CN102172224A

CN102172224A - 红花萱草组培配方及其培养方法

Info

Publication number: CN102172224A
Application number: CN 201110072438
Authority: CN
Inventors: 卢宝伟; 孟庆敏; 安凤霞; 王洪军; 郑宝仁; 唐翠; 景向欣; 徐国柱; 黄石竹; 李伟; 苏小霞
Original assignee: HEILONGJIANG VOCATIONAL INSTITUTE OF ECOLOGICAL ENGINEERING
Current assignee: HEILONGJIANG VOCATIONAL INSTITUTE OF ECOLOGICAL ENGINEERING
Priority date: 2011-03-24
Filing date: 2011-03-24
Publication date: 2011-09-07

Abstract

本发明提供了一种红花萱草组培配方及其培养方法，通过消毒外植体，得到无菌系，继而利用不同种类和不同浓度的外源激素的配比，对组培苗进行继代增殖、生长及生根进行筛选、调控，最后确定最佳的外植体与培养基配方，使其能应用于工厂化生产。本发明的组培配方可以将红花萱草“红宝石”大量扩繁，可以快速大量的繁殖组培苗，以适应园林绿化需要。本发明方法在消毒时间和效果、操作方法和再生效率、生产成本等方面都明显优于以往的几个黄色花系萱草品种的组培快繁，所建立的规模化商品生产体系稳定、周期较短，能够满足规模化快繁生产。

Description

红花萱草组培配方及其培养方法

(一)技术领域

本发明涉及植物培养技术领域，具体涉及一种红花萱草组培技术。

(二)背景技术

萱草为百合科多年生草本宿根花卉，原产我国、日本及欧洲南部。色彩华丽，广泛用于城市绿化和园林景观建设。除蓝色和纯白色以外其余花色均有栽培品种。花径变化大，花期从晚春一直到秋季，大多数品种花期几周甚至几个月。一般采用分株、茎芽扦插等无性繁殖方式进行增殖，由于其速度慢，一般1株萱草每年仅可繁殖4～5株，因而难以适应市场商品化生产的需求。红花萱草的叶狭长，花呈喇叭形，花茎短而适中，花形各异。具有观赏价值高、适应性强、栽培管理粗放等特点。近年来市场对红花萱草种苗的需求量越来越大，特别是红花萱草的优良品种。因此，找到红花萱草快速繁殖的技术和方法，加速红花萱草的推广应用也就显得至关重要。

萱草繁殖方式常采用种子繁殖，也可用分株和扦插繁殖，但是，利用传统方式繁殖，其株型一致性较差，植株变异性较大，优良性状无法保持，因此，研究萱草离体快繁技术，进一步提高萱草的观赏应用价值及其对北方环境条件的不断适应性，使其在园林绿化中能够得到更广泛的应用，具有重要的理论和现实意义。

(三)发明内容

本发明的目的在于提供一种可以快速大量的繁殖组培苗，能应用于工厂化生产的红花萱草组培配方。

本发明的目的是这样实现的：它包括：

最佳外植体：花托；

消毒时间：0.1％(质量百分比)升汞10min

芽诱导培养基：MS+6-BA 1.0mg·L^-1+KT 1.0mg·L^-1

继代增值培养基：MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1

生根培养基：1/2MS+NAA 0.2mg·L^-1

上述培养基均添加3％(质量百分比)蔗糖和0.8％(质量百分比)琼脂，pH值5.8

培养温度为25℃，光照时间为12h·d^-1，光照强度约25～30μmol·m^-2·s^-1

移栽：蛭石∶黑土∶细沙＝1∶2∶1

本发明的红花萱草组培配方还包括这样一些技术特征：

1、所述的MS培养基为：

工作液浓度为单位mg/L，其中包含：

大量元素：NH₄NO₃ 1650、KNO₃ 1900、CaCl₂·2H₂O 440、MgSO₄·7H₂O 370、KH₂PO₄ 170；

微量元素：KI 0.83、H₃BO₃ 6.2、MnSO₄·4H₂O 22.3、ZnSO₄·7H₂O 8.6、Na₂MnO₄·2H₂O0.25、CuSO₄·5H₂O 0.025、CoCl₂·6H₂O 0.025；

铁盐：FeSO₄·7H₂O 27.8、Na₂-EDTA·2H₂O 37.3；

有机物质：肌醇100、烟酸0.5、盐酸吡哆醇(维生素B6)0.5、盐酸硫胺素(维生素B1)0.1、甘氨酸2.0；

2、所述的NAA为萘乙酸；

3、所述的6-BA为6-苄基嘌呤；

4、所述的KT为激动素。

本发明采用组织培养的方法，利用不同种类和不同浓度的激素配比，将红花萱草进行快速扩繁，从而得到于红花萱草“红宝石”快速繁殖的最佳组培配方。

本发明的另一目的在于提供一种红花萱草组培的培养方法，它包括以下几个步骤：

首先，播种红花萱草‘红宝石’的种子，得到播种苗，采集健壮的无病虫害的花、茎节、块茎、花托组织器官，作为组织培养的外植体，将采集到的外植体先混合洗衣粉在流水下冲洗30min，在超净工作台上用75％的酒精消毒10-30s，再用无菌水冲洗3-5遍，之后用0.1％升汞消毒2-20min；

第二，将消毒后的外植体接种到芽诱导培养基上，送入培养室进行无菌培养，培养基为MS+6-BA 1.0mg·L^-1+KT 1.0mg·L^-1。，将分化后的外植体继代到继代增殖培养基上进行继代培养，得到分化苗，继代培养基为MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1；

第三，将分化苗接种到生根培养基上进行生根培养，生根培养基为1/2MS+NAA 0.2mg·L^-1；

第四，炼苗，把生根后的组培苗在炼苗室中开盖锻炼3-5d，然后移栽到蛭石∶黑土∶细沙＝1∶2∶1的基质中，得到成品。

本发明采用组织培养的方法，通过消毒外植体，得到无菌系，继而利用不同种类和不同浓度的外源激素的配比，对组培苗进行继代增殖、生长及生根进行筛选、调控，最后确定最佳的外植体与培养基配方，使其能应用于工厂化生产。创新点在于本发明的组培配方是将红花萱草“红宝石”大量扩繁的最佳组合，可以快速大量的繁殖组培苗，以适应园林绿化需要，而且一直未见其他团队有相关相似报道，尚属国内首例。

本发明对红花萱草‘红宝石’品种的花、茎节、块茎等外植体进行了系列组培快繁研究，取得了较好的结果，但以花托为外植体进行组培快繁，效果更优于花茎节和块茎，且取花托不影响母本植株正常生长。本发明方法在消毒时间和效果、操作方法和再生效率、生产成本等方面都明显优于以往的几个黄色花系萱草品种的组培快繁，所建立的规模化商品生产体系稳定、周期较短(大约2个月左右)，能够满足规模化快繁生产。本发明主要应用于红花萱草“红宝石”的快速扩繁，使其应用于实际生产中。弥补了红花萱草快速、工厂化繁殖的空白。

(四)附图说明

图1为本发明培养方法的流程示意图。

(五)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明：

结合图1，首先，播种红花萱草‘红宝石’的种子，得到一定量的播种苗，本实施例中得到的播种苗量约为500株，采集健壮的无病虫害的花、茎节、块茎、花托等组织器官，作为组织培养的外植体。将采集到的外植体先混合洗衣粉在流水下冲洗30min，其中混合与外植体质量相等的洗衣粉，在超净工作台上用75％的酒精消毒10-30s，再用无菌水冲洗3-5遍，之后用0.1％升汞消毒2-20min，筛选出最佳的外植体消毒方法：0.1％(质量百分比)升汞10min。

第二，将消毒后的外植体接种到准备好的芽诱导培养基上，送入培养室进行无菌培养，培养室的培养温度为25℃，光照时间为12h·d^-1，光照强度约25～30μmol·m^-2·s^-1。在这一过程中，根据不同培养基上各外植体分化情况的不同筛选出芽诱导得较好的外植体种类和培养基类型。效果最好的外植体为花托，培养基为MS+6-BA 1.0mg·L^-1+KT 1.0mg·L^-1。将分化得较好的外植体继代到继代增殖培养基上(有3个以上明显的分化芽)，经过3～4轮的继代培养，得到2～3倍数量的分化苗。效果最好的继代培养基为MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1。

第三，将生长得健壮的分化苗接种到生根培养基上，进行生根培养。在这一过程中，筛选出生根较好的培养基。生根培养基为1/2MS+NAA 0.2mg·L^-1。(1/2MS培养基是MS培养基的大量元素减半)。

做完生根培养的分化苗下一步就要经过炼苗，然后移栽，从而真正的进入园林绿化中。

炼苗，一般要把生根较好的组培苗在炼苗室中开盖锻炼3-5d，然后移栽到蛭石∶黑土∶细沙＝1∶2∶1的基质中，移栽成活率在95％左右。

本实施例实施过程中，对大量的培养基配方进行比对，得到以下组分：

最佳外植体：花托

消毒时间：0.1％(质量百分比)升汞10min

芽诱导培养基：MS+6-BA 1.0mg·L^-1+KT 1.0mg·L^-1

继代增值培养基：MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1

生根培养基：1/2MS+NAA 0.2mg·L^-1

上述培养基均添加3％(质量百分比)蔗糖和0.8％(质量百分比)琼脂，pH值5.8培养温度为25℃，光照时间为12h·d^-1，光照强度约25～30μmol·m^-2·s^-1移栽：蛭石∶黑土∶细沙＝1∶2∶1

其中：

1、MS培养基配方单

工作液浓度单位mg/L

大量元素：NH₄NO₃ 1650 KNO₃ 1900 CaCl₂·2H₂O 440 MgSO₄·7H₂O 370 KH₂PO₄ 170

微量元素：KI 0.83 H₃BO₃ 6.2 MnSO₄·4H₂O 22.3 ZnSO₄·7H₂O 8.6 Na₂MnO₄·2H2O 0.25CuSO₄·5H₂O 0.025 CoCl₂·6H₂O 0.025

铁盐：FeSO₄·7H₂O(27.8)Na₂-EDTA·2H₂O(37.3)

有机物质：肌醇100烟酸0.5盐酸吡哆醇(维生素B6)0.5盐酸硫胺素(维生素B1)0.1甘氨酸2.0

2、NAA为萘乙酸

3、6-BA为6-苄基嘌呤

4、KT为激动素。

Claims

1.一种红花萱草组培配方，其特征在于：它包括：

芽诱导培养基：MS+6-BA 1.0mg·L^-1+KT 1.0mg·L^-1

继代增值培养基：MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1

生根培养基：1/2MS+NAA 0.2mg·L^-1

上述培养基均添加3％质量百分比的蔗糖和0.8％质量百分比的琼脂，pH值5.8。

2.根据权利要求1所述的红花萱草组培配方，其特征在于所述的MS培养基为：

工作液浓度单位为mg/L，其中包含：

微量元素：KI 0.83、H₃BO₃ 6.2、MnSO₄·4H₂O 22.3、ZnSO₄·7H₂O 8.6、Na₂MnO₄·2H₂O 0.25、CuSO₄·5H₂O 0.025、CoCl₂·6H₂O 0.025；

铁盐：FeSO₄·7H₂O 27.8、Na₂-EDTA·2H₂O 37.3；

有机物质：肌醇100、烟酸0.5、盐酸吡哆醇0.5、盐酸硫胺素0.1、甘氨酸2.0。

3.根据权利要求2所述的红花萱草组培配方，其特征在于所述的NAA为萘乙酸。

4.根据权利要求3所述的红花萱草组培配方，其特征在于所述的6-BA为6-苄基嘌呤。

5.根据权利要求4所述的红花萱草组培配方，其特征在于所述的KT为激动素。

6.一种根据权利要求1所述的红花萱草组培方法，其特征在于它包括以下几个步骤：

7.根据权利要求6所述的红花萱草组培方法，其特征在于所述的外植体优选为花托。

8.根据权利要求7所述的红花萱草组培方法，其特征在于所述的外植体消毒方法优选0.1％质量百分比的升汞10min。

9.根据权利要求8所述的红花萱草组培方法，其特征在于所述的培养室的培养温度为25℃，光照时间为12h·d^-1，光照强度约25～30μmol·m^-2·s^-1。