实施例3
黄金锦络石的组织培养方法，该方法包括以下几个步骤：
（1）无菌材料的获得：选取生长健壮，带有腋芽的一年生枝条为外植体。在自来水下用洗涤剂冲洗2h后，在超净工作台上用75%的酒精消毒40s，然后用无菌水冲洗6遍，再用质量浓度为30%次氯酸钠溶液消毒30分钟，然后用无菌水冲洗6遍，用无菌滤纸吸干多余分水分后备用。
（2）诱导培养：将步骤（1）中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段，每个茎段带有腋芽。将茎段接种到不定芽的诱导培养基上，诱导培养基的为MS+0.6mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.3mg/L 萘乙酸+0.5mg/L 苯基噻二唑基脲+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.8。培养30天时间，培养条件温度在25℃，光照强度为1500Lux，光照时间12h。
（3）增殖培养：将步骤（2）中长出的不定芽切下，接种到增殖培养基上，增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0.5 mg/L 萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.8。7天之后，芽基部会长出多个丛生芽，28天转接一次，将丛芽单个切下，接入新的增殖培养基中继续培养。培养条件温度在25℃，光照强度为1500Lux，光照时间12h。
（4）生根培养：选取步骤（3）中生长健壮，高度2cm的丛生苗切成单株接种到生根培养基上。生根培养基为1/2MS+1.0mg/L 吲哚丁酸+0.5 mg/L 萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+4%活性炭，pH5.8。30天后，基部长出主根和须根，主根长度达到6cm。
（5）炼苗与移栽：将高度大于3cm，叶片数在4片、根系长度在5cm的组培苗进行炼苗。打开瓶盖7天，使其适应外界环境。7天后洗掉根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30分钟，移栽至大棚内，适度遮光。
本发明中不同激素对黄金锦络石茎段不定芽诱导的情况见表1。
表1
Claims (4)
1.黄金锦络石的组织培养方法，其特征是步骤为：
（1）无菌材料的选取：选取生长健壮，带有腋芽的一年生黄金锦络石枝条为外植体；在自来水下用洗涤剂冲洗2h后，在超净工作台上用质量浓度为75%的酒精消毒10~40s，然后用无菌水冲洗3~5遍，再用质量浓度为5%~30%的次氯酸钠溶液消毒10~30min，然后用无菌水冲洗4~6遍，用无菌滤纸吸干多余分水分后备用；
（2）诱导培养：将步骤（1）中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段，每个茎段带有腋芽；将茎段接种到不定芽的诱导培养基上；培养30天时间，培养条件温度在23~26℃，光照强度为1500~2000Lux，光照时间12h；
（3）增殖培养：将步骤（2）中长出的不定芽切下，接种到增殖培养基上， 7天之后，芽基部会长出多个丛生芽，28天转接一次，将丛芽单个切下，接入新的增殖培养基中继续培养；培养条件温度在23~26℃，光照强度为1500~2000Lux，光照时间12h；
（4）生根培养：选取步骤（3）中生长健壮，高度2~4cm的丛生苗切成单株接种到生根培养基上；30天后，基部长出主根和须根，主根长度达到3~6cm；
（5）炼苗与移栽：将步骤（4）中高度大于3cm，叶片数在4~6片、根系长度在2~5cm的组培苗进行炼苗；打开瓶盖7天，使其适应外界环境；7天后洗掉根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡5~30min，移栽至大棚内，适度遮光，即可。
2.如权利要求1所述黄金锦络石的组织培养方法，其特征是：步骤（2）所述诱导培养基为MS培养基：+0.5~1.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤；+0.1~1.0mg/L 萘乙酸；+0.1~0.5mg/L苯基噻二唑基脲；+30g/L蔗糖；+7g/L琼脂粉，调节pH为5.8。
3.如权利要求1所述黄金锦络石的组织培养方法，其特征是：步骤（3）所述增殖培养基为MS培养基：+0.5~3.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤；+0.1~0.5mg/L萘乙酸；+30g/L蔗糖；+7g/L琼脂粉，调节pH为5.8。
4.如权利要求1所述黄金锦络石的组织培养方法，其特征是：步骤（4）所述生根培养基为1/2MS培养基：+0.1～1.0 mg/L吲哚丁酸；+0.1～0.5 mg/L 萘乙酸；+30 g/L蔗糖；+7g/L琼脂粉；+1%~4%活性炭，调节pH为5.8。
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