CN103404436A - 一种获得鸡爪槭无菌苗的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种获得鸡爪槭无菌苗的方法，它包括以下步骤：S1.切取外植体：待实生苗第一片真叶展开后，剪取不包括子叶的根上部分，于流水中冲洗后吸干水分；S2.灭菌：将切取的外植体放入超净工作台，用酒精和升汞灭菌后置于无菌纸上晾干；S3.生根培养：将灭菌后的外植体接种于1/2MS+IAA0.05mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L的生根培养基中，在光照、恒温条件下培养获得长势旺盛的鸡爪槭无菌苗。本发明采用组培繁殖的手段获得大量种苗，为嫁接提供材料，为园区等提供种苗，为建立鸡爪槭组培快繁体系提供了基础材料，该方法具有简便易行、程序简单、工效高、成本低的特性。

Description

一种获得鸡爪槭无菌苗的方法
技术领域
本发明涉及一种植物的培养方法，具体涉及一种获得鸡爪槭无菌苗的方法。
背景技术
鸡爪槭（Acer paimatum）别名雅枫，系槭树科槭树属，是城市景观中名贵的观赏树种。原产中国长江流域，日本、朝鲜半岛也有分布。我国主要分布于长江流域各省，多生于海拔1200m以下山地、丘陵之林缘或疏林中。鸡爪槭属落叶小乔木，高约8m，树皮深灰色，当年生枝紫色或淡紫绿色；多年生枝淡灰色、紫色或深紫色。鸡爪槭叶对生，直径7-10厘米，基部截形，掌状深裂，裂片5-9个，通常7裂，裂片卵状长圆形或披针性，顶端锐尖或长锐尖，边缘有不整齐的重锯齿，嫩叶密生柔毛。叶片在春天先红后绿，到秋季变成红色。伞房花序顶生，发叶后开花，花紫红色。翅果初为紫红色，成熟后为棕黄色，小坚果球形，直径7毫米，脉纹显著；翅与小坚果共长2-2.5厘米，宽1厘米，张开成钝角。花期5月，果期9月。
鸡爪槭喜温暖、湿润气候及半阴环境，不耐涝，较耐旱，在阳光直射处孤植夏季易遭日灼之害；适生于肥沃、湿润而排水良好之土壤，耐寒性不强，酸性、中性及石灰质土均能适应，是近年来竞相培育的优良观赏树种。
鸡爪槭具有极高的观赏价值，对城市景观的表现具有相当重要的作用，高速公路绿化带、公园、广场、小区绿地等地方随处可见到其优美的身姿。我国著名的苏州古典园林中的留园西部假山周围遍植鸡爪槭，春夏绿叶如盖，秋季红叶似火，与山水、亭台构成一副绝妙的美景；南京的植物园红枫园极具特色，树体高大，气势非凡的鸡爪槭是其主体树种。鸡爪槭不仅能给城市绿化增加了绿量，而且能给城市风景增添绚丽多姿的色彩，极大地丰富城市景观，使城市景观充满活力与生机；同时，该植物具有较高的药用价值，其枝条、叶片可熬制成药，具有行气止痛，去毒消肿等功效。因此栽鸡爪槭具有很高的园林观赏价值和良好的经济效益。
鸡爪槭常规的繁殖方法主要为种子繁殖、嫁接繁殖和扦插繁殖。种子繁殖无法达到扩繁的效果，嫁接繁殖又受季节环境限制 ，由于鸡爪槭属于难生根的树种，扦插繁殖成活率低。                                           
发明内容
本发明的目的即在于克服现有技术的不足，提供一种获得鸡爪槭无菌苗的方法，本发明采用组培繁殖的手段获得大量种苗，为嫁接提供材料，为园区等提供种苗，为建立鸡爪槭组培快繁体系提供了基础材料。
  本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种获得鸡爪槭无菌苗的方法，它包括以下步骤：
S1. 切取外植体：待实生苗第一片真叶展开后，剪取不包括子叶的根上部分，于流水中冲洗5～10min后，吸干水分；
S2. 灭菌：将冲洗后的外植体放入超净工作台，用浓度为70～75%的酒精消毒8～15s，用无菌水冲洗4～6次，再放入浓度为0.1～0.2%的升汞中灭菌3～8min，用无菌水冲洗4～6次，置于无菌纸上晾干；
S3. 生根培养：将灭菌后的外植体接种于生根培养基中，在光照、恒温条件下培养，培养2～3周后，开始生根，4～5周后，生根数达3～5，其根上部分长势旺盛，获得长势旺盛的鸡爪槭无菌苗；其中生根培养基为1/2MS+IAA 0.05mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，培养基的pH值为5～7；光照强度为2800～3200LX，光照时间为13～18h，恒温培养温度为22～26℃。
 本发明的有益效果是：本发明可以在一年四季在室内培养鸡爪槭无菌苗而广泛提供种苗，为嫁接提供材料，为园区等提供种苗；本发明是在无菌环境下获得鸡爪槭无菌苗，可直接用于后续的原生质体分离和组织培养，能够满足实验室中要求的无菌组织培养、原生质体制备和遗传转化等实验；该方法具有简便易行、程序简单、工效高、成本低的特性。  
附图说明
图1为鸡爪槭实生苗示意图；
图2为鸡爪槭外植体示意图；
图3为生根培养后的鸡爪槭无菌苗示意图；
图4为生根培养后的鸡爪槭无菌苗根系示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所述。
实施例1：一种获得鸡爪槭无菌苗的方法，它包括以下步骤：
S1. 切取外植体：待实生苗第一片真叶展开后，剪取不包括子叶的根上部分，于流水中冲洗5min后，吸干水分；
S2. 灭菌：将冲洗后的外植体放入超净工作台，用浓度为70%的酒精消毒8s，用无菌水冲洗4次，再放入浓度为0.1%的升汞中灭菌3min，用无菌水冲洗4次，置于无菌纸上晾干；
S3. 生根培养：将灭菌后的外植体接种于生根培养基中，在光照、恒温条件下培养，培养2周后，开始生根，4周后，生根数达3，其根上部分长势旺盛，获得长势旺盛的鸡爪槭无菌苗；其中生根培养基为1/2MS+IAA 0.05mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，培养基的pH值为5；光照强度为2800LX，光照时间为13h，恒温培养温度为22℃。
实施例2：一种获得鸡爪槭无菌苗的方法，它包括以下步骤：
S1. 切取外植体：待实生苗第一片真叶展开后，剪取不包括子叶的根上部分，于流水中冲洗10min后，吸干水分；
S2. 灭菌：将冲洗后的外植体放入超净工作台，用浓度为75%的酒精消毒15s，用无菌水冲洗6次，再放入浓度为0.2%的升汞中灭菌8min，用无菌水冲洗6次，置于无菌纸上晾干；
S3. 生根培养：将灭菌后的外植体接种于生根培养基中，在光照、恒温条件下培养，培养3周后，开始生根，5周后，生根数达5，其根上部分长势旺盛，获得长势旺盛的鸡爪槭无菌苗；其中生根培养基为1/2MS+IAA 0.05mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，培养基的pH值为7；光照强度为3200LX，光照时间为18h，恒温培养温度为26℃。
实施例3：一种获得鸡爪槭无菌苗的方法，它包括以下步骤：
S1. 切取外植体：待实生苗第一片真叶展开后，剪取不包括子叶的根上部分，于流水中冲洗8min后，吸干水分；
S2. 灭菌：将冲洗后的外植体放入超净工作台，用浓度为73%的酒精消毒10s，用无菌水冲洗5次，再放入浓度为0.15%的升汞中灭菌5min，用无菌水冲洗5次，置于无菌纸上晾干；
S3. 生根培养：将灭菌后的外植体接种于生根培养基中，在光照、恒温条件下培养，培养1.5周后，开始生根，4.5周后，生根数达4，其根上部分长势旺盛，获得长势旺盛的鸡爪槭无菌苗；其中生根培养基为1/2MS+IAA 0.05mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，培养基的pH值为6；光照强度为3000LX，光照时间为15h，恒温培养温度为23℃。
实施例4：一种获得鸡爪槭无菌苗的方法，它包括以下步骤：
S1. 切取外植体：待实生苗第一片真叶展开后，剪取不包括子叶的根上部分，于流水中冲洗10min后，吸干水分；
S2. 灭菌：将冲洗后的外植体放入超净工作台，用浓度为75%的酒精消毒13s，用无菌水冲洗5次，再放入浓度为0.2%的升汞中灭菌3min，用无菌水冲洗6次，置于无菌纸上晾干；
S3. 生根培养：将灭菌后的外植体接种于生根培养基中，在光照、恒温条件下培养，培养3周后，开始生根，5周后，生根数达5，其根上部分长势旺盛，获得长势旺盛的鸡爪槭无菌苗；其中生根培养基为1/2MS+IAA 0.05mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，培养基的pH值为6；光照强度为3200LX，光照时间为13h，恒温培养温度为24℃。 

Claims (3)

1.一种获得鸡爪槭无菌苗的方法，其特征在于，它包括以下步骤：
S1. 切取外植体：待实生苗第一片真叶展开后，剪取不包括子叶的根上部分，于流水中冲洗5～10min后，吸干水分；
S2. 灭菌：将冲洗后的外植体放入超净工作台，用浓度为70～75%的酒精消毒8～15s，用无菌水冲洗4～6次，再放入浓度为0.1～0.2%的升汞中灭菌3～8min，用无菌水冲洗4～6次，置于无菌纸上晾干；
S3. 生根培养：将灭菌后的外植体接种于生根培养基中，在光照、恒温条件下培养，培养2～3周后，开始生根，4～5周后，生根数达3～5，其根上部分长势旺盛，获得长势旺盛的鸡爪槭无菌苗。
2.根据权利要求1所述的一种获得鸡爪槭无菌苗的方法，其特征在于，所述步骤S3中生根培养基为1/2MS+IAA 0.05mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，培养基的pH值为5～7。
3.根据权利要求1所述的一种获得鸡爪槭无菌苗的方法，其特征在于，所述步骤S3中光照强度为2800～3200LX，光照时间为13～18h，恒温培养温度为22～26℃。
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