CN105340734B - 明月草组织培养快速繁殖培养基及组织培养快速繁殖方法 - Google Patents
明月草组织培养快速繁殖培养基及组织培养快速繁殖方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105340734B CN105340734B CN201510663256.5A CN201510663256A CN105340734B CN 105340734 B CN105340734 B CN 105340734B CN 201510663256 A CN201510663256 A CN 201510663256A CN 105340734 B CN105340734 B CN 105340734B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- culture
- sucrose
- tissue
- medium
- angelica keiskei
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 241001105098 Angelica keiskei Species 0.000 title claims abstract description 35
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 title claims abstract description 34
- 238000009395 breeding Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 238000012258 culturing Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract description 14
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 33
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 33
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 32
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 32
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 32
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 29
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 20
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 claims description 12
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000012879 subculture medium Substances 0.000 claims description 8
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 6
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 5
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 229910021580 Cobalt(II) chloride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- LKDRXBCSQODPBY-VRPWFDPXSA-N D-fructopyranose Chemical compound OCC1(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-VRPWFDPXSA-N 0.000 claims description 4
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 4
- 229910004619 Na2MoO4 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910052927 chalcanthite Inorganic materials 0.000 claims description 4
- RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M chloromercury Chemical compound [Hg]Cl RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 4
- 229910052564 epsomite Inorganic materials 0.000 claims description 4
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 4
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims description 4
- 230000001795 light effect Effects 0.000 claims description 4
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 229910000357 manganese(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 4
- 229910052603 melanterite Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 claims description 4
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 claims description 4
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 claims description 4
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000011684 sodium molybdate Substances 0.000 claims description 4
- TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N sodium molybdate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 4
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 4
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 claims description 4
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 claims description 4
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011686 zinc sulphate Substances 0.000 claims description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 3
- TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N Carbendazim Natural products C1=CC=C2NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 TWFZGCMQGLPBSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- JNPZQRQPIHJYNM-UHFFFAOYSA-N carbendazim Chemical compound C1=C[CH]C2=NC(NC(=O)OC)=NC2=C1 JNPZQRQPIHJYNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000006013 carbendazim Substances 0.000 claims description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 3
- 239000012533 medium component Substances 0.000 claims description 3
- 239000005842 Thiophanate-methyl Substances 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 claims description 2
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 claims description 2
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 claims description 2
- QGHREAKMXXNCOA-UHFFFAOYSA-N thiophanate-methyl Chemical group COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC QGHREAKMXXNCOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical compound OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000010923 batch production Methods 0.000 abstract description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000012286 potassium permanganate Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000012090 tissue culture technique Methods 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- DQFBYFPFKXHELB-UHFFFAOYSA-N Chalcone Natural products C=1C=CC=CC=1C(=O)C=CC1=CC=CC=C1 DQFBYFPFKXHELB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000288027 Chrysolophus pictus Species 0.000 description 1
- PQMOXTJVIYEOQL-UHFFFAOYSA-N Cumarin Natural products CC(C)=CCC1=C(O)C(C(=O)C(C)CC)=C(O)C2=C1OC(=O)C=C2CCC PQMOXTJVIYEOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001558017 Gynura Species 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- FSOGIJPGPZWNGO-UHFFFAOYSA-N Meomammein Natural products CCC(C)C(=O)C1=C(O)C(CC=C(C)C)=C(O)C2=C1OC(=O)C=C2CCC FSOGIJPGPZWNGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N Terfenadine Chemical compound C1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1C(O)CCCN1CCC(C(O)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)CC1 GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 241000372906 Vahlodea Species 0.000 description 1
- 230000001387 anti-histamine Effects 0.000 description 1
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 1
- 235000005513 chalcones Nutrition 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000027119 gastric acid secretion Effects 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 description 1
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- DQFBYFPFKXHELB-VAWYXSNFSA-N trans-chalcone Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 DQFBYFPFKXHELB-VAWYXSNFSA-N 0.000 description 1
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开了明月草组织培养快速繁殖培养基及组织培养快速繁殖方法，方法包括外植体消毒、腋芽诱导培养、继代培养、生根培养和移栽技术。本发明的组培配方是明月草大量扩繁的最佳组合，增殖系数达到5‑6倍，生根率和移栽成活率均在95％以上。本发明弥补了传统育苗技术的一些不足，提高了繁殖系数，缩短繁殖周期，并解决季节性限制问题，建立的规模化生产体系稳定、苗木品质高，生产周期只需一个半月左右，满足了种苗繁育的工厂化需求。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养技术领域，特别是涉及明月草组织培养快速繁殖培养基及组织培养快速繁殖方法。
背景技术
明月草(Angelica keiskei koidzumi)又称金鸡毛草，属菊科菊三七属，为宿根多年生长常绿直立草本植物，原产于新加坡。明月草含有多种天然活性物质，特别是富含特有物质查尔酮及香豆素(尹慧丹等，2011)，全草可入药，具有增强人体免疫力、舒张血管、抑制胃酸分泌、抗血栓、降血糖、降血压、抗组胺、防癌变等功效(Enoki T,et al.,2007)。近年来，明月草又成为人们喜爱的一种蔬菜，主要食用茎叶，食法多样，可炒食、炸食、凉拌，氽汤或做成茶汁，其具有独特的芳香，可解鱼、肉的腥膻味，茎叶煮水后食味柔滑，口感清爽。
明月草以分株或扦插繁殖为主，多在每年3-5月进行，但受季节影响较大，且繁殖系数和出苗率低，难以满足规模化生产的需求。组织培养繁殖速度快，所产种苗为脱毒苗，因此，采用组织培养技术是实现对明月草规模化繁殖的有效途径。国内利用组织培养技术繁育明月草的研究尚未见报道。
发明内容
为了解决上述的技术问题，本发明的一个目的是建立一种有效的明月草组织培养快速繁殖方法，提高繁殖系数，缩短繁殖周期，并解决季节性限制问题。本发明的另一个目的是提供上述明月草组织培养快速繁殖培养基。
本发明的技术方案如下：
明月草组织培养快速繁殖培养基，包括腋芽诱导培养基、继代培养基、壮苗培养基和生根培养基，其中：
腋芽诱导培养基为MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8；
继代培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+AD0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8；
壮苗培养基为MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8；
生根培养基为1/2MS0+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8。
本发明所述的MS基本培养基成分构成如下：
(1)大量元素：KNO31260mg/L、NH4NO31320mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MgSO4·7H2O370mg/L、KH2PO4170mg/L、FeSO4·7H2O 427.8mg/L、EDTA-2Na 37.3mg/L；
(2)微量元素：MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、H3PO36.2mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L；
(3)有机物：C6H12O6·2H2O(肌醇)100mg/L、NH2CH2COOH(甘氨酸)2.0mg/L、C8H11O3N·HCl(盐酸吡哆醇)0.5mg/L、NC5H4COOH(烟酸)0.5mg/L、C12H17C10S·2HCL(盐酸硫胺素)0.1mg/L；
余量为蒸馏水。
所述1/2MS基本培养基的成分为：大量元素是MS基本培养基的一半，其余成分微量元素、铁盐、有机成分与MS基本培养基相同。
所述的MS0培养基成分构成如下：
(1)大量元素：KNO31260mg/L、NH4NO31320mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MgSO4·7H2O370mg/L、KH2PO4170mg/L、FeSO4·7H2O 855.6mg/L、EDTA-2Na 37.3mg/L；
(2)微量元素：MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、H3PO36.2mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L；
(3)有机物：C6H12O6·2H2O(肌醇)100mg/L、NH2CH2COOH(甘氨酸)2.0mg/L、C8H11O3N·HCl(盐酸吡哆醇)0.5mg/L、NC5H4COOH(烟酸)0.5mg/L、C12H17C10S·2HCL(盐酸硫胺素)0.1mg/L。
明月草组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：
步骤1，外植体的选择：春季以明月草母株上带有潜伏芽的新发枝条为外植体；
步骤2，外植体的消毒：剪去枝条叶片，用自来水冲洗2-3分钟，再用洗洁精洗涤1-2次，接着用自来水冲洗3-5分钟，再在超净工作台上以0.1％HgCl2溶液消毒8-12分钟，最后用无菌水冲洗4-5遍，沥干后待用；
步骤3，腋芽诱导培养：将消毒好的枝条切除茎尖，余下的枝条剪成每段带有1-2个腋芽的茎段，接种到腋芽诱导培养基上放进培养室进行无菌培养，腋芽诱导培养基为MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8，MS培养基经高压灭菌15-20分钟，培养条件为温度25-30℃，光照强度1500-2000lx，每日光照12小时条件下培养，接种后5天腋芽开始萌动，当15-20天伸长至2±0.5cm时，即可进入继代培养；
步骤4，继代培养：将步骤3中获得的不定芽进行继代培养，培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+AD0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8，MS培养基经高压灭菌15-20分钟，培养条件为温度25-30℃，光照强度1500-2000lx，每日光照12-14小时条件下培养，培养7-10天，待丛生芽长至1.5-2cm时进行壮苗培养；
步骤5，壮苗培养：将继代苗切下接种进行壮苗培养，培养基为MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8，温度、光照条件同步骤4，培养10天，将长至3-4cm的幼苗转至生根培养；
步骤6，生根培养：将步骤5中获得的幼苗进行生根培养，培养基为1/2MS0+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8，培养条件同步骤4，培养两周当生根条数达到6条以上，平均根长0.5cm以上时便用清水将根部琼脂清洗干净进行移栽；
步骤7，移栽与管护：育苗棚具有一定遮阴效果和通风条件，移栽基质选用黄心土，苗床提前1天用0.15％KMnO4消毒(袋苗需将黄心土装袋后移栽前一天喷淋0.15％KMnO4消毒液)，生根苗移栽后用清水淋透，用塑料薄膜覆盖，以后每隔一周喷施800-1000倍甲基托布津或1000倍多菌灵药液，连续喷3-4次，20天后逐步通风，并移除遮盖物。
本发明明月草组织培养快速繁殖方法中所述的高压灭菌，优选压力为1.1kg/cm2。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
1、本发明建立了以茎段为外植体的明月草组织培养快速繁殖方法，一个培养周期内的增殖系数达到5-6倍，生根率和移栽成活率均达到95％以上。
2、本发明克服了传统繁殖方式受季节与气候限制的不足，有效提高了明月草的繁殖系数，缩短了繁殖周期，并解决季节性限制问题，建立的规模化生产体系稳定、苗木品质高，生产周期只需一个半月左右，满足了种苗繁育的工厂化需求，为该物种的保存及产业化提供了可靠、高效的繁殖方法。
附图说明
图1为明月草茎段诱导。
图2为明月草丛生芽。
图3为明月草生根苗。
图4为明月草移栽袋苗。
图5为苗床明月草小苗。
具体实施方式
下面以实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施
例。实施例1：
明月草组织培养快速繁殖培养基，包括腋芽诱导培养基、继代培养基、壮苗培养基和生根培养基，配制方法为：
腋芽诱导培养基为MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5，经1.1kg/cm2高压灭菌20分钟；
继代培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+AD0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.8，经1.1kg/cm2高压灭菌20分钟；
壮苗培养基为MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.8，经1.1kg/cm2高压灭菌20分钟；
生根培养基为1/2MS0+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.8，经1.1kg/cm2高压灭菌20分钟。
实施例2：
明月草组织培养快速繁殖培养基，包括腋芽诱导培养基、继代培养基、壮苗培养基和生根培养基，配制方法为：
腋芽诱导培养基为MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.8，经1.1kg/cm2高压灭菌15分钟；
继代培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+AD0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5，经1.1kg/cm2高压灭菌15分钟；
壮苗培养基为MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5，经1.1kg/cm2高压灭菌15分钟；
生根培养基为1/2MS0+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5，经1.1kg/cm2高压灭菌15分钟。
实施例3：
明月草组织培养快速繁殖方法：
(1)外植体的选择：春季以明月草母株上带有潜伏芽的新发枝条为外植体；
(2)外植体的消毒：剪去枝条叶片，用自来水冲洗2-3分钟，再用洗洁精洗涤1-2次，接着用自来水冲洗5分钟，再在超净工作台上以0.1％HgCl2溶液消毒10分钟，最后用无菌水冲洗5遍，沥干后待用；
(3)腋芽诱导培养：将消毒好的枝条切除茎尖，余下的枝条剪成每段带有1-2个腋芽的茎段，接种到诱导培养基上放进培养室进行无菌培养，培养基为MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3g/L，pH5.6，MS培养基经1.1kg/cm2高压灭菌20分钟，培养条件为温度25-30℃，光照强度1500-2000lx，每日光照12小时条件下培养；接种后5天腋芽开始萌动，当15-20天伸长至2±0.5cm时，即可进入继代培养；
(4)继代培养：将步骤3中获得的不定芽进行继代培养，培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+AD0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3.6g/L，pH5.6，MS培养基经1.1kg/cm2高压灭菌15-20分钟，培养条件为温度25-30℃，光照强度1500-2000lx，每日光照12-14小时条件下培养，培养7-10天，待丛生芽长至1.5-2cm时进行壮苗培养；
(5)壮苗培养：将继代苗切下接种至MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉4g/L，pH5.6，温度、光照条件同步骤4，培养10天左右，将长至3-4cm的幼苗转至生根培养基；
(6)生根培养：将步骤5中获得的幼苗转至1/2MS01L+蔗糖30g/L+琼脂粉4g/L，pH5.6的培养基中进行生根培养，培养条件同步骤4，培养两周左右当生根条数达到6条以上，长度0.5cm以上时便可用清水将根部琼脂清洗干净进行移栽；
(7)移栽与管护：移栽基质选用黄心土，育苗棚应具有一定遮阴效果和通风条件，苗床需提前1天用0.15％KMnO4消毒，生根苗移栽后用清水淋透，以后每隔一周喷施适量800-1000倍甲基托布津，连续喷3次，20天后逐步通风，并移除遮盖物。
实施例4：
明月草组织培养快速繁殖方法：
(1)外植体的选择：春季以明月草母株上带有潜伏芽的新发枝条为外植体；
(2)外植体的消毒：剪去枝条叶片，用自来水冲洗3分钟，再用洗洁精洗涤1次，接着用自来水冲洗3-5分钟，再在超净工作台上以0.1％HgCl2溶液消毒12分钟，最后用无菌水冲洗5遍，沥干后待用；
(3)腋芽诱导培养：将消毒好的枝条切除茎尖，余下的枝条剪成每段带有1-2个腋芽的茎段，接种到诱导培养基上放进培养室进行无菌培养，培养基为MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3.6g/L，pH5.6，MS培养基经1.1kg/cm2高压灭菌20分钟，培养条件为温度25-30℃，光照强度1500-2000lx，每日光照12小时条件下培养；接种后5天腋芽开始萌动，当培养18天左右伸长至2±0.5cm时，即可进入继代培养；
(4)继代培养：将步骤3中获得的不定芽进行继代培养，培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+AD0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3g/L，pH5.6，MS培养基经1.1kg/cm2高压灭菌20分钟，培养条件为温度25-30℃，光照强度1500-2000lx，每日光照12-14小时条件下培养，培养一周左右，待丛生芽长至1.5-2cm时进行壮苗培养；
(5)壮苗培养：将继代苗切下接种至MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3.6g/L，pH5.6，温度、光照条件同步骤4，培养10天左右，将长至3-4cm的幼苗转至生根培养基；
(6)生根培养：将步骤5中获得的幼苗转至1/2MS0+蔗糖30g/L+琼脂粉4g/L，pH5.6的培养基中进行生根培养，培养条件同步骤4，培养两周左右当生根条数达到6条以上，长度0.5cm以上时便可用清水将根部琼脂清洗干净进行移栽；
(7)移栽与管护：移栽基质选用黄心土，育苗棚应具有一定遮阴效果和通风条件，苗床需提前1天用0.15％KMnO4消毒，生根苗移栽后用清水淋透，以后每隔一周喷施适量1000倍多菌灵药液，连续喷4次，20天后逐步通风，并移除遮盖物。
Claims (3)
1.明月草组织培养快速繁殖培养基，其特征在于：包括腋芽诱导培养基、继代培养基、壮苗培养基和生根培养基，其中：
腋芽诱导培养基为MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8；
继代培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+AD0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8；
壮苗培养基为MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8；
生根培养基为1/2MS0+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8；
所述的MS0培养基成分构成如下：
(1)大量元素：KNO3 1260mg/L、NH4NO3 1320mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MgSO4·7H2O370mg/L、KH2PO4 170mg/L、FeSO4·7H2O 855.6mg/L、EDTA-2Na 37.3mg/L；
(2)微量元素：MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、H3PO3 6.2mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L；
(3)有机物：C6H12O6·2H2O(肌醇)100mg/L、NH2CH2COOH(甘氨酸)2.0mg/L、C8H11O3N·HCl(盐酸吡哆醇)0.5mg/L、NC5H4COOH(烟酸)0.5mg/L、C12H17C10S·2HCL(盐酸硫胺素)0.1mg/L。
2.明月草组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1，外植体的选择：春季以明月草母株上带有潜伏芽的新发枝条为外植体；
步骤2，外植体的消毒：剪去枝条叶片，用自来水冲洗2-3分钟，再用洗洁精洗涤1-2次，接着用自来水冲洗3-5分钟，再在超净工作台上以0.1％HgCl2溶液消毒8-12分钟，最后用无菌水冲洗4-5遍，沥干后待用；
步骤3，腋芽诱导培养：将消毒好的枝条切除茎尖，余下的枝条剪成每段带有1-2个腋芽的茎段，接种到腋芽诱导培养基上放进培养室进行无菌培养，腋芽诱导培养基为MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8，MS培养基经高压灭菌15-20分钟，培养条件为温度25-30℃，光照强度1500-2000lx，每日光照12小时条件下培养，接种后5天腋芽开始萌动，当15-20天伸长至2±0.5cm时，即可进入继代培养；
步骤4，继代培养：将步骤3中获得的不定芽进行继代培养，培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+AD0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8，MS培养基经高压灭菌15-20分钟，培养条件为温度25-30℃，光照强度1500-2000lx，每日光照12-14小时条件下培养，培养7-10天，待丛生芽长至1.5-2cm时进行壮苗培养；
步骤5，壮苗培养：将继代苗切下接种进行壮苗培养，培养基为MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.02mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8，温度、光照条件同步骤4，培养10天，将长至3-4cm的幼苗转至生根培养；
步骤6，生根培养：将步骤5中获得的幼苗进行生根培养，培养基为1/2MS0+蔗糖30g/L+琼脂粉3-4g/L，pH5.5-5.8，培养条件同步骤4，培养两周当生根条数达到6条以上，平均根长0.5cm以上时便用清水将根部琼脂清洗干净进行移栽；
步骤7，移栽与管护：育苗棚具有一定遮阴效果和通风条件，移栽基质选用黄心土，苗床提前1天用0.15％KMnO4消毒，生根苗移栽后用清水淋透，用塑料薄膜覆盖，以后每隔一周喷施800-1000倍甲基托布津或1000倍多菌灵药液，连续喷3-4次，20天后逐步通风，并移除遮盖物；
所述的MS0培养基成分构成如下：
(1)大量元素：KNO3 1260mg/L、NH4NO3 1320mg/L、CaCl2·2H2O 440mg/L、MgSO4·7H2O370mg/L、KH2PO4 170mg/L、FeSO4·7H2O 855.6mg/L、EDTA-2Na 37.3mg/L；
(2)微量元素：MnSO4·4H2O 22.3mg/L、ZnSO4·7H2O 8.6mg/L、H3PO3 6.2mg/L、Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L、KI 0.83mg/L、CuSO4·5H2O 0.025mg/L、CoCl2·6H2O 0.025mg/L；
(3)有机物：C6H12O6·2H2O(肌醇)100mg/L、NH2CH2COOH(甘氨酸)2.0mg/L、C8H11O3N·HCl(盐酸吡哆醇)0.5mg/L、NC5H4COOH(烟酸)0.5mg/L、C12H17C10S·2HCL(盐酸硫胺素)0.1mg/L。
3.根据权利要求2所述的明月草组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述的高压灭菌，压力为1.1kg/cm2。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510663256.5A CN105340734B (zh) | 2015-10-14 | 2015-10-14 | 明月草组织培养快速繁殖培养基及组织培养快速繁殖方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510663256.5A CN105340734B (zh) | 2015-10-14 | 2015-10-14 | 明月草组织培养快速繁殖培养基及组织培养快速繁殖方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105340734A CN105340734A (zh) | 2016-02-24 |
| CN105340734B true CN105340734B (zh) | 2017-09-22 |
Family
ID=55317024
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510663256.5A Expired - Fee Related CN105340734B (zh) | 2015-10-14 | 2015-10-14 | 明月草组织培养快速繁殖培养基及组织培养快速繁殖方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105340734B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107593450A (zh) * | 2017-10-31 | 2018-01-19 | 安徽新华学院 | 一种明月草的生产加工方法 |
| CN107853174A (zh) * | 2017-10-31 | 2018-03-30 | 安徽新华学院 | 一种提高明月草侧芽成活率的方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102224803A (zh) * | 2011-05-05 | 2011-10-26 | 山西菩净生物科技有限公司 | 白子菜的人工培育方法 |
| CN102246694A (zh) * | 2011-05-05 | 2011-11-23 | 湖南农业大学 | 一种白背三七的组织培养方法 |
-
2015
- 2015-10-14 CN CN201510663256.5A patent/CN105340734B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102224803A (zh) * | 2011-05-05 | 2011-10-26 | 山西菩净生物科技有限公司 | 白子菜的人工培育方法 |
| CN102246694A (zh) * | 2011-05-05 | 2011-11-23 | 湖南农业大学 | 一种白背三七的组织培养方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 白背三七草组培快繁技术研究;黄余磊等;《浙江农业科学》;20111231(第1期);摘要，第1.2.1节 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105340734A (zh) | 2016-02-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102893870B (zh) | 牛大力种苗组织培养快速繁殖及育苗的方法 | |
| CN103190347B (zh) | 一种茶壶枣组织培养方法 | |
| CN103081807B (zh) | 耐冬山茶愈伤组织再生植株的方法 | |
| CN104126506B (zh) | 一种美国红火箭紫薇的组织培养方法 | |
| CN109258460A (zh) | 微茎尖培养结合热处理获得增城蜜菊脱毒苗的培育方法 | |
| CN102144566A (zh) | 兴仁金线莲试管苗的培育方法 | |
| CN102823503B (zh) | 红掌以芽繁芽组织培养培养基 | |
| CN102273408B (zh) | 蝴蝶文心兰优质种苗快速繁殖方法 | |
| CN108419675A (zh) | 一种紫果西番莲顶梢的组培育苗方法 | |
| CN107667860A (zh) | 一种山姜的组织培养繁殖方法 | |
| CN104798688B (zh) | 木通种苗的培养方法 | |
| CN109156344A (zh) | 一种仙茅叶片离体培养与植株再生方法 | |
| CN103430854A (zh) | 铁线莲奶油的组织培养方法 | |
| CN103461131B (zh) | 铁线莲贝蒂·里斯登的组织培养方法 | |
| CN104488722B (zh) | 一种南美叉柱花的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN106900555A (zh) | 阳春砂试管分株培养基及一次成苗组培分株快繁方法 | |
| CN105191803B (zh) | 一种铁皮石斛组培袋苗生产方法 | |
| CN105340734B (zh) | 明月草组织培养快速繁殖培养基及组织培养快速繁殖方法 | |
| CN103651115A (zh) | 一种杜鹃花金踯躅的组培快繁方法 | |
| CN103461130B (zh) | 一种铁线莲栽培品种多变海神的组织培养方法 | |
| CN1324952C (zh) | 柠檬马鞭草的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN103039363A (zh) | 油茶组培苗繁殖用生根培养基及其繁殖方法 | |
| KR101887221B1 (ko) | 기내배양에 의한 대나무 대량증식 방법 | |
| CN103444540A (zh) | 一种组织培养快速繁育红花鸡蛋花的方法 | |
| CN107135943A (zh) | 一种冬樱离体快繁方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Yang Liping Inventor after: Liang Gang Inventor after: Wu Hongying Inventor after: Chen Naiming Inventor after: Wang Huayu Inventor after: He Guizheng Inventor after: Chen Liwen Inventor after: Shi Qun Inventor after: Yang Qiong Inventor after: Chen Naijian Inventor after: Chen Junjin Inventor before: Yang Liping |
|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170922 |