CN103125384A - 南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法 - Google Patents

南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法，它以南海杜鹃的茎尖或一年生嫩枝带腋芽茎段作为外植体，在诱导培养基中诱导产生不定芽，再在增殖培养基中培养出所需的丛生芽，将丛生芽切割成单株植入生根培养基，经生根培养后直接栽于营养钵获得南海杜鹃种苗。本发明之方法高效、快速，通过各培养阶段的激素调节，达到提高繁殖率和减少变异的目的，可用于南海杜鹃的工厂化、规模化生产。

Description

南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法
技术领域
本发明涉及一种植物的组织培养与快速繁殖方法，尤其是南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法，属植物栽培技术领域。
背景技术
南海杜鹃为杜鹃花科杜鹃花属马银花亚属常绿杜鹃，灌木至小乔木，高1～5米，叶革质，花期4～5个月，花色紫红色，为我国特有品种，产于广东、海南等地，是为数不多的几种低海拔耐热常绿杜鹃之一，可广泛用于南方地区园林绿化，也是培养耐热常绿杜鹃的优秀亲本，野生品种极少。南海杜鹃种子量小，出苗率低，扦插困难，因此需要寻找一套新的高效可行的繁殖方法来进行繁殖，以满足市场需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法，以适应大规模生产优质种苗。
本发明以南海杜鹃一年生嫩枝茎段或茎尖作外植体，并在本发明提供的培养基中进行无菌苗诱导和增殖培养，从而建立无菌快繁体系和组培苗移栽体系，达到种苗快速繁殖和生产要求。
本发明通过下列技术方案完成：一种南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于包括下列工艺步骤：
A、将经过消毒灭菌处理的南海杜鹃外植体，即南海杜鹃一年生嫩枝的茎尖与茎段，接种到下列诱导培养基中：
WPM培养基
糖     30g/L
琼脂   4～7g/L
ZT     2～3mg/L
IAA    0.5～1mg/L
PH    5.0～5.5
在光照强度为1200～1500lx，温度为20～25℃，光周期为8～10h/d培养条件下，30～35天，外植体萌发分化成丛生芽。切下丛生芽，进入下一步骤；
B、将A步骤切下的丛生芽依次转接至下列增殖培养基中：
WPM培养基
糖    30g/L
琼脂  4～7g/L
ZT    0.5～1.2mg/L
IAA   0.1～0.3mg/L
PH    5.0～5.5
在光照强度为1200～1500lx，温度为20～25℃，光周期为8～10h/d，培养条件下，进行增殖培养，每30～35天，继代一次，得增殖倍数为2.5～3的丛生芽，如此反复进行增殖培养至所需量的丛生芽，并使丛生芽长成2～3节，高1～2cm的芽苗，切下进入下一步骤；
C、将B步骤切下的芽苗分成单株，接种到下列生根培养基上，在光照强度为1500～2000lx，温度为20～25℃，光周期为8～10h/d条件下，生根培养至芽苗长大并生根；
WPM培养基
糖    30g/L
琼脂  4～7g/L
IBA   0.5～1.5mg/L
IAA   0.5～0.8mg/L
PH    5.0～5.5
D、将上述C步骤的生根苗移至室外散射光下锻炼一周后，取出生根苗，用清水将苗上的培养基洗净，放入质量浓度为0.1％的多菌灵溶液中消毒1～2分钟，移栽到装有下列基质的的营养钵中：腐叶土∶草炭土∶珍珠岩＝2∶2∶1体积比的基质中，正常养护，即得南海杜鹃种苗。
所述A步骤对南海杜鹃外植体进行消毒灭菌处理方法为：在超净工作台中，将经过清水洗净的1～2cm茎尖或带芽茎段，依次在体积浓度为70％～75％的酒精中消毒处理20～40秒、在质量浓度为0.1％～0.15％的升汞溶液中灭菌8～15分钟、在体积浓度为1.5％～2％的次氯酸钠溶液中消毒处理15～20分钟，之后用无菌水漂洗2～3次即可。
所述酒精、升汞、次氯酸钠、无菌水、多菌灵均为市购的常规产品。
本发明在研究南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法的过程中，通过选择一年生南海杜鹃嫩枝的茎尖和带腋芽的茎段作外植体，诱导产生丛生芽，将丛生芽切割接种至继代培养基中，每30～35天转接一次，增殖倍数为2.5～3倍，芽苗增殖到适合的数量时，切割芽苗进行生根培养，生根后的组培苗直接栽于营养钵中，获得了南海杜鹃种苗高效快速繁殖的效果。具体优越性表现如下：
1、提供南海杜鹃离体组培快繁的成套技术，实现了南海杜鹃种苗的规模化、标准化生产。
2、本方法所得后代性状稳定，无明显变异。
3、本方法所得后代生长健壮，抗病能力强。
4、本方法可以很好地解决野生南海杜鹃保护与开发这一矛盾。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
实施例1
1、外植体灭菌：采集南海杜鹃一年生嫩枝，切成1厘米长的带芽茎段，用肥皂水清洗后，在超净工作台中，依次在体积浓度为75％的酒精中消毒处理20秒、在质量浓度为0.1％的升汞溶液中灭菌8分钟、在体积浓度为1.5％的次氯酸钠溶液中消毒处理8分钟，之后用无菌水漂洗3次；
2、不定芽诱导培养：将经过上述1步骤消毒灭菌的外植体在无菌工作环境中，接种到下列诱导培养基中：WPM+ZT2mg/L+IAA0.5mg/L+糖30g/L+琼脂4g/L，PH5.5，在光照强度为1200LX，培养温度为25℃，光周期为8h/d的培养条件下培养30天，有65％的外植体无污染，诱导出丛生芽，在无菌环境中切下芽丛，分成单株，将单株切成带2个节的茎段，进入下一步骤；
3、增殖培养：将上述2步骤切下的茎段在无菌环境中接种到下列增殖培养基中：WPM+ZT0.5mg/L+IAA0.1mg/L+糖30g/L+琼脂4g/L，PH5.5，在光照强度为1200LX，培养温度为25℃，光周期为8h/d的培养条件下培养35天，得增殖倍数为2.5的芽丛，在无菌环境中切下芽丛，分成单株，将单株切成带2个节的茎段，在无菌环境中，再次转接到上述增殖培养基中进行培养，如此反复多次切割、培养，增殖培养到所需芽丛数量，在无菌环境中切下芽丛，分成单株，将单株切成高1.5cm，带有茎尖，具有2个节的芽苗，进入下一步骤；
4、生根培养：在超净工作台中，将上述芽苗接种到下列生根培养基中：WPM+IBA1.5mg/L+IAA0.5mg/L+糖30g/L+琼脂4g/L，PH5.5，在光照强度为1200LX，培养温度为25℃，光周期为8h/d的培养条件下培养45天，得长高长壮的生根苗；
5、炼苗和移栽：将上述4步骤的生根苗移到室外散射光下锻炼7天，取出生根苗，用清水将苗上的培养基洗净，放入质量浓度为0.1％的多菌灵溶液中消毒1分钟，移栽到装有下列基质的的营养钵中：腐叶土∶草炭土∶珍珠岩＝2∶2∶1体积比的基质中，正常养护，60天后，即得南海杜鹃种苗。
实施例2
1、外植体灭菌：采集南海杜鹃一年生嫩枝，切成2厘米长的带芽茎段，用肥皂水清洗后，在超净工作台中，依次在体积浓度为75％的酒精中消毒处理30秒、在质量浓度为0.1％的升汞溶液中灭菌10分钟、在体积浓度为1.5％的次氯酸钠溶液中消毒处理15分钟，之后用无菌水漂洗3次；
2、不定芽诱导培养：将经过上述1步骤消毒灭菌的外植体在无菌工作环境中，接种到下列诱导培养基中：WPM+ZT2.5mg/L+IAA0.8mg/L+糖30g/L+琼脂5g/L，PH5.2，在光照强度为1500LX，培养温度为22℃，光周期为8h/d的培养条件下培养30天，有58％的外植体无污染，诱导出丛生芽，在无菌环境中切下芽丛，分成单株，将单株切成带2个节的茎段，进入下一步骤；
3、增殖培养：将上述2步骤切下的茎段在无菌环境中接种到下列增殖培养基中：WPM+ZT0.8mg/L+IAA0.2mg/L+糖30g/L+琼脂5g/L，PH5.2，在光照强度为1500LX，培养温度为22℃，光周期为8h/d的培养条件下培养35天，得增殖倍数为2.9的芽丛，在无菌环境中切下芽丛，分成单株，将单株切成带2个节的茎段，在无菌环境中，再次转接到上述增殖培养基中进行培养，如此反复多次切割、培养，增殖培养到所需芽丛数量，在无菌环境中切下芽丛，分成单株，将单株切成高1.5cm，带有茎尖，具有2个节的芽苗，进入下一步骤；
4、生根培养：在超净工作台中，将上述芽苗接种到下列生根培养基中：WPM+IBA1mg/L+IAA0.8mg/L+糖30g/L+琼脂5g/L，PH5.2，在光照强度为1500LX，培养温度为22℃，光周期为8h/d的培养条件下培养45天，得长高长壮的生根苗；
5、炼苗和移栽：将上述4步骤的生根苗移到室外散射光下锻炼7天，取出生根苗，用清水将苗上的培养基洗净，放入质量浓度为0.1％的多菌灵溶液中消毒2分钟，移栽到装有下列基质的的营养钵中：腐叶土∶草炭土∶珍珠岩＝2∶2∶1体积比的基质中，正常养护，60天后，即得南海杜鹃种苗。
实施例3
1、外植体灭菌：采集南海杜鹃一年生嫩枝，切成1厘米长的带芽茎段，用肥皂水清洗后，在超净工作台中，依次在体积浓度为70％的酒精中消毒处理40秒、在质量浓度为0.15％的升汞溶液中灭菌10分钟、在体积浓度为2％的次氯酸钠溶液中消毒处理15分钟，之后用无菌水漂洗3次；
2、不定芽诱导培养：将经过上述1步骤消毒灭菌的外植体在无菌工作环境中，接种到下列诱导培养基中：WPM+ZT3mg/L+IAA1mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L，PH5.5，在光照强度为1500LX，培养温度为20℃，光周期为10h/d的培养条件下培养35天，有76％的外植体无污染，诱导出丛生芽，在无菌环境中切下芽丛，分成单株，将单株切成带2个节的茎段，进入下一步骤；
3、增殖培养：将上述2步骤切下的茎段在无菌环境中接种到下列增殖培养基中：WPM+ZT1.2mg/L+IAA0.3mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L，PH5.5，在光照强度为1500LX，培养温度为20℃，光周期为10h/d的培养条件下培养35天，得增殖倍数为3的芽丛，在无菌环境中切下芽丛，分成单株，将单株切成带2个节的茎段，在无菌环境中，再次转接到上述增殖培养基中进行培养，如此反复多次切割、培养，增殖培养到所需芽丛数量，在无菌环境中切下芽丛，分成单株，将单株切成高1.5cm，带有茎尖，具有2个节的芽苗，进入下一步骤；
4、生根培养：在超净工作台中，将上述芽苗接种到下列生根培养基中：WPM+IBA0.5mg/L+IAA0.8mg/L+糖30g/L+琼脂7g/L，PH5.5，在光照强度为1500LX，培养温度为20℃，光周期为10h/d的培养条件下培养50天，得长高长壮的生根苗；
5、炼苗和移栽：将上述4步骤的生根苗移到室外散射光下锻炼7天，取出生根苗，用清水将苗上的培养基洗净，放入质量浓度为0.1％的多菌灵溶液中消毒1分钟，移栽到装有下列基质的的营养钵中：腐叶土∶草炭土∶珍珠岩＝2∶2∶1体积比的基质中，正常养护，60天后，即得南海杜鹃种苗。
以上公开的仅为本专利的具体实施例，但本专利并非局限于此，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，做出的变形应视为属于本发明保护范围。

Claims (2)

1.一种南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于包括下列工艺步骤：
A、将经过消毒灭菌处理的南海杜鹃茎尖或带腋芽茎段接种到下列诱导培养基上：
WPM培养基
Figure FSA00000626753900011
在光照强度为1200～1500lx，温度为20～25℃，光周期为8～10h/d培养条件下，30～35天，外植体萌发分化成丛生芽，切下丛生芽，进入下一步骤；
B、将A步骤切下的丛生芽依次转接至下列增殖培养基中：
WPM培养基
Figure FSA00000626753900012
在光照强度为1200～1500lx，温度为20～25℃，光周期为8～10h/d，培养条件下，进行增殖培养，每30～35天，继代一次，得增殖倍数为2.5～3的丛生芽，如此反复进行增殖培养至所需量的丛生芽，并使丛生芽长成2～3节，高1～2cm的芽苗，切下进入下一步骤；
C.将B步骤切下的芽苗分成单株，接种到下列生根培养基上，在光照强度为1500～2000lx，温度为20～25℃，光周期为8～10h/d条件下，生根培养至芽苗长大并生根；
WPM培养基
Figure FSA00000626753900013
Figure FSA00000626753900021
D、将上述C步骤的生根苗移至室外散射光下锻炼一周后，取出生根苗，用清水将苗上的培养基洗净，放入质量浓度为0.1％的多菌灵溶液中消毒1～2分钟，移栽到装有下列基质的的营养钵中：腐叶土∶草炭土∶珍珠岩＝2∶2∶1体积比的基质中，正常养护，即得南海杜鹃种苗。
2.如权利要求1所述的南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法，其特征在于所述A步骤的对南海杜鹃外植体进行消毒灭菌处理为：在超净工作台中，将经过清水洗净的1～2cm茎尖或带芽茎段，依次在体积浓度为70％～75％的酒精中消毒处理20～40秒、在质量浓度为0.1％～0.15％的升汞溶液中灭菌8～15分钟、在体积浓度为1.5％～2％的次氯酸钠溶液中消毒处理15～20分钟，之后用无菌水漂洗2～3次即可。
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