CN108260525A - 一种金球北美香柏的组培培养基及其组培培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种金球北美香柏的组培培养基，包括增殖培养基和生根培养基；所述增殖培养基组分包括DCR基本培养基，附加6‑苄氨基嘌呤、萘乙酸、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和琼脂；所述生根培养基组分包括1/2WPM基本培养基，附加萘乙酸、吲哚乙酸、蔗糖和琼脂，所述组培培养基，能有效提高金球北美香柏繁殖速度。
Description
技术领域
本发明涉及生物组培育苗技术领域，具体涉及一种金球北美香柏的组培培养基及其组培培养方法。
背景技术
金球北美香柏Thujaoccidentalis‘GoldenGlobe’，隶属柏科崖柏属，常绿针叶树，灌木，树高0.6-2.2m，冠幅0.9-1.8m，树冠圆锥形、椭圆形到圆形，顶端钝圆；树皮棕褐色，长条状剥落；小枝密集、扁平、暗绿色，背面常为灰绿色；鳞叶浓密柔软、黄绿色或金黄色，有光泽，有宜人的香味，鳞叶着生像羽毛排列；雌球花有8-10对珠鳞，珠鳞表面光滑，雌球花绿色转棕褐色，球果褐色，种子可以自然传播。
金球北美香柏喜光，在全光照条件下长势旺盛；喜微酸性、中性和偏碱性土壤，粘土、有机质土和沙土中均可生长，长势中等；耐积水性强，在其他针叶树难以适应的沼泽地亦能存活；耐寒性差，冬季需避干冷风，可作基础种植，行道树，混合花境，岩石庭院假山花园，也可作树篱。其观赏价值高，适应范围，但目前金球北美香柏繁殖方式主要采用扦插、播种繁殖方式，繁殖速度慢，不能满足市场需求。
发明内容
有鉴于此，本申请提供了一种金球北美香柏的组培培养基及组培培养方法，能有效提高金球北美香柏繁殖速度。
为解决以上技术问题，本发明提供的技术方案是一种金球北美香柏的组培培养基，包括增殖培养基和生根培养基；
所述增殖培养基组分包括DCR基本培养基，附加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和琼脂；
所述生根培养基组分包括1/2WPM基本培养基，附加萘乙酸、吲哚乙酸、蔗糖和琼脂。
优选的，所述增殖培养基组分包括：DCR基本培养基，附加0.2～2mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.01～1mg/L萘乙酸、0.02～2g/L聚乙烯吡咯烷酮、20～40g/L蔗糖和2～12g/L琼脂。
优选的，所述增殖培养基组分包括：DCR基本培养基，附加1～1.5mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.03～0.05mg/L萘乙酸、1～1.5g/L聚乙烯吡咯烷酮、25～30g/L蔗糖和5～8g/L琼脂。
优选的，所述增殖培养基组分包括：DCR基本培养基，附加1mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.03mg/L萘乙酸、1g/L聚乙烯吡咯烷酮、30g/L蔗糖和8g/L琼脂。
优选的，所述生根培养基组分包括1/2WPM基本培养基，附加0.1～2mg/L萘乙酸、0.05～1.0mg/L吲哚乙酸、15～40g/L蔗糖和2～12g/L琼脂。
优选的，所述生根培养基组分包括1/2WPM基本培养基，附加0.3～1mg/L萘乙酸、0.1～0.5mg/L吲哚乙酸、15～25g/L蔗糖和5～8g/L琼脂。
优选的，所述生根培养基组分包括1/2WPM基本培养基，附加0.3mg/L萘乙酸、0.5mg/L吲哚乙酸、20g/L蔗糖和8g/L琼脂。
优选的，所述增殖培养基和所述生根培养基的pH值为5.8～6.0。
本发明还提供了一种金球北美香柏的组培培养方法，包括以下步骤：
增殖培养：取金球北美香柏腋芽分离成单株，采用增殖培养基进行增殖培养，得到丛生芽；
生根培养：将所述丛生芽分离成单株，采用生根培养基进行生根培养，得到金球北美香柏组培苗。
优选的，所述增殖培养的条件为：温度为23～27℃，光照2000～2500Lx，光照时间8～14h/d。
优选的，所述增殖培养的条件为：温度为25℃，光照2500Lx，光照时间12h/d。
优选的，所述增殖培养培养时间28～35天。
优选的，所述生根培养的条件为：温度为22～27℃，光照1500～2500Lx，光照时间8～14h/d。
优选的，所述生根培养的条件为：温度为25℃，光照2500Lx，光照时间10h/d。
优选的，所述生根培养培养时间为4～9周。
优选的，所述生根培养培养时间为8～9周。
优选的，还包括切取金球北美香柏带芽茎段得到外植体，所述外植体进行初代培养，诱导出所述腋芽。
优选的，所述初代培养培养基组分包括DCR基本培养基，附加1.0g/L6-苄氨腺嘌呤、0.02mg/L萘乙酸和1.0g/L聚乙烯吡咯烷酮。
优选的，所述初代培养条件为：温度为23～27℃，光照1500～2500Lx，光照时间8～12h/d。
优选的，所述初代培养时间为6～8天。
DCR基本培养基是一种能够自动诱导由乳糖操纵子调控的目的蛋白质表达的培养基,能够保证组织生长所需的矿质营养。
MS基本培养基具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养，还能加速愈伤组织的生长，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适。
本申请所述1/2MS基本培养基是MS基本培养基大量元素减半，其它成分不变。具有无机盐浓度较低，但能够保证组织生长所需的矿质营养，满足植物细胞的营养和生理需要，最主要是能促进植物组织生根，因而在植物组织培养快速繁殖时，常用它作为生根培养基的基本培养基。
本申请所述6-苄氨基腺嘌呤，是一种植物生长调节剂，其主要作用是促进芽的形成，也可以诱导愈伤组织发生，促进细胞分裂，促进非分化组织分化，促进生物体内物质的积累，促进侧芽发生，防止老化，是植物组织和细胞培养中最常用的一种细胞分裂素。
本申请所述所述聚乙烯吡咯烷酮是酚类物质的专一吸附剂，所述聚乙烯吡咯烷酮中的基团有很强的结合多酚化合物的能力，使多酚化合物不能成为多酚氧化酶的底物，从而抑制褐化的发生。
组织培养过程中，当外植体被切割和接种时，损伤的切面细胞中酚类物质会在多酚氧化酶的作用下发生氧化反应，形成大量有毒的醌类物质，使外植体的切面变成棕褐色或暗褐色而发生褐变。醌会逐渐扩散到培养基中，抑制其他酶的活性，导致组织带了紊乱，对外植体的脱分化和营养物的再分化产生严重的影响，毒害整个组织，本申请初代培养基和增殖培养基中加入聚乙烯吡咯烷酮有效抑制褐化的发生。
本申请所述萘乙酸，是一种植物生长调节剂，在植物使用扦插法繁殖时使用，也可用于植物组织培养，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根。
本申请与现有技术相比，其详细说明如下：
本申请种苗繁殖不受季节的影响，一年四季都可培育苗木。
本申请解决了科学研究选育的良种应用的问题，母本材料少，采用金球北美香柏茎段即可大批量繁殖无病菌、健康的金球北美香柏组培苗，降低了生产成本。
本申请初代培养基和增殖培养基中加入聚乙烯吡咯烷酮有效防止褐化现象。
金球北美香柏在自然环境中只茎能单支向上生长，通过利用植物细胞全能性进行组织培养技术繁殖，可保持优良树种的遗传稳定性，且丛生芽数量多，有效增殖率高，生根苗生长整齐，培养周期短，能有效提高其繁殖速度，组培苗移栽成活率高，为进一步开展品种改良奠定基础。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1
1、实验原料：一种金球北美香柏的组培培养基，包括增殖培养基和生根培养基；
所述增殖培养基组分包括：DCR基本培养基，附加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和琼脂，所述增殖培养基pH值为5.8～6.0；
所述生根培养基组分包括：1/2WPM基本培养基，附加0.3mg/L萘乙酸、0.5mg/L吲哚乙酸，20g/L蔗糖和8g/L琼脂，所述生根培养基的pH值为5.8～6.0；
所述组培培养基还包括初代培养培养基组分包括:DCR基本培养基，附加1.0g/L6-苄氨腺嘌呤、0.02mg/L萘乙酸和1.0g/L聚乙烯吡咯烷酮。。
2、实验过程：一种金球北美香柏的组培培养方法，包括以下步骤：
切取金球北美香柏带芽茎段得到外植体，所述外植体进行初代培养，诱导出所述腋芽；
取金球北美香柏腋芽分离成单株，采用增殖培养基进行增殖培养，得到丛生芽；
将所述丛生芽分离成单株，采用生根培养基进行生根培养，得到金球北美香柏组培苗。
其中，
所述初代培养条件为：温度为23～27℃，光照1500～2500Lx，光照时间8～14h/d，所述初代培养时间为6～8天；
所述增殖培养的条件为：温度为23～27℃，光照2000～2500Lx，光照时间8～14h/d，所述增殖培养培养时间28～35天；
所述生根培养的条件为：温度为22～27℃，光照1500～2500Lx，光照时间8～14h/d，所述生根培养培养时间为5～9周。
3、实验方法：根据接种数、增殖数、增殖系数、平均丛生芽株高分析增殖培养基中成分和浓度对增殖的影响结果。
4、实验结果：将表1
表1增殖培养基中成分和浓度对增殖的影响结果
从以上数据可以看出，所述增殖培养基组分包括：DCR基本培养基，附加0.2～2mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.01～1mg/L萘乙酸、0.02～2g/L聚乙烯吡咯烷酮、20～40g/L蔗糖和2～12g/L琼脂，可进行增殖培养，得到丛生芽；优选的，所述增殖培养基组分包括：DCR基本培养基，附加1～1.5mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.03～0.05mg/L萘乙酸、1～1.5g/L聚乙烯吡咯烷酮、25～30g/L蔗糖和5～8g/L琼脂；最优选的，所述增殖培养基组分包括：DCR基本培养基，附加1mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.03mg/L萘乙酸、1g/L聚乙烯吡咯烷酮、30g/L蔗糖和8g/L琼脂。
实施例2
本实施例除下述特征外，其他均与实施例1相同：
1、实验原料：
所述增殖培养基组分包括：DCR基本培养基，附加1mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.03mg/L萘乙酸、1g/L聚乙烯吡咯烷酮、30g/L蔗糖和8g/L琼脂，所述增殖培养基pH值为5.8～6.0；
所述生根培养基组分包括：1/2WPM基本培养基，附加萘乙酸、吲哚乙酸、蔗糖和琼脂，所述生根培养基组分浓度见表2，所述生根培养基的pH值为5.8～6.0；
3、实验方法：根据接种数、生根数、平均生根数、平均根长、生根率分析生根培养基中组分和浓度对生根培养的影响结果。
4、实验结果：将表2
表2生根培养基中成分和浓度对生根培养的影响结果
从以上数据可以看出，所述生根培养基组分包括1/2WPM基本培养基，附加0.1～2mg/L萘乙酸、0.05～1mg/L吲哚乙酸，15～40g/L蔗糖和2～12g/L琼脂，可进行生根培养，得到金球北美香柏组培苗；优选的，所述生根培养基组分包括1/2WPM基本培养基，附加0.3～1mg/L萘乙酸、0.1～0.5吲哚乙酸，15～25g/L蔗糖和5～8g/L琼脂；最优选的，所述生根培养基组分包括1/2WPM基本培养基，附加0.3mg/L萘乙酸、0.5mg/L吲哚乙酸，20g/L蔗糖和8g/L琼脂。
实施例3
1、实验原料：
所述增殖培养基组分包括：DCR基本培养基，附加1mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.03mg/L萘乙酸、1g/L聚乙烯吡咯烷酮、30g/L蔗糖和8g/L琼脂，所述增殖培养基pH值为5.8～6.0；
所述生根培养基组分包括：1/2WPM基本培养基，附加0.3mg/L萘乙酸、0.5mg/L吲哚乙酸、20g/L蔗糖和8g/L琼脂，所述生根培养基的pH值为5.8～6.0；
所述组培培养基还包括初代培养培养基组分包括:DCR基本培养基，附加1.0g/L6-苄氨腺嘌呤、0.02mg/L萘乙酸和1.0g/L聚乙烯吡咯烷酮。
2、实验过程：一种金球北美香柏的组培培养方法，包括以下步骤：
切取金球北美香柏带芽茎段得到外植体，所述外植体进行初代培养，诱导出所述腋芽；
取金球北美香柏腋芽分离成单株，采用增殖培养基进行增殖培养，得到丛生芽；
将所述丛生芽分离成单株，采用生根培养基进行生根培养，得到金球北美香柏组培苗。
其中，
所述初代培养条件为：温度为23～27℃，光照1500～2500Lx，光照时间8～14h/d，所述初代培养时间为6～8天；
所述增殖培养的条件见表3；
所述生根培养的条件为：温度为23～27℃，光照2000～2500Lx，光照时间8～14h/d，所述生根培养培养时间为5～9周。
3、实验方法：根据增殖培养培养时间、增殖系数、平均丛生芽株高分析增殖条件对增殖的影响结果。
4、实验结果：将表3
表3增殖培养条件对增殖的影响结果
从以上数据可以看出，分组B温度为25℃，光照2500Lx，光照时间12h/d时，增殖条件为最优选方案。
实施例4
本实施例除下述特征外，其他均与实施例3相同：
所述实验过程中所述初代培养条件为：温度为23～27℃，光照1500～2500Lx，光照时间8～14h/d，所述初代培养时间为6～8天；
所述增殖培养的条件为：温度为23～27℃，光照2000～2700Lx，光照时间8～14h/d，所述增殖培养培养时间28～35天；
所述生根培养的条件见表4。
3、实验方法：根据生根培养培养时间、平均根长、生根率分析生根条件对生根培养的影响结果
4、实验结果：将表4
表4生根培养条件对增殖的影响结果
从以上数据可以看出，分组b温度为25℃，光照2500Lx，光照时间10h/d时，生根条件为最优选方案。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种金球北美香柏的组培培养基，其特征在于，包括增殖培养基和生根培养基；
所述增殖培养基组分包括DCR基本培养基，附加6-苄氨基嘌呤、萘乙酸、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和琼脂；
所述生根培养基组分包括1/2WPM基本培养基，附加萘乙酸、吲哚乙酸、蔗糖和琼脂。
2.根据权利要求1所述的组培培养基，其特征在于，所述增殖培养基组分包括：DCR基本培养基，附加0.2～2mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.01～1mg/L萘乙酸、0.02～2g/L聚乙烯吡咯烷酮、20～40g/L蔗糖和2～12g/L琼脂。
3.根据权利要求1所述的组培培养基，其特征在于，所述生根培养基组分包括1/2WPM基本培养基，附加0.1～2mg/L萘乙酸、0.05～1.0mg/L吲哚乙酸、15～40g/L蔗糖和2～12g/L琼脂。
4.根据权利要求1所述的组培培养基，其特征在于，所述增殖培养基和所述生根培养基的pH值为5.8～6.0。
5.一种金球北美香柏的组培培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
增殖培养：取金球北美香柏腋芽分离成单株，采用增殖培养基进行增殖培养，得到丛生芽；
生根培养：将所述丛生芽分离成单株，采用生根培养基进行生根培养，得到金球北美香柏组培苗。
6.根据权利要求6所述的组织培养方法，其特征在于，所述增殖培养的条件为：温度为23～27℃，光照2000～2500Lx，光照时间8～14h/d。
7.根据权利要求6所述的组织培养方法，其特征在于，所述增殖培养培养时间28～35天。
8.根据权利要求6所述的组织培养方法，其特征在于，所述生根培养的条件为：温度为22～27℃，光照1500～2500Lx，光照时间8～14h/d。
9.根据权利要求6所述的组织培养方法，其特征在于，所述生根培养培养时间为4～9周。
10.根据权利要求9所述的组织培养方法，其特征在于，还包括切取金球北美香柏带芽茎段得到外植体，所述外植体进行初代培养，诱导出所述腋芽。
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