CN109380120A - 一种栗子的组织培养技术 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种栗子的组织培养技术，栗子又名板栗，我国东此、华南、华北、西南、西北有产。其中北京的延庆盛产，培育催芽有的要用水浸透催芽，有的用物理手段打启种子，有些要经过发酵或者鸡采食后排出的排泄物浸泡发芽。涉及栗子通过离体快繁技术获得优质种苗的育苗方法，以栗子带芽茎段为外植体，经过外植体消毒、丛生芽诱导、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了栗子组织培养快速繁殖体系，加速栗子良种的推广和资源开发利用具有重要的现实意义。

Description

一种栗子的组织培养技术

技术领域

本发明涉及植物生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种栗子的组织培养技术。

背景技术

栗子又名板栗，我国东此、华南、华北、西南、西北有产。其中北京的延庆盛产，培育催芽有的要用水浸透催芽，有的用物理手段打启种子，有些要经过发酵或者鸡采食后排出的排泄物浸泡发芽。板栗刚采下立即播种，发芽困难，发芽水平低，须经过1~3个月的后期成熟之后，气温在14度时，才开始发芽。栗子大小相对以致种子中等、名熟、成熟期轮晚的为宜，即每千克120~160粒，且发芽率都在85%以上。小晚熟品种在9月下旬至10月成熟时，气温已低，种子生理活动减少，耐贮藏。

栗子长期以来供不应求，加上人为的掠夺式砍伐导致栗子野生资源枯竭，因此有必要对其资源进行保护。近年来，栗子资源开发有了一定的规模，在江西、湖北、广东、福建等建立了GAP种植基地，对栗子野生资源保护工作起到了一定的促进作用。目前栗子主要通过种子进行种苗繁殖，但由于种子繁殖后代性状发生分离，不利于优质种质资源保护，制约了优质栗子的推广种植。因此，有必要建立栗子的组织培养技术，为其良种快速繁殖提供技术支撑和保障，也为满足我国对栗子种苗的需求，加速其资源扩充具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供出一种栗子的组织培养技术，本发明以栗子带芽茎段为外植体，经过外植体消毒、丛生芽诱导、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了栗子组织培养快速繁殖体系，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种栗子的组织培养技术，包括以下的步骤：

步骤1，丛生芽诱导：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的带芽茎段作为外植体,用洗洁精水溶液浸泡16min，然后用自来水冲洗42min，擦干表面水分后备用,在超净工作台中以70%乙醇浸泡18s，0.1%升汞溶液消毒35min，再用无菌水清洗10次，擦干后切成长度为2cm的茎段接种到诱导培养基上,先在30℃条件下全暗培养32天，然后置于每天光照18小时，光照强度为1200lx，培养温度为30℃条件下培养，直至诱导形成丛生芽；诱导培养基为：MS+6mg/L6-BA+2mg/L NAA+0.9mmol/L La(NO₃)₂+4.9%蔗糖+1.2%琼脂+0.25%活性炭，pH值为5.8;

步骤2，增殖培养：将步骤1所得的丛生芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在30℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照18小时，光照强度为1200lx，培养温度为30℃的条件下培养直至各丛生芽伸长到8cm；增殖培养基为：MS+3mg/L6-BA+0.9mg/L NAA+4.1%蔗糖+0.9%琼脂+0.4%活性炭，pH值为5.8;

步骤3，生根培养：将步骤1或步骤2所获得的高度约为6cm的丛生芽芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在30℃条件下全暗培养12天，然后置于每天光照18小时，光照强度为2100lx，培养温度为30℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+4mg/LNAA+4.5%蔗糖+1.1%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.8;

步骤4，炼苗移栽：栗子瓶内生根35天后，置于自然光照下炼苗12天后，洗净根部培养基，移栽由黄心土：河沙＝3：1混合成的基质中。

与现有技术相比本发明的优点是：本发明通过离体快繁技术获得优质种苗的育苗方法。以栗子带芽茎段为外植体，经过外植体消毒、丛生芽诱导、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了栗子组织培养快速繁殖体系，加速栗子良种的推广和资源开发利用具有重要的现实意义。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1：

（1）丛生芽诱导：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的带芽茎段作为外植体,用洗洁精水溶液浸泡9min，然后用自来水冲洗13min，擦干表面水分后备用。在超净工作台中以75%乙醇浸泡9s，0.1%升汞溶液消毒15min，再用无菌水清洗8次，擦干后切成长度为4.0cm的茎段接种到诱导培养基上,先在26℃条件下全暗培养22天，然后置于每天光照18小时，光照强度为1200x，培养温度为26℃条件下培养45天即可诱导形成丛生芽，诱导率为70%。所述诱导培养基为MS+3mg/L6-BA+0.7mg/L NAA+0.2mmol/L La(NO₃)₂+3.6%蔗糖+0.6%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.7。

（2）增殖培养：将步骤（1）所得的丛生芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在26℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照18小时，光照强度为1200lx，培养温度为26℃的条件下培养38天各丛生芽即可伸长到8cm，增殖率为5.0。所述增殖培养基为MS+2mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+3.6%蔗糖+0.5%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.7。

（3）生根培养：将步骤（1）或步骤（2）所获得的高度约为6cm的丛生芽芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在26℃条件下全暗培养8天，然后置于每天光照10小时，光照强度为2500lx，培养温度为26℃的条件下培养40天即可生根，生根率为75%。

（4）炼苗移栽：栗子瓶内生根20天后，置于自然光照下炼苗8天后，洗净根部培养基，移栽由黄心土：河沙=3：1混合成的基质中。移栽成活率为89%。

实施例2：

（1）丛生芽诱导：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的带芽茎段作为外植体,用洗洁精水溶液浸泡15min，然后用自来水冲洗25min，擦干表面水分后备用。在超净工作台中以75%乙醇浸泡13s，0.1%升汞溶液消毒18min，再用无菌水清洗16次，擦干后切成长度为5.0cm的茎段接种到诱导培养基上,先在26℃条件下全暗培养25天，然后置于每天光照21小时，光照强度为1600x，培养温度为26℃条件下培养45天即可诱导形成丛生芽，诱导率为76%。所述诱导培养基为MS+7mg/L6-BA+1.0mg/L NAA+0.5mmol/L La(NO₃)₂+5.5%蔗糖+1.5%琼脂+1.2%活性炭，pH值为5.6。

（2）增殖培养：将步骤（1）所得的丛生芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在26℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照19小时，光照强度为2100lx，培养温度为26℃的条件下培养31天各丛生芽即可伸长到8cm，增殖率为7。所述增殖培养基为MS+1.8mg/L6-BA+0.9mg/L NAA+5.8%蔗糖+1.3%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.6。

（3）生根培养：将步骤（1）或步骤（2）所获得的高度约为6cm的丛生芽芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在26℃条件下全暗培养8天，然后置于每天光照20小时，光照强度为2100lx，培养温度为26℃的条件下培养35天即可生根，生根率为91.9%。

（4）炼苗移栽：栗子瓶内生根32天后，置于自然光照下炼苗9天后，洗净根部培养基，移栽由黄心土：河沙=2：1混合成的基质中。移栽成活率为92%。

Claims (1)

1.一种栗子的组织培养技术，其特征在于包括以下步骤：

步骤1，丛生芽诱导：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的带芽茎段作为外植体,用洗洁精水溶液浸泡16min，然后用自来水冲洗42min，擦干表面水分后备用,在超净工作台中以70%乙醇浸泡18s，0.1%升汞溶液消毒35min，再用无菌水清洗10次，擦干后切成长度为2cm的茎段接种到诱导培养基上,先在30℃条件下全暗培养32天，然后置于每天光照18小时，光照强度为1200lx，培养温度为30℃条件下培养，直至诱导形成丛生芽；诱导培养基为：MS+6mg/L6-BA+2mg/L NAA+0.9mmol/L La(NO₃)₂+4.9%蔗糖+1.2%琼脂+0.25%活性炭，pH值为5.8;

步骤2，增殖培养：将步骤1所得的丛生芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在30℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照18小时，光照强度为1200lx，培养温度为30℃的条件下培养直至各丛生芽伸长到8cm；增殖培养基为：MS+3mg/L6-BA+0.9mg/L NAA+4.1%蔗糖+0.9%琼脂+0.4%活性炭，pH值为5.8;

步骤3，生根培养：将步骤1或步骤2所获得的高度约为6cm的丛生芽芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在30℃条件下全暗培养12天，然后置于每天光照18小时，光照强度为2100lx，培养温度为30℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+4mg/LNAA+4.5%蔗糖+1.1%琼脂+0.3%活性炭，pH值为5.8;

步骤4，炼苗移栽：栗子瓶内生根35天后，置于自然光照下炼苗12天后，洗净根部培养基，移栽由黄心土：河沙＝3：1混合成的基质中。