CN111657151A - 一种元宝枫快速成苗方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种元宝枫快速成苗方法，尤其是元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法，属于植物快繁技术领域。本发明的方法包括：采集元宝枫当年生枝条，切割带芽茎段作为外植体，消毒后接种于外植体萌发培养基上，使芽体展叶，获得无菌苗；再将无菌苗的新生茎段置于生根培养基上，直接生根成苗，随后移栽。利用本发明的方法所获得的元宝枫组培苗健壮且生根率较高，生根率可达85％，植株根系旺盛，移栽的成活率高达98％以上，而且操作简单，成本低廉，是一种高效、简便、具有极高的推广应用价值的元宝枫离体繁育技术方法。

Description

一种元宝枫快速成苗方法
技术领域
本发明属于植物快繁技术领域，更具体地说，涉及一种元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法以及其中涉及的改良培养基。
背景技术
元宝枫(Acer truncatum Bunge)，又称元宝槭、平基槭、元宝树等，为槭树科(Aceraceae)槭属(Acer)落叶小乔木，高度可达8-13m。主要分布于我国的黄河流域、东北、内蒙古、江苏及安徽等地区。其作为我国的园林绿化的主要树种之一，除具有重要的观赏价值外，还是一种多用途的木本油料树种，种仁中含油脂约48％、蛋白质25％～27％，种皮单宁可达60％，叶中含有黄酮、绿原酸、强心苷等多种活性物质；更重要的是油脂中的脂肪酸组成中含有5-6％的神经酸，神经酸是世界公认的唯一能修复、疏通受损大脑神经纤维并促使神经细胞再生的有效物质，帮助治疗脑中风后遗症、脑萎缩、老年痴呆症等世界疾病潜力巨大。目前元宝枫油已于2011年被中华人民共和国卫生部第9号文件批准为新资源食品，且在2017年被国家林草局确定为珍贵木本油料树种，并被江苏省列入珍贵彩色树种名录。可见随着健康理念的产业发展，药食同源的元宝枫产业发展潜力巨大。因此，开展元宝枫的规模化育苗技术，发展意义重大。
元宝枫常规生产主要以播种或嫁接方式繁殖；但这两种繁殖方式均存在一定的弊端，如种苗质量受繁殖材料的影响，会出现品质退化或病虫害积累等问题。最突出的问题是常规的种苗繁殖受季节影响很大，优良遗传性状难以保持稳定，导致良种推广种植受到极大限制等问题。利用组织培养技术，可快速、大量培养具有优良遗传性状的元宝枫种苗。常规的组培苗进行炼苗移栽过程对技术要求较高，会出现移栽阶段死苗等现象，从而影响快速繁殖效果。
元宝枫的组织培养技术研究已有报道，中国专利CN201210221749.X一种元宝枫的组织培养方法，利用4-6年的元宝枫母树的当年生枝芽作为外植体，进行组织诱导培养，但并未报道该技术的移栽成活率以及育苗周期，虽然记载其具有较高生根率，然而，发明人在实际应用中发现，采用上述文献公开的方法进行育苗，幼苗生根率低、成活率低、育苗周期长。经过实际实验发现采用上述方案的生根率远低于其所报道的数值。
发明内容
针对现有技术存在的元宝枫育苗生根率低、成活率低、周期长的问题，本发明提供一种元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法。采用本发明的方法进行育苗，具有繁殖速度快、茎段腋芽生长快、生根率高的优点，既能提高元宝枫组培苗质量，又能够简化繁育流程，缩短培养周期，为元宝枫的优良品种材料保存提供有效途径。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：
一种元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法，包括如下步骤：
1)采集元宝枫当年生4月至5月初枝条作为外植体来源，切割成2-3cm的带芽茎段，作为外植体备用；
2)对外植体进行消毒处理；
3)去掉腋叶和外植体基部的切口，接种于外植体萌发培养基上，使芽体展叶，获得无菌苗；
4)将无菌苗的原生茎段或新生茎段，置于一步成苗生根培养基上，直接生根成苗，随后移栽。
进一步地，步骤2)具体为：将外植体用清洗液清洗表面2min，灭菌水清洗至清洗液洗脱干净；在超净工作台上，加入75％酒精表面消毒30s，去掉酒精，加入质量体积比为0.1％的HgCl2，消毒2-4min，震荡，使HgCl2溶液与外植体充分接触，保证消毒彻底，去掉消毒液，用无菌水清洗4-5次，置于灭菌纸上，吸干表面水分。优选的，所述清洗液为洗衣粉溶液或洗洁精溶液或皂液或其它具有表面活性的溶液。更优选的，所述清洗液浓度为0.001％-2％(m/v)。
进一步地，步骤3)中所述的外植体萌发培养基具体为：改良NN69+0.2mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。
进一步地，步骤4)中所述一步成苗生根培养基具体为：改良NN69+0.4mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂+0.5g/L活性炭，pH为5.8。
进一步地，所述改良NN69培养基组成包括：600-800mg/L NH4NO3,800-1000mg/LKNO3,100-300mg/L MgSO4,50-100mg/L KH2PO4,100-300mg/L CaCl2·2H2O,10-50mg/LNa2·EDTA·2H2O；10-50mg/L FeSO4·7H2O,1-10mg/L H3BO3,0.01-1mg/L Na2MoO4·2H2O,0.01-0.5mg/L CuSO4·5H2O,1-50mg/L MnSO4·4H2O,1-50mg/L ZnSO4·7H2O,0.001-0.5mg/L生物素H，1-20mg/L烟酸，0.1-10mg/L盐酸硫胺素，0.1-10mg/L盐酸吡哆醇，1-50mg/L肌醇，0.1-10mg/L甘氨酸，0.1-10mg/L叶酸。
进一步地，步骤2)中外植体萌发培养的培养条件为：光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃。
进一步地，步骤3)中外植体萌发培养的培养条件为：光照强度为2000-2500Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃。
进一步地，步骤4)中所述移栽方法包括以下步骤：
a.生根培养10-15天后，将培养瓶的封口塑料膜摘下，敞开瓶口1-2天，将小植株从培养瓶中取出，洗净附着的培养基；
b.a步骤所获得的小植株用25％的多菌灵溶液浸泡2分钟，移栽至温室大棚装有营养土的营养钵中，保证新移栽的种苗所处环境湿度为90％左右，温度控制在25-30℃，常规水肥管理，移栽成苗。
进一步地，所述的营养土包括：泥炭土、珍珠岩和蛭石，三者按7:2:1重量比混合，移栽前一周用20％多菌灵溶液消毒。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
本发明通过采用带芽茎段作外植体，以及使用特定的萌发培养基和生根培养基，使外植体先展叶成苗再生根，随后即可移栽，可谓一步诱导成苗，既提高了元宝枫组培苗的质量，同时也省去常规的愈伤组织诱导、丛生芽诱导、丛生芽生根等繁琐步骤，从而大大缩短了培养周期。本发明提供的方法所获得的元宝枫组培苗健壮且生根率较高，生根率达85％，植株根系旺盛，移栽的成活率高达98％以上，而且操作简单，成本低廉，是一种高效、简便、具有极高的推广应用价值的元宝枫离体繁育技术方法。
附图说明
图1为元宝枫组织培养过程图；A：外植体培养期；B：新生叶芽及茎段移栽；C1：一步成苗生根诱导；C2：生长健壮的新生根；D：移栽成活的元宝枫苗。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。
每个处理设置4次重复，每次重复初始样本量为60株外植体。
实施例1：
一种元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法，包括以下步骤：
1、无菌苗的获得：
1)材料选取：采集元宝枫当年生枝条作为外植体来源，切割成2-3cm的带芽茎段，作为外植体备用；
2)外植体处理：将外植体用洗衣粉溶液清洗表面2min，所述洗衣粉溶液浓度为0.05％，灭菌水清洗至洗衣粉溶液洗脱干净。在超净工作台上，加入75％酒精表面消毒30s，去掉酒精，加入质量体积比为0.1％的HgCl2，消毒2-4min，震荡，使HgCl2溶液与外植体充分接触，保证消毒彻底，去掉消毒液，用无菌水清洗4-5次，置于灭菌纸上，吸干表面水分；
3)外植体萌发培养：去掉腋叶和芽体基部的切口，接种于外植体萌发培养基上，调查外植体的展叶时间(所述展叶时间是指样本第一片叶片展开至样本所有叶片展开的时间区间，下同)。25-30天后，芽体展叶，获得无菌苗；
2、一步成苗诱导
在超净工作台中将无菌苗的茎段或新生腋芽，置于生根培养基上，30天后仍未见肉眼可见的不定根。由于无菌苗未能生根，无法进行栽培步骤。
以上所述萌发培养基为：MS基本培养基+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
无菌苗获得方法中，接种材料培养条件为：光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃；
一步成苗生根培养基为：1/2MS基本培养基+0.2mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂+0.5g/L活性炭，pH为5.8；
一步成苗生根培养过程的培养条件为：光照强度为2000-2500Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃。
实施例2：
一种元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法，包括以下步骤：
1、无菌苗的获得：
1)材料选取：采集元宝枫当年生枝条作为外植体来源，切割成2-3cm的带芽茎段，作为外植体备用；
2)外植体处理：首先将外植体用洗衣粉溶液清洗表面2min，所述洗衣粉溶液浓度为0.05％，灭菌水清洗至洗衣粉溶液洗脱干净。在超净工作台上，加入75％酒精表面消毒30s，去掉酒精，加入质量体积比为0.1％的HgCl2，消毒2-4min，震荡，使HgCl2溶液与外植体充分接触，保证消毒彻底，去掉消毒液，用无菌水清洗4-5次，置于灭菌纸上，吸干表面水分；
3)外植体萌发培养：去掉腋叶和芽体基部的切口，接种于外植体萌发培养基上，20-25天后，芽体展叶，获得无菌苗；
2、一步成苗诱导
在超净工作台中将无菌苗的茎段或新生腋芽，置于生根培养基上，20-30天，可见肉眼可见的不定根。30天调查无菌苗的生根情况，计算样本生根率(生根率＝生根的组培苗数/全部的组培苗数(接种苗数)×100％，下同)。该处理生根率为15.0％，待55天左右，不定根生长健壮，满足移栽条件后，准备移栽。
3、移栽
将培养瓶的封口塑料膜摘下，敞开瓶口1-2天，将诱导生根的小苗从培养瓶中取出，洗净附着的培养基；
小苗用25％多菌灵溶液浸泡2分钟，移栽至温室大棚装有营养土的营养钵中，保证新移栽的种苗所处环境湿度为90％左右，温度控制在25-30℃，常规水肥管理，移栽成苗，15天后统计成活率(成活率＝移栽成活的数量/总移栽的数量×100％，下同)，该处理成活率77.8％。
以上所述萌发培养基为：MS基本培养基+0.2mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
无菌苗获得方法中，接种材料培养条件为：光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃；
一步成苗生根培养基为：1/2MS基本培养基+0.4mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂+0.5g/L活性炭，pH为5.8；
一步成苗生根培养过程的培养条件为：光照强度为2000-2500Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃；
移栽营养土包括：泥炭土、珍珠岩和蛭石，三者按重量比7:2:1比例混合，移栽前一周用20％的多菌灵溶液消毒。
实施例3：
一种元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法，包括以下步骤：
1、无菌苗的获得：
1)材料选取：采集元宝枫当年生枝条作为外植体来源，切割成2-3cm的带芽茎段，作为外植体备用；
2)外植体处理：首先将外植体用洗衣粉溶液清洗表面2min，所述洗衣粉溶液浓度为0.05％，灭菌水清洗至洗衣粉溶液洗脱干净。在超净工作台上，加入75％酒精表面消毒30s，去掉酒精，加入质量体积比为0.1％的HgCl2，消毒2-4min，震荡，使HgCl2溶液与外植体充分接触，保证消毒彻底，去掉消毒液，用无菌水清洗4-5次，置于灭菌纸上，吸干表面水分；
3)外植体萌发培养：去掉腋叶和芽体基部的切口，接种于外植体萌发培养基上，芽体生长缓慢，25-30天后展叶，获得无菌苗；
2、一步成苗诱导
在超净工作台中将无菌苗的茎段或新生腋芽，置于生根培养基上，20-30天，出现肉眼可见的不定根，生根率为56.7％；待40天左右，不定根生长健壮，满足移栽条件后，准备移栽。
3、移栽
将培养瓶的封口塑料膜摘下，敞开瓶口1-2天，将诱导生根的小苗从培养瓶中取出，洗净附着的培养基；
小苗用25％多菌灵溶液浸泡2分钟，移栽至温室大棚装有营养土的营养钵中，保证新移栽的种苗所处环境湿度为90％左右，温度控制在25-30℃，常规水肥管理，移栽成苗，15天后统计成活率97.0％。
以上所述萌发培养基为：改良NN69+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
无菌苗获得方法中，接种材料培养条件为：光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃；
一步成苗生根培养基为：改良NN69+0.4mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂+0.5g/L活性炭，pH为5.8；
改良NN69培养基的具体组成包括：540mg/L NH4NO3，712.5mg/L KNO3，138.75mg/LMgSO4，51mg/L KH2PO4，124.5mg/L CaCl2·2H2O，37.3mg/L Na2·EDTA·2H2O，27.8mg/LFeSO4·7H2O，3mg/L H3BO3，0.25mg/L Na2MoO4·2H2O，0.08mg/L CuSO4·5H2O，19mg/LMnSO4·4H2O，10mg/L ZnSO4·7H2O，0.05mg/L生物素H，5mg/L烟酸，0.5mg/L盐酸硫胺素，0.5mg/L盐酸吡哆醇，10mg/L肌醇，2mg/L甘氨酸，0.5mg/L叶酸。
一步成苗生根培养过程的培养条件为：光照强度为2000-2500Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃；
移栽营养土成分包括：泥炭土、珍珠岩和蛭石，三者按重量比7:2:1比例混合，移栽前一周用20％的多菌灵消毒。
实施例4：
一种元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法，包括以下步骤：
1、无菌苗的获得：
1)材料选取：采集元宝枫当年生枝条作为外植体来源，切割成2-3cm的带芽茎段，作为外植体备用；
2)外植体处理：首先将外植体用洗衣粉溶液清洗表面2min，所述洗衣粉溶液浓度为0.05％，灭菌水清洗至洗衣粉溶液洗脱干净。在超净工作台上，加入75％酒精表面消毒30s，去掉酒精，加入质量体积比为0.1％的HgCl2，消毒2-4min，震荡，使HgCl2溶液与外植体充分接触，保证消毒彻底，去掉消毒液，用无菌水清洗4-5次，置于灭菌纸上，吸干表面水分；
3)外植体萌发培养：去掉腋叶和芽体基部的伤口，接种于外植体萌发培养基上，10-15天后，芽体展叶，生长健壮，获得无菌苗；
2、一步成苗诱导
在超净工作台中将无菌苗的茎段或新生腋芽，置于生根培养基上，20-30天，出现肉眼可见的不定根，生根率为45.0％；待40天左右，不定根生长健壮，满足移栽条件后，准备移栽。
3、移栽
将培养瓶的封口塑料膜摘下，敞开瓶口1-2天，将诱导生根的小苗从培养瓶中取出，洗净附着的培养基；
小苗用25％多菌灵溶液浸泡2分钟，移栽至温室大棚装有营养土的营养钵中，保证新移栽的种苗所处环境湿度为90％左右，温度控制在25-30℃，常规水肥管理，移栽成苗，15天后统计成活率96.3％。
以上所述萌发培养基为：改良NN69+0.2mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
无菌苗获得方法中，接种材料培养条件为：光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃；
一步成苗生根培养基为：改良NN69+0.2mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂+0.5g/L活性炭，pH为5.8；
改良NN69培养基的具体组成包括：540mg/L NH4NO3，712.5mg/L KNO3，138.75mg/LMgSO4，51mg/L KH2PO4，124.5mg/L CaCl2·2H2O，37.3mg/L Na2·EDTA·2H2O，27.8mg/LFeSO4·7H2O，3mg/L H3BO3，0.25mg/L Na2MoO4·2H2O，0.08mg/L CuSO4·5H2O，19mg/LMnSO4·4H2O，10mg/L ZnSO4·7H2O，0.05mg/L生物素H，5mg/L烟酸，0.5mg/L盐酸硫胺素，0.5mg/L盐酸吡哆醇，10mg/L肌醇，2mg/L甘氨酸，0.5mg/L叶酸。
一步成苗生根培养过程的培养条件为：光照强度为2000-2500Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃；
移栽营养土包括：泥炭土、珍珠岩和蛭石，三者按重量比7:2:1比例混合，移栽前一周用多菌灵消毒。
实施例5：
一种元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法，包括以下步骤：
1、无菌苗的获得：
1)材料选取：采集元宝枫当年生枝条作为外植体来源，切割成1.5-2cm的带芽茎段，作为外植体备用；
2)外植体处理：首先将外植体用洗衣粉溶液清洗表面2min，所述洗衣粉溶液浓度为0.05％，灭菌水清洗数次至洗衣粉溶液洗净。在超净工作台上，加入75％酒精表面消毒30s，倒出酒精，加入质量体积比为0.1％的HgCl2，消毒2-4min，震荡，使HgCl2溶液与外植体充分接触，保证消毒彻底，倒出消毒液，用无菌水清洗4-5次，置于灭菌纸上，吸干表面水分；
3)外植体萌发培养：去掉腋叶和芽体基部的切口，接种于外植体萌发培养基上，10-15天后，芽体展叶，生长健壮，获得无菌苗；
1、一步成苗诱导
在超净工作台中将无菌苗的茎段或新生腋芽，置于生根培养基上，10-15天，即可出现肉眼可见的不定根，生根率为85.0％；待35天左右，不定根生长健壮，满足移栽条件后，准备移栽。
3、移栽
将培养瓶的封口塑料膜摘下，敞开瓶口1-2天，将诱导生根的小苗从培养瓶中取出，洗净附着的培养基；
小苗用25％多菌灵溶液浸泡2分钟，移栽至温室大棚装有营养土的营养钵中，保证新移栽的种苗所处环境湿度为90％左右，温度控制在25-30℃，常规水肥管理，移栽成苗，15天后统计成活率98.0％。
以上所述萌发培养基为：改良NN69+0.2mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
无菌苗获得方法中，接种材料培养条件为：光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃；
一步成苗生根培养基为：改良NN69+0.4mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂+0.5g/L活性炭，pH为5.8；
改良NN69培养基的具体组成包括：540mg/L NH4NO3，712.5mg/L KNO3，138.75mg/LMgSO4，51mg/L KH2PO4，124.5mg/L CaCl2·2H2O，37.3mg/L Na2·EDTA·2H2O，27.8mg/LFeSO4·7H2O，3mg/L H3BO3，0.25mg/L Na2MoO4·2H2O，0.08mg/L CuSO4·5H2O，19mg/LMnSO4·4H2O，10mg/L ZnSO4·7H2O，0.05mg/L生物素H，5mg/L烟酸，0.5mg/L盐酸硫胺素，0.5mg/L盐酸吡哆醇，10mg/L肌醇，2mg/L甘氨酸，0.5mg/L叶酸。
一步成苗生根培养过程的培养条件为：光照强度为2000-2500Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃；
移栽营养土成分为：泥炭土、珍珠岩、蛭石按重量比7:2:1比例混合，移栽前一周用多菌灵消毒。
实施例6：
一种元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法，包括以下步骤：
1、无菌苗的获得：
1)材料选取：采集元宝枫当年生枝条作为外植体来源，切割成2-3cm的带芽茎段，作为外植体备用；
2)外植体处理：首先将外植体用洗衣粉溶液清洗表面2min，所述洗衣粉溶液浓度为0.05％，灭菌水清洗至洗衣粉溶液洗脱干净。在超净工作台上，加入75％酒精表面消毒30s，去掉酒精，加入质量体积比为0.1％的HgCl2，消毒2-4min，震荡，使HgCl2溶液与外植体充分接触，保证消毒彻底，去掉消毒液，用无菌水清洗4-5次，置于灭菌纸上，吸干表面水分；
3)外植体萌发培养：去掉腋叶和芽体基部的切口，接种于外植体萌发培养基上，10-15天后，芽体展叶，获得无菌苗；
2、一步成苗诱导
在超净工作台中将无菌苗的茎段或新生腋芽，置于生根培养基上，20-30天，出现肉眼可见的不定根，生根率为68.3％；待35天左右，不定根生长健壮，满足移栽条件后，准备移栽。
3、移栽
将培养瓶的封口塑料膜摘下，敞开瓶口1-2天，将诱导生根的小苗从培养瓶中取出，洗净附着的培养基；
小苗用25％多菌灵溶液浸泡2分钟，移栽至温室大棚装有营养土的营养钵中，保证新移栽的种苗所处环境湿度为90％左右，温度控制在25-30℃，常规水肥管理，移栽成苗，15天后统计成活率95.1％。
以上所述萌发培养基为：改良NN69+0.2mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；
无菌苗获得方法中，接种材料培养条件为：光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃；
一步成苗生根培养基为：改良NN69+0.6mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂+0.5g/L活性炭，pH为5.8；
改良NN69培养基的具体组成包括：540mg/L NH4NO3，712.5mg/L KNO3，138.75mg/LMgSO4，51mg/L KH2PO4，124.5mg/L CaCl2·2H2O，37.3mg/L Na2·EDTA·2H2O，27.8mg/LFeSO4·7H2O，3mg/L H3BO3，0.25mg/L Na2MoO4·2H2O，0.08mg/L CuSO4·5H2O，19mg/LMnSO4·4H2O，10mg/L ZnSO4·7H2O，0.05mg/L生物素H，5mg/L烟酸，0.5mg/L盐酸硫胺素，0.5mg/L盐酸吡哆醇，10mg/L肌醇，2mg/L甘氨酸，0.5mg/L叶酸。
一步成苗生根培养过程的培养条件为：光照强度为2000-2500Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃；
移栽营养土成分包括：泥炭土、珍珠岩和蛭石，三者按重量比7:2:1比例混合，移栽前一周用20％的多菌灵消毒。
实施例7：
参照文献CN102726295A实施例方法进行。在采集元宝枫当年生枝条作为外植体，将外植体用50％的丙醇漂洗45～60秒，再用15％双氧水再消毒4～5分钟，再用无菌水清洗多遍。然后取出消毒后的外植体，在无菌滤纸上进行切段，外植体切段后每段长0.8～1.2cm，切段并接种到培养基中。培养基的组成为：MS+2.0mg/L 6-BA+0.6mg/L NAA，每升培养基中加入35～45g蔗糖和20～25g琼脂。组织诱导培养在pH 5.6～5.8，20～24℃的环境下进行，光照强度1500lux，每天18小时光照6小时黑暗。
25-35天后，芽体展叶，获得无菌苗。
在超净工作台中将无菌苗的茎段或新生腋芽，置于生根培养基上，生根培养基为：1/2MS基本培养基+0.2mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂+0.5g/L活性炭，pH为5.8。培养在20～24℃的环境下进行，光照强度1500Lx，每天18小时光照6小时黑暗。
35-40天后，出现肉眼可见的不定根，但生根率仅为为6.7％；待55天左右，不定根生长健壮，满足移栽条件后，准备移栽。
3、移栽
将培养瓶的封口塑料膜摘下，敞开瓶口1-2天，将诱导生根的小苗从培养瓶中取出，洗净附着的培养基；
小苗用25％多菌灵浸泡2分钟，移栽至温室大棚装有营养土的营养钵中，保证新移栽的种苗所处环境湿度为90％左右，温度控制在25-30℃，常规水肥管理，移栽成苗，15天后统计成活率75％以上。
表1不同组成的萌发培养基获得的芽体展叶时间
Figure BDA0002602621220000111
不同实施例比较结果表明：通过添加适量浓度的IBA可有效加快外植体中芽体展叶的生长速度，且使用改良后的NN69基本培养基要比MS基本培养基效果更好。
表2在不同组成的生根培养基上的生根情况及移栽后的成活情况
Figure BDA0002602621220000121
不同实施例比较结果表明：本发明通过培养方式和培养方法的创新，大大缩短了培养周期，且操作简单，成本低廉。添加不同浓度的IBA生长素可有效提高元宝枫种苗的生根率，但浓度过高，生根率反而降低；通过改良后的NN69基本培养基显著提高了元宝枫组培苗的生根率，植株根系旺盛，移栽成活率高。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但不应解释为对本申请保护范围的限制。

Claims (9)

1.一种元宝枫快速成苗方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)元宝枫外植体的制备；2)对外植体进行消毒处理；3)消毒后的外植体培养，获得无菌苗；4)无菌苗生根培养获得成苗，移栽。
2.一种元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)采集元宝枫当年生枝条作为外植体来源，切割成合适长度的带芽茎段，作为外植体备用；
2)对步骤1)获得的外植体进行消毒处理；
3)步骤2)处理后的外植体去掉腋叶和芽体基部的切口，外植体接种于萌发培养基上，使芽体展叶，获得无菌苗；
4)将步骤3)获得的无菌苗的新生茎段，置于生根培养基上，直接生根成苗，随后移栽。
3.根据权利要求2所述的元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法，其特征在于，步骤2)具体为：将外植体用洗衣粉溶液清洗表面2min，灭菌水清洗至洗衣粉溶液洗脱干净；在超净工作台上，加入75％酒精表面消毒30s，去掉75％酒精，加入质量体积比为0.1％的HgCl2，消毒2-4min，震荡，使HgCl2溶液与外植体充分接触，保证消毒彻底，去掉消毒液，用无菌水清洗4-5次，置于灭菌纸上，吸干表面水分。
4.根据权利要求2所述的元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法，其特征在于，步骤3)所述的外植体萌发培养基为：改良NN69+0.2mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。
5.根据权利要求2所述的元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法，其特征在于，步骤4)所述生根培养基为：改良NN69+0.4mg/L IBA+20.0g/L蔗糖+6.0g/L琼脂+0.5g/L活性炭，pH为5.8。
6.根据权利要求2所述的元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法，其特征在于，步骤3)中外植体萌发培养的培养条件为：光照强度为1500-2000Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃。
7.根据权利要求2所述的元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法，其特征在于，步骤4)中外植体生根的培养条件为：光照强度为2000-2500Lx，光照时间为12h/d，培养室温度控制在23-25℃。
8.根据权利要求2所述的元宝枫嫩枝茎段试管内一步快速成苗方法，其特征在于，步骤4)所述移栽方法包括以下步骤：
a.生根培养10-15天后，将培养瓶的封口塑料膜摘下，敞开瓶口1-2天，将小植株从培养瓶中取出，洗净附着的培养基；
b.a步骤获得的小植株用25％的多菌灵溶液浸泡2分钟，移栽至温室大棚装有营养土的营养钵中，保证新移栽的种苗所处环境湿度为90％左右，温度控制在25-30℃，常规水肥管理，移栽成苗。
9.一种用于元宝枫快速育苗的培养基，其特征在于，所述培养基的成分包括：600-800mg/L NH4NO3，800-1000mg/L KNO3，100-300mg/L MgSO4，50-100mg/L KH2PO4，100-300mg/L CaCl2·2H2O，10-50mg/L Na2·EDTA·2H2O，10-50mg/L FeSO4·7H2O，1-10mg/L H3BO3，0.01-1mg/L Na2MoO4·2H2O，0.01-0.5mg/L CuSO4·5H2O，1-50mg/L MnSO4·4H2O，1-50mg/LZnSO4·7H2O，0.001-0.5mg/L生物素H，1-20mg/L烟酸，0.1-10mg/L盐酸硫胺素，0.1-10mg/L盐酸吡哆醇，1-50mg/L肌醇，0.1-10mg/L甘氨酸和0.1-10mg/L叶酸。
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