CN110663554A

CN110663554A - 一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法

Info

Publication number: CN110663554A
Application number: CN201911090727.2A
Authority: CN
Inventors: 胡春宏; 常苹; 王婷婷; 季翔
Original assignee: Jiangsu Dongyu Plant Technology Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Dongyu Plant Technology Co Ltd
Priority date: 2019-11-09
Filing date: 2019-11-09
Publication date: 2020-01-10

Abstract

本发明公开了一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法，属于本植物的组织培养技术领域，旨在提供一种周年化、批次化、洁净化的河桦热度拉的商业组织培养育苗方法，其技术方案要点是具体步骤如下：S1：外植体选择；S2：将外植体消毒；S3:启动培养；S4：增殖培养；S5：生根培养，其中，在所述S2中采用“白猫”牌家用漂白水与无菌水按1：4的体积比制成的漂白水对外植体消毒。本方法通过组织培养以芽繁芽的技术途径进行种苗快速繁殖，在培养过程中避免产生愈伤组织，避免了性状分离和变异，保持了母本的优良特性，种苗性状稳定。

Description

一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法

技术领域

本发明涉及木本植物的组织培养技术领域，特别涉及一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法。

背景技术

传统的河桦繁殖方法采用扦插或籽播方式进行种苗繁育，但扦插育苗受季节限制，一年中只有短暂的5～9月份可以进行相关作业；此外，扦插育苗需要从苗木上截取大量的枝条，将会影响苗木的绿化造型，严重的将直接导致截枝后的苗木无法销售，失去商业价值，最重要的是扦插育苗由于是在自然环境下作业，引起植物感染菌类和病毒，造成菌类和病毒扩散。而采用籽播方式育苗，会受到种子来源限制，此外，籽播育苗还存在严重的性状分离，很难获得性状一致的商业种苗。

目前河桦的繁殖方法主要有以下三种：

1.种子繁殖：河桦种子较小，成熟后易飞散，抗旱力弱，贮存期短，最好随采随种，播前选取饱满的种子进行温水浸泡催芽，播种时的种子密度、合理行距及覆土厚度都受不同区域的土壤和气候限制，播种后的出苗期、间苗期、成长期，均要加强水肥及病虫害、杂草等田间管理。

2.扦插育苗：每年5～9月份，剪取半木质化的嫩枝插穗，截成15cm长的插条，保留上半部，去除剩余枝叶，下端切口处蘸取配好的生根粉或生根液，插入已备好的插床上，期间管理好插床的温湿度，等插条生根后进行移植。

3.组织培养：

现有的文献报道，河桦的组织培养主要研究关于不同微扦插条件下的生根情况和不同容器对河桦组培苗生长的影响，并成功获得大量的芽和种苗。

但是上述河桦的繁殖方法都会有以下的问题存在：

1.常规的种子繁殖速度慢，需采种、选种、贮藏、催芽、播种、育苗管理等一系列较长周期的实施步骤，同时受季节的限制，播种时限较短；且种子成活率低，导致繁殖系数低；种子繁殖中，发生性状分离的概率高，难以获得性状一致的批量种苗。

2.扦插育苗过程中，插穗生根不够稳定，扦插时间短暂、扦插基质配比种类以及扦插微环境控制对生根率的影响比较大；且扦插育苗需要截取大量枝条，严重影响树势和整体景观效果；此外，植物病毒会随着扦插育苗而逐渐积累，随着扦插繁殖代数的增加，性状退化较为明显。

3.河桦组培育苗技术尚在起步，同科桦树多数是通过体细胞发生途径进行培养育苗，或直接通过愈伤组织再分化产生不定芽来进行大量扩繁，但此途径容易导致较高的遗传性状变异，商业风险较高。

发明内容

本发明的目的是提供一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法，具有实现种苗繁育工作的周年化、批次化、洁净化的优点。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法，其特征在于：具体步骤如下：

S1：外植体选择；

S2：将外植体消毒；

S3:启动培养；

S4：增殖培养；

S5：生根培养，

其中，在所述S2中采用“白猫”牌家用漂白水与无菌水按1：4的体积比制成的漂白水对外植体消毒。

通过采用上述技术方案，能够大大降低外植体的死亡率及消毒获得率。这种家用白猫牌漂白水比医用酒精、升汞、高锰酸钾、双氧水等强氧化剂安全，不需要公安部门审批。

进一步的，在S1中，剪取河桦抽出的嫩梢，从顶芽起向下截取带有4～10个腋芽茎段的枝条，去除叶片，切取单节带腋芽茎段作为外植体，每根茎段含一个腋芽，每根茎段长1.5～2cm。

进一步的，在S2中，外植体用医用酒精棉擦拭干净，立即倒入漂白水中10～20min，期间均需轻微震荡摇晃3～5次，最后用无菌水分别洗涤3次，每次漂洗2～5分钟。

通过采用上述技术方案，对外植体消毒方法简单，能够大大降低外植体的死亡率及消毒获得率。同时这种家用白猫牌漂白水比医用酒精、升汞、高锰酸钾、双氧水等强氧化剂安全，不需要公安部门审批。

进一步的，在S3中，将在S2中消毒灭菌后的外植体两端分别切除0.3～0.5cm，接入启动培养基中，在培养室暗培养一周，每天光照时间16h，黑暗8h，光强2000～3000lux，培养温度23～26℃，培养4～5周腋芽萌发，无菌苗株高2～3cm。

通过采用上述技术方案，培养4～5周的条件能够有效避免培养阶段植物材料出现应激反应，有效降低褐变强度，植物材料能够快速适应新的营养液，便于大型实验室环境控制，促使植物材料快速生长、芽体健壮。

进一步的，在S3中的启动培养基为WPM+MT 1.0～1.5mg/L+GA₃ 1.0～2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.8g/L，启动培养基的pH为5.80。

通过采用上述技术方案，该配方能够促进腋芽萌发，同时有效避免愈伤组织的产生。

进一步的，在S4中，将S3中得到的无菌外植体接种于增殖培养基中，接种后在培养室先暗培养一周，然后每天光照16h，黑暗8h，光强2000～3000lux，培养温度为23～26℃，培养4～6周可诱导产生从生芽2～4个，芽丛高度1～2cm。

通过采用上述技术方案，培养4～6周的条件能够有效避免增殖阶段植物材料出现应激反应，有效降低褐变强度，植物材料能够快速适应新的营养液，便于大型实验室环境控制，促使植物材料快速生长、芽体健壮。

进一步的，在S4中的增殖培养基为WPM+MT 0.5～1.0mg/L+GA₃1.0-2.0 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.8g/L，培养基的pH为5.80。

通过采用上述技术方案，该配方能够保障腋芽增殖人为可控，增殖倍率为3-4倍，且芽体健壮，重复性好。

进一步的，在S5中，将在S4中增殖后的外植体的顶芽切下，顶芽高度约1.5～3.0cm，接种于生根培养基中诱导生根，接种后先暗培养一周，然后每天光照16h，黑暗8h，光强2000～3000lux，培养温度为23～26℃，培养3～4周。

通过采用上述技术方案，培养3～4周的条件能够有效避免生根阶段植物材料出现应激反应，有效降低褐变强度，植物材料能够快速适应新的营养液，便于大型实验室环境控制，促使植物材料快速生长、芽体健壮。

进一步的，在S5中的生根培养基为1/2WPM+IBA 0.5～1.0mg/L+NAA 0.5～1.0mg/L+AC 0.3～0.5g/L+蔗糖15g/L+琼脂6.8g/L，生根培养基的pH为5.80。

通过采用上述技术方案，该配方能够促进植物产生的根与植物体结构相连，避免产生愈伤组织，且生长出的根短而粗壮，能够在移栽时降低损伤、提高移栽存活率。

综上所述，本发明具有以下有益效果：

1、本申请通过组织培养以芽繁芽的技术途径进行种苗快速繁殖，在培养过程中避免产生愈伤组织，避免了性状分离和变异，保持了母本的优良特性，种苗性状稳定。

2、本申请只需要少量外植体材料，不再需要采集大量枝条，避免了对成品苗木的取枝伤害；也不依赖于植物种子，能够根据订单需要按批周年生产。

3、本申请中涉及的培养基配方，能够保持3-4倍的合理增殖倍率，重复性好，性状稳定，且生产的丛生芽芽体健壮、大小一致，符合商业生产对种苗健壮度、整齐度、重复性的要求。

附图说明

图1是实施例中河桦热度拉的商业组织培养育苗方法的流程图。

具体实施方式

以下结合附图对本发明作进一步详细说明。

一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法，具体步骤如下：

S1、河桦外植体的选择：

春季4月份，选择晴天上午，剪取植株健壮、性状纯正、无病虫害的河桦刚抽出的嫩梢，从顶芽起向下截取约带4～10个腋芽茎段的枝条，去除叶片，切取单节带腋芽茎段作为外植体，每根茎段含一个腋芽，每根茎段长1.5～2cm。

S2、河桦外植体消毒：

将茎段依木质化程度分为轻微木质化和半木质化单独进行消毒。在无菌操作台上，将外植体用医用酒精棉擦拭干净，立即倒入比例为1:4的家用“白猫”漂白水（白猫牌漂白水：无菌水体积比）中10～20min，期间均需轻微震荡摇晃3—5次，最后用无菌水分别洗涤3次，每次漂洗2～5分钟。

S3、启动培养：

在操作工作台上，将消毒灭菌后的外植体两端分别切除0.3～0.5cm，接入启动培养基中，启动培养基为WPM+MT 1.0～1.5mg/L+GA₃1.0～2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.8g/L，培养基的pH为5.80。接种后在培养室暗培养一周，然后每天光照时间16h，黑暗8h，光强2000～3000lux，培养温度23～26℃，培养4～5周腋芽萌发，植株健壮，无菌苗株高约2～3cm。

S4、增殖培养：

将无菌外植体接种于增殖培养基中，增殖培养基为WPM+MT0.5～1.0mg/L+GA₃1.0～2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.8g/L，培养基的pH为5.80。接种后在培养室先暗培养一周，然后每天光照16h，黑暗8h，光强2000～3000lux，培养温度为23～26℃，培养4～6周可诱导产生从生芽2～4个，芽丛高度1～2cm，增殖率达到3～4倍。

S5、生根的培养：

增殖后将顶芽切下，高度约1.5～3.0cm，接种于生根培养基中诱导生根，生根培养基为1/2WPM+IBA0.5～1.0mg/L+NAA0.5～1.0mg/L+AC0.3～0.5g/L+蔗糖15g/L+琼脂6.8g/L，培养基的pH为5.80。接种后先暗培养一周，然后每天光照16h，黑暗8h，光强2000～3000lux，培养温度为23～26℃，培养3～4周可诱导出根，植株长高至2～3cm，健壮，主根为2～3条，长度约2～6cm。

本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims

1.一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法，其特征在于：具体步骤如下：

S1：外植体选择；

S2：将外植体消毒；

S3:启动培养；

S4：增殖培养；

S5：生根培养，

2.根据权利要求1所述的一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法，其特征在于：在S1中，剪取河桦抽出的嫩梢，从顶芽起向下截取带有4～10个腋芽茎段的枝条，去除叶片，切取单节带腋芽茎段作为外植体，每根茎段含一个腋芽，每根茎段长1.5～2cm。

3.根据权利要求1所述的一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法，其特征在于：在S2中，外植体用医用酒精棉擦拭干净，立即倒入漂白水中10～20min，期间均需轻微震荡摇晃3～5次，最后用无菌水分别洗涤3次，每次漂洗2～5分钟。

4.根据权利要求1所述的一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法，其特征在于：在S3中，将在S2中消毒灭菌后的外植体两端分别切除0.3～0.5cm，接入启动培养基中，在培养室暗培养一周，每天光照时间16h，黑暗8h，光强2000～3000lux，培养温度23～26℃，培养4～5周腋芽萌发，无菌苗株高2～3cm。

5.根据权利要求4所述的一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法，其特征在于：在S3中的启动培养基为WPM+MT 1.0～1.5mg/L+GA₃ 1.0～2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.8g/L，启动培养基的pH为5.80。

6.根据权利要求1所述的一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法，其特征在于：在S4中，将S3中得到的无菌外植体接种于增殖培养基中，接种后在培养室先暗培养一周，然后每天光照16h，黑暗8h，光强2000～3000lux，培养温度为23～26℃，培养4～6周可诱导产生从生芽2～4个，芽丛高度1～2cm。

7.根据权利要求6所述的一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法，其特征在于：在S4中的增殖培养基为WPM+MT 0.5～1.0mg/L+GA₃1.0-2.0 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.8g/L，培养基的pH为5.80。

8.根据权利要求1所述的一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法，其特征在于：在S5中，将在S4中增殖后的外植体的顶芽切下，顶芽高度约1.5～3.0cm，接种于生根培养基中诱导生根，接种后先暗培养一周，然后每天光照16h，黑暗8h，光强2000～3000lux，培养温度为23～26℃，培养3～4周。

9.根据权利要求8所述的一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法，其特征在于：在S5中的生根培养基为1/2WPM+IBA 0.5～1.0mg/L+NAA 0.5～1.0mg/L+AC 0.3～0.5g/L+蔗糖15g/L+琼脂6.8g/L，生根培养基的pH为5.80。