CN103651147B - 黄金锦络石的组织培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种植物的组织培养方法，具体涉及金叶络石的组织培养方法，属于生物技术领域。按照本发明提供的技术方案，黄金锦络石的组织培养方法，其通过无菌材料的选取、诱导培养、增殖培养、生根培养和炼苗与移栽得到黄金锦络石。本发明克服了黄金锦络石扦插繁殖率低，成活率不高等特点，导致黄金锦络石的价格偏高等缺点，通过组织培养的方法提高黄金锦络石的繁殖系数，促进生长和提高成活率。

Description

黄金锦络石的组织培养方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种植物的组织培养方法，具体涉及金叶络石的组织培养方法，属于 生物技术领域。
背景技术
[0002] 黄金锦络石是夹竹桃科络石属，亚洲络石的变种。新叶橘黄色，老叶亮绿色，由于 新叶向老叶过渡，整株植物叶色呈现花斑状，包含3~4种不同的颜色，是优良的园林绿化色 叶植物。黄金锦络石适应性强，在干旱、水涝、寒冷和高温的条件下均能保持一定的生命力。 此外，黄金锦络石具有蔓性的特点，园林上广泛用于地被和垂直绿化，也可做盆栽观赏。但 由于其扦插繁殖率低，成活率不高等特点，导致黄金锦络石的价格偏高，制约了黄金锦络石 的推广速度。
发明内容
[0003] 本发明的目的在于克服上述不足之处，通过组织培养的方法提高黄金锦络石的繁 殖系数，促进生长和提高成活率。
[0004] 按照本发明提供的技术方案，黄金锦络石的组织培养方法，步骤为：
[0005] (1)无菌材料的选取：选取生长健壮，带有腋芽的一年生黄金锦络石枝条为 外植体；在自来水下用洗涤剂冲洗2h后，在超净工作台上用质量浓度为75%的酒精消 毒10~40s，然后用无菌水冲洗3~5遍，再用质量浓度为5%~30%的次氯酸钠溶液消毒 10~30min，然后用无菌水冲洗4~6遍，用无菌滤纸吸干多余分水分后备用；
[0006] (2)诱导培养：将步骤（1)中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段，每个茎段带有腋 芽；将茎段接种到不定芽的诱导培养基上；培养30天时间，培养条件温度在23~26°C，光照 强度为1500~2000Lux，光照时间12h;
[0007] (3)增殖培养：将步骤（2)中长出的不定芽切下，接种到增殖培养基上，7天之后， 芽基部会长出多个丛生芽，28天转接一次，将丛芽单个切下，接入新的增殖培养基中继续培 养；培养条件温度在23~26°C，光照强度为1500~2000Lux，光照时间12h;
[0008] (4)生根培养：选取步骤（3)中生长健壮，高度2~4cm的丛生苗切成单株接种到生 根培养基上；30天后，基部长出主根和须根，主根长度达到3~6cm;
[0009] (5)炼苗与移栽：将步骤（4)中高度大于3cm，叶片数在4~6片、根系长度在2~5cm 的组培苗进行炼苗；打开瓶盖7天，使其适应外界环境；7天后洗掉根部的培养基，用800倍 的多菌灵浸泡5~30min，移栽至大棚内，适度遮光，即可。
[0010] 步骤（2)所述诱导培养基为MS培养基：+0• 5~1.Omg/L6-苄氨基腺嘌呤； +0. 1~1.Omg/L萘乙酸；+0. 1~0. 5mg/L苯基噻二唑基脲；+30g/L蔗糖；+7g/L琼脂粉，调节 pH为 5. 8。
[0011] 步骤（3)所述增殖培养基为MS培养基：+0. 5~3. 0mg/L6-苄氨基腺嘌呤； +0• 1~0. 5mg/L萘乙酸；+30g/L蔗糖；+7g/L琼脂粉，调节pH为5. 8。
[0012] 步骤（4)所述生根培养基为1/2MS培养基：+0• 1~1. 0mg/L吲哚丁酸；+0• 1~ 0• 5mg/L萘乙酸；+30g/L蔗糖；+7g/L琼脂粉；+1%~4%活性炭，调节pH为5. 8。
[0013] 本发明的有益效果：本发明克服了黄金锦络石扦插繁殖率低，成活率不高等特点， 导致黄金锦络石的价格偏高等缺点，通过组织培养的方法提高黄金锦络石的繁殖系数，促 进生长和提尚成活率。
具体实施方式
[0014] 实施例1
[0015] 黄金锦络石的组织培养方法，该方法包括以下几个步骤：
[0016] (1)无菌材料的获得：选取生长健壮，带有腋芽的一年生枝条为外植体。在自来水 下用洗涤剂冲洗2h后，在超净工作台上用75%的酒精消毒20s，然后用无菌水冲洗3遍，再 用质量浓度为5%次氯酸钠溶液消毒20分钟，然后用无菌水冲洗4遍，用无菌滤纸吸干多余 分水分后备用。
[0017] (2)诱导培养：将步骤（1)中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段，每个茎段带有腋 芽。将茎段接种到不定芽的诱导培养基上，诱导培养基的为MS+0.5mg/L6-苄氨基腺嘌呤 +0•lmg/L萘乙酸+0•lmg/L苯基噻二唑基脲+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5. 8。培养30 天时间，培养条件温度在25°C，光照强度为1500LUX，光照时间12h。
[0018] (3)增殖培养：将步骤（2)中长出的不定芽切下，接种到增殖培养基上，增殖培养 基为MS+1. 5mg/L6-苄氨基腺嘌呤+0.2mg/L萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5. 8。 7天之后，芽基部会长出多个丛生芽，28天转接一次，将丛芽单个切下，接入新的增殖培养 基中继续培养。培养条件温度在25°C，光照强度为1500LUX，光照时间12h。
[0019] (4)生根培养：选取步骤（3)中生长健壮，高度2cm的丛生苗切成单株接种到生根 培养基上。生根培养基为1/2MS+0. 1mg/L吲哚丁酸+0. 1mg/L萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/ L琼脂粉+1%活性炭，pH5. 8。30天后，基部长出主根和须根，主根长度达到4cm。
[0020] (5)炼苗与移栽：将高度大于3cm，叶片数在4片、根系长度在2cm的组培苗进行炼 苗。打开瓶盖7天，使其适应外界环境。7天后洗掉根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡 5分钟，移栽至大棚内，适度遮光。
[0021] 实施例2
[0022] 黄金锦络石的组织培养方法，该方法包括以下几个步骤：
[0023] (2)无菌材料的获得：选取生长健壮，带有腋芽的一年生枝条为外植体。在自来水 下用洗涤剂冲洗2h后，在超净工作台上用75%的酒精消毒30s，然后用无菌水冲洗4遍，再 用质量浓度为10%次氯酸钠溶液消毒10分钟，然后用无菌水冲洗4遍，用无菌滤纸吸干多 余分水分后备用。
[0024] (2)诱导培养：将步骤（1)中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段，每个茎段带有腋 芽。将茎段接种到不定芽的诱导培养基上，诱导培养基的为MS+1.5mg/L6-苄氨基腺嘌呤 +0. 2mg/L萘乙酸+0.6mg/L苯基噻二唑基脲+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.8。培养30 天时间，培养条件温度在26°C，光照强度为2500LUX，光照时间12h。
[0025] (3)增殖培养：将步骤（2)中长出的不定芽切下，接种到增殖培养基上，增殖培养 基为MS+2.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤+0.5mg/L萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.8。 7天之后，芽基部会长出多个丛生芽，28天转接一次，将丛芽单个切下，接入新的增殖培养 基中继续培养。培养条件温度在26°C，光照强度为2000LUX，光照时间12h。
[0026] (4)生根培养：选取步骤（3)中生长健壮，高度2cm的丛生苗切成单株接种到生根 培养基上。生根培养基为1/2MS+0. 2mg/L吲哚丁酸+0. 5mg/L萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/ L琼脂粉+2%活性炭，pH5. 8。30天后，基部长出主根和须根，主根长度达到4cm。
[0027] (5)炼苗与移栽：将高度大于3cm，叶片数在5片、根系长度在3cm的组培苗进行炼 苗。打开瓶盖7天，使其适应外界环境。7天后洗掉根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡 10分钟，移栽至大棚内，适度遮光。
[0028] 实施例3
[0029] 黄金锦络石的组织培养方法，该方法包括以下几个步骤：
[0030] (1)无菌材料的获得：选取生长健壮，带有腋芽的一年生枝条为外植体。在自来水 下用洗涤剂冲洗2h后，在超净工作台上用75%的酒精消毒40s，然后用无菌水冲洗6遍，再 用质量浓度为30%次氯酸钠溶液消毒30分钟，然后用无菌水冲洗6遍，用无菌滤纸吸干多 余分水分后备用。
[0031] (2)诱导培养：将步骤（1)中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段，每个茎段带有腋 芽。将茎段接种到不定芽的诱导培养基上，诱导培养基的为MS+0.6mg/L6-苄氨基腺嘌呤 +0. 3mg/L萘乙酸+0. 5mg/L苯基噻二唑基脲+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.8。培养30 天时间，培养条件温度在25°C，光照强度为1500LUX，光照时间12h。
[0032] (3)增殖培养：将步骤（2)中长出的不定芽切下，接种到增殖培养基上，增殖培养 基为MS+1.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤+0. 5mg/L萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，pH5.8。 7天之后，芽基部会长出多个丛生芽，28天转接一次，将丛芽单个切下，接入新的增殖培养 基中继续培养。培养条件温度在25°C，光照强度为1500LUX，光照时间12h。
[0033] (4)生根培养：选取步骤（3)中生长健壮，高度2cm的丛生苗切成单株接种到生根 培养基上。生根培养基为l/2MS+1.0mg/L吲哚丁酸+0. 5mg/L萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/ L琼脂粉+4%活性炭，pH5. 8。30天后，基部长出主根和须根，主根长度达到6cm。
[0034] (5)炼苗与移栽：将高度大于3cm，叶片数在4片、根系长度在5cm的组培苗进行炼 苗。打开瓶盖7天，使其适应外界环境。7天后洗掉根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡 30分钟，移栽至大棚内，适度遮光。
[0035] 本发明中不同激素对黄金锦络石茎段不定芽诱导的情况见表1。
[0036] 表 1
[0037]
Figure CN103651147BD00061

Claims (1)

1.黄金锦络石的组织培养方法，其特征是步骤为： (1) 无菌材料的选取：选取生长健壮，带有腋芽的一年生黄金锦络石枝条为外植体；在 自来水下用洗涤剂冲洗2h后，在超净工作台上用质量浓度为75%的酒精消毒10~40s，然后 用无菌水冲洗3~5遍，再用质量浓度为5%~30%的次氯酸钠溶液消毒10~30min，然后用无菌 水冲洗4~6遍，用无菌滤纸吸干多余分水分后备用； (2) 诱导培养：将步骤（1)中灭菌好的一年生枝条切成多个茎段，每个茎段带有腋芽； 将茎段接种到不定芽的诱导培养基上；培养30天时间，培养条件温度在23~26°C，光照强度 为 1500~2000Lux，光照时间 12h ; (3) 增殖培养：将步骤（2)中长出的不定芽切下，接种到增殖培养基上，7天之后，芽基 部会长出多个丛生芽，28天转接一次，将丛芽单个切下，接入新的增殖培养基中继续培养； 培养条件温度在23~26°C，光照强度为1500~2000Lux，光照时间12h ; (4) 生根培养：选取步骤（3)中生长健壮，高度2~4cm的丛生苗切成单株接种到生根培 养基上；30天后，基部长出主根和须根，主根长度达到3~6cm ; (5) 炼苗与移栽：将步骤（4)中高度大于3cm，叶片数在4~6片、根系长度在2~5cm的组 培苗进行炼苗；打开瓶盖7天，使其适应外界环境；7天后洗掉根部的培养基，用800倍的多 菌灵浸泡5~30min，移栽至大棚内，适度遮光，即可； 步骤（2)所述诱导培养基为MS培养基+0. 5~1. Omg/L 6-苄氨基腺嘌呤+0. 1~1. Omg/L 萘乙酸+0. 1~0. 5mg/L苯基噻二唑基脲+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，调节pH为5. 8 ; 步骤（3)所述增殖培养基为MS培养基+0. 5~3. 0mg/L6-苄氨基腺嘌呤+0. 1~0. 5mg/L 萘乙酸+30g/L蔗糖+7g/L琼脂粉，调节pH为5. 8 ; 步骤（4)所述生根培养基为1/2MS培养基+0. 1~I. 0 mg/L吲哚丁酸+0. 1~0. 5 mg/ L萘乙酸+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂粉+1%~4%活性炭，调节pH为5. 8。
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