CN103299896A - 一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法 - Google Patents
一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103299896A CN103299896A CN2013101533969A CN201310153396A CN103299896A CN 103299896 A CN103299896 A CN 103299896A CN 2013101533969 A CN2013101533969 A CN 2013101533969A CN 201310153396 A CN201310153396 A CN 201310153396A CN 103299896 A CN103299896 A CN 103299896A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- chinese cabbage
- bolting
- spring
- microspore
- isolated microspore
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 235000000536 Brassica rapa subsp pekinensis Nutrition 0.000 title claims abstract description 103
- 241000499436 Brassica rapa subsp. pekinensis Species 0.000 title claims abstract description 103
- 235000010149 Brassica rapa subsp chinensis Nutrition 0.000 title claims abstract description 102
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 238000012258 culturing Methods 0.000 title abstract description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 72
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 45
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 claims abstract description 6
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 26
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 26
- 235000007516 Chrysanthemum Nutrition 0.000 claims description 13
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 6
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 3
- 244000189548 Chrysanthemum x morifolium Species 0.000 claims 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 17
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 17
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 abstract description 7
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000009331 sowing Methods 0.000 abstract description 2
- 108700001094 Plant Genes Proteins 0.000 abstract 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 abstract 1
- 241000723353 Chrysanthemum Species 0.000 description 12
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 230000010152 pollination Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 2
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 241000219198 Brassica Species 0.000 description 1
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 1
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 1
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 1
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 235000011292 Brassica rapa Nutrition 0.000 description 1
- 240000008100 Brassica rapa Species 0.000 description 1
- 241000195940 Bryophyta Species 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000005200 bud stage Effects 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010413 gardening Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000003020 moisturizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 238000011017 operating method Methods 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 239000003415 peat Substances 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 description 1
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开了一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法，包括以下步骤：（1）取易于进行游离小孢子培养的高代自交系材料，与待培养小孢子的耐抽苔春白菜材料进行杂交，得杂交种子；（2）将杂交种子播种于营养钵，温室大棚自然春化，第二年3月底至4月下旬，抽苔开花期，取花蕾按常规方法进行游离小孢子培养，得再生植株。本发明采用简单的杂交方法，将市售不同背景的春白菜与易于进行游离小孢子培养的自交系材料进行杂交，有效改善了供体植株基因型状态，显著拓宽了耐抽苔春白菜游离小孢子培养的供体植株选择范围，有利于提高不同背景春白菜双单倍体材料的获得几率，极大地提高了春白菜育种效率。
Description
技术领域
本发明涉及一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法，属于细胞工程育种领域。
背景技术
对育种家而言，快速纯化育种材料是提高育种效率的主要手段。常规纯化材料的方法是连续自交，往往需要6～8代才能培育出可用作杂交育种的亲本材料，这往往需要6～8年的时间。通过游离小孢子培养只须1～2年就可以得到多种基因型的纯合体，因此，游离小孢子培养是创造稳定变异材料的理想方法，能明显缩短育种进程，提高育种效率。大白菜游离小孢子培养受供体植株基因型的影响非常明显[曹鸣庆,李岩,刘凡.基因型和供体植株生长环境对大白菜游离小孢子胚胎发生的影响.华北农学报,1993,8(4):1-6；申书兴,梁会芬,张成合等.提高大白菜小孢子胚胎发生及植株获得率的几个因素研究.河北农业大学学报,1999,22(4):65～68]。一般而言，冬性弱的夏材料和秋材料游离小孢子培养容易成功，反之耐抽苔春白菜材料则不易成功。自从1989年Sato[Sato T,Nishio T,Hirai M,Plant regeneration from isolated microspore cultures of Chinese cabbage(Brassica campestris ssp.Pekinensis).Plant Cell Reports,1989,8:486-488]率先对结球大白菜进行游离小孢子培养并获得成功以来，该领域在夏、秋早熟和秋白菜的游离小孢子培养技术方面已日趋成熟[曹鸣庆,李岩,刘凡.基因型和供体植株生长环境对大白菜游离小孢子胚胎发生的影响.华北农学报,1993,8(4):1-6；栗根义,高睦枪,赵秀山.大白菜游离小孢子培养.园艺学报,1993,20(2):167-170；李岩,刘凡,曹鸣庆.通过游离小孢子培养方法获得小白菜三个变种的胚胎和植株.华北农学报,1993,8(3):92-97；曹鸣庆,李岩,蒋涛,西尾刚.大白菜和小白菜游离小孢子培养试验简报.华北农学报,1992,(02):119-120]，并成功应用于育种实践，先后育成了“豫白菜11号”等早熟白菜品种[栗根义,高睦枪,耿建峰等.春秋适应型大白菜新品种豫白菜11号的选育.河南农业科学,1999,3:24-26；耿建峰,原玉香,张晓伟等.耐热早熟大白菜豫新60及其栽培技术.河南农业科学,2003,5:43]。相比较而言，春白菜的游离小孢子培养一直没有得到技术上的突破。虽然也有少量报到，但进展十分缓慢。如2001年Ajisaka[Ajisaka H,Kuginuki Y,Yui S,Enomoto S&Hirai M.Identification and mapping of a quantitative trait locus controlling extreme late bolting in Chinese cabbage(Brassica rapa L.ssp.Pekinensis syn.campestris L.)using bulked segregant analysis.Euphytica,2001,118:75-81]等对PLNo.2×A9302的F1代进行小孢子培养获得了耐抽苔双单倍体材料DH27，但PLNo.2来源自无球叶的大白菜地方品种“Osaka Shirona Bansei”， 并不是真正的结球春白菜。我国学者近年来也对春白菜小孢子培养进行了不断尝试，主要致力于改进培养基配方并对培养条件进行优化，也取得了一定的进展，但大多只得到胚状体[周英,冯辉,王超楠,刘如娥.大白菜小孢子胚诱导及植株再生.沈阳农业大学学报,2006，37(6)：816-820；潘洪艳,冯辉.2009.春结球黄心大白菜小孢子胚诱导和植株再生.中国蔬菜,8:32-35]。总体而言，目前耐抽苔春白菜游离小孢子培养体系远未建成，其离春白菜育种实践仍有很大差距。因此亟待建立适应性好的春白菜游离小孢子培养技术体系。
发明内容
针对上述现有技术，针对春白菜游离小孢子培养方面的不足，本发明提供了一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法，可以对各种春白菜材料进行培养，大大缩短了春白菜亲本材料的纯化年限，对提高春白菜新品种培育效率意义尤为重大。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法，包括以下步骤：
（1）供体植株基因型改良：取易于进行游离小孢子培养的高代自交系材料，与待培养小孢子的耐抽苔春白菜材料进行杂交，得杂交种子；
所述易于进行游离小孢子培养的高代自交系材料为夏白菜材料94610、秋早熟材料J3或06-21-1。
所述待培养小孢子的春白菜材料为各种耐抽苔春白菜一代杂种或自交几代的春白菜材料，进一步地，为日本春白菜品种菊锦、韩国春白菜品种阳春、韩国春白菜品种三宝或韩国春白菜品种强势。
上述白菜材料均为现有技术中已公开出售的材料，均可从市场上买到，其品种名称为所属领域技术人员公知的。
（2）杂交种的游离小孢子培养：将杂交种子播种于营养钵，常规管理，温室大棚自然春化，第二年3月底至4月下旬，抽苔开花期，取花蕾按常规方法进行游离小孢子培养，得再生植株。
所述营养钵的规格为：20cm×20cm。
（3）再生植株性状调查：将获得的再生植株诱导生根后移栽至温室，自然越冬，来年根据抽苔开花时期选择晚抽苔再生植株，即为耐抽苔双单倍体植株；自交结实后进行其它性状调查即获得纯系耐抽苔材料。
本发明的广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法，有益效果如下：由于长期以春白菜为供体植株进行游离小孢子培养成功的几率较低，通过将不同背景的春白菜材料与易于进 行游离小孢子培养的自交系材料杂交，显著改善了春白菜游离小孢子培养的供体植株状态。即使通过常规培养基配方，也能显著提高杂种游离小孢子培养时再生植株的产生频率，从而在后续耐抽苔性状筛选中，大大提高耐抽苔纯系材料的获得比例，亦即提高耐抽苔春白菜的纯化效率，对缩短育种年限、提高春白菜育种效率起明显促进作用。
本发明的特点是：采用简单的杂交方法，将市售不同背景的春白菜与易于进行游离小孢子培养的自交系材料进行杂交，有效改善了供体植株基因型状态，显著拓宽了耐抽苔春白菜游离小孢子培养的供体植株选择范围，有利于提高不同背景春白菜双单倍体材料的获得几率。经证实，获得了极耐抽苔的双单倍体材料，极大地提高了春白菜育种效率。
应用前景：利用该方法，可以在三年内获得耐抽苔春白菜纯系材料，与常规自交纯化相比(一般需要6～8年即6～8代连续自交)，能显著缩短育种年限、加快育种进程、提高春白菜育种效率。
本发明的方法首先通过改进供体植株的状态、再利用大白菜游离小孢子培养的常规方法，大大拓宽了春白菜游离小孢子培养的供体植株选择范围、简化了操作步骤，通过对再生植株耐抽苔性的调查，获得了双单倍体耐抽苔春白菜材料。本发明的方法的应用将显著扩大春白菜游离小孢子培养的基因型谱，缩短春白菜材料的纯化年限，提高春白菜育种效率。
附图说明
图1：亲本菊锦的小孢子培养结果示意图，图中，亲本菊锦的小孢子在完成几次分裂之后停止发育并死亡。
图2：高频游离小孢子胚诱导材料94610的小孢子胚示意图，图中，培养皿中的漂浮物和悬浮物是转绿的小孢子胚（显绿色，但因按照审查指南相关规定，只能提交黑白颜色的视图，所以图中显示为灰色，特此说明）。
图3a：07-ZY4在液体培养基中的胚状体示意图，图3b：07-ZY4转绿的胚状体移入固体培养基示意图。
图4：再生植株09-552的抽苔示意图，图中可见，09-552的抽苔最晚，明显晚于09-555。
图5a：以09-552配制的杂交组合春季播种收获产品时的短缩径调查图，图5b为对照，对照是其亲本菊锦。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。
实施例1 不同春白菜材料与高代自交系材料杂交组合配制
1.1供试材料的选择与种植
供试材料包括四个市售的春白菜品种和四份高代自交系材料，春白菜品种分别是一份日本春白菜品种菊锦和三份(韩国春白菜品种阳春、三宝、强势，高代自交系材料分别夏白菜材料94610、秋早熟材料J3和06-21-1、春白菜材料06-101-4。
根据耐抽苔性预测，材料和品种于11月下旬至12月中旬分3批育苗，来年3月10日定植于50目的防虫网棚中，地面覆盖地膜，3月下旬起陆续开花，开花1周后人工杂交配制杂交组合。
1.2供试材料杂交组合配制及人工杂交
分别配制4个杂交组合，07-ZY4(菊锦×94610)、07-ZY32(阳春×J3)、07-ZY40-1(三宝×06-21-1)、07-ZY46-1(强势×06-101-4)，春季开花期，人工挑蕾去雄，杂交授粉，套袋使种荚授粉完成后收获种子备用。
实施例2 不同春白菜材料、高代自交系材料以及其杂交组合的游离小孢子培养
2.1各种材料的种植（见实施例1的1.1）
2.2各种培养基的准备
小孢子提取液及小孢子洗液B5W：B5液体培养基加13％蔗糖，pH5.8，高压灭菌。
小孢子热激处理培养液NLN-13：NLN液体培养基加13％蔗糖，pH5.8，0.22μm微孔滤膜过滤除菌。
小孢子暗培养的培养液NLN-10：NLN液体培养基加10％蔗糖，pH5.8，0.22μm微孔滤膜过滤除菌。
小孢子胚生长培养基B5G：B5固体培养基添加6-BA0.2mg/mL＋NAA0.02mg/mL＋3%蔗糖，pH5.8，高压灭菌。
再生植株生根培养基MS0：MS固体培养基，不添加任何激素，pH5.8，高压灭菌。
所有培养基配方详见[官春云，李栒，李文彬，芸薹属植物的生物技术，湖南科学技术出版社，2001]。
2.3小孢子的游离和培养
在晴天上午10时前后取健壮花枝，选取2.5-3.5mm的花蕾，流水冲洗30min，在超净工作台上用2%的NaClO表面消毒30min，无菌水冲洗5次备用。
加3-5mLB5W，用玻璃研棒挤出小孢子，以孔径50μm的滤网过滤，滤液转入50mL的离心管中，100g离心2min，弃上清，加入10mL相同洗液，再次离心，重复3次，之后加入一定体积的NLN-13培养液摇匀，用血球计数板调整小孢子密度至0.75-1.5×105个/mL，33℃ 黑暗热激处理24h。次日，100g离心2min，弃上清，加入等体积的NLN-10培养液摇匀，分装到直径为6cm的玻璃培养皿，3mL/皿，每个材料或品种分装10-15皿，石蜡膜封口后25℃黑暗培养。待形成2-3mm长的子叶胚时转入4000Lux、16h光照/8h黑暗的光照条件下培养，子叶胚转绿后，转入B5G固体培养基光照培养。待幼苗长大后转入MS0培养基诱导生根。两周至4周期间统计产胚量、计算产胚率和再生植株产率。结果见表1所示。
表1 游离小孢子培养结果
结果表明：
（1）4个春白菜品种菊锦、阳春、三宝、强势的游离小孢子培养中，只有菊锦和强势诱导出少量多细胞团，分别为接种小孢子总量的4.12％和0.83％。细胞团生长极为缓慢，在完成几次分裂之后停止发育并迅速死亡（见图1）。阳春和三宝仅观察到极个别小孢子略微膨大，没有发生细胞分裂；
（2）4个抗病毒高代自交系94610、J3、06-21-1和06-101-4的游离小孢子培养中，前3种材料均获得了胚状体，平均成胚率分别为94.6（小孢子胚的照片如图2所示）、65.3和21.9个/皿。而耐抽苔的06-101-4仅诱导出少量多细胞团，分别为接种小孢子总量的3.21％，同样生长极为缓慢，在完成几次分裂之后停止发育并迅速死亡；
（3）对4个转育材料07-ZY4、07-ZY32、07-ZY40-1、07-ZY46-1进行游离小孢子培养，前3种材料均获得了胚状体，平均成胚率分别为2.6（图3a）、2.1和1.2个/皿。其中07-ZY4最终获得9棵再生植株（图3b）。07-ZY32的胚状体停留在鱼类胚阶段不再发育，并最终死亡；07-ZY40-1的子叶胚转入固体培养基后褐变死亡，二者均未获得再生植株。07-ZY46-1仅诱导出少量多细胞团，占接种小孢子总量的1.13％，生长极为缓慢，在完成几次分裂之后停止发育并迅速死亡，最终没能获得再生植株。
总之，4个春白菜品种均没能获得胚状体，4个转育材料有3个获得了胚状体，另1个春白菜材料没能获得胚状体，与公开报道的趋势一致。对比4个转育材料的2个亲本不难发现，能诱导出胚状体的07-ZY4、07-ZY32和07-ZY40-1的双亲中至少有1个亲本是能够诱导出胚状体的材料，亲本之一胚状体发生频率越高（如94610），其与春白菜组合的胚状体发生频率也相对较高（如07-ZY4）；而未诱导出胚状体的07-ZY40-1的双亲都是未诱导出胚状体的耐抽苔春材料。可见，将易于进行游离小孢子培养的材料与难以成功的材料进行杂交，再对杂交后代进行游离小孢子培养，显著提高了杂种游离小孢子培养的成功几率，增加了培养结果的可预见性，在所得再生植株中可望鉴定出耐抽苔性的双单倍体株系。
实施例3 07-ZY4游离小孢子培养的再生植株耐抽苔性鉴定
3.1再生植株驯化、移栽与自交结实
再生植株生根后，洗净根部的培养基转入蛭石:草炭＝1:1的基质中保湿3-5天进行驯化，驯化完成后移栽入防虫网中正常管理，11月末移入日光温室，待开花后选花粉正常单株挑蕾自交授粉，能正常收获种子的植株即为DH再生植株。07-ZY4的9棵再生植株中有7株收获了自交种子，即7个双单倍体株系（编号从09-552至09-558）。
3.2再生植株耐抽苔性鉴定
秋季，将双单倍体株系以及对照母本菊锦、父本94610、春白菜对照阳春，播种于防虫网内。11月末，各株系选5个结球良好的母株定植在日光温室中，以初见花蕾期和开花期为主要依据，确定再生植株自交后代的耐抽苔能力。调查结果见表2。结果表明：2009年12月13日09-555最早出现花蕾，之后其他材料和品种陆续出现蕾，09-552最晚，直到2010年3月22日才出现花蕾。2010年1月24日09-555最早开花，之后其他材料陆续开花，同样地，09-552开花最晚（开花示意图见图4），直到2010年4月8日才开花。对照春白菜品种菊锦和阳春的开花时间分别为2010年4月6日和3月29日。由此可见，09-552的耐抽苔能力超过阳春，与其耐抽苔亲本菊锦相当。
这表明通过杂交、培养、鉴定三步骤，三年即可获得耐抽苔春白菜纯系材料，而一般自交纯化需要6～8年，由此可见，采用次策略显著缩短了材料的纯化年限。
表2 单倍体起源再生植株的耐抽苔性
注：1、2、3、4、5级分别对应耐抽苔、较耐抽苔、不耐抽苔、较易抽苔和易抽苔
实施例4以09-552配制的春白菜组合耐抽苔性鉴定
在鉴定其耐抽苔性的当年，以耐抽苔性较强的09-552为母本，以抗病毒自交系94610为父本，配制杂交组合，人工挑蕾自交，收获F1代种子。
来年春季播种F1，以父、母本为对照，收获产品时通过比较短缩径的长短鉴定F1的耐抽苔性。结果表明：所获得的F1代短缩径较短，比母本菊锦还要略短（见图5），属于极耐抽苔类型。鉴定为纯系的耐抽苔材料。如果当年就配制杂交组合，杂交组合再经过一年的耐抽苔性和其它性状调查，即可获得F1代的春白菜品种用于其它生产试验。由此可见，通过游离小孢子培养，显著提高了春白菜育种效率。
Claims (6)
1.一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）取易于进行游离小孢子培养的高代自交系材料，与待培养小孢子的耐抽苔春白菜材料进行杂交，得杂交种子；
（2）将杂交种子播种于营养钵，温室大棚自然春化，第二年3月底至4月下旬，抽苔开花期，取花蕾进行游离小孢子培养，得再生植株。
2.根据权利要求1所述的一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法，其特征在于：还包括以下步骤：（3）将获得的再生植株诱导生根后移栽至温室，自然越冬，来年根据抽苔开花时期选择晚抽苔再生植株，即为耐抽苔双单倍体植株；自交结实后即获得纯系耐抽苔材料。
3.根据权利要求1所述的一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法，其特征在于：所述易于进行游离小孢子培养的高代自交系材料为夏白菜材料94610、秋早熟材料J3或06-21-1。
4.根据权利要求1所述的一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法，其特征在于：所述待培养小孢子的春白菜材料为各种耐抽苔春白菜一代杂种或自交几代的春白菜材料。
5.根据权利要求1或4所述的一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法，其特征在于：所述待培养小孢子的春白菜材料为日本春白菜品种菊锦、韩国春白菜品种阳春、韩国春白菜品种三宝或韩国春白菜品种强势。
6.根据权利要求1所述的一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法，其特征在于：所述营养钵的规格为：20cm×20cm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2013101533969A CN103299896A (zh) | 2013-04-27 | 2013-04-27 | 一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2013101533969A CN103299896A (zh) | 2013-04-27 | 2013-04-27 | 一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103299896A true CN103299896A (zh) | 2013-09-18 |
Family
ID=49125964
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2013101533969A Pending CN103299896A (zh) | 2013-04-27 | 2013-04-27 | 一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103299896A (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104026004A (zh) * | 2014-06-30 | 2014-09-10 | 镇江瑞繁农艺有限公司 | 一种耐抽苔春甘蓝高效育种方法 |
| CN106258870A (zh) * | 2015-06-08 | 2017-01-04 | 浙江美之奥种业有限公司 | 一种在冬季获取青花菜小孢子材料的方法 |
| CN106718825A (zh) * | 2016-11-22 | 2017-05-31 | 安徽省农业科学院园艺研究所 | 一种乌菜游离小孢子培养方法 |
| CN111357642A (zh) * | 2020-03-19 | 2020-07-03 | 河南省农业科学院园艺研究所 | 一种大白菜的育种方法 |
| CN112493115A (zh) * | 2020-11-25 | 2021-03-16 | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 | 一种创制晚抽薹玉田包尖白菜的方法及其应用 |
| CN113899861A (zh) * | 2021-10-20 | 2022-01-07 | 河北省农林科学院经济作物研究所 | 一种适宜四倍体大白菜游离小孢子培养的花蕾筛选方法和小孢子提取方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101946700A (zh) * | 2010-08-10 | 2011-01-19 | 沈阳农业大学 | 提高大白菜与小白菜杂种小孢子胚诱导率及直接成苗率的方法 |
-
2013
- 2013-04-27 CN CN2013101533969A patent/CN103299896A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101946700A (zh) * | 2010-08-10 | 2011-01-19 | 沈阳农业大学 | 提高大白菜与小白菜杂种小孢子胚诱导率及直接成苗率的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 包美丽等: "黄心春结球白菜游离小孢子培养体系的优化", 《沈阳农业大学学报》 * |
| 潘洪艳，冯辉: "春结球黄心大白菜小孢子胚诱导和植株再生", 《中国蔬菜》 * |
| 赵智中等: "耐抽苔春白菜游离小孢子策略", 《中国园艺学会十字花科蔬菜分会第八届学术研讨会论文集》 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104026004A (zh) * | 2014-06-30 | 2014-09-10 | 镇江瑞繁农艺有限公司 | 一种耐抽苔春甘蓝高效育种方法 |
| CN104026004B (zh) * | 2014-06-30 | 2016-05-11 | 镇江瑞繁农艺有限公司 | 一种耐抽苔春甘蓝育种方法 |
| CN106258870A (zh) * | 2015-06-08 | 2017-01-04 | 浙江美之奥种业有限公司 | 一种在冬季获取青花菜小孢子材料的方法 |
| CN106258870B (zh) * | 2015-06-08 | 2019-12-31 | 浙江美之奥种业股份有限公司 | 一种在冬季获取青花菜小孢子材料的方法 |
| CN106718825A (zh) * | 2016-11-22 | 2017-05-31 | 安徽省农业科学院园艺研究所 | 一种乌菜游离小孢子培养方法 |
| CN111357642A (zh) * | 2020-03-19 | 2020-07-03 | 河南省农业科学院园艺研究所 | 一种大白菜的育种方法 |
| CN112493115A (zh) * | 2020-11-25 | 2021-03-16 | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 | 一种创制晚抽薹玉田包尖白菜的方法及其应用 |
| CN112493115B (zh) * | 2020-11-25 | 2022-05-03 | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 | 一种创制晚抽薹玉田包尖白菜的方法及其应用 |
| CN113899861A (zh) * | 2021-10-20 | 2022-01-07 | 河北省农林科学院经济作物研究所 | 一种适宜四倍体大白菜游离小孢子培养的花蕾筛选方法和小孢子提取方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101617630B (zh) | 青花菜高二倍体率小孢子再生植株的培养方法 | |
| WO2018032925A1 (zh) | 水稻小粒型不育系的育种方法及杂交水稻的轻简制种方法 | |
| CN104012208B (zh) | 一种冷等离子处理的花生育种方法 | |
| CN101803564B (zh) | 一种利用细胞质雄性不育系配制杂交甘蓝的简化育种方法 | |
| CN103299896A (zh) | 一种广适性耐抽苔春白菜游离小孢子的培养方法 | |
| CN102228005A (zh) | 半夏组织培养一步成种法 | |
| CN114041418B (zh) | 一种玉米与小麦远缘杂交产生小麦双单倍体的方法 | |
| CN102217533A (zh) | 一种制备玉米ⅱ型胚性愈伤组织的方法 | |
| CN101773072B (zh) | 一种结球甘蓝游离小孢子培养获得再生植株的方法 | |
| CN103875524B (zh) | 一种高结实率水稻的育种方法 | |
| CN104170668A (zh) | 甘蔗实生苗进行黑穗病高效接种方法 | |
| CN101124886B (zh) | 利用棉花雄性不育系和恢复系进行宿根再生的杂交制种方法 | |
| CN104026017B (zh) | 玉米单倍体植株的培育方法 | |
| CN103636505B (zh) | 一种高叶绿素多蘖大麦的复合选育方法 | |
| CN110959530A (zh) | 一种无距虾脊兰野外回归方法 | |
| CN102100175A (zh) | 洋葱雄性不育系的选育及杂交制种方法 | |
| CN101810136A (zh) | 花椰菜细胞质雄性不育系转育方法及其不育系的应用 | |
| CN102326513B (zh) | 一种建立通用玉米再生体系的方法 | |
| CN101663994A (zh) | 杂交夏大豆的制种方法 | |
| CN105706923B (zh) | 一种筛选甘蔗耐旱变异株的方法 | |
| CN103190336A (zh) | 一种甘蓝转育苤蓝雄性不育系及选育杂交种的方法 | |
| CN110100722B (zh) | 一种紫叶白花甘蓝型景观油菜常规品种的选育方法 | |
| CN102668975A (zh) | 一种应用具有紫色叶标记杂交稻三系不育系制种的方法 | |
| CN100348090C (zh) | 一种建立冬枣多倍体诱导体系的方法 | |
| CN103798125A (zh) | 一种获得十字花科蔬菜新种质的方法及其应用方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20130918 |