CN103548676A - 一种红花槭的组培快繁方法 - Google Patents

一种红花槭的组培快繁方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种‘卓越’红花槭的组培快繁方法，是由无菌苗的获得，丛生芽诱导，生根培养和炼苗步骤组成。本发明方法明显简化了组培步骤，省略了常规方法中的初代培养和壮苗培养步骤，提高了繁殖效率，‘卓越’红花槭繁殖效率可达到8.0，生根率达到100%，炼苗成活率75%。本发明利用改良培养基解决了‘卓越’红花槭快繁难题，为‘卓越’红花槭工厂化育苗或规模化生产及推广奠定了良好基础。

Description

一种红花槭的组培快繁方法
技术领域
本发明涉及一种组培方法，尤其涉及一种‘卓越’红花槭的组培快繁方法，属植物组织培养技术领域。 
背景技术
北美红花槭（Acer rubrum L.），槭树科槭属，又名美国红枫，原产北美洲，是美国三大彩叶树种之一，其干形优美，叶色鲜艳，是世界著名的观赏树种，广泛应用于风景林、公园、小区、街道等的绿化、美化。因其应用范围广、适应性强，在我国也被大量引种。‘卓越’红花槭（A.rubrum‘Somerset’）是从北美红花槭中选育出来的优良品种之一，山东省林木种质资源中心于2007年从美国引进，经过6年的试种发现：卓越’红花槭确实具有叶色鲜艳、红叶期长、适应性强，观赏价值高的特点，但其扦插成活率低，大量繁殖较为困难，致使推广应用受很大影响。 
目前公开的北美红花槭的组织培养中，MS、1/2MS培养基较为常用，激素以6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）为主，辅以吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、噻苯隆（TDZ）等，愈伤组织诱导率可达81.48%（宗树斌等，2006），增殖系数可达6.8，生根率70%（曹受金等，2010）。徐榕（2010）针对北美红花槭中的两个优良品种‘秋天火焰’（Acer×freemanii‘Autumn’）和‘冷峻’（Acer×freemanii‘Marmo’）进行了组培快繁的研究，是以MS为基本培养基，添加适量的噻苯隆（TDZ），结果两品种的增殖系数都达到3.0以上，其最佳生根培养基为MS+0.1-0.2mg/L NAA+0.5-0.6mg/L活性炭（AC）。但申请人在对针对‘卓越’红花槭的检索中未见有关‘卓越’红花槭组培快繁方法的报道。 
发明内容
针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种‘卓越’红花槭的组培快繁方法。 
本发明所述‘卓越’红花槭的组培快繁方法，其特征在于：所述方法由无菌苗的获得，丛生芽诱导，生根培养和炼苗步骤组成。 
其中：所述无菌苗获得的方法是：剪取‘卓越’红花槭植株1-2年生枝条，去尘，放入清水中培养，1-2天换水一次，培养至抽出嫩芽；取生长健壮的嫩芽，流水冲洗2-3h，在超净台上用75%酒精处理30-40s，无菌水漂洗3-4次，再用质量比为1%NaClO处理5-10min，之后无菌水漂洗3-4次，并用无菌滤纸吸去多余水分，得到无菌苗。 
其中：所述丛生芽诱导的方法是：在无菌条件下将获得的无菌苗接种于快繁培养基上，在25±2℃，光照14～16h，光强3000lx条件下培养20～30天，获得丛生芽；其中所述快繁培养基的组成为：DKW培养基+TDZ0.01～0.03mg/L+6-BA0.015～0.025mg/L+AC0.4～0.8g/L+蔗糖20～30g/L+琼脂5.5g/L，pH值为5.8～6.0；其中DKW培养基组分为：硝酸铵1416.0mg/L，硼酸4.8mg/L，无水氯 化钙112.5mg/L，硝酸钙1367.0mg/L，五水硫酸铜0.25mg/L，乙二胺四乙酸二钠45.4mg/L，七水硫酸铁33.8mg/L，硫酸镁361.49mg/L，一水硫酸锰33.5mg/L，钼酸钠0.39mg/L，六水硫酸镍0.005mg/L，磷酸二氢钾265.0mg/L，硫酸钾1559.0mg/L，六水硝酸锌17.0mg/L，盐酸硫胺素5.22mg/L。 
其中：所述快繁培养基的优选组成为：DKW培养基+TDZ 0.02mg/L+6-BA 0.020mg/L+AC0.7g/L+蔗糖25g/L+琼脂5.5g/L。 
其中：所述生根培养的方法是：在无菌条件下将获得的丛生芽分成单株，切去基部培养基，直接接种到生根培养基上，在25±2℃，光照14～16h，光强3000lx条件下培养20～30天，得到生根组培苗；其中所述生根培养基的组成为DKW培养基+IBA 0.05～0.15mg/L+NAA0.1～0.25mg/L+AC 0.4～0.6g/L+蔗糖10～15g/L+琼脂5.5g/L，pH值为5.8～6.0；其中DKW培养基组分为：硝酸铵1416.0mg/L，硼酸4.8mg/L，无水氯化钙112.5mg/L，硝酸钙1367.0mg/L，五水硫酸铜0.25mg/L，乙二胺四乙酸二钠45.4mg/L，七水硫酸铁33.8mg/L，硫酸镁361.49mg/L，一水硫酸锰33.5mg/L，钼酸钠0.39mg/L，六水硫酸镍0.005mg/L，磷酸二氢钾265.0mg/L，硫酸钾1559.0mg/L，六水硝酸锌17.0mg/L，盐酸硫胺素5.22mg/L。 
其中：所述生根培养基的优选组成为：DKW培养基+IBA 0.10mg/L+NAA 0.15mg/L+AC 0.4g/L+蔗糖13g/L+琼脂5.5g/L。 
其中：所述炼苗的方法是：将获得的生根组培苗移至炼苗室，室内温度20～25℃，湿度40%以上，闭瓶炼苗5±1天，开瓶盖炼苗2-3天，取出小苗，洗净培养基后，移栽至珍珠岩:蛭石:草炭=1:1:1的基质中，在温室内继续炼苗30-40天，待根系发育正常，苗株生长健壮后移栽至大田。 
本发明公开的‘卓越’红花槭组培快繁方法是将外植体直接接种到快繁培养基上获得丛生芽，并将丛生芽分成单株后直接接种到生根培养基上，步骤中没有初代培养，得到无菌苗直接进行快繁，快繁后直接生根，没有壮苗步骤，明显简化了组培步骤，省略了常规方法中的初代培养和壮苗培养步骤，提高了繁殖效率，经检索在目前公开的能找到的快繁方法的文献中，本发明的快繁效率是最高的，即‘卓越’红花槭繁殖效率可达到8.0，生根率达到100%，炼苗成活率75%。 
本发明建立了针对‘卓越’红花槭的组培快繁体系，利用改良培养基即在DKW培养基基础上添加不同浓度的和不同种类的激素提高繁殖效率，解决了‘卓越’红花槭快繁难题，并且本发明方法较常规步骤简单、繁殖效率高，为‘卓越’红花槭工厂化育苗或规模化生产及推广奠定了良好基础。 
附图说明
图1：本发明所述‘卓越’红花槭组培及炼苗情况 
其中：a：芽分化b：芽增殖c：生根情况d：炼苗e：移栽至大田。 
具体实施方式
实施例1 
剪取6年生‘卓越’红花槭植株1-2年生枝条，洗去枝条上附着的灰尘，放入清水中培养，1-2天换水一次，培养至抽出嫩芽。取生长健壮的嫩芽，流水冲洗2h，在超净台上用75%酒精处理30s，无菌水漂洗3次，再用1%NaClO处理5～10min，无菌水漂洗3次，无菌滤纸吸去多余水分，接种于快繁培养基上。在25（±2）℃，光照14～16h，光强3000lx条件下培养。8-10天后芽开始分化，30天后丛生芽生长稳定，平均出芽个数8.3个。 
其中，所述快繁培养基的组成为：DKW培养基+TDZ 0.02mg/L+6-BA0.020mg/L+AC 0.7g/L+蔗糖25g/L+琼脂5.5g/L。 
在无菌条件下将丛生芽分成单株，切去基部培养基，接种于生根培养基上，在25（±2）℃，光照14～16h，光强3000lx条件下培养20～30天可生根，生根率100%。 
其中，所述生根培养基的组成为DKW培养基+IBA 0.10mg/L+NAA 0.15mg/L+AC 0.4g/L+蔗糖13g/L+琼脂5.5g/L。 
将生根组培苗移至炼苗室，室内温度20～25℃，湿度40%以上，闭瓶炼苗5天，开瓶盖炼苗2天，开瓶后瓶内湿度不低于60%，如培养基过干可向瓶内喷水。开瓶炼苗结束后，用镊子取出组培苗，洗净培养基，移栽至珍珠岩：蛭石：草炭=1:1:1的基质中，在温室内继续炼苗30～40天。基质和育苗容器预先用0.125%高锰酸钾消毒，炼苗期间温室内湿度保持在40%～80%，温度15-35℃。根系发育正常，苗株生长健壮后移栽至大田，成活率75%。 
上述DKW培养基组分为：硝酸铵1416.0mg/L，硼酸4.8mg/L，无水氯化钙112.5mg/L，硝酸钙1367.0mg/L，五水硫酸铜0.25mg/L，乙二胺四乙酸二钠45.4mg/L，七水硫酸铁33.8mg/L，硫酸镁361.49mg/L，一水硫酸锰33.5mg/L，钼酸钠0.39mg/L，六水硫酸镍0.005mg/L，磷酸二氢钾265.0mg/L，硫酸钾1559.0mg/L，六水硝酸锌17.0mg/L，盐酸硫胺素5.22mg/L。 
实施例2 
方法及步骤同实施例1，不同的是：所述快繁培养基的组成为：DKW培养基+TDZ0.01mg/L+6-BA0.015mg/L+AC0.4g/L+蔗糖20g/L+琼脂5.5g/L。所述生根培养基的组成为DKW培养基+IBA 0.05mg/L+NAA0.25mg/L+AC0.4g/L+蔗糖10g/L+琼脂5.5g/L。 
实施例3 
方法及步骤同实施例1，不同的是：所述快繁培养基的组成为：DKW培养基+TDZ0.03mg/L+6-BA0.025mg/L+AC0.8g/L+蔗糖30g/L+琼脂5.5g/L。所述生根培养基的组成为DKW培养基+IBA0.15mg/L+NAA0.25mg/L+AC0.6g/L+蔗糖15g/L+琼脂5.5g/L。 

Claims (6)

1.一种‘卓越’红花槭的组培快繁方法，其特征在于：所述方法由无菌苗的获得，丛生芽诱导，生根培养和炼苗步骤组成。
2.如权利要求1所述‘卓越’红花槭的组培快繁方法，其特征在于：所述无菌苗获得的方法是：剪取‘卓越’红花槭植株1-2年生枝条，去尘，放入清水中培养，1-2天换水一次，培养至抽出嫩芽；取生长健壮的嫩芽，流水冲洗2-3h，在超净台上用75%酒精处理30-40s，无菌水漂洗3-4次，再用质量比为1%NaClO处理5-10min，之后无菌水漂洗3-4次，并用无菌滤纸吸去多余水分，得到无菌苗。
3.如权利要求1所述‘卓越’红花槭的组培快繁方法，其特征在于：所述丛生芽诱导的方法是：在无菌条件下将获得的无菌苗接种于快繁培养基上，在25±2℃，光照14～16h，光强3000lx条件下培养20～30天，获得丛生芽；其中所述快繁培养基的组成为：DKW培养基+TDZ0.01～0.03mg/L+6-BA0.015～0.025mg/L+AC0.4～0.8g/L+蔗糖20～30g/L+琼脂5.5g/L，pH值为5.8～6.0；其中DKW培养基组分为：硝酸铵1416.0mg/L，硼酸4.8mg/L，无水氯化钙112.5mg/L，硝酸钙1367.0mg/L，五水硫酸铜0.25mg/L，乙二胺四乙酸二钠45.4mg/L，七水硫酸铁33.8mg/L，硫酸镁361.49mg/L，一水硫酸锰33.5mg/L，钼酸钠0.39mg/L，六水硫酸镍0.005mg/L，磷酸二氢钾265.0mg/L，硫酸钾1559.0mg/L，六水硝酸锌17.0mg/L，盐酸硫胺素5.22mg/L。
4.如权利要求3所述‘卓越’红花槭的组培快繁方法，其特征在于：所述快繁培养基的组成为：DKW培养基+TDZ 0.02mg/L+6-BA 0.02mg/L+AC 0.7g/L+蔗糖25g/L+琼脂5.5g/L。
5.如权利要求1所述‘卓越’红花槭的组培快繁方法，其特征在于：所述生根培养的方法是：在无菌条件下将获得的丛生芽分成单株，切去基部培养基，直接接种到生根培养基上，在25±2℃，光照14～16h，光强3000lx条件下培养20～30天，得到生根组培苗；其中所述生根培养基的组成为DKW培养基+IBA 0.05～0.15mg/L+NAA0.1～0.25mg/L+AC0.4～0.6g/L+蔗糖10～15g/L+琼脂5.5g/L，pH值为5.8～6.0；其中DKW培养基组分为：硝酸铵1416.0mg/L，硼酸4.8mg/L，无水氯化钙112.5mg/L，硝酸钙1367.0mg/L，五水硫酸铜0.25mg/L，乙二胺四乙酸二钠45.4mg/L，七水硫酸铁33.8mg/L，硫酸镁361.49mg/L，一水硫酸锰33.5mg/L，钼酸钠0.39mg/L，六水硫酸镍0.005mg/L，磷酸二氢钾265.0mg/L，硫酸钾1559.0mg/L，六水硝酸锌17.0mg/L，盐酸硫胺素5.22mg/L。
6.如权利要求5所述‘卓越’红花槭的组培快繁方法，其特征在于：所述生根培养基的组成为：DKW培养基+IBA 0.10mg/L+NAA 0.15mg/L+AC 0.4g/L+蔗糖13g/L+琼脂5.5g/L。
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