CN103651147B - 黄金锦络石的组织培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种植物的组织培养方法,具体涉及金叶络石的组织培养方法,属于生物技术领域。按照本发明提供的技术方案,黄金锦络石的组织培养方法,其通过无菌材料的选取、诱导培养、增殖培养、生根培养和炼苗与移栽得到黄金锦络石。本发明克服了黄金锦络石扦插繁殖率低,成活率不高等特点,导致黄金锦络石的价格偏高等缺点,通过组织培养的方法提高黄金锦络石的繁殖系数,促进生长和提高成活率。

Description

黄金锦络石的组织培养方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种植物的组织培养方法,具体涉及金叶络石的组织培养方法,属于 生物技术领域。
背景技术
[0002] 黄金锦络石是夹竹桃科络石属,亚洲络石的变种。新叶橘黄色,老叶亮绿色,由于 新叶向老叶过渡,整株植物叶色呈现花斑状,包含3~4种不同的颜色,是优良的园林绿化色 叶植物。黄金锦络石适应性强,在干旱、水涝、寒冷和高温的条件下均能保持一定的生命力。 此外,黄金锦络石具有蔓性的特点,园林上广泛用于地被和垂直绿化,也可做盆栽观赏。但 由于其扦插繁殖率低,成活率不高等特点,导致黄金锦络石的价格偏高,制约了黄金锦络石 的推广速度。
发明内容
[0003] 本发明的目的在于克服上述不足之处,通过组织培养的方法提高黄金锦络石的繁 殖系数,促进生长和提高成活率。
[0004] 按照本发明提供的技术方案,黄金锦络石的组织培养方法,步骤为:
[0005] (1)无菌材料的选取:选取生长健壮,带有腋芽的一年生黄金锦络石枝条为 外植体;在自来水下用洗涤剂冲洗2h后,在超净工作台上用质量浓度为75%的酒精消 毒10~40s,然后用无菌水冲洗3~5遍,再用质量浓度为5%~30%的次氯酸钠溶液消毒 10~30min,然后用无菌水冲洗4~6遍,用无菌滤纸吸干多余分水分后备用;
[0006] (2)诱导培养:将步骤(1)中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段,每个茎段带有腋 芽;将茎段接种到不定芽的诱导培养基上;培养30天时间,培养条件温度在23~26°C,光照 强度为1500~2000Lux,光照时间12h;
[0007] (3)增殖培养:将步骤(2)中长出的不定芽切下,接种到增殖培养基上,7天之后, 芽基部会长出多个丛生芽,28天转接一次,将丛芽单个切下,接入新的增殖培养基中继续培 养;培养条件温度在23~26°C,光照强度为1500~2000Lux,光照时间12h;
[0008] (4)生根培养:选取步骤(3)中生长健壮,高度2~4cm的丛生苗切成单株接种到生 根培养基上;30天后,基部长出主根和须根,主根长度达到3~6cm;
[0009] (5)炼苗与移栽:将步骤(4)中高度大于3cm,叶片数在4~6片、根系长度在2~5cm 的组培苗进行炼苗;打开瓶盖7天,使其适应外界环境;7天后洗掉根部的培养基,用800倍 的多菌灵浸泡5~30min,移栽至大棚内,适度遮光,即可。
[0010] 步骤(2)所述诱导培养基为MS培养基:+0• 5~1.Omg/L6-苄氨基腺嘌呤; +0. 1~1.Omg/L萘乙酸;+0. 1~0. 5mg/L苯基噻二唑基脲;+30g/L蔗糖;+7g/L琼脂粉,调节 pH为 5. 8。
[0011] 步骤(3)所述增殖培养基为MS培养基:+0. 5~3. 0mg/L6-苄氨基腺嘌呤; +0• 1~0. 5mg/L萘乙酸;+30g/L蔗糖;+7g/L琼脂粉,调节pH为5. 8。
[0012] 步骤(4)所述生根培养基为1/2MS培养基:+0• 1~1. 0mg/L吲哚丁酸;+0• 1~ 0• 5mg/L萘乙酸;+30g/L蔗糖;+7g/L琼脂粉;+1%~4%活性炭,调节pH为5. 8。
[0013] 本发明的有益效果:本发明克服了黄金锦络石扦插繁殖率低,成活率不高等特点, 导致黄金锦络石的价格偏高等缺点,通过组织培养的方法提高黄金锦络石的繁殖系数,促 进生长和提尚成活率。
具体实施方式
[0014] 实施例1
[0015] 黄金锦络石的组织培养方法,该方法包括以下几个步骤:
[0016] (1)无菌材料的获得:选取生长健壮,带有腋芽的一年生枝条为外植体。在自来水 下用洗涤剂冲洗2h后,在超净工作台上用75%的酒精消毒20s,然后用无菌水冲洗3遍,再 用质量浓度为5%次氯酸钠溶液消毒20分钟,然后用无菌水冲洗4遍,用无菌滤纸吸干多余 分水分后备用。
[0017] (2)诱导培养:将步骤(1)中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段,每个茎段带有腋 芽。将茎段接种到不定芽的诱导培养基上,诱导培养基的为MS+0.5mg/L6-苄氨基腺嘌呤 +0•lmg/L萘乙酸+0•lmg/L苯基噻二唑基脲+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉,pH5. 8。培养30 天时间,培养条件温度在25°C,光照强度为1500LUX,光照时间12h。
[0018] (3)增殖培养:将步骤(2)中长出的不定芽切下,接种到增殖培养基上,增殖培养 基为MS+1. 5mg/L6-苄氨基腺嘌呤+0.2mg/L萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉,pH5. 8。 7天之后,芽基部会长出多个丛生芽,28天转接一次,将丛芽单个切下,接入新的增殖培养 基中继续培养。培养条件温度在25°C,光照强度为1500LUX,光照时间12h。
[0019] (4)生根培养:选取步骤(3)中生长健壮,高度2cm的丛生苗切成单株接种到生根 培养基上。生根培养基为1/2MS+0. 1mg/L吲哚丁酸+0. 1mg/L萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/ L琼脂粉+1%活性炭,pH5. 8。30天后,基部长出主根和须根,主根长度达到4cm。
[0020] (5)炼苗与移栽:将高度大于3cm,叶片数在4片、根系长度在2cm的组培苗进行炼 苗。打开瓶盖7天,使其适应外界环境。7天后洗掉根部的培养基,用800倍的多菌灵浸泡 5分钟,移栽至大棚内,适度遮光。
[0021] 实施例2
[0022] 黄金锦络石的组织培养方法,该方法包括以下几个步骤:
[0023] (2)无菌材料的获得:选取生长健壮,带有腋芽的一年生枝条为外植体。在自来水 下用洗涤剂冲洗2h后,在超净工作台上用75%的酒精消毒30s,然后用无菌水冲洗4遍,再 用质量浓度为10%次氯酸钠溶液消毒10分钟,然后用无菌水冲洗4遍,用无菌滤纸吸干多 余分水分后备用。
[0024] (2)诱导培养:将步骤(1)中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段,每个茎段带有腋 芽。将茎段接种到不定芽的诱导培养基上,诱导培养基的为MS+1.5mg/L6-苄氨基腺嘌呤 +0. 2mg/L萘乙酸+0.6mg/L苯基噻二唑基脲+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉,pH5.8。培养30 天时间,培养条件温度在26°C,光照强度为2500LUX,光照时间12h。
[0025] (3)增殖培养:将步骤(2)中长出的不定芽切下,接种到增殖培养基上,增殖培养 基为MS+2.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤+0.5mg/L萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉,pH5.8。 7天之后,芽基部会长出多个丛生芽,28天转接一次,将丛芽单个切下,接入新的增殖培养 基中继续培养。培养条件温度在26°C,光照强度为2000LUX,光照时间12h。
[0026] (4)生根培养:选取步骤(3)中生长健壮,高度2cm的丛生苗切成单株接种到生根 培养基上。生根培养基为1/2MS+0. 2mg/L吲哚丁酸+0. 5mg/L萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/ L琼脂粉+2%活性炭,pH5. 8。30天后,基部长出主根和须根,主根长度达到4cm。
[0027] (5)炼苗与移栽:将高度大于3cm,叶片数在5片、根系长度在3cm的组培苗进行炼 苗。打开瓶盖7天,使其适应外界环境。7天后洗掉根部的培养基,用800倍的多菌灵浸泡 10分钟,移栽至大棚内,适度遮光。
[0028] 实施例3
[0029] 黄金锦络石的组织培养方法,该方法包括以下几个步骤:
[0030] (1)无菌材料的获得:选取生长健壮,带有腋芽的一年生枝条为外植体。在自来水 下用洗涤剂冲洗2h后,在超净工作台上用75%的酒精消毒40s,然后用无菌水冲洗6遍,再 用质量浓度为30%次氯酸钠溶液消毒30分钟,然后用无菌水冲洗6遍,用无菌滤纸吸干多 余分水分后备用。
[0031] (2)诱导培养:将步骤(1)中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段,每个茎段带有腋 芽。将茎段接种到不定芽的诱导培养基上,诱导培养基的为MS+0.6mg/L6-苄氨基腺嘌呤 +0. 3mg/L萘乙酸+0. 5mg/L苯基噻二唑基脲+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉,pH5.8。培养30 天时间,培养条件温度在25°C,光照强度为1500LUX,光照时间12h。
[0032] (3)增殖培养:将步骤(2)中长出的不定芽切下,接种到增殖培养基上,增殖培养 基为MS+1.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤+0. 5mg/L萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉,pH5.8。 7天之后,芽基部会长出多个丛生芽,28天转接一次,将丛芽单个切下,接入新的增殖培养 基中继续培养。培养条件温度在25°C,光照强度为1500LUX,光照时间12h。
[0033] (4)生根培养:选取步骤(3)中生长健壮,高度2cm的丛生苗切成单株接种到生根 培养基上。生根培养基为l/2MS+1.0mg/L吲哚丁酸+0. 5mg/L萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/ L琼脂粉+4%活性炭,pH5. 8。30天后,基部长出主根和须根,主根长度达到6cm。
[0034] (5)炼苗与移栽:将高度大于3cm,叶片数在4片、根系长度在5cm的组培苗进行炼 苗。打开瓶盖7天,使其适应外界环境。7天后洗掉根部的培养基,用800倍的多菌灵浸泡 30分钟,移栽至大棚内,适度遮光。
[0035] 本发明中不同激素对黄金锦络石茎段不定芽诱导的情况见表1。
[0036] 表 1
[0037]
Figure CN103651147BD00061

Claims (1)

1.黄金锦络石的组织培养方法,其特征是步骤为: (1) 无菌材料的选取:选取生长健壮,带有腋芽的一年生黄金锦络石枝条为外植体;在 自来水下用洗涤剂冲洗2h后,在超净工作台上用质量浓度为75%的酒精消毒10~40s,然后 用无菌水冲洗3~5遍,再用质量浓度为5%~30%的次氯酸钠溶液消毒10~30min,然后用无菌 水冲洗4~6遍,用无菌滤纸吸干多余分水分后备用; (2) 诱导培养:将步骤(1)中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段,每个茎段带有腋芽; 将茎段接种到不定芽的诱导培养基上;培养30天时间,培养条件温度在23~26°C,光照强度 为 1500~2000Lux,光照时间 12h ; (3) 增殖培养:将步骤(2)中长出的不定芽切下,接种到增殖培养基上,7天之后,芽基 部会长出多个丛生芽,28天转接一次,将丛芽单个切下,接入新的增殖培养基中继续培养; 培养条件温度在23~26°C,光照强度为1500~2000Lux,光照时间12h ; (4) 生根培养:选取步骤(3)中生长健壮,高度2~4cm的丛生苗切成单株接种到生根培 养基上;30天后,基部长出主根和须根,主根长度达到3~6cm ; (5) 炼苗与移栽:将步骤(4)中高度大于3cm,叶片数在4~6片、根系长度在2~5cm的组 培苗进行炼苗;打开瓶盖7天,使其适应外界环境;7天后洗掉根部的培养基,用800倍的多 菌灵浸泡5~30min,移栽至大棚内,适度遮光,即可; 步骤(2)所述诱导培养基为MS培养基+0. 5~1. Omg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0. 1~1. Omg/L 萘乙酸+0. 1~0. 5mg/L苯基噻二唑基脲+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉,调节pH为5. 8 ; 步骤(3)所述增殖培养基为MS培养基+0. 5~3. 0mg/L6-苄氨基腺嘌呤+0. 1~0. 5mg/L 萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉,调节pH为5. 8 ; 步骤(4)所述生根培养基为1/2MS培养基+0. 1~I. 0 mg/L吲哚丁酸+0. 1~0. 5 mg/ L萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+1%~4%活性炭,调节pH为5. 8。
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