CN101578963A - 日本红枫的组织培养快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种日本红枫的组织培养快繁方法,该方法是由外植体的选取与灭菌、最佳的诱导培养基和生长培养基、制备无菌苗、芽的增殖、增殖生长、生根培养和炼苗移栽六个主要步骤,获得到大量种苗。本发明的有益技术效果是:利用无性繁殖技术对种苗培育方面的传统方式行了改进。在人工制造的优化环境里,解决了种苗体质优化的难题。并且可以把植物中各种优良种性,如抗寒、抗旱、抗病、抗虫以及快速生长等进行移植和优化组合,创造出新型的优良品种,组培苗生根率达95%以上,移栽成活率达85%以上。使生根时间大大缩短,这与植物的童性或幼性得到激发有直接的关系。对于加快新品种扩繁,降低种苗成本意义巨大。
Description
技术领域
本发明涉及一种组织培养方法,更具体的说涉及一种日本红枫的组织培养快繁方法。
技术背景
日本红枫(Acer palmatum atropurpureum)是槭树科槭树属落叶小乔木,为鸡爪槭的变种,原产地为日本和韩国。因其树型小巧精致,叶片掌状且叶裂深浅多样以及艳丽的红色而闻名。日本红枫生长速度比普通国产红枫快的多,叶片颜色更鲜艳,耐寒性更强,因此在园林景观彩叶植物中,日本红枫是应用最为广泛的槭树科品种之一。
日本红枫的现有的繁殖方法主要是种子繁殖和嫁接法。种子繁殖对培育条件要求苛刻,且耗时较长。嫁接法,秋季采用芽接,春季则用枝接。以1-2年生健壮实生苗亲和力较强的青枫为砧木,以落地嫁接为宜。接穗采用种子繁殖方式获得,但由其播种繁殖变异大,生长缓慢,且不易扦插成活,远不能满足嫁接需求,严重制约了日本红枫的推广。
发明内容
基本培养基和组培各阶段培养基由以下配方组成:
1)基本培养基:选用WPM为培养基,pH5~6,蔗糖20~40%,琼脂6~10g/L;
2)诱导培养基:WPM+0.05~0.2mg/L TDZ+0.0.05~0.2mg/L BA;
4)增殖培养基:WPM+0.1~0.3mg/L TDZ+0.05~0.3mg/L BA;
5)生根培养基:WPM+0.1~0.6mg/L IBA+0.1~0.6mg/L NAA。
基本培养基和组培各阶段培养基的具体配方为:
1)基本培养基:以WPM为基本培养基,蔗糖30g/L,琼脂7g/L,pH5.8;
2)诱导培养基:WPM+0.1mg/L TDZ+0.1mg/L BA;
3)增殖培养基:WPM+0.2mg/L TDZ+0.1mg/L BA;
4)生根培养基:WPM+0.3mg/L IBA+0.32mg/L NAA。
外植体的选取与表面灭菌是:选取日本红枫实生苗的幼嫩枝,去叶,切取带有腋芽的茎段,经NaClO表面灭菌处理后,作为组培用的外植体。
诱导培养是:无菌条件下将表面灭菌处理的茎段的切口变褐处切除,迅速将腋芽茎段的芽向上接种在诱导培养基上,在常温光照培养条件下,诱导腋芽萌发,然后分化丛生芽,得到单株芽。
增殖培养是:将单株芽接入增殖培养基中,在常温光照培养条件下,每2月继代培养1次。
生根培养是:将所得单株芽中2-3cm以上的有效苗切割下来,除去周围的小芽及组织,接种到生根培养基中,在生根光照培养条件下培养1-2周,得到组培苗。
炼苗移栽是:当生根的组培苗生长到3-5cm以上时,将培养罐开盖,进行炼苗1-2周,炼苗后将组培苗上残留的培养基洗净,植入园土∶腐叶土∶砂土=2∶2∶1的培养土中。
常温光照培养条件是:温度为25±2℃、光照14h/D、光照强度2500-3000Lux;
生根光照培养条件是:温度为22±2℃、光照8h/D、光照强度为2500-3000Lux。
本发明的有益技术效果是:利用无性繁殖技术对种苗培育方面的传统方式行了改进。在人工制造的优化环境里,促进细胞的快速分裂和繁殖;使用优化基因组合技术,解决了种苗体质优化的难题。并且可以把植物中各种优良种性,如抗寒、抗旱、抗病、抗虫以及快速生长等进行移植和优化组合,创造出新型的优良品种,组培苗生根率达95%以上,移栽成活率达85%以上。采用该技术特别适用于母本材料少,急需大量商品苗,且原先需嫁接红枫品种。通过多代循环技术后,还能使生根时间大大缩短,这与植物的童性或幼性得到激发有直接的关系。正确理解与运用快繁技术,对于加快新品种扩繁,降低种苗成本意义巨大。
具体实施方式
a、外植体选择与表面灭菌:剪取日本红枫优良实生苗幼嫩枝,切取带有腋芽的茎段,将含腋芽的茎段在清水冲洗1h;然后外植体经75%酒精浸泡40s,再用体积比为3%NaClO溶液浸泡15min,最后用灭菌蒸馏水冲洗4~5次后作为组培的外植体待用;
b、诱导培养:无菌条件下将外植体切口变褐处切除,迅速将腋芽茎段的芽向上接入WPM+0.1mg/L TDZ+0.1mg/L BA诱导培养基上,诱导腋芽萌发,然后分化丛生芽;培养条件为:温度为25±2℃、光照14h/D、光照强度2500-3000Lux;
c、增殖培养:在无菌条件下将丛生芽切成单株接入WPM+0.2mg/L TDZ+0.1mg/L BA增殖培养基中进行增殖培养,继续分化丛生芽,扩大增殖系数;每2月继代培养1次。培养条件为:温度为25±2℃、光照14h/D、光照强度2500-3000Lux;
d、生根培养:将单株芽生长到2-3cm时,将组培苗接种到WPM+0.3mg/L IBA+0.32mg/L NAA生根培养基中培养1-2周,诱导生根,生根率可达95%以上。培养条件为:温度为22±2℃、光照8h/D、光照强度为2500-3000Lux;
e、组培苗炼苗:当生根的组培苗生长到3-5cm以上时,将培养罐开盖,进行炼苗1-2周,选取生长良好的进行移栽;
f、移栽:将组培苗上残留的培养基洗净,植入园土∶腐叶土∶砂土=2∶2∶1的培养土中,成活率达85%以上。
Claims (9)
1、日本红枫的组织培养快繁方法,包括基本培养基、外植体的选取与灭菌、诱导培养、增殖培养、生根培养和炼苗移栽六个步骤,其特征在于:基本培养基和组培各阶段培养基由以下配方组成:
1)基本培养基:选用WPM为培养基,pH5~6,蔗糖20~40%,琼脂6~10g/L;
2)诱导培养基:WPM+0.05~0.2mg/L TDZ+0.0.05~0.2mg/L BA;
4)增殖培养基:WPM+0.1~0.3mg/L TDZ+0.05~0.3mg/L BA;
5)生根培养基:WPM+0.1~0.6mg/L IBA+0.1~0.6mg/L NAA。
2、根据权利要求1所述的日本红枫的组织培养快繁方法,其特征在于:基本培养基和组培各阶段培养基的配方为:
1)基本培养基:以WPM为基本培养基,蔗糖30g/L,琼脂7g/L,pH5.8;
2)诱导培养基:WPM+0.1mg/L TDZ+0.1mg/L BA;
3)增殖培养基:WPM+0.2mg/L TDZ+0.1mg/L BA;
4)生根培养基:WPM+0.3mg/L IBA+0.32mg/L NAA。
3、根据权利要求1所述的日本红枫的组织培养快繁方法,其特征在于:外植体的选取与表面灭菌是:选取日本红枫实生苗的幼嫩枝,去叶,切取带有腋芽的茎段,经NaClO表面灭菌处理后,作为组培用的外植体。
4、根据权利要求1所述的日本红枫的组织培养快繁方法,其特征在于:诱导培养是:无菌条件下将表面灭菌处理的茎段的切口变褐处切除,迅速将腋芽茎段的芽向上接种在诱导培养基上,在常温光照培养条件下,诱导腋芽萌发,然后分化丛生芽,得到单株芽。
5、根据权利要求1所述的日本红枫的组织培养快繁方法,其特征在于:增殖培养是:将单株芽接入增殖培养基中,在常温光照培养条件下,每2月继代培养1次。
6、根据权利要求1所述的日本红枫的组织培养快繁方法,其特征在于:生根培养是:将所得单株芽中2-3cm以上的有效苗切割下来,除去周围的小芽及组织,接种到生根培养基中,在生根光照培养条件下培养1-2周,得到组培苗。
7、根据权利要求1所述的日本红枫的组织培养快繁方法,其特征在于:炼苗移栽是:当生根的组培苗生长到3-5cm以上时,将培养罐开盖,进行炼苗1-2周,炼苗后将组培苗上残留的培养基洗净,植入园上∶腐叶土∶砂土=2∶2∶1的培养土中。
8、根据权利要求4和权利要求5所述的日日本红枫的组织培养快繁方法,其特征在于:常温光照培养条件是:温度为25±2℃、光照14h/D、光照强度2500-3000Lux。
9、根据权利要求6所述的日本红枫的组织培养快繁方法,其特征在于:生根光照培养条件是:温度为22±2℃、光照8h/D、光照强度为2500-3000Lux。
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