CN104871981A - 一种崖柏组培快繁方法 - Google Patents

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张桂玲
温四民
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Abstract

本发明公开了一种崖柏组培快繁方法，崖柏是我国特有濒危物种，极具经济价值和研究价值，由于崖柏种子较难获得和母株数量稀缺，因此限制了播种繁殖和扦插繁殖方法的使用，而利用组培快繁方法可解决以上问题。本发明包括如下步骤：外植体消毒、初代培养、继代培养、生根培养、炼苗移栽。在不同培养阶段使用不同培养基组成，并且采用合理的炼苗措施，能够建立崖柏组培快繁技术体系，方法重复性好。采用本方法得到的再生植株，植物学性状稳定，试管苗月增长系数达到4-6，生根率达70%，移栽成活率达95%，能进行大规模商品化育苗生产，可有效扩大崖柏这一濒危植物的种群数量。

Description

一种崖柏组培快繁方法
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种崖柏组培快繁方法。
背景技术
崖柏（Thuja sutchuenensis Franch.）为柏科（Cupressaceae）崖柏属（Thuja L.）常绿乔木，树高可达20ｍ，胸径2ｍ以上，在白垩纪繁盛一时，被世界自然保护联盟（IUCN）公布为极危树种，是世界上仅存的植物活化石，也是我国特有的国宝级植物。由于该树种起源古老，材质优良，具有重要的艺术价值、收藏价值、药用价值和研究价值。1999 年，重庆林业局组织专家开展国家重点保护野生植物调查时，在重庆的城口县和开县山区发现该种的野生种群，但是数量有限，天然更新不良，种群处于极度衰退状态。2005年，在重庆花萼山发现较大的崖柏种群。2013年经市场崖柏疯炒后，又先后在河北、河南、山西、陕西、甘肃天水等地发现崖柏，并遭到疯狂的乱砍乱伐，崖柏正处于极度濒危状态，亟待进行拯救性繁育。
有关崖柏种群繁殖的研究较少，张世强等对崖柏种子繁育进行了研究；陈红锋等人发明了一种崖柏种子繁殖的方法；金江群等对崖柏扦插繁殖进行了研究。野外调查发现，崖柏的结实量极低且种子败育严重，种子缺乏已构成种子繁殖的主要障碍；扦插繁殖可以解决崖柏种子繁殖的种源稀缺问题，但易受母株数量限制，并且缺乏崖柏扦插繁殖的系统研究，存在扦插枝条用量大、繁殖率较低，植株容易老化的问题。而使用组织培养方法繁殖崖柏可以克服以上技术存才的不足，可以大量、快速扩大崖柏种群数量，因此研究崖柏组培快繁方法具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术存在的问题，提供一种崖柏组培快繁方法，以便扩大崖柏这一濒危物种的种群数量，同时为这一珍稀植物的研究和开发提供可靠的材料来源。其特征在于包括以下步骤：
（1）外植体采集及消毒：选取崖柏春天萌发的嫩枝作为外植体，剪成5～6cm茎段，用0.3%新洁尔灭溶液浸泡10～15min，在磁力搅拌器上旋转处理20min，自来水冲洗1～2h，转入超净工作台中，用75%乙醇溶液消毒50s，无菌水冲洗5～6次，用2%次氯酸钠溶液消毒10min，用无菌水冲洗5～6次，用无菌滤纸吸干表面的水分备用；
（2）初代培养：将经步骤（1）消毒后的嫩枝剪成约1.5cm的茎段，接种至初代培养基进行丛生芽诱导培养, 培养条件为：每天光照12～14小时，光照强度1500～2000Lx，温度25±1℃，空气相对湿度75%～80%；
（3）继代培养：将步骤（2）初代培养得到的丛生芽接种至继代培养基进行增殖培养，培养条件为：每天光照12～14 小时，光照强度1500～2000Lx，温度25±1℃，空气相对湿度75%～80%；
（4）生根培养：将步骤（3）继代培养中获得的植株，选取2～3cm无根嫩梢从基部切下接种至生根培养基进行诱导生根，培养条件为：每天光照12～14 小时，光照强度2500～3000Lx，温度25±1℃，空气相对湿度75%～80%；
（5）炼苗移栽：将苗高6～10cm的壮苗带瓶移至温度25±1℃、湿度70～75%、光强4000～5000Lx环境下，2天后逐渐打开瓶盖，炼苗2～3天，然后洗去组培苗根系上的培养基，栽至铺有移栽专用基质的苗床中，温度16～22℃，空气相对湿度75％～80％，光照强度5000～10000Lx；
2.前述的一种崖柏组培快繁方法，其中所述的初代培养基的组成为：GD+KT1.0～3.0mg/L+NAA0.5～0.8mg/L+6-BA4.0～6.0mg/L +AC1.0～1.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂3.5～5.0g/L，pH为5.7～5.8；
3. 前述的一种崖柏组培快繁方法，其中所述的继代培养基的组成为：GD+NAA0.8～1.0mg/L+6-BA5.0～7.0mg/L+AC1.0～1.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂3.5～5.0g/L，pH为5.7～5.8；
4. 前述的一种崖柏组培快繁方法，其中所述的生根培养基的组成为：GD+NAA0.8～1.0mg/L+IBA1.0～3.0mg/L+蔗糖25～30g/L+琼脂3.5～5.0g/L，pH为5.7～5.8；
5. 前述的一种崖柏组培快繁方法，其中所述的移栽专用基质由山土、蛭石、珍珠岩按体积比2：1：1混合而成。
有益效果
本发明以春天萌发的嫩枝为外植体，经过初代培养、继代培养、生根培养、炼苗移栽，可得到完整的再生植株。采用本方法得到的再生植株，植物学性状稳定，使试管苗月增长系数达到4～6，生根率达70%，移栽成活率达95%，快繁方法稳定性好，能有效保护母株，可有效扩大崖柏这一濒危植物的种群数量。
具体实施方式
实施例1
（1）外植体采集及消毒：选取崖柏春天萌发的嫩枝作为外植体，剪成5～6cm茎段，用0.3%新洁尔灭溶液浸泡10～15min，在磁力搅拌器上旋转处理20min，自来水冲洗1～2h，转入超净工作台中，用75%乙醇溶液消毒50s，无菌水冲洗5～6次，用2%次氯酸钠溶液消毒10min，用无菌水冲洗5～6次，用无菌滤纸吸干表面的水分备用；
（2）初代培养：将经步骤（1）消毒后的嫩枝剪成约1.5cm的茎段，接种至初代培养基进行丛生芽诱导培养, 初代培养基的组成为：GD+KT1.0mg/L+NAA0.5mg/L+6-BA4.0mg/L +AC1.0g/L+蔗糖25g/L+琼脂3.5g/L，pH为5.7～5.8。培养条件为：每天光照12～14小时，光照强度1500～2000Lx，温度25±1℃，空气相对湿度75%～80%；
（3）继代培养：将步骤（2）初代培养得到的丛生芽接种至继代培养基进行增殖培养，继代培养基的组成为：GD+NAA0.8mg/L+6-BA5.0mg/L+AC1.0g/L+蔗糖25g/L+琼脂3.5g/L，pH为5.7～5.8。培养条件为：每天光照12～14小时，光照强度1500～2000Lx，温度25±1℃，空气相对湿度75%～80%；
（4）生根培养：将步骤（3）继代培养中获得的植株，选取2～3cm无根嫩梢从基部切下接种至生根培养基进行诱导生根，生根培养基的组成为：GD+NAA0.8mg/L+IBA1.0mg/L+蔗糖25g/L+琼脂3.5g/L，pH为5.7～5.8。培养条件为：每天光照12～14 小时，光照强度2500～3000Lx，温度25±1℃，空气相对湿度75%～80%；
（5）炼苗移栽：将苗高6～10cm的壮苗带瓶移至温度25±1℃、湿度70～75%、光强4000～5000Lx环境下，2天后逐渐打开瓶盖，炼苗2～3天，然后洗去组培苗根系上的培养基，栽至铺有移栽专用基质的苗床中，移栽专用基质由山土、蛭石、珍珠岩按体积比2：1：1混合而成。温度16～22℃，空气相对湿度75％～80％，光照强度5000～10000Lx。
实施例2
方法及步骤与实施例1相同，不同的是：所述的初代培养基的组成为：GD+ KT3.0mg/L+NAA0.8mg/L+6-BA6.0mg/L+AC1.5g/L+蔗糖30g/L+琼脂5.0g/L，pH为5.7～5.8；所述继代培养基的组成为：GD+NAA1.0mg/L+6-BA7.0mg/L+AC1.5g/L+蔗糖30g/L+琼脂5.0g/L，pH为5.7～5.8；所述生根培养基的组成为：GD+NAA1.0mg/L+IBA3.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5.0g/L，pH为5.7～5.8。
实施例3
方法及步骤与实施例1相同，不同的是：所述的初代培养基的组成为：GD+ KT2.0mg/L+NAA0.65mg/L+6-BA5.0mg/L+AC1.25g/L+蔗糖27.5g/L+琼脂4.25g/L，pH为5.7～5.8；所述继代培养基的组成为：GD+NAA0.9mg/L+6-BA6.0mg/L+AC1.25g/L+蔗糖27.5/L+琼脂4.25g/L，pH为5.7～5.8；所述生根培养基的组成为：GD+NAA0.9mg/L+IBA2.0mg/L+蔗糖27.5g/L+琼脂4.25g/L，pH为5.7～5.8。
注意事项：
1.选择崖柏外植体时，早春材料比夏季和秋季材料褐变的程度弱，冬季的芽进入深休眠状态，不容易生长，所以最好选用早春的材料作为外植体；
2.为了阻止褐变对外植体的影响，可把外植体放到空白琼脂培养基中培养5-7天，使组织中的酚类物质部分渗入培养基中，切口愈合后再转移至初代培养基上；
3.通过添加褐变抑制剂与吸附剂试验，活性炭与其他试剂相比，能有效减轻褐变对崖柏外植体产生丛生芽的影响；
4.山土为取自松林下的土，含有松柏类根系共生菌，可促进崖柏组培苗移栽后的快速生长。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。

Claims (5)

1.一种崖柏组培快繁方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）外植体采集及消毒：选取崖柏春天萌发的嫩枝作为外植体，剪成5～6cm茎段，用0.3%新洁尔灭溶液浸泡10～15min，在磁力搅拌器上旋转处理20min，自来水冲洗1～2h，转入超净工作台中，用75%乙醇溶液消毒50s，无菌水冲洗5～6次，用2%次氯酸钠溶液消毒10min，用无菌水冲洗5～6次，用无菌滤纸吸干表面的水分备用；
（2）初代培养：将经步骤（1）消毒后的嫩枝剪成约1.5cm的茎段，接种至初代培养基进行丛生芽诱导培养, 培养条件为：每天光照12～14小时，光照强度1500～2000Lx，温度25±1℃，空气相对湿度75%～80%；
（3）继代培养：将步骤（2）初代培养得到的丛生芽接种至继代培养基进行增殖培养，培养条件为：每天光照12～14 小时，光照强度1500～2000Lx，温度25±1℃，空气相对湿度75%～80%；
（4）生根培养：将步骤（3）继代培养中获得的植株，选取2～3cm无根嫩梢从基部切下接种至生根培养基进行诱导生根，培养条件为：每天光照12～14 小时，光照强度2500～3000Lx，温度25±1℃，空气相对湿度75%～80%；
（5）炼苗移栽：将苗高6～10cm的壮苗带瓶移至温度25±1℃、湿度70～75%、光强4000～5000Lx环境下，2天后逐渐打开瓶盖，炼苗2～3天，然后洗去组培苗根系上的培养基，栽至铺有移栽专用基质的苗床中，温度16～22℃，空气相对湿度75％～80％，光照强度5000～10000Lx。
2.根据权利要求1所述的一种崖柏组培快繁方法，其特征在于步骤（2）所述的初代培养基的组成为：GD+KT1.0～3.0mg/L+NAA0.5～0.8mg/L+6-BA4.0～6.0mg/L +AC1.0～1.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂3.5～5.0g/L，pH为5.7～5.8。
3.根据权利要求1所述的一种崖柏组培快繁方法，其特征在于步骤（3）所述的继代培养基的组成为：GD+NAA0.8～1.0mg/L+6-BA5.0～7.0mg/L+AC1.0～1.5g/L+蔗糖25～30g/L+琼脂3.5～5.0g/L，pH为5.7～5.8。
4.根据权利要求1所述的一种崖柏组培快繁方法，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基的组成为：GD+NAA0.8～1.0mg/L+IBA1.0～3.0mg/L+蔗糖25～30g/L+琼脂3.5～5.0g/L，pH为5.7～5.8。
5.根据权利要求1所述的一种崖柏组培快繁方法，其特征在于步骤（5）所述的移栽专用基质由山土、蛭石、珍珠岩按体积比2：1：1混合而成。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105104201A (zh) * 2015-09-09 2015-12-02 江苏农林职业技术学院 一种撒瓦那柏初代组培方法
CN106171994A (zh) * 2016-07-18 2016-12-07 江苏农林职业技术学院 一种撒瓦那柏继代培养方法
CN106613979A (zh) * 2016-12-23 2017-05-10 江苏农林职业技术学院 一种黄金柏初代培养方法
CN108260525A (zh) * 2016-12-31 2018-07-10 四川七彩林业开发有限公司 一种金球北美香柏的组培培养基及其组培培养方法
CN109275563A (zh) * 2018-09-30 2019-01-29 内蒙古农业大学 一种圆柏离体快繁方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5036007A (en) * 1989-03-09 1991-07-30 Weyerhaeuser Company Method for reproducing coniferous plants by somatic embryogenesis using abscisic acid and osmotic potential variation
CN102960249A (zh) * 2012-11-30 2013-03-13 通化师范学院 一种利用朝鲜崖柏嫩茎段试管内生根和生长同步的高效育苗方法
CN103733862A (zh) * 2014-01-13 2014-04-23 中国科学院华南植物园 一种崖柏种子繁殖方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5036007A (en) * 1989-03-09 1991-07-30 Weyerhaeuser Company Method for reproducing coniferous plants by somatic embryogenesis using abscisic acid and osmotic potential variation
CN102960249A (zh) * 2012-11-30 2013-03-13 通化师范学院 一种利用朝鲜崖柏嫩茎段试管内生根和生长同步的高效育苗方法
CN103733862A (zh) * 2014-01-13 2014-04-23 中国科学院华南植物园 一种崖柏种子繁殖方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
M. H. KABIR ET.AL.,: "In vitro Propagation of Thuja occidentalis Through Apical Shoot Culture", 《PLANT TISSUE CULT. & BIOTECH.》 *
金江群等: "崖柏无性繁殖及其对干旱—复水的生理响应研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105104201A (zh) * 2015-09-09 2015-12-02 江苏农林职业技术学院 一种撒瓦那柏初代组培方法
CN106171994A (zh) * 2016-07-18 2016-12-07 江苏农林职业技术学院 一种撒瓦那柏继代培养方法
CN106613979A (zh) * 2016-12-23 2017-05-10 江苏农林职业技术学院 一种黄金柏初代培养方法
CN108260525A (zh) * 2016-12-31 2018-07-10 四川七彩林业开发有限公司 一种金球北美香柏的组培培养基及其组培培养方法
CN109275563A (zh) * 2018-09-30 2019-01-29 内蒙古农业大学 一种圆柏离体快繁方法

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