CN114208680B - 一种台湾佛甲草组织培养与快速繁殖方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种台湾佛甲草组织培养与快速繁殖方法，本发明采用采样前预防性杀菌消毒手段，使外植体带菌率降低50％左右，大大提高了外植体的消毒效果；所用试剂均为低成本试剂，生根培养基无需添加任何植物激素，同样达到其他组培技术一样的生根效果，降低了生产成本，同时减少了配制难度；本发明所采用的接种外植体用培养基配方，可以使外植体不经过愈伤阶段直接再生出新芽，缩短了增殖时间，提高了增殖效率，为工厂化生产极大降低了时间成本。

Description

一种台湾佛甲草组织培养与快速繁殖方法

技术领域

本发明涉及一种台湾佛甲草组织培养与快速繁殖方法。

背景技术

台湾佛甲草(学名：Sedum formosanum N.E.Br.)，为景天科佛甲草属的一种多年生草本植物。该种四季常绿，冠幅较大，适合做花镜、地被，也可盆栽家养。花叶俱美，观赏效果极佳。然而台湾佛甲草种子细小，播种发芽率较低，扦插繁殖成活率不高且容易传播病害，严重制约了其在园林市场的应用。利于植物组织培养技术开展台湾佛甲草的繁育，不仅能大幅提高繁殖系数，还能替代占用大量土地面积的资源圃。

发明内容

本发明提供一种快速繁殖新型地被植物台湾佛甲草的方法，通过该方法，可以在较短时间内低成本、高效率获得大量组培苗，供应市场。

一种台湾佛甲草组织培养与快速繁殖方法，包括以下步骤：

S1、材料选择与预处理：选择生长健壮、无病虫害的植株作为母株，优选的，于采样前一周，隔天使用50％的甲基托布津1000倍液对取样母株进行喷洒，以减少母株体内携带的内生菌，从而优化外植体的消毒效果。取样时，剪取顶端幼嫩茎段，去除残叶，湿布包裹备用。

S2、外植体消毒处理：将取回的幼嫩茎段放入含有10％洗衣粉的水中浸泡5分钟，过程中轻轻搓揉，以去除茎段上的杂物。随后将外植体放入1L玻璃烧杯中，置于自来水下流水冲洗30min，随后采用1000倍多菌灵溶液浸泡10min，蒸馏水冲洗5-10次，将清洗过的外植体转移到已预灭菌30min的超净工作台上。置于70-75％酒精中，晃动30秒，立即倒掉酒精，并用灭菌水清洗1遍；然后将外植体置于0.1％升汞溶液中，摇动7-8分钟，倒掉升汞溶液，用灭菌水冲洗3遍，倒掉灭菌水，用无菌滤纸吸干备用。

S3、诱导培养基的配制：诱导培养基的配方为MS+6BA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L。

S4、外植体接种：将B步骤处理完毕的外植体剪成长约2厘米左右的茎段，然后按照生长极性接种入诱导培养基上进行培养，密封。

S5、继代和生根培养：外植体在初代培养基上经过30-40天会从基部不经过愈伤，直接分化出新芽群，待新芽长至2厘米左右，就可以将新芽剥离，置于新的培养基上进行二次增殖，每30天更换一次培养基。增殖培养基的配方为MS+6BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L。将地上部分形态健全，高为2-3厘米左右的小芽转移入生根培养基上进行生根培养，平均25天左右发育完成，形成完整植株，即可炼苗移栽。生根培养基配方是1/2MS+蔗糖30g/L+琼脂8g/L。

S6、炼苗移栽：生根完成的无菌苗，移入温室大棚，松开瓶盖，使瓶苗与外界环境相适应，三天后可进行移栽。移栽时，将苗子连同培养基取出放入配有1000倍多菌灵的盆中，洗去培养基，随后用流水冲洗干净。适当修剪苗子基部叶片，准备移栽。移栽基质采用细泥炭和珍珠岩、蛭石按照体积比3:1:1混合，先将含水量质量百分比80％左右的基质装填入穴盘，然后用镊子将洗净的苗子移入基质，种植完毕喷淋浇水，塑料薄膜覆盖保湿，20-30℃之间缓苗，15天左右即可成活并撤掉覆盖物。

本发明所达到的有益效果是：台湾佛甲草目前尚未有成功的组培快繁报道，本方法为首次公开；本发明采用采样前预防性杀菌消毒手段，使外植体带菌率降低50％左右，大大提高了外植体的消毒效果；

本发明所采用的接种外植体用培养基配方，可以使外植体不经过愈伤阶段直接再生出新芽，缩短了增殖时间，提高了增殖效率，为工厂化生产极大降低了时间成本。本发明所用试剂均为低成本试剂，生根培养基无需添加任何植物激素，同样达到其他组培技术一样的生根效果，降低了生产成本，同时减少了配制难度。

具体实施方式

以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例

一种台湾佛甲草组织培养与快速繁殖方法，包括以下步骤：

S1、材料选择与预处理：选择生长健壮、无病虫害的植株作为母株，于采样前一周，隔天使用50％的甲基托布津1000倍液对取样母株进行喷洒，以减少母株体内携带的内生菌，从而优化外植体的消毒效果。取样时，剪取顶端幼嫩茎段，去除残叶，湿布包裹备用。

S2、外植体消毒处理：将取回的幼嫩茎段放入含有10％洗衣粉的水中浸泡5分钟，过程中轻轻搓揉，以去除茎段上的杂物。随后将外植体放入1L玻璃烧杯中，置于自来水下流水冲洗30min，随后采用1000倍多菌灵溶液浸泡10min，蒸馏水冲洗5-10次，将清洗过的外植体转移到已预灭菌30min的超净工作台上。置于70-75％酒精中，晃动30秒，立即倒掉酒精，并用灭菌水清洗1遍；然后将外植体置于0.1％升汞溶液中，摇动7-8分钟，倒掉升汞溶液，用灭菌水冲洗3遍，倒掉灭菌水，用无菌滤纸吸干备用。

S3、诱导培养基的配制：诱导培养基的配方为MS+6BA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L。

S4、外植体接种：将B步骤处理完毕的外植体剪成长约2厘米左右的茎段，然后按照生长极性接种入诱导培养基上进行培养，密封。

S5、继代和生根培养：外植体在初代培养基上经过30-40天会从基部不经过愈伤，直接分化出新芽群，待新芽长至2厘米左右，就可以将新芽剥离，置于新的培养基上进行二次增殖，每30天更换一次培养基。增殖培养基的配方为MS+6BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L。将地上部分形态健全，高为2-3厘米左右的小芽转移入生根培养基上进行生根培养，平均25天左右发育完成，形成完整植株，即可炼苗移栽。生根培养基配方是1/2MS+蔗糖30g/L+琼脂8g/L。

S6、炼苗移栽：生根完成的无菌苗，移入温室大棚，松开瓶盖，使瓶苗与外界环境相适应，三天后可进行移栽。移栽时，将苗子连同培养基取出放入配有1000倍多菌灵的盆中，洗去培养基，随后用流水冲洗干净。适当修剪苗子基部叶片，准备移栽。移栽基质采用细泥炭和珍珠岩、蛭石按照体积比3:1:1混合，先将含水量质量百分比80％左右的基质装填入穴盘，然后用镊子将洗净的苗子移入基质，种植完毕喷淋浇水，塑料薄膜覆盖保湿，20-30℃之间缓苗，15天左右即可成活并撤掉覆盖物。

预防性杀菌消毒处理对比实验：

取40盆健壮、无病虫害的台湾佛甲草作为组培工厂化生产母本苗，其中20盆母株于采样前一周，隔天使用50％的甲基托布津1000倍液进行喷洒，另20盆进行常规养护管理。从两个不同处理的母本群各取200个外植体进行无菌化处理，每瓶接种一个茎段，10天后统计无菌处理成活率。结果证明，外植体预处理将无菌化成活率由37％提高至84％，提高近50％。该方法大大优化了外植体无菌处理成活率。

设置梯度实验发现，在不添加任何植物激素的MS基础培基上，接种15天后台湾佛甲草也能缓慢生根，尝试使用1/2MS培养基，降低盐离子浓度后，生根速度更快、生根质量(根长、根粗)更佳，一般10天左右出根。满足工厂化生产需求。于时，设定生根培养基配方为1/2MS+蔗糖30g/L+琼脂8g/L。这与多肉多浆植物易生根的特性相符合。

梯度实验证实，在添加6BA1.5mg/L、NAA0.1mg/L的增殖培养基上，台湾佛甲草能不经过愈伤组织分化，而以类似微型扦插的形式直接从茎基、叶腋处抽生出小芽，形成多枝多芽的小灌木结构，接种25天时统计增殖效率达12，相比传统植物组织培养继代、增殖时外植体脱分化、再分化时长达两月之久的繁索的生产过程，此法大大节省了生产时间且很好的保持了原种的优良性状。

将增殖培养基上台湾佛甲草长达2cm左右的茎段转接至生根培养基上进行生根培养，约10天左右抽发新根，25天时植株形态完整、长势良好。统计平均根数为6条，根长为2.5cm。

生根完成的无菌苗炼苗移栽15天后揭去覆盖物，统计成活率高达97％，生活率较高。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种台湾佛甲草组织培养与快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、材料选择与预处理：选择生长健壮、无病虫害的植株作为母株，采样前一周，预防性杀菌消毒，取样时，剪取顶端幼嫩茎段，去除残叶，湿布包裹备用；

S2、外植体消毒处理：将取回的幼嫩茎段放入含有洗衣粉的水中浸泡，过程中轻轻搓揉，以去除茎段上的杂物，随后将外植体放入玻璃烧杯中，置于自来水下流水冲洗一段时间，随后采用多菌灵溶液浸泡，蒸馏水冲洗5-10次，将清洗过的外植体转移到超净工作台上，置于70-75％酒精中，晃动30秒，立即倒掉酒精，并用灭菌水清洗1遍；然后将外植体置于0.1％升汞溶液中，摇动7-8分钟，倒掉升汞溶液，用灭菌水冲洗3遍，倒掉灭菌水，用无菌滤纸吸干备用；

S3、诱导培养基的配制；

S4、外植体接种：将S2处理完毕的外植体剪成长段，然后按照生长极性接种入诱导培养基上进行培养，密封；

S5、继代和生根培养：外植体在初代培养基上分化出新芽群，新芽剥离，置于新的培养基上进行二次增殖，将地上部分形态健全，高为2-3厘米的小芽转移入生根培养基上进行生根培养，成完整植株，即可炼苗移栽；

S6、炼苗移栽：生根完成的无菌苗，移入温室大棚，松开瓶盖，使瓶苗与外界环境相适应，三天后可进行移栽；移栽时，将苗子连同培养基取出放入配多菌灵的盆中，洗去培养基，随后用流水冲洗干净；适当修剪苗子基部叶片，准备移栽；

预防性杀菌消毒的方法为隔天使用50％的甲基托布津1000倍液对取样母株进行喷洒；

诱导培养基的配方为MS+6BA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L；

增殖培养基的配方为MS+6BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8g/L；

生根培养基配方是1/2MS+蔗糖30g/L+琼脂8g/L；

移栽基质采用细泥炭和珍珠岩、蛭石按照体积比3:1:1混合，先将基质装填入穴盘，然后用镊子将洗净的苗子移入基质，种植完毕喷淋浇水，塑料薄膜覆盖保湿，20-30℃之间缓苗，成活后撤掉覆盖物。