CN105850741A - 一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法 - Google Patents

一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法 Download PDF

Info

Publication number
CN105850741A
CN105850741A CN201610255272.5A CN201610255272A CN105850741A CN 105850741 A CN105850741 A CN 105850741A CN 201610255272 A CN201610255272 A CN 201610255272A CN 105850741 A CN105850741 A CN 105850741A
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
seedling
culture medium
root
spore
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201610255272.5A
Other languages
English (en)
Inventor
何俊
孟静
张舒
杨俊波
李德铢
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kunming Institute of Botany of CAS
Original Assignee
Kunming Institute of Botany of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kunming Institute of Botany of CAS filed Critical Kunming Institute of Botany of CAS
Priority to CN201610255272.5A priority Critical patent/CN105850741A/zh
Publication of CN105850741A publication Critical patent/CN105850741A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Cultivation Of Plants (AREA)

Abstract

本发明提供植物凤丫蕨(Coniogramme japonica(Thunberg)Diels)的快速繁殖和离体保存方法。包括外植体的获取、绿色球状体GGB诱导与增殖培养、生根培养、分化培养、离体保存或移栽步骤，取野外自然生长的凤丫蕨孢子，在孢子萌发培养基中培养，获得带根状茎的小苗，转入绿色球状体诱导与增殖培养基中培养，将生成的绿色球状体转入生根培养基中，然后将长出1‑2条根、分化出小叶但仍未完全分化的绿色球状体转接至分化培养基中进行培养，分化出的小苗转接在离体培养基上继代培养离体保存，或将分化出的小苗进行移栽。该方法对凤丫蕨属植物种质资源的开发、利用和保护提供了重要的技术支撑。

Description

一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法
技术领域：
本发明涉及植物生物技术领域，具体地，涉及植物凤丫蕨(Coniogramme japonica(Thunberg)Diels)的离体保存方法。
背景技术：
凤丫蕨(Coniogramme japonica(Thunberg)Diels)为裸子蕨科(Hemionitidaceae)凤丫蕨属(ConiogrammeFee)多年生草本植物，广泛分布于我国西南及长江中下游地区，喜生湿润林下和山谷阴湿处，海拔100-1300米。其地下根状茎发达，常连片生长，根茎及全草入药，具有舒筋活络、祛寒除湿等功效，主要用于治疗风湿性关节炎、白带、肾炎、无名毒疮等症。同时，凤丫蕨植株形态优美，亦是优良的观赏蕨类。目前，关于凤丫蕨属植物各方面的研究渐渐增多，如，周丽华(2009，不同灭菌方法和赤霉素浓度对凤丫蕨幼茎成苗的影响，安徽农业科学37(31):15222-15223)以凤丫蕨幼茎为外植体，经自来水洗2h，酒精消毒60s，升汞消毒10min能达到较好的灭菌效果，且在添加浓度为1.5mg/L赤霉素(GA)的1/2MS培养基中可成苗，但最高成苗率只有75％；韦景枫等(2004，凤丫蕨组培快繁技术初报，贵州林业科技32(3)：32-34)以凤丫蕨孢子成熟的叶片作为外殖体，对凤丫蕨的组培快繁进行了研究。随着对该属植物各方面研究工作的深入，以及人们对于该属植物野生资源需求的日益增加，进一步开展该属物种的离体保存的研究，将对凤丫蕨属植物种质资源的利用和保护提供重要的技术支撑。至今，现有技术尚未见有凤丫蕨生物技术方法进行离体保存的报道。
发明内容：
本发明的目的在于提供现有技术中未有的一种极具药用价值和观赏潜力的植物凤丫蕨的离体保存方法。通过对凤丫蕨的孢子无菌萌发、绿色球状体(Green Globular Body，GGB)诱导、生根和离体保存等步骤，建立了凤丫蕨的快繁和离体保存体系，继代周期达2年以上。该方法将对凤丫蕨属植物种质资源的开发、利用和保护提供重要的技术支撑。
为实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，该方法包括外植体的获取、绿色球状体GGB诱导与增殖培养、生根培养、分化培养、离体保存或移栽步骤，取野外自然生长的凤丫蕨孢子，在孢子萌发培养基(1)中培养，获得带根状茎的小苗，转入绿色球状体诱导与增殖培养基(2)中培养，将生成的绿色球状体转入生根培养基(3)中，然后将长出1-2条根、分化出小叶但仍未完全分化的绿色球状体转接至分化培养基(4)中进行培养，分化出的小苗转接在离体培养基(5)上继代培养离体保存，或将分化出的小苗进行移栽，所述的(1)孢子萌发培养基为：基本培养基为MS大量元素取1/4，其余成分与MS相同的1/4MS培养基；(2)GGB诱导与增殖培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L；(3)生根培养基为：1/10MS；(4)分化培养基为：1/2MS+IBA0.1mg/L+IAA0.1mg/L；(5)离体保存培养基为：1/2MS，以上培养基均添加蔗糖30g/L，琼脂5.8g/L固化，pH5.8，(1)(2)(3)(5)在如下培养条件下培养：培养温度23±2℃，光照强度10-20μmol/(m2·s)，光照12h/d；(4)的培养条件为：培养温度28℃，光照强度50μmol/(m2·s)，光照12h/d。
根据所述的一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，其中所述的外植体的获取是选择野外自然生长发育良好，没有病虫害的成年凤丫蕨植株，剪下长有成熟孢子的叶片，通过自然脱落获得孢子，将孢子用双层擦镜纸包好，放入无菌水中浸泡6小时，然后用75％酒精消毒5-7s，再用无菌水冲洗3遍，用0.1％HgCl2水溶液进行消毒5-10min，在无菌条件下用无菌水反复水洗3遍，滤纸吸干多余水分，然后用解剖刀切开擦镜纸，通过拖带擦镜纸将孢子散落到培养基(1)中，接种90天后孢子萌发，出现原叶体的分化，在(1)培养基中继续培养，获得带根状茎的小苗。
根据所述的一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，其中所述的绿色球状体GGB诱导与增殖培养是(1)培养基中获得的带根状茎小苗去除须根和叶片后，接种至绿色球状体诱导培养基(2)上，每瓶接种5个外植体，15天后出现绿色突起，继续在此培养条件下继代培养2-3次，绿色突起进一步长大直至形成绿色球状体。
根据所述的一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，其中所述的生根培养是将获得的绿色球状体转接至生根培养基(3)中，10天后开始出现根的分化，20天后根长至1cm长，继续培养，可进一步分化出细小叶片。
根据所述的一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，其中所述的分化培养是将长有1-2条根、分化出小叶但仍未完全分化的绿色球状体转接至(4)培养基中进行培养，30天分化出大量的凤丫蕨小苗。
根据所述的一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，其中所述的离体保存是将培养基(4)中分化出的小苗转接在培养基(5)上，每瓶接种5个，小苗继续生长，继代周期2年以上。
根据所述的一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，其中所述的移栽是将培养基(4)中的带根小苗进行移栽，首先将瓶苗放在大棚内炼苗3-5天，然后从培养瓶中取出生根苗，洗去附着的培养基，略微晾干水分后进行移栽，移栽基质为经5％甲醛水溶液消毒过的腐殖土∶沙土＝2∶1，栽好后浇透定根水，前期视苗生长状况进行及时通风或补水处理，待试管苗长出新叶后，揭膜粗放管理。
根据所述的一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，其中所述的外植体的获取是在选择野外自然生长且发育良好，没有病虫害的成年凤丫蕨植株，剪下长有成熟孢子的叶片，装好带回实验室，通过自然脱落获得孢子，将孢子用双层擦镜纸包好，放入无菌水中浸泡6小时，然后用75％酒精消毒5-7s，再用无菌水冲洗3遍，用0.1％HgCl2水溶液进行消毒5-10min，在无菌条件下用无菌水反复水洗3遍，滤纸吸干多余水分，然后用解剖刀切开擦镜纸，通过拖带擦镜纸将孢子散落到培养基(1)中，接种90天后孢子萌发，出现原叶体的分化，在(1)培养基中继续培养；
所述的绿色球状体GGB诱导与增殖培养是将小苗去除须根和叶片后，接种至GGB诱导培养基(2)上，每瓶接种5个外植体，15天后出现绿色突起，继续在此培养条件下继代培养2-3次，绿色突起进一步长大直至形成GGB，大小约0.5cm×0.3cm绿色小球团，增殖率可达1∶6；
所述的生根培养是将获得的GGB转接至生根培养基(3)中，10天后开始出现根的分化，20天后根长至1cm长，继续培养，进一步分化出细小叶片；
所述的分化培养是将长有1-2条根、分化出小叶但仍未完全分化的GGB转接至(4)培养基中进行培养，30天即可分化出大量的凤丫蕨小苗；
所述的离体保存是将培养基(4)中分化出的小苗转接在培养基(5)上，每瓶接种5个，小苗继续生长，获得根状茎明显长长的小苗，偶尔伴生丛生小苗，在此培养条件下，继代周期延长至2年以上，延长了继代周期，缩短了继代次数，维持了种质资源的遗传性；
所用培养瓶均为白色透明玻璃瓶，直径7.5cm×高9.0cm，容积300ml；
所述的移栽是将培养基(4)中的带根小苗进行移栽，首先将瓶苗放在大棚内炼苗3-5天，然后从培养瓶中取出生根苗，洗去附着的培养基，略微晾干水分后进行移栽，移栽基质为经5％甲醛水溶液消毒过的腐殖土∶沙土＝2∶1，栽好后浇透定根水，前期视苗生长状况进行及时通风或补水处理，待试管苗长出新叶后，揭膜粗放管理，移栽成苗率80％以上。
与现有技术相比，本发明具备如下的优益性：本发明提供的一种极具药用价值和观赏潜力的植物凤丫蕨的离体保存方法，是首次以野外自然生长的凤丫蕨孢子为外植体，克服了野外取材时间不宜把握、易污染的困难。然后通过对孢子的消毒、无菌萌发、绿色球状体(Green Globular Body，GGB)诱导、生根和离体保存等步骤，建立起一套完整和科学的凤丫蕨的快速繁殖和离体保存体系，科学性强、操作简单。特别是首次实现了凤丫蕨离体保存的继代周期延长至2年以上，大大降低了保存的成本，缩短了继代次数，维持了种质资源的遗传性。为后续凤丫蕨植物资源的开发、利用和保护提供重要的技术支撑，同时也为凤丫蕨属相关野生种质资源的离体保存、科学研究提供了科学依据。
具体实施方式：
为了更好地说明本发明的实质性内容，下面用本发明的实施例来进一步说明本发明，但本发明的内容并不局限于此。根据本发明技术方案和实施例的描述，也许同领域技术人员在本发明的基础上还可以对本发明技术方案进行一些修改和改进。因此，在不偏离本发明主要技术方案的基础上所做的修改和改进，均应属于本发明所要求保护的范围。
实施例1：
1、材料：凤丫蕨Coniogramme japonica(Thunberg)Diels。
2、材料类别：野外自然生长的凤丫蕨孢子。
3、培养条件：(1)孢子萌发培养基：基本培养基为MS大量元素取1/4，其余成分与MS相同的1/4MS培养基；(2)GGB诱导与增殖培养基：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L；(3)生根培养基：1/10MS；(4)分化培养基：1/2MS+IBA0.1mg/L+IAA0.1mg/L；(5)离体保存培养基：1/2MS。以上培养基均添加蔗糖30g/L，琼脂5.8g/L固化，pH5.8，培养温度均为25±2℃，光照强度10-20μmol/(m2·s)，光照12h/d。所用培养瓶均为白色透明玻璃瓶，直径7.5cm×高9.0cm，容积约300ml。所有培养基均添加琼脂5.8g/L固化，pH5.8。(1)(2)(3)(5)在如下培养条件下培养：培养温度23±2℃，光照强度10-20μmol/(m2·s)，光照12h/d；(4)的培养条件为：培养温度28℃，光照强度50μmol/(m2·s)，光照12h/d。
4、生长与分化情况
4.1外植体的获得：于2011年8月-11月间通过多次取样，在野外选择自然生长且发育良好，没有病虫害的成年凤丫蕨植株，最终确定选取长有成熟孢子的叶片，将其剪下用普通信封装好带回实验室，通过自然脱落获得孢子用于后续研究(表1)。将孢子用双层擦镜纸包好，放入无菌水中浸泡6小时。然后用75％酒精消毒5-7s，再用无菌水冲洗3遍，用0.1％HgCl2水溶液进行消毒5-10min，在无菌条件下用无菌水反复水洗3遍，滤纸吸干多余水分。然后用解剖刀切开擦镜纸，通过拖带擦镜纸将孢子散落到培养基(1)中。接种约50天后孢子萌发，出现原叶体的分化。在(1)培养基中继续培养，即可获得带根状茎的小苗，但生长缓慢。
表1取材时间的选择
4.2GGB诱导与增殖培养：将小苗去除须根和叶片后，接种至GGB诱导培养基(2)上，每瓶接种5个外植体。15天后出现绿色突起，继续在此培养条件下继代培养2-3次，绿色突起进一步长大直至形成GGB，大小约0.5cm×0.3cm绿色小球团，增殖率可达1∶6，相较于其他培养条件，培养基(2)获得的GGB更有利于后期小苗的分化(表2)。
表2GGB诱导与增殖
4.3生根培养：将获得的GGB转接至生根培养基(3)中，10天后开始出现根的分化，20天后根长至1cm长。继续培养，可进一步分化出小叶片，大小约0.3×0.3cm，且但生长缓慢，小叶片纤弱，未见伸长的根状茎。
4.4分化培养基：将长有1-2条根、分化出小叶但仍未完全分化的GGB转接至(4)培养基中进行培养，30天即可分化出大量的凤丫蕨小苗。
4.5离体保存：将培养基(4)中分化出的小苗转接在培养基(5)上，每瓶接种5个，小苗继续生长。能获得根状茎明显伸长的小苗，偶尔伴生丛生小苗，但不如在培养基(4)上增殖明显。在此培养条件下，继代周期可延长至2年以上，大大延长了继代周期，缩短了继代次数，维持了种质资源的遗传性(表3)。同时，利用已保存的瓶苗重复以上步骤可重新诱导获得GGB，并形成新的幼苗。
表3离体保存培养基
4.6移栽：将培养基(4)中的带根小苗进行移栽。首先将瓶苗放在大棚内炼苗3-5天，然后从培养瓶中取出生根苗，洗去附着的培养基，略微晾干水分后进行移栽。移栽基质为经5％甲醛水溶液消毒过的腐殖土∶沙土＝2∶1，栽好后浇透定根水，前期视苗生长状况进行及时通风或补水处理，待试管苗长出新叶后，揭膜粗放管理，移栽成苗率80％以上。

Claims (8)

1.一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，该方法包括外植体的获取、绿色球状体GGB诱导与增殖培养、生根培养、分化培养、离体保存或移栽步骤，取野外自然生长的凤丫蕨孢子，在孢子萌发培养基(1)中培养，获得带根状茎的小苗，转入绿色球状体诱导与增殖培养基(2)中培养，将生成的绿色球状体转入生根培养基(3)中，然后将长出1-2条根、分化出小叶但仍未完全分化的绿色球状体转接至分化培养基(4)中进行培养，分化出的小苗转接在离体培养基(5)上继代培养离体保存，或将分化出的小苗进行移栽，所述的(1)孢子萌发培养基为：基本培养基为MS大量元素取1/4，其余成分与MS相同的1/4MS培养基；(2)GGB诱导与增殖培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L；(3)生根培养基为：1/10MS；(4)分化培养基为：1/2MS+IBA0.1mg/L+IAA0.1mg/L；(5)离体保存培养基为：1/2MS，以上培养基均添加蔗糖30g/L，琼脂5.8g/L固化，pH5.8，(1)(2)(3)(5)在如下培养条件下培养：培养温度23±2℃，光照强度10-20μmol/(m2·s)，光照12h/d；(4)的培养条件为：培养温度28℃，光照强度50μmol/(m2·s)，光照12h/d。
2.根据权利要求1所述的一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，其特征在于所述的外植体的获取是选择野外自然生长且发育良好，没有病虫害的成年凤丫蕨植株，剪下长有成熟孢子的叶片，通过自然脱落获得孢子，将孢子用双层擦镜纸包好，放入无菌水中浸泡6小时，然后用75％酒精消毒5-7s，再用无菌水冲洗3遍，用0.1％HgCl2水溶液进行消毒5-10min，在无菌条件下用无菌水反复水洗3遍，滤纸吸干多余水分，然后用解剖刀切开擦镜纸，通过拖带擦镜纸将孢子散落到培养基(1)中，接种90天后孢子萌发，出现原叶体的分化，在(1)培养基中继续培养，获得带根状茎的小苗。
3.根据权利要求1所述的一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，其特征在于所述的绿色球状体GGB诱导与增殖培养是(1)培养基中获得的带根状茎小苗去除须根和叶片后，接种至绿色球状体诱导培养基(2)上，每瓶接种5个外植体，15天后出现绿色突起，继续在此培养条件下继代培养2-3次，绿色突起进一步长大直至形成绿色球状体。
4.根据权利要求1所述的一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，其特征在于所述的生根培养是将获得的绿色球状体转接至生根培养基(3)中，10天后开始出现根的分化，20天后根长至1cm长，继续培养，可进一步分化出细小叶片。
5.根据权利要求1所述的一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，其特征在于所述的分化培养是将长有1-2条根、分化出小叶但仍未完全分化的绿色球状体转接至(4)培养基中进行培养，30天分化出大量的凤丫蕨小苗。
6.根据权利要求1所述的一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，其特征在于所述的离体保存是将培养基(4)中分化出的小苗转接在培养基(5)上，每瓶接种5个，小苗继续生长，继代周期2年以上。
7.根据权利要求1所述的一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，其特征在于所述的移栽是将培养基(4)中的带根小苗进行移栽，首先将瓶苗放在大棚内炼苗3-5天，然后从培养瓶中取出生根苗，洗去附着的培养基，略微晾干水分后进行移栽，移栽基质为经5％甲醛水溶液消毒过的腐殖土∶沙土＝2∶1，栽好后浇透定根水，前期视苗生长状况进行及时通风或补水处理，待试管苗长出新叶后，揭膜粗放管理。
8.根据权利要求1所述的一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法，其特征在于所述的外植体的获取是在选择野外生长发育良好，没有病虫害的成年凤丫蕨植株，剪下长有成熟孢子的叶片，装好带回实验室，通过自然脱落获得孢子，将孢子用双层擦镜纸包好，放入无菌水中浸泡6小时，然后用75％酒精消毒5-7s，再用无菌水冲洗3遍，用0.1％HgCl2水溶液进行消毒5-10min，在无菌条件下用无菌水反复水洗3遍，滤纸吸干多余水分，然后用解剖刀切开擦镜纸，通过拖带擦镜纸将孢子散落到培养基(1)中，接种90天后孢子萌发，出现原叶体的分化，在(1)培养基中继续培养；
所述的绿色球状体GGB诱导与增殖培养是将小苗去除须根和叶片后，接种至GGB诱导培养基(2)上，每瓶接种5个外植体，15天后出现绿色突起，继续在此培养条件下继代培养2-3次，绿色突起进一步长大直至形成GGB，大小约0.5cm×0.3cm绿色小球团，增殖率可达1∶6；
所述的生根培养是将获得的GGB转接至生根培养基(3)中，10天后开始出现根的分化，20天后根长至1cm长，继续培养，进一步分化出细小叶片；
所述的分化培养是将长有1-2条根、分化出小叶但仍未完全分化的GGB转接至(4)培养基中进行培养，30天即可分化出大量的凤丫蕨小苗；
所述的离体保存是将培养基(4)中分化出的小苗转接在培养基(5)上，每瓶接种5个，小苗继续生长，获得根状茎明显长长的小苗，偶尔伴生丛生小苗，在此培养条件下，继代周期延长至2年以上，延长了继代周期，缩短了继代次数，维持了种质资源的遗传性；
所用培养瓶均为白色透明玻璃瓶，直径7.5cm×高9.0cm，容积300ml；
所述的移栽是将培养基(4)中的带根小苗进行移栽，首先将瓶苗放在大棚内炼苗3-5天，然后从培养瓶中取出生根苗，洗去附着的培养基，略微晾干水分后进行移栽，移栽基质为经5％甲醛水溶液消毒过的腐殖土∶沙土＝2∶1，栽好后浇透定根水，前期视苗生长状况进行及时通风或补水处理，待试管苗长出新叶后，揭膜粗放管理，移栽成苗率80％以上。
CN201610255272.5A 2016-04-22 2016-04-22 一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法 Pending CN105850741A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610255272.5A CN105850741A (zh) 2016-04-22 2016-04-22 一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201610255272.5A CN105850741A (zh) 2016-04-22 2016-04-22 一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105850741A true CN105850741A (zh) 2016-08-17

Family

ID=56632664

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201610255272.5A Pending CN105850741A (zh) 2016-04-22 2016-04-22 一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN105850741A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108077081A (zh) * 2018-02-11 2018-05-29 珠海诺德生物科技有限公司 一种澳洲宝石种苗的组培快繁方法
CN108094206A (zh) * 2017-12-25 2018-06-01 绵阳师范学院 一种光叶蕨孢子体繁殖的培养方法
CN109302990A (zh) * 2018-12-18 2019-02-05 中国科学院昆明植物研究所 一种三色凤尾蕨组培方法及其在种质保存中的应用
CN110786243A (zh) * 2019-12-03 2020-02-14 厦门市园林植物园 一种笔筒树组织培养的繁殖方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《主要珍稀濒危树种繁殖技术》编辑委员会: "《主要珍稀濒危物种繁殖技术》", 30 June 1992, 中国林业出版社 *
韦景枫等: ""凤丫蕨组培快繁技术初报"", 《贵州林业科技》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108094206A (zh) * 2017-12-25 2018-06-01 绵阳师范学院 一种光叶蕨孢子体繁殖的培养方法
CN108077081A (zh) * 2018-02-11 2018-05-29 珠海诺德生物科技有限公司 一种澳洲宝石种苗的组培快繁方法
CN109302990A (zh) * 2018-12-18 2019-02-05 中国科学院昆明植物研究所 一种三色凤尾蕨组培方法及其在种质保存中的应用
CN110786243A (zh) * 2019-12-03 2020-02-14 厦门市园林植物园 一种笔筒树组织培养的繁殖方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104719165B (zh) 一种黑果枸杞的快速组培方法
CN104855285B (zh) 一种多倍体金线莲有机培养一次性成苗诱导方法
CN104012417B (zh) 小木漆高效快速扩繁方法
CN104813939A (zh) 一种荷花再生体系的构建方法
Debnath A scale-up system for lowbush blueberry micropropagation using a bioreactor
CN104920228A (zh) 一种宝兴百合组培快繁和离体保存方法
CN110301355A (zh) 一种墨兰组织培养方法
CN105613287B (zh) 一种法斗木莲组织快繁育苗方法
CN105850741A (zh) 一种凤丫蕨的快速繁殖和离体保存方法
CN105766654B (zh) 一种南川木菠萝组织培养方法
CN104094845B (zh) 一种神农香菊的离体培养方法
CN106172016A (zh) 一种五加皮组培快繁方法
CN103141388A (zh) 一种海葱组织培养的方法
CN107494275A (zh) 一种土茯苓组培快繁方法
CN105104206B (zh) 见血青的离体保存方法
CN104585036A (zh) 一种北美海棠高原之火腋芽的组培快繁方法
CN106069748A (zh) 美国红枫十月辉煌的商用组织培养种苗繁育方法
CN103155869A (zh) 甜樱桃砧木Colt组织培养方法
CN106171996B (zh) 一种野生白桦的快速繁殖方法
CN106577280A (zh) 一种利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗
CN108142281A (zh) 一种杜仲组织培养方法
CN106212288A (zh) 一种刨花润楠的组培繁殖方法
CN100391333C (zh) 安祖花无菌苗组织培养和试管苗炼苗移栽方法
CN103141384A (zh) 盆栽菊花的组织培养快速繁殖方法
Jahan et al. Clonal propagation of Chrysanthemum morifolium ramat using various explants obtained from field grown plants

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20160817

RJ01 Rejection of invention patent application after publication