CN103461136A

CN103461136A - 一种蟹爪兰的繁殖方法

Info

Publication number: CN103461136A
Application number: CN2013104336604A
Authority: CN
Inventors: 赵天荣; 蔡建岗
Original assignee: Ningbo Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Ningbo Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2013-09-18
Filing date: 2013-09-18
Publication date: 2013-12-25

Abstract

本发明公开了一种蟹爪兰的繁殖方法，包括如下步骤：（1）选取蟹爪兰的茎节作为外植体并消毒；（2）将消毒后的外植体接种到芽诱导培养基上，送入培养室进行芽诱导培养；（3）将分化后的外植体转移到继代培养基中进行继代培养；（4）选取健壮的分化苗接种到生根培养基上进行生根培养；（5）炼苗并移栽，得到成品。本发明所述方法增殖系数始终保持在3.0以上，因此培育周期短，为实现通过杂交育种手段选育的蟹爪兰新品种的快速扩繁，早日上市奠定了基础。

Description

一种蟹爪兰的繁殖方法

技术领域

本发明涉及组织培养技术领域，特别是涉及一种采用组织培养技术繁殖蟹爪兰的方法。

背景技术

蟹爪兰（Zygocactus truncactus）又称圣诞仙人掌、蟹爪莲或仙指花，为仙人掌科蟹爪兰属多年生常绿小灌木肉质植物，常生长在半阴、湿润的环境中，具有扁平的变态茎，分枝极多，节间短、状如蟹爪。蟹爪兰花色艳丽，花期正值圣诞节至春节期间，深受人们喜爱。

蟹爪兰的繁殖方式主要是扦插繁殖，嫁接繁殖，也可采用播种繁殖。扦插繁殖适用于规模化生产中应用；嫁接繁殖工序较多，适用于小批量生产，制作造型和大型盆栽以及引种繁殖和抢救品种；播种繁殖主要应用于蟹爪兰杂交育种中的新品种选育。以上方式可以满足生产需求，但是对于蟹爪兰杂交育种中选育出的优良新品种，如果要进行大面积推广，扦插繁殖的年繁殖系数4，如仅依靠传统的繁殖使已选育出的新品种面市至少需要6-8年才可有一定规模，另外一个品种扦插繁殖多代还会出现退化的现象。因此研究蟹爪兰快速繁殖的技术和方法，加速蟹爪兰新品种的推广，具有重要的理论和现实意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种简便的快速大量繁殖蟹爪兰的方法。

一种蟹爪兰的繁殖方法，包括如下步骤：

（1）选取蟹爪兰的茎节作为外植体并消毒；

（2）将消毒后的外植体接种到芽诱导培养基上，送入培养室进行芽诱导培养；

（3）将分化后的外植体转移到继代培养基中进行继代培养；

（4）选取健壮的分化苗接种到生根培养基上进行生根培养；

（5）炼苗并移栽，得到成品。

本发明所述的蟹爪兰的繁殖方法，其中所述外植体为蟹爪兰的幼嫩茎节。

本发明所述的蟹爪兰的繁殖方法，其中所述外植体的消毒方法为：将采集到的外植体先混合洗洁精在流水下冲洗30min,在超净工作台上用75%的酒精消毒10-30s，在用无菌水冲洗3-5遍，之后用0.1%升汞消毒10min。

本发明所述的蟹爪兰的繁殖方法，其中所述芽诱导培养基为MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1。

本发明所述的蟹爪兰的繁殖方法，其中，接种时将整个消毒后的茎节直接接入芽诱导培养基中，其基部先长出3-5条根，根与茎节连接处分化愈伤组织，从愈伤组织中分化出幼嫩茎节，当幼嫩茎节长至2-3个茎节时，进行继代培养。

本发明所述的蟹爪兰的繁殖方法，其中，接种时将整个消毒后的茎节直接接入芽诱导培养基中，从所述茎节顶端长出幼嫩茎节，当长出2-3个所述幼嫩茎节时选用所述幼嫩茎节进行继代培养。

本发明所述的蟹爪兰的繁殖方法，其中，接种时将整个消毒后的茎节直接接入芽诱导培养基中，其基部先长出3-5条根，根与茎节连接处分化愈伤组织，将所述愈伤组织转移到成分一致的新的芽诱导培养基中，分化出幼嫩茎节，当长出2-3个所述幼嫩茎节时进行继代培养。

本发明所述的蟹爪兰的繁殖方法，其中所述继代培养基为MS+6-BA1.0mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1。

本发明所述的蟹爪兰的繁殖方法，其中所述生根培养基为1/2MS+NAA0.1mg·L^-1。

本发明所述的蟹爪兰的繁殖方法，其中所述步骤（5）具体为：把生根后的组培苗在炼苗室中开盖锻炼3-5d，然后移栽到泥炭：珍珠岩3:1的基质中，得到成品。

本发明所述的蟹爪兰的繁殖方法，其中所述培养室的培养温度为25℃，光照时间为12h·d^-1,光照强度约25-30μmol·m^-2·s^-1；

所述芽诱导培养基、增殖培养基和生根培养基中均添加3%质量百分比的蔗糖和0.8%质量百分比的琼脂，PH为5.8。

本发明蟹爪兰的繁殖方法与现有技术不同之处在于：

本发明采用组织培养的方法，通过消毒外植体，得到无菌系，继而利用不同种类和不同浓度的外源激素的配比，对组培苗进行继代增殖、生长及生根进行筛选、调控、最后确定最佳外植体与培养基的配比，使其能应用于工厂化生产。创新点在于本发明的组培配方是将自主选育的蟹爪兰新品种进行大量扩繁的最佳组合，可以快速大量的繁殖组培苗，以适应花卉市场的需要，尚属国内首例。

本发明对多个自主选育的蟹爪兰新品种的成熟茎节、幼嫩茎节等外植体进行了系列组培快繁研究，取得了较好的结果，但以幼嫩茎节进行组培快繁效果最佳，且取幼嫩茎节不影响植株正常生长。本发明在消毒时间和效果、操作方法和再生效率、生产成本等方面都明显优于其他植物组培快繁，所以建立的规模化商品生产体系稳定、能够满足规模化快繁生产。本发明主要应用于蟹爪兰新品种的快速扩繁，使其快速走向市场的一种有效途径，改变国内新品种推出较慢的现状。

本发明所述蟹爪兰茎节的繁殖方法，幼嫩茎节依次通过洗洁精、75%酒精和0.1%HgCl₂溶液浸泡获得无菌茎节，灭菌效果较好，后续培养污染较少，而茎节死亡率较低，用芽诱导培养基诱导培养形成愈伤组织，再分化形成小茎节，得到蟹爪兰组培苗，将小茎节转接到增殖培养基中，茎节顶端分生出幼嫩茎节，一个月可增殖一次；本发明所述方法消毒时可以单个茎节也可以是连着的两个茎节，消毒后再切开，接种时是整个茎节接入，而不是传统的将所述茎节切成较小的组织块后接入，比传统方法简便且增殖效果更好，采用传统方法达不到本发明所述的增殖效果；本发明所述方法增殖系数始终保持在3.0以上，因此培育周期短，为实现通过杂交育种手段选育的蟹爪兰新品种的快速扩繁，早日上市奠定了基础。

附图说明

图1A为接入芽诱导培养基的茎段形成的愈伤组织；

图1B为愈伤组织中分化出的幼嫩茎节；

图1C为芽增殖培养后的外植体；

图1D为完成增殖的外植体。

具体实施方式

实施例1

如图1所示，一种蟹爪兰的繁殖方法，采用组织培养技术，具体包括如下步骤：

（1）切取蟹爪兰幼嫩茎节作为组织培养外植体，将采集到的外植体先混合洗洁精在流水下冲洗30min,在超净工作台上用75%的酒精消毒10-30s，在用无菌水冲洗3-5遍，之后用0.1%升汞消毒10min。

（2）将消毒后的外植体接种到芽诱导培养基上，送入培养室进行无菌培养，培养室的培养温度为25℃，光照时间为12h·d^-1,光照强度约25-30μmol·m^-2·s^-1；

在这一过程中，根据不同培养基上各外植体分化的情况的不同筛选出芽诱导得较好的外植体种类和培养基类型，效果最好的外植体为幼嫩茎段，芽诱导培养基为MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1。接种时将整个消毒后的茎节直接接入芽诱导培养基中，茎节基部分化需要2-3个月的时间，其基部先长出3-5条根，根与茎节连接处分化愈伤组织（见图1A），从愈伤组织中分化出幼嫩茎节（见图1B），当幼嫩茎节长至2-3个茎节时，进行继代培养。

（3）将分化后的外植体继代到继代增值培养基上进行继代培养（有3个以上分化较好的茎节），增值系数可达3.0以上（见图1C和图1D），所述继代培养基为MS+6-BA1.0mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1。

（4）将生长健壮的分化苗接种到生根培养基上进行生根培养基上，进行生根培养，生根培养基为1/2MS+NAA0.1mg·L^-1。

（5）在生根培养后的分化苗中选择生根较好的，在炼苗室中打开盖锻炼3-5d,然后移栽到泥炭：珍珠岩=3:1的基质中，移栽成活率在95%左右，获得商品苗。

所述芽诱导培养基、继代培养基和生根培养基中均添加3%（质量百分比）的蔗糖和0.8%（质量百分比）的琼脂，PH为5.8。

所述培养室的培养温度为25℃，光照时间为12h·d^-1,光照强度约25-30μmol·m^-2·s^-1。

其中：

1、MS培养基配方单如下：

工作液浓度单位mg/L

大量元素：NH₄NO₃ 1650、KNO₃1900、CaCl₂·2H₂O 440、MgSO₄·7H₂O 370、KH₂PO₄ 170；

微量元素：KI0.83、H₃BO₃ 6.2、MnSO₄·4H₂O 22.3、ZnSO₄7H₂O 8.6、Na₂MnO₄·2H₂O 0.25、CuSO₄·5H₂O 0.025、CoCl₂·6H₂O 0.025。

铁盐：FeSO₄7H₂O 27.8、Na₂-EDTA 2H₂O 37.3。

有机物质：肌醇100、烟酸0.5、盐酸毗多醇0.5、烟酸硫胺素0.1、甘氨酸2.0。

2、NAA为萘乙酸

3、6-BA为6-苄基嘌呤

采用本发明所述方法对4个蟹爪兰品种进行了增殖，试验结果表明，品种1的增殖系数为3.3，品种2的增殖系数为3.0，品种3的增殖系数为3.5，品种4（‘早妆’）的增殖系数为3.1，其中品种3茎节较小而致密，丰花型品种，在组培过程中发现其增值系数相对其他品种而言相对较高。

实施例2

步骤（2）中接种时将整个消毒后的茎节直接接入芽诱导培养基中，培养2-3个月后从所述茎节顶端长出幼嫩茎节，当长出2-3个所述幼嫩茎节时选用所述幼嫩茎节进行继代培养。

其他同实施例1。

实施例3

步骤（2）中接种时将整个消毒后的茎节直接接入芽诱导培养基中，其基部先长出3-5条根，根与茎节连接处分化愈伤组织，将所述愈伤组织转移到成分一致的新的芽诱导培养基中，分化出幼嫩茎节，当长出2-3个所述幼嫩茎节时进行继代培养。

其他同实施例1。

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims

1.一种蟹爪兰的繁殖方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）选取蟹爪兰的茎节作为外植体并消毒；

（3）将分化后的外植体转移到继代培养基中进行继代培养；

（4）选取健壮的分化苗接种到生根培养基上进行生根培养；

（5）炼苗并移栽，得到成品。

2.根据权利要求1所述的蟹爪兰的繁殖方法，其特征在于：所述外植体为蟹爪兰的幼嫩茎节。

3.根据权利要求1或2所述的蟹爪兰的繁殖方法，其特征在于：所述外植体的消毒方法为：将采集到的外植体先混合洗洁精在流水下冲洗30min,在超净工作台上用75%的酒精消毒10-30s，在用无菌水冲洗3-5遍，之后用0.1%升汞消毒10min。

4.根据权利要求3所述的蟹爪兰的繁殖方法，其特征在于：所述芽诱导培养基为MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1。

5.根据权利要求4所述的蟹爪兰的繁殖方法，其特征在于：接种时将整个消毒后的茎节直接接入芽诱导培养基中，其基部先长出3-5条根，根与茎节连接处分化愈伤组织，从愈伤组织中分化出幼嫩茎节，当幼嫩茎节长至2-3个茎节时，进行继代培养。

6.根据权利要求4所述的蟹爪兰的繁殖方法，其特征在于：接种时将整个消毒后的茎节直接接入芽诱导培养基中，从所述茎节顶端长出幼嫩茎节，当长出2-3个所述幼嫩茎节时选用所述幼嫩茎节进行继代培养。

7.根据权利要求4所述的蟹爪兰的繁殖方法，其特征在于：接种时将整个消毒后的茎节直接接入芽诱导培养基中，其基部先长出3-5条根，根与茎节连接处分化愈伤组织，将所述愈伤组织转移到成分一致的新的芽诱导培养基中，分化出幼嫩茎节，当长出2-3个所述幼嫩茎节时进行继代培养。

8.根据权利要求5或6或7所述的蟹爪兰的繁殖方法，其特征在于：所述继代培养基为MS+6-BA1.0mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1。

9.根据权利要求8所述的蟹爪兰的繁殖方法，其特征在于：所述生根培养基为1/2MS+NAA0.1mg·L^-1。

10.根据权利要求9所述的蟹爪兰的繁殖方法，其特征在于：

所述步骤（5）具体为：把生根后的组培苗在炼苗室中开盖锻炼3-5d，然后移栽到泥炭：珍珠岩3:1的基质中，得到成品；

所述培养室的培养温度为25℃，光照时间为12h·d^-1,光照强度约25-30μmol·m^-2·s^-1；