CN115486368A - 一种适用于茶树组织培养快速繁殖的方法以及应用 - Google Patents
一种适用于茶树组织培养快速繁殖的方法以及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115486368A CN115486368A CN202211160380.6A CN202211160380A CN115486368A CN 115486368 A CN115486368 A CN 115486368A CN 202211160380 A CN202211160380 A CN 202211160380A CN 115486368 A CN115486368 A CN 115486368A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- culture
- tissue culture
- tea
- buds
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/002—Culture media for tissue culture
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明属于茶树繁育技术领域，公开了一种适用于茶树组织培养快速繁殖的方法以及应用。所述适用于茶树组织培养快速繁殖的方法包括：将福鼎大白茶带腋芽茎段消毒后置于含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)诱导培养基中诱导腋芽分化；继代增殖培养，将萌发的外植体转接到含PVP继代增殖培养基中，诱导生长多丛芽；将多丛芽浸泡生长素后转入含PVP生根培养基中，诱导生根获得无菌种苗。本发明提供了一种福鼎大白茶组织培养快繁的方法，包括初代诱导培养，继代增殖培养和生根培养。该快繁技术能够快速高效的繁殖福鼎大白茶植株，在短时间内为生产提供大量优质幼苗，为规模化生产福鼎大白茶提供种源。因此实用性强、应用前景大。
Description
技术领域
本发明属于茶树繁育技术领域，尤其涉及一种适用于茶树组织培养快速繁殖的方法以及应用。
背景技术
福鼎大白茶原产于福建省福鼎市，至今已有140多年的栽培历史。1985年被认定为国家茶树良种并命名为‘华茶1号’，是全国主要的茶树栽培品种。其植株主干较明显，分枝较密，叶质肥厚柔软，叶色深绿，嫩芽壮实，白毫多，持嫩性强，内含物质丰富，具有高产和优质的特性。
福鼎大白茶对自然条件和土壤类型表现出广泛适用性，对干旱和寒冷也表现出优良抗性。作为茶树种质开发和抗性研究的重要资源，对茶树抗性育种和商品栽培具有重要的理论和实践价值。但福鼎大白育种时间长且具有高度杂合性、自交不亲合性、自交衰退、种性退化，为保持福鼎大白茶优良种性，采用组织培养技术进行苗木快繁。
褐化现象是组织培养过程中常见的问题之一，酚类物质是造成外植体发生褐变的重要底物，茶树中含有大量多酚类物质，外植体褐化严重，阻碍组织培养开展。
通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有技术中福鼎大白茶苗木繁殖中，易受外界环境条件的限制，繁殖系数小，育种周期长，占地面积大，经济效益不高。
发明内容
为克服相关技术中存在的问题，本发明公开实施例提供了一种适用于茶树组织培养快速繁殖的方法以及应用。具体公开一种福鼎大白茶组织培养快速繁殖的方法。本发明目的在于通过植物组培技术来进行福鼎大白茶苗木快繁，不受外界环境条件的限制，繁殖系数大，育种周期短，占地面积小，经济效益高，为茶树育种工作开创新的局面。
所述技术方案如下：该适用于茶树组织培养快速繁殖的方法包括：
适用于茶树组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，该方法包括：
S1，将白茶带腋芽茎段消毒后置于含聚乙烯吡咯烷酮PVP的诱导培养基中诱导腋芽分化；所述诱导培养基为MS溶液、2.0-6.0mg·L-16-BA溶液、 1.0-2.0mg·L-1IBA溶液、1.5-2.5g·L-1PVP溶液、30g·L-1蔗糖和8g·L-1琼脂的混合液；
S2，继代增殖培养，将萌发的外植体转接到含聚乙烯吡咯烷酮PVP继代增殖培养基中，诱导生长多丛芽；所述增殖培养基为MS溶液、0.05-0.2mg·L-1IBA 溶液、1.0-2.0mg·L-16-BA溶液、1.5-2.5g·L-1PVP溶液、30g·L-1蔗糖和8g·L-1琼脂的混合液；
S3，将多丛芽浸泡生长素后转入含聚乙烯吡咯烷酮PVP生根培养基中，诱导生根获得无菌种苗；所述生长素为IBA生长素，生根培养基为1/2MS溶液、 0.5-2.0mg·L-1IBA溶液、1.5-2.5g·L-1PVP溶液、30g·L-1蔗糖和8g·L-1琼脂的混合液。
在一个实施例中，在步骤S1中，将白茶带腋芽茎段消毒后置于含聚乙烯吡咯烷酮PVP的诱导培养基中诱导腋芽分化，具体包括：
(1)外植体选择，选用当年生无病虫害枝芽饱满的半木质化新梢作为外植体；
(2)外植体消毒，去除三分之二外植体叶片，流水清洗后，剪成短茎段，然后用消毒液浸泡，最后在无菌水中漂洗，获得消毒的外植体；
(3)初代诱导培养，将消毒的外植体接种到诱导培养基中，诱导外植体腋芽萌发。
在一个实施例中，在步骤(2)中，所述茎段含1个饱满腋芽，采用酒精和次氯酸钠消毒。
在一个实施例中，在步骤(2)中，所述消毒包括：用清水清洗茎段，然后用70％酒精处理，用2％次氯酸钠处理，最后用无菌水清洗。
在一个实施例中，在步骤(3)中，所述诱导培养基培养条件为：每天光照培养12-16h，光照强度80-100μmol·m-2·s-1，温度为25-28℃；黑暗培养8-12h，温度为23-25℃。
在一个实施例中，在步骤S2中，所述增殖培养基的培养条件为：每天光照培养14-16h，光照强度70-90μmol·m-2·s-1，温度为26-30℃；黑暗培养8-10h，温度为22-26℃。
在一个实施例中，在步骤S3中，所述生根培养基培养条件为：每天光照培养10-16h，光照强度60-90μmol·m-2·s-1，温度为24-28℃；黑暗培养8-14h，温度为23-27℃。
在一个实施例中，在步骤S3后，还需进行经过驯化培养移植大田。
在一个实施例中，所述驯化培养移植大田包括炼苗和移栽，将无菌种苗不定根长至1-3cm时，松动瓶盖2天后打开瓶盖进行炼苗，将生根组培苗从培养瓶中取出，去除根部培养基，种植于草炭土、蛭石以及珍珠岩组成的基质中。
本发明的另一目的在于提供一种所述适用于茶树组织培养快速繁殖的方法在同类物种茶树繁殖上的应用。
结合上述的所有技术方案，本发明所具备的优点及积极效果为：
第一、针对上述现有技术存在的技术问题以及解决该问题的难度，紧密结合本发明的所要保护的技术方案以及研发过程中结果和数据等，详细、深刻地分析本发明技术方案如何解决的技术问题，解决问题之后带来的一些具备创造性的技术效果，具体描述如下：本发明提供了一种福鼎大白茶组织培养快繁的方法，包括初代诱导培养，继代增殖培养和生根培养。该快繁技术能够快速高效的繁殖福鼎大白茶植株，在短时间内为生产提供大量优质幼苗，为规模化生产福鼎大白茶提供种源。因此实用性强、应用前景大。
第二、把技术方案看作一个整体或者从产品的角度，本发明所要保护的技术方案具备的技术效果和优点，具体描述如下：本发明提供的适用于茶树组织培养繁殖的方法，将福鼎大白茶带腋芽茎段消毒后置于诱导培养基中诱导腋芽分化，诱导率为38.23％。将萌发的腋芽置于增殖培养基中诱导多丛芽；诱导率 85.32％-95.97％，增殖倍数为3.59-8.78。然后将多丛芽转入生根培养基中，诱导生根获得无菌种苗，生根率为89.29％-95.68％。最后经过驯化培养移植大田。本发明简单易操作便，生产成本低、增殖倍数和生根率高，可快速促进福鼎大白茶种苗繁育和规模化生产。
附图说明
此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本公开的实施例，并与说明书一起用于解释本公开的原理。
图1是本发明实施例提供的适用于茶树组织培养快速繁殖的方法流程图；
图2(A)是本发明实施例1提供的福鼎大白茶腋芽分化图；
图2(B)是本发明对比例1提供的福鼎大白茶腋芽分化图；
图2(C)是本发明对比例2提供的福鼎大白茶腋芽分化图；
图2(D)是本发明对比例3提供的福鼎大白茶腋芽分化图；
图2(E)是本发明对比例4提供的福鼎大白茶腋芽分化图；
图2(F)是本发明对比例5提供的福鼎大白茶腋芽分化图；
图2(G)是本发明对比例6提供的福鼎大白茶腋芽分化图
图2(H)是本发明对比例7提供的福鼎大白茶腋芽分化图；
图2(I)是本发明对比例8提供的福鼎大白茶腋芽分化图；
图3(A)是本发明实施例1提供的福鼎大白茶多丛芽增殖图；
图3(B)是本发明对比例9提供的福鼎大白茶多丛芽增殖图；
图3(C)是本发明对比例10提供的福鼎大白茶多丛芽增殖图；
图3(D)是本发明对比例11提供的福鼎大白茶多丛芽增殖图；
图3(E)是本发明对比例12提供的福鼎大白茶多丛芽增殖图；
图3(F)是本发明对比例13提供的福鼎大白茶多丛芽增殖图；
图3(G)是本发明对比例14提供的福鼎大白茶多丛芽增殖图
图3(H)是本发明对比例15提供的福鼎大白茶多丛芽增殖图；
图4是本发明实施例1提供的福鼎大白茶生根图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其他方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
一、解释说明实施例
为加快福鼎大白茶良种繁育，下面以福鼎大白茶为例，对本发明实施例提供的福鼎大白茶的组织培养方法作详细描述。
如图1所示，本发明实施例提供的适用于茶树组织培养快速繁殖的方法包括以下步骤：
S101，将福鼎大白茶带腋芽茎段消毒后置于含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)诱导培养基中诱导腋芽分化；
S102，继代增殖培养，将萌发的外植体转接到含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)继代增殖培养基中，诱导生长多丛芽；
S103，将多丛芽浸泡生长素后转入含聚乙烯吡咯烷酮(PVP)生根培养基中，诱导生根获得无菌种苗。
具体地，本发明实施例提供的适用于茶树组织培养快速繁殖的方法包括以下步骤：
步骤1，外植体选择，选用当年生无病虫害枝芽饱满的半木质化新梢作为外植体。
步骤2，外植体消毒，去除三分之二外植体叶片，流水清洗后，剪成短茎段，然后用消毒液浸泡，最后在无菌水中漂洗，获得消毒的外植体。
步骤3，初代诱导培养，将消毒的外植体接种到诱导培养基中，诱导外植体腋芽萌发。
步骤4，继代增殖培养，将萌发的外植体转接到增殖培养基中，诱导生长多丛芽。
步骤5，生根培养，将多丛芽切成单芽浸泡IBA生长素后，接种至生根培养基，诱导出白色根，获得无菌种苗。
步骤6，炼苗和移栽：无菌种苗不定根长至1-3cm时，松动瓶盖2天后打开瓶盖进行炼苗，将生根组培苗从培养瓶中取出，去除根部培养基，种植于基质中。
在本发明一优选实施例中，步骤2所述茎段含1个饱满腋芽，采用酒精和次氯酸钠消毒。
在本发明一优选实施例中，步骤2所述消毒的方法具体指用清水清洗茎段，然后用70％酒精处理，用2％次氯酸钠处理，最后用无菌水清洗。
在本发明一优选实施例中，步骤2所述消毒的方法具体为：将外植体在流水下小心冲洗1-2h，然后在超净台中剪成2-3cm茎段，用无菌水清洗3次；接着用70％酒精处理60s，用无菌水清洗3-4次；再用2％次氯酸钠溶液处理25min，最后用无菌水清洗3-4次。
在本发明一优选实施例中，步骤3所述诱导培养基为MS溶液、 4.0mg·L-16-BA溶液、1.5mg·L-1IBA溶液、2.0g·L-1PVP溶液、30g·L-1蔗糖和 8g·L-1琼脂的混合液。
在本发明一优选实施例中，步骤4所述继代增殖培养基为MS溶液、 IBA0.1mg·L-1溶液、6-BA1.5mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1。
在本发明一优选实施例中，步骤5所述生根培养基为1/2MS溶液、 IBA1.0mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1。
在本发明一优选实施例中，步骤3、步骤4、步骤5中培养条件均为每天光照培养16h，光照强度90μmol·m-2·s-1条件下，温度为28℃；黑暗培养8h，温度为23℃。
在本发明一优选实施例中，步骤6中无菌种苗在生根培养基中不定根长至 1-3cm时，打开瓶盖，将自封袋倒置扣在组培瓶上保湿，室内炼苗5天后移栽至基质中，然后按照常规茶树幼苗管理方法栽培管理。
实施例1
(1)外植体预处理
选择福鼎大白茶新萌发无病虫害带腋芽茎段，将采集的茶树带腋芽茎段剪去叶片，保留在叶柄部位，0.5％洗洁精溶液浸泡50min，用流动水冲洗30min。
(2)外植体消毒
茎段消毒：将预处理的外植体移至超净工作台，用70％酒精消毒1min，无菌水清洗3-4次后，用2％次氯酸钠消毒25min，无菌水清洗5-6次。将消毒后的外植体放入带有滤纸的培养皿内(均灭菌)，吸干表面水分，剪成1.5cm长的茎段，上部平切，下部斜切，上短(1/3)下长(2/3)，插入培养基中。
(3)初代诱导培养
将消毒后的茎段接种到初代组织诱导培养基中进行培养，初代诱导培养基为MS溶液、6-BA4.0mg·L-1溶液、IBA1.5mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1溶液和琼脂8g·L-1，pH为5.6，培养30天。腋芽分化见图2A。
(4)继代增殖培养
选取的初代培养生长一致的芽，进行继代增殖培养，培养基为MS溶液、IBA0.1mg·L-1溶液、6-BA1.5mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1，pH为5.6，培养30天形成小苗(无根)，见图3A。
(5)生根培养
将步骤(4)得到的无根小苗经IBA浸泡后转接入生根培养基中培养成健壮小苗，生根培养基为1/2MS溶液、IBA1.0mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1和琼脂8g·L-1，40天后得到完整的植株，见图4。
步骤(3)、(4)和(5)中培养条件均为每天光照培养16h，光照强度 90μmol·m-2·s-1条件下，温度为28℃；黑暗培养8h，温度为23℃。
(6)炼苗和移栽：
在生根培养基生长30天后，多丛芽基部再生的不定根大约长至1-3cm时，打开瓶盖，将自封袋倒置扣在组培瓶上保湿，室内炼苗5天后，将组培苗从培养瓶中取出，洗掉根部的培养基，移栽至松软的基质中，并在幼苗上方用保鲜膜遮盖保湿，采用常规茶树幼苗管理方法栽培管理(温度可设置为26℃，湿度保持在60％以上)。
实施例2
(1)外植体的预处理
选择福鼎大白茶新萌发无病虫害带腋芽茎段，将采集的茶树带腋芽茎段剪去2/3叶片，保留在叶柄部位1/3叶片，在0.5％多菌灵溶液中浸泡30min，冲洗干净后，用流动水冲洗1h。
(2)外植体的消毒
茎段消毒：将预处理的外植体移至超净工作台，用70％酒精消毒1min，无菌水清洗3-4次后，用4％次氯酸钠消毒15min，期间不断搅拌，用无菌水清洗 5-6次。将洗净后的外植体放在带有滤纸的培养皿内(均灭菌)，吸干表面水分，剪成1.5cm长的茎段，上部平切，下部斜切，上短(1/3)下长(2/3)，插入带培养基的组培瓶中。
(3)初代诱导培养
将消毒后的茎段接种到初代组织诱导培养基中进行培养，初代诱导培养基为MS溶液、6-BA4.0mg·L-1溶液、IBA1.5mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1和琼脂8g·L-1，pH为5.6，培养30天。
(4)继代增殖培养
选取初代培养生长一致的芽，进行继代增殖培养，培养基为MS溶液、 IBA0.1mg·L-1溶液、6-BA1.5mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1，pH为5.6，培养30天后形成小苗。
(5)生根培养
将步骤(4)得到的小苗浸泡IBA后转接入生根培养基中培养成健壮小苗，生根培养基为1/2MS溶液、IBA1.0mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1。40天后得到完整的植株。
步骤(3)、(4)和(5)中培养条件均为每天光照培养16h，光照强度 90μmol·m-2·s-1条件下，温度为28℃；黑暗培养8h，温度为23℃。
(6)炼苗和移栽：
在生根培养基生长大约40天后，多丛芽基部再生的不定根大约长至1-3cm 时，打开瓶盖，将自封袋倒置扣在组培瓶上保湿，室内炼苗5天后，将组培苗从培养瓶中取出，洗掉根部的培养基，移栽至松软的基质中，并在幼苗上方用保鲜膜遮盖保湿，采用常规茶树幼苗管理方法栽培管理(温度可设置为26℃，湿度保持在60％以上)。
实施例3
(1)外植体的预处理
选择福鼎大白茶新萌发无病虫害带腋芽茎段，将采集的茶树带腋芽茎段剪去叶片，保留在叶柄部位，在0.5％洗洁精溶液中浸泡50min，冲洗干净后，用流动水冲洗1h。
(2)外植体的消毒
茎段消毒：将预处理的外植体移至超净工作台，用70％酒精消毒40秒，无菌水清洗3-4次后，用2％次氯酸钠消毒30min，期间不断搅拌，用无菌水清洗5-6次。将洗净后的外植体放在带有滤纸的培养皿内(均灭菌)，将消毒后的外植体放入带有滤纸的培养皿内(均灭菌)，吸干表面水分，剪成1.5cm长的茎段，上部平切，下部斜切，上短(1/3)下长(2/3)，插入培养基中。
(3)初代诱导培养
将消毒后的茎段接种到初代组织诱导培养基中进行培养，初代诱导培养基为MS溶液、6-BA4.0mg·L-1溶液、IBA1.5mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1和琼脂8g·L-1，pH为5.6，培养30天。
(4)继代增殖培养
选取初代培养生长一致的芽，进行继代增殖培养，培养基为MS溶液、IBA0.1mg·L-1溶液、6-BA1.5mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30·gL-1和琼脂8·gL-1，pH为5.6，培养30天后形成小苗。
(5)生根培养
将步骤(4)得到的小苗用IBA浸泡后转接入生根培养基中培养成健壮小苗，生根培养基为1/2MS溶液、IBA1.0mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1。40天后得到完整的植株。
步骤(3)、(4)和(5)中培养条件均为每天光照培养16h，光照强度 90μmol·m-2·s-1条件下，温度为28℃；黑暗培养8h，温度为23℃。
(6)炼苗和移栽：
在生根培养基生长大约40天后，多丛芽基部再生的不定根大约长至1-3cm 时，打开瓶盖，将自封袋倒置扣在组培瓶上保湿，室内炼苗5天后，将组培苗从培养瓶中取出，洗掉根部的培养基，移栽至松软的基质中，并在幼苗上方用保鲜膜遮盖保湿，采用常规茶树幼苗管理方法栽培管理(温度可设置为26℃，湿度保持在60％以上)。
对比例1
一种与实施例1相似的组培方法，区别在于，步骤(3)初代诱导培养基为 MS溶液、6-BA2.0mg·L-1溶液、IBA0.5mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1和琼脂8g·L-1。腋芽分化见图2B。
对比例2
一种与实施例1相似的组培方法，区别在于，步骤(3)初代诱导培养基为 MS溶液、6-BA2.0mg·L-1溶液、IBA1.0mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1和琼脂8g·L-1。腋芽分化见图2C。
对比例3
一种与实施例1相似的组培方法，区别在于，步骤(3)初代诱导培养基为 MS+6-BA2.0mg·L-1+IBA1.5mg·L-1+PVP2.0g·L-1+蔗糖30g·L-1+琼脂8g·L-1。腋芽分化见图2D。
对比例4
一种与实施例1相似的组培方法，区别在于，步骤(3)初代诱导培养基为 MS溶液、6-BA4.0mg·L-1溶液、IBA0.5mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1和琼脂8g·L-1。腋芽分化见图2E。
对比例5
一种与实施例1相似的组培方法，区别在于，步骤(3)初代诱导培养基为 MS溶液、6-BA4.0mg·L-1溶液、IBA1.0mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1和琼脂8g·L-1。腋芽分化见图2F。
对比例6
一种与实施例1相似的组培方法，区别在于，步骤(3)初代诱导培养基为 MS溶液、6-BA6.0mg·L-1溶液、IBA0.5mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1和琼脂8g·L-1。腋芽分化见图2G。
对比例7
一种与实施例1相似的组培方法，区别在于，步骤(3)初代诱导培养基为 MS溶液、6-BA6.0mg·L-1溶液、IBA1.0mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1和琼脂8g·L-1。腋芽分化见图2H。
对比例8
一种与实施例1相似的组培方法，区别在于，步骤(3)初代诱导培养基为 MS溶液、6-BA6.0mg·L-1溶液、IBA1.5mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1和琼脂8g·L-1。腋芽分化见图2I。
观察和统计实施例1和对比例1-8诱导外植体腋芽分化的情况，并统计诱导率和增值倍数，结果如表1所示，福鼎大白茶在不同浓度的6-BA和IBA生长素下的诱导率和增殖倍数明显不同，6-BA浓度为2.0mg·L-1，IBA生长素的浓度为1.5mg·L-1时诱导率和增殖倍数最高，分别为38.23％和0.78。
表1激素诱导福鼎大白茶腋芽分化
对比例9
一种与实施例2相似的组培方法，区别在于，步骤(4)继代增殖培养基为 MS溶液、IAA0.1mg·L-1溶液、6-BA1.5mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1和琼脂8g·L-1。多丛芽增殖见图3B。
对比例10
一种与实施例2相似的组培方法，区别在于，步骤(4)继代增殖培养基为 MS溶液、NAA0.1mg·L-1溶液、6-BA1.5mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1和琼脂8g·L-1。多丛芽增殖见图3C。
对比例11
一种与实施例2相似的组培方法，区别在于，步骤(4)继代增殖培养基为 MS溶液、IBA0.1mg·L-1溶液、6-BA1.5mg·L-1溶液、GA31.0mg·L-1溶液、 PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1。多丛芽增殖见图3D。
对比例12
一种与实施例2相似的组培方法，区别在于，步骤(4)继代增殖培养基为 MS溶液、IBA0.1mg·L-1溶液、6-BA1.5mg·L-1溶液、GA32.0mg·L-1溶液、 PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1，多丛芽增殖见图3E。
对比例13
一种与实施例2相似的组培方法，区别在于，步骤(4)继代增殖培养基为 MS溶液、IBA0.1mg·L-1溶液、6-BA1.5mg·L-1溶液、GA33.0mg·L-1溶液、 PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1。多丛芽增殖见图3F。
对比例14
一种与实施例2相似的组培方法，区别在于，步骤(4)继代增殖培养基为MS溶液、IBA0.1mg·L-1溶液、6-BA1.5mg·L-1溶液、GA34.0mg·L-1溶液、 PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1。多丛芽增殖见图3G。
对比例15
一种与实施例2相似的组培方法，区别在于，步骤(4)继代增殖培养基为 MS溶液、IBA0.1mg·L-1溶液、6-BA1.5mg·L-1溶液、GA35.0mg·L-1溶液、 PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1。多丛芽增殖见图3H。
观察和统计实施例2和对比例9-15诱导多丛芽增殖的情况，并统计诱导率和增值倍数，结果如表2所示，不同激素诱导福鼎大白茶多丛芽增殖差异比较明显，IBA生长素诱导的芽叶较大，茎较粗，IAA诱导的芽叶较小，茎较细，NAA 诱导的芽壮、叶大、茎粗壮。激素诱导福鼎大白茶多丛芽增殖的效应为 IBA>IAA>NAA，IBA生长素的诱导率和增殖倍数分别为92.5％和7.89。生长素IBA 和赤霉素GA共同诱导福鼎大白茶多丛芽的增殖倍数明显降低，芽叶小，节间长，茎细。
表2不同种类的激素诱导福鼎大白茶多丛芽增殖
对比例16
一种与实施例3相似的组培方法，区别在于，步骤(5)生根培养基为1/2MS 溶液、IAA1.0mg·L-1和蛭石。
对比例17
一种与实施例3相似的组培方法，区别在于，步骤(5)小苗用10mg·L-1的IBA浸泡5min，然后转接入生根培养基1/2MS溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1和琼脂8g·L-1。
对比例18
一种与实施例3相似的组培方法，区别在于，步骤(5)小苗用20mg·L-1的IBA浸泡5min，然后转接入生根培养基1/2MS溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1和琼脂8g·L-1。
对比例19
一种与实施例3相似的组培方法，区别在于，步骤(5)小苗用40mg·L-1的IBA浸泡5min，然后转接入生根培养基1/2MS溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖 30g·L-1和琼脂8g·L-1。
对比例20
一种与实施例3相似的组培方法，区别在于，步骤(5)小苗直接转接入生根培养基1/2MS溶液、IBA0.5mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1。
对比例21
一种与实施例3相似的组培方法，区别在于，步骤(5)小苗直接转接入生根培养基1/2MS溶液、IBA1.0mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1。
对比例22
一种与实施例3相似的组培方法，区别在于，步骤(5)小苗直接转接入生根培养基1/2MS溶液、IBA2.0mg·L-1溶液、PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1。
对比例23
一种与实施例3相似的组培方法，区别在于，步骤(5)小苗用20mg·L-1的IBA浸泡5min，然后转接入生根培养基1/2MS溶液、IBA0.5mg·L-1溶液、 PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1。
对比例24
一种与实施例3相似的组培方法，区别在于，步骤(5)小苗用20mg·L-1的IBA浸泡5min，然后转接入生根培养基1/2MS溶液、IBA2.0mg·L-1溶液、 PVP2.0g·L-1溶液、蔗糖30g·L-1和琼脂8g·L-1。
观察和统计实施例1和对比例16-24诱导多丛芽生根的情况，并统计诱导率和增值倍数，结果如表3所示，不同浓度IBA和培养基诱导福鼎大白茶多丛芽生根的效果不同，福鼎大白茶在含有IBA的琼脂固体培养基的生根率高于用 IBA浸泡多丛芽的生根率，用IBA浸泡多丛芽后再转接入含IBA的固体培养基中的生根效果更好，生根率在89.29％-95.68％。
表3生长素和培养基诱导福鼎大白茶多丛芽生根
由表1、表2和表3可知，本发明提供了一种福鼎大白茶组织培养快繁的方法，筛选出适合福鼎大白茶不定芽分化和生根的培养基，将福鼎大白茶植株的茎段分化为完整的个体，从而可以批量繁殖福鼎大白茶种苗。
在上述实施例中，对各个实施例的描述都各有侧重，某个实施例中没有详述或记载的部分，可以参见其它实施例的相关描述。
以上所述，仅为本发明较优的具体的实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种适用于茶树组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，该方法包括：
S1，将白茶带腋芽茎段消毒后置于含聚乙烯吡咯烷酮PVP的诱导培养基中诱导腋芽分化；所述诱导培养基为MS溶液、2.0-6.0mg·L-16-BA溶液、1.0-2.0mg·L-1IBA溶液、1.5-2.5g·L-1PVP溶液、30g·L-1蔗糖和8g·L-1琼脂的混合液；
S2，继代增殖培养，将萌发的外植体转接到含聚乙烯吡咯烷酮PVP继代增殖培养基中，诱导生长多丛芽；所述增殖培养基为MS溶液、0.05-0.2mg·L-1IBA溶液、1.0-2.0mg·L-16-BA溶液、1.5-2.5g·L-1PVP溶液、30g·L-1蔗糖和8g·L-1琼脂的混合液；
S3，将多丛芽浸泡生长素后转入含聚乙烯吡咯烷酮PVP生根培养基中，诱导生根获得无菌种苗；所述生长素为IBA生长素，生根培养基为1/2MS溶液、0.5-2.0mg·L-1IBA溶液、1.5-2.5g·L-1PVP溶液、30g·L-1蔗糖和8g·L-1琼脂的混合液。
2.根据权利要求1所述的适用于茶树组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤S1中，将白茶带腋芽茎段消毒后置于含聚乙烯吡咯烷酮PVP的诱导培养基中诱导腋芽分化，具体包括：
(1)外植体选择，选用当年生无病虫害枝芽饱满的半木质化新梢作为外植体；
(2)外植体消毒，去除三分之二外植体叶片，流水清洗后，剪成短茎段，然后用消毒液浸泡，最后在无菌水中漂洗，获得消毒的外植体；
(3)初代诱导培养，将消毒的外植体接种到诱导培养基中，诱导外植体腋芽萌发。
3.根据权利要求2所述的适用于茶树组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述茎段含1个饱满腋芽，采用酒精和次氯酸钠消毒。
4.根据权利要求2所述的适用于茶树组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述消毒包括：用清水清洗茎段，然后用70％酒精处理，用2％次氯酸钠处理，最后用无菌水清洗。
5.根据权利要求2所述的适用于茶树组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述诱导培养基培养条件为：每天光照培养12-16h，光照强度80-100μmol·m-2·s-1，温度为25-28℃；黑暗培养8-12h，温度为23-25℃。
6.根据权利要求2所述的适用于茶树组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤S2中，所述增殖培养基的培养条件为：每天光照培养14-16h，光照强度70-90μmol·m-2·s-1，温度为26-30℃；黑暗培养8-10h，温度为22-26℃。
7.根据权利要求2所述的适用于茶树组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤S3中，所述生根培养基培养条件为：每天光照培养10-16h，光照强度60-90μmol·m-2·s-1，温度为24-28℃；黑暗培养8-14h，温度为23-27℃。
8.根据权利要求1所述的适用于茶树组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤S3后，还需进行经过驯化培养移植大田。
9.根据权利要8所述的适用于茶树组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，所述驯化培养移植大田包括炼苗和移栽，将无菌种苗不定根长至1-3cm时，松动瓶盖2天后打开瓶盖进行炼苗，将生根组培苗从培养瓶中取出，去除根部培养基，种植于草炭土、蛭石以及珍珠岩组成的基质中。
10.一种如权利要1-9任意一项所述适用于茶树组织培养快速繁殖的方法在同类物种茶树繁殖上的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211160380.6A CN115486368A (zh) | 2022-09-22 | 2022-09-22 | 一种适用于茶树组织培养快速繁殖的方法以及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211160380.6A CN115486368A (zh) | 2022-09-22 | 2022-09-22 | 一种适用于茶树组织培养快速繁殖的方法以及应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115486368A true CN115486368A (zh) | 2022-12-20 |
Family
ID=84470031
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211160380.6A Pending CN115486368A (zh) | 2022-09-22 | 2022-09-22 | 一种适用于茶树组织培养快速繁殖的方法以及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115486368A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115623985A (zh) * | 2022-08-18 | 2023-01-20 | 山东农业大学 | 一种茶树红色愈伤组织培养的方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6548300B1 (en) * | 2001-03-20 | 2003-04-15 | Council Of Scientific & Industrial Research | One step method for micro-production of tea leaves |
| CN1985580A (zh) * | 2006-12-18 | 2007-06-27 | 江苏阳光生态农林开发股份有限公司 | 杜鹃红山茶组培快繁方法 |
| CN102422810A (zh) * | 2011-09-02 | 2012-04-25 | 安徽农业大学 | 一种茶树无性系离体再生培养的方法 |
| CN103891613A (zh) * | 2014-03-24 | 2014-07-02 | 湖北民族学院 | 一种绿风藤茶品种复壮的快速繁殖方法 |
| CN114051932A (zh) * | 2021-12-02 | 2022-02-18 | 贵州大学 | 一种以茶树带腋芽茎段为外植体建立高效快繁体系的方法 |
| CN114342804A (zh) * | 2021-12-15 | 2022-04-15 | 中南林业科技大学 | 一种光调控促进油茶带芽茎段植株再生的方法 |
-
2022
- 2022-09-22 CN CN202211160380.6A patent/CN115486368A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6548300B1 (en) * | 2001-03-20 | 2003-04-15 | Council Of Scientific & Industrial Research | One step method for micro-production of tea leaves |
| CN1985580A (zh) * | 2006-12-18 | 2007-06-27 | 江苏阳光生态农林开发股份有限公司 | 杜鹃红山茶组培快繁方法 |
| CN102422810A (zh) * | 2011-09-02 | 2012-04-25 | 安徽农业大学 | 一种茶树无性系离体再生培养的方法 |
| CN103891613A (zh) * | 2014-03-24 | 2014-07-02 | 湖北民族学院 | 一种绿风藤茶品种复壮的快速繁殖方法 |
| CN114051932A (zh) * | 2021-12-02 | 2022-02-18 | 贵州大学 | 一种以茶树带腋芽茎段为外植体建立高效快繁体系的方法 |
| CN114342804A (zh) * | 2021-12-15 | 2022-04-15 | 中南林业科技大学 | 一种光调控促进油茶带芽茎段植株再生的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 田维丽: "鸟王茶 NW32 离体快繁与再生体系建立", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》, vol. 1, no. 5, pages 047 - 419 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115623985A (zh) * | 2022-08-18 | 2023-01-20 | 山东农业大学 | 一种茶树红色愈伤组织培养的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111937746B (zh) | 一种用于再生虎克姜花植株的系列培养试剂盒及其应用 | |
| CN111616052A (zh) | 一种苹果砧木楸子的快速繁殖及无糖生根培养方法、应用 | |
| CN113661924B (zh) | 保亭花的组培快速繁殖方法 | |
| CN115316273B (zh) | 一种安吉白茶组织培养快速繁殖的方法 | |
| CN111657151A (zh) | 一种元宝枫快速成苗方法 | |
| CN112470929B (zh) | 大花红景天根颈顶端组织获得再生植株的方法 | |
| CN112243861B (zh) | 一种华盖木组培快繁方法 | |
| CN115486368A (zh) | 一种适用于茶树组织培养快速繁殖的方法以及应用 | |
| CN105123526B (zh) | 一种百日草组培繁殖的种质保存方法 | |
| CN110810242A (zh) | 一种蒜头果的快速繁殖方法 | |
| CN110663554A (zh) | 一种河桦热度拉的商业组织培养育苗方法 | |
| CN112106664B (zh) | 一种壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法 | |
| CN113875585A (zh) | 一种无刺刺梨离体快繁育苗的方法 | |
| CN108552057B (zh) | 一种黄梁木高效再生体系建立的方法 | |
| Baskaran et al. | High frequency plant regeneration from the mature seeds of Garcinia indica | |
| CN114946659B (zh) | 一种短柱铁线莲的离体快繁方法 | |
| CN113287519B (zh) | 矮生碗柱草组织培养用培养基、组织培养方法 | |
| CN109526748A (zh) | 一种白鹤芋花序组织培养方法 | |
| CN112690215B (zh) | 一种猪血木组织培养方法 | |
| CN114208680B (zh) | 一种台湾佛甲草组织培养与快速繁殖方法 | |
| CN114208665B (zh) | 布鲁堡油点百合快速繁殖方法 | |
| CN110169359B (zh) | 天女木兰的快速繁育方法 | |
| CN109156346B (zh) | 百可花腋芽微繁方法 | |
| CN107494268B (zh) | 五彩络石的组培快繁方法 | |
| Sun et al. | The Technical System of Rapid Propagation with Photinia frasery Leaves Inducing Calli, First Generation Culture, Increasing Reproduction, Rooting and Training Seedlings to Transplant |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |