CN108935108A - 一种红薯组培苗脱毒组培方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种红薯组培苗脱毒组培方法，具体包括以下步骤：1)温室催芽、2)消毒、3)检测病毒、4)增殖培养、5)壮苗和生根培养、6)驯化炼苗、7)移栽。本发明优点在于：提供了一种红薯组培苗脱毒组培方法，可以脱去种薯的病毒，由于没有病毒病对生理的干扰，脱毒红薯种苗成活快、成活率快、生长势强、分枝数多、叶片浓绿、发根快、结薯早、薯块膨大期长、薯块明显增大、增产显著、品质有显改善，充分显示出脱毒薯的优越性能，有重大推广价值。
Description
技术领域
本发明涉及红树种植技术领域，具体是指一种红薯组培苗脱毒组培方法。
背景技术
红薯又名甜薯，旋花科薯蓣属缠绕草质藤本，地下块茎顶分枝末端膨大成卵球形的块茎，红薯属喜光的短日照作物，性喜温，不耐寒，较耐旱，主要分布在北纬40°以南，红薯随着种植代数的增加会出现退化现象，表现为植株变小、分枝减少、叶片皱缩、羽状斑纹、生长势衰退、块茎变小、产量品质明显下降、甚至丧失生产利用价值。红薯种性退化主要原因是由病毒侵染造成的，侵染红薯的病毒有十多种，在我国主要有两种：一是红薯羽状斑驳病毒，主要症状是叶片出现规则退绿条纹或带有紫色边缘的退绿斑，也可沿叶脉行成紫色羽状斑纹，植株生长势减弱，薯块上产生褐色纵裂，薯块内部形成褐色的内木栓，薯块变小，产量品质下降；二是红薯潜隐病毒，其症状表现不明显，产量品质下降，将带毒植株或块茎上的顶部生长点切下，进行组织培养，生成小苗，通过检测从中选出无毒苗，脱毒率仅为百分之几或千分之几。
发明内容
本发明的目的在于提供一种红薯组培苗脱毒组培方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种红薯组培苗脱毒组培方法，具体包括以下步骤：
1)温室催芽：在温室里，将基质药渣、珍珠岩、草炭按照1：1：1比例配好，铺在苗床上，用杀菌剂和杀虫剂消毒后，选择均匀健康的龙9薯块放入温室埋入基质中，保持温度25-35度，湿度40-80％，光照不超过15000勒克斯，发芽10厘米后取3-4厘米茎尖送入实验室；
2)消毒：在超净工作台上，把红薯茎尖切取2cm左右长度，用75％的酒精消毒10秒钟后，使用无菌水清洗，用0.1％氯化汞灭菌5-6分钟，使用无菌水冲洗4-5次，再用消毒后的滤纸吸干芽上的水分，在解剖镜下用解剖针进行茎尖剥离，切取0.2～0.4mm的茎尖生长点，接种在1/2MS，NAA0.1mg/L固体培养基上，送入培养间，要求温度25-30℃，每天12h、4000～5000勒克斯的光照下培养，产生小植株；
3)检测病毒：茎尖长成苗子后，对获得的小植株用酶联免疫检测法和巴西牵牛指示嫁接法进行脱毒效果的检测，对检测为阴性的植株，在其茎尖部分5叶阶段时再通过酶联免疫检测法测定是否存在红薯羽状斑驳病毒和红薯黄矮病毒；
4)增殖培养：检测过确认没有病毒，就可已进入快繁阶段，一个月左右茎尖长出芽丛，待芽苗长至3厘米大小时将芽逐个切下分成单株，切去上部叶片，接种到MS，BA1mg/L，NAA0.1mg/L增殖培养基中继续增殖，每瓶放5个芽，每15-25天左右增殖1代；
5)壮苗和生根培养：将增殖苗接种到1/2MS的草莓壮苗培养基中，经过15-20天培养间培养，转接到1/2MS、NAA0.1、0.1％AC的生根培养基中，促使其生根，在温度28-30度条件下进行光照，光照保持4000勒克斯左右，培养20天；
6)驯化炼苗：把生根后的红薯脱毒苗移放温室大棚里炼苗15-20天，温度25-30℃，光照不超过1万勒克斯，20天后开瓶后再炼苗3～4天，用镊子把组培苗从培养瓶中取出，用清水洗净苗子根系上的培养基，放在800倍百菌清消毒水中浸泡10秒钟捞出放框里；
7)移栽：将基质药渣、珍珠岩、草炭按照1：1：1比例配好，直接栽在苗床上中，浇透水，再用杀菌剂消毒后，栽种红薯苗，养护温度25-30度，湿度60-90％，刚开始两周光照不高过6000勒克斯，两周后增加到10000勒克斯。
作为一种优选方案，所述步骤7)中将基质药渣、珍珠岩、草炭按照1：1：1比例配好，直接栽在苗床上中，浇透水，再用杀菌剂消毒后，栽种红薯苗，养护温度26度，湿度80％，刚开始两周光照不高过6000勒克斯，两周后增加到10000勒克斯。
本发明优点在于：提供了一种红薯组培苗脱毒组培方法，可以脱去种薯的病毒，由于没有病毒病对生理的干扰，脱毒红薯种苗成活快、成活率快、生长势强、分枝数多、叶片浓绿、发根快、结薯早、薯块膨大期长、薯块明显增大、增产显著、品质有显改善，充分显示出脱毒薯的优越性能，有重大推广价值。
具体实施方式
下面用具体实施例说明本发明，并不是对本发明的限制。
实施例1
一种红薯组培苗脱毒组培方法，具体包括以下步骤：
1)温室催芽：在温室里，将基质药渣、珍珠岩、草炭按照1：1：1比例配好，铺在苗床上，用杀菌剂和杀虫剂消毒后，选择均匀健康的龙9薯块放入温室埋入基质中，保持温度25度，湿度40％，光照不超过15000勒克斯，发芽10厘米后取3-4厘米茎尖送入实验室；
2)消毒：在超净工作台上，把红薯茎尖切取2cm左右长度，用75％的酒精消毒10秒钟后，使用无菌水清洗，用0.1％氯化汞灭菌5-6分钟，使用无菌水冲洗4-5次，再用消毒后的滤纸吸干芽上的水分，在解剖镜下用解剖针进行茎尖剥离，切取0.2～0.4mm的茎尖生长点，接种在1/2MS，NAA0.1mg/L固体培养基上，送入培养间，要求温度25-30℃，每天12h、4000勒克斯的光照下培养，产生小植株；
3)检测病毒：茎尖长成苗子后，对获得的小植株用酶联免疫检测法和巴西牵牛指示嫁接法进行脱毒效果的检测，对检测为阴性的植株，在其茎尖部分5叶阶段时再通过酶联免疫检测法测定是否存在红薯羽状斑驳病毒和红薯黄矮病毒；
4)增殖培养：检测过确认没有病毒，就可已进入快繁阶段，一个月左右茎尖长出芽丛，待芽苗长至3厘米大小时将芽逐个切下分成单株，切去上部叶片，接种到MS，BA1mg/L，NAA0.1mg/L增殖培养基中继续增殖，每瓶放5个芽，每15-25天左右增殖1代；
5)壮苗和生根培养：将增殖苗接种到1/2MS的草莓壮苗培养基中，经过15天培养间培养，转接到1/2MS、NAA0.1、0.1％AC的生根培养基中，促使其生根，在温度28度条件下进行光照，光照保持4000勒克斯左右，培养20天；
6)驯化炼苗：把生根后的红薯脱毒苗移放温室大棚里炼苗15天，温度25℃，光照不超过1万勒克斯，20天后开瓶后再炼苗3～4天，用镊子把组培苗从培养瓶中取出，用清水洗净苗子根系上的培养基，放在800倍百菌清消毒水中浸泡10秒钟捞出放框里；
7)移栽：将基质药渣、珍珠岩、草炭按照1：1：1比例配好，直接栽在苗床上中，浇透水，再用杀菌剂消毒后，栽种红薯苗，养护温度25度，湿度60％，刚开始两周光照不高过6000勒克斯，两周后增加到10000勒克斯。
实施例2
一种红薯组培苗脱毒组培方法，具体包括以下步骤：
1)温室催芽：在温室里，将基质药渣、珍珠岩、草炭按照1：1：1比例配好，铺在苗床上，用杀菌剂和杀虫剂消毒后，选择均匀健康的龙9薯块放入温室埋入基质中，保持温度35度，湿度40-80％，光照不超过15000勒克斯，发芽10厘米后取3-4厘米茎尖送入实验室；
2)消毒：在超净工作台上，把红薯茎尖切取2cm左右长度，用75％的酒精消毒10秒钟后，使用无菌水清洗，用0.1％氯化汞灭菌5-6分钟，使用无菌水冲洗4-5次，再用消毒后的滤纸吸干芽上的水分，在解剖镜下用解剖针进行茎尖剥离，切取0.2～0.4mm的茎尖生长点，接种在1/2MS，NAA0.1mg/L固体培养基上，送入培养间，要求温度25-30℃，每天12h、5000勒克斯的光照下培养，产生小植株；
3)检测病毒：茎尖长成苗子后，对获得的小植株用酶联免疫检测法和巴西牵牛指示嫁接法进行脱毒效果的检测，对检测为阴性的植株，在其茎尖部分5叶阶段时再通过酶联免疫检测法测定是否存在红薯羽状斑驳病毒和红薯黄矮病毒；
4)增殖培养：检测过确认没有病毒，就可已进入快繁阶段，一个月左右茎尖长出芽丛，待芽苗长至3厘米大小时将芽逐个切下分成单株，切去上部叶片，接种到MS，BA1mg/L，NAA0.1mg/L增殖培养基中继续增殖，每瓶放5个芽，每15-25天左右增殖1代；
5)壮苗和生根培养：将增殖苗接种到1/2MS的草莓壮苗培养基中，经过20天培养间培养，转接到1/2MS、NAA0.1、0.1％AC的生根培养基中，促使其生根，在温度28-30度条件下进行光照，光照保持4000勒克斯左右，培养20天；
6)驯化炼苗：把生根后的红薯脱毒苗移放温室大棚里炼苗20天，温度30℃，光照不超过1万勒克斯，20天后开瓶后再炼苗3～4天，用镊子把组培苗从培养瓶中取出，用清水洗净苗子根系上的培养基，放在800倍百菌清消毒水中浸泡10秒钟捞出放框里；
7)移栽：将基质药渣、珍珠岩、草炭按照1：1：1比例配好，直接栽在苗床上中，浇透水，再用杀菌剂消毒后，栽种红薯苗，养护温度30度，湿度90％，刚开始两周光照不高过6000勒克斯，两周后增加到10000勒克斯。
实施例3
一种红薯组培苗脱毒组培方法，具体包括以下步骤：
1)温室催芽：在温室里，将基质药渣、珍珠岩、草炭按照1：1：1比例配好，铺在苗床上，用杀菌剂和杀虫剂消毒后，选择均匀健康的龙9薯块放入温室埋入基质中，保持温度30度，湿度60％，光照不超过15000勒克斯，发芽10厘米后取3-4厘米茎尖送入实验室；
2)消毒：在超净工作台上，把红薯茎尖切取2cm左右长度，用75％的酒精消毒10秒钟后，使用无菌水清洗，用0.1％氯化汞灭菌5-6分钟，使用无菌水冲洗4-5次，再用消毒后的滤纸吸干芽上的水分，在解剖镜下用解剖针进行茎尖剥离，切取0.2～0.4mm的茎尖生长点，接种在1/2MS，NAA0.1mg/L固体培养基上，送入培养间，要求温度28℃，每天12h、4500勒克斯的光照下培养，产生小植株；
3)检测病毒：茎尖长成苗子后，对获得的小植株用酶联免疫检测法和巴西牵牛指示嫁接法进行脱毒效果的检测，对检测为阴性的植株，在其茎尖部分5叶阶段时再通过酶联免疫检测法测定是否存在红薯羽状斑驳病毒和红薯黄矮病毒；
4)增殖培养：检测过确认没有病毒，就可已进入快繁阶段，一个月左右茎尖长出芽丛，待芽苗长至3厘米大小时将芽逐个切下分成单株，切去上部叶片，接种到MS，BA1mg/L，NAA0.1mg/L增殖培养基中继续增殖，每瓶放5个芽，每15-25天左右增殖1代；
5)壮苗和生根培养：将增殖苗接种到1/2MS的草莓壮苗培养基中，经过18天培养间培养，转接到1/2MS、NAA0.1、0.1％AC的生根培养基中，促使其生根，在温度29度条件下进行光照，光照保持4000勒克斯左右，培养20天；
6)驯化炼苗：把生根后的红薯脱毒苗移放温室大棚里炼苗18天，温度28℃，光照不超过1万勒克斯，20天后开瓶后再炼苗3～4天，用镊子把组培苗从培养瓶中取出，用清水洗净苗子根系上的培养基，放在800倍百菌清消毒水中浸泡10秒钟捞出放框里；
7)移栽：将基质药渣、珍珠岩、草炭按照1：1：1比例配好，直接栽在苗床上中，浇透水，再用杀菌剂消毒后，栽种红薯苗，养护温度28度，湿度75％，刚开始两周光照不高过6000勒克斯，两周后增加到10000勒克斯。
本发明优点在于：提供了一种红薯组培苗脱毒组培方法，可以脱去种薯的病毒，由于没有病毒病对生理的干扰，脱毒红薯种苗成活快、成活率快、生长势强、分枝数多、叶片浓绿、发根快、结薯早、薯块膨大期长、薯块明显增大、增产显著、品质有显改善，充分显示出脱毒薯的优越性能，有重大推广价值。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种红薯组培苗脱毒组培方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
1)温室催芽：在温室里，将基质药渣、珍珠岩、草炭按照1：1：1比例配好，铺在苗床上，用杀菌剂和杀虫剂消毒后，选择均匀健康的龙9薯块放入温室埋入基质中，保持温度25-35度，湿度40-80％，光照不超过15000勒克斯，发芽10厘米后取3-4厘米茎尖送入实验室；
2)消毒：在超净工作台上，把红薯茎尖切取2cm左右长度，用75％的酒精消毒10秒钟后，使用无菌水清洗，用0.1％氯化汞灭菌5-6分钟，使用无菌水冲洗4-5次，再用消毒后的滤纸吸干芽上的水分，在解剖镜下用解剖针进行茎尖剥离，切取0.2～0.4mm的茎尖生长点，接种在1/2MS，NAA0.1mg/L固体培养基上，送入培养间，要求温度25-30℃，每天12h、4000～5000lux的光照下培养，产生小植株；
3)检测病毒：茎尖长成苗子后，对获得的小植株用酶联免疫检测法和巴西牵牛指示嫁接法进行脱毒效果的检测，对检测为阴性的植株，在其茎尖部分5叶阶段时再通过酶联免疫检测法测定是否存在红薯羽状斑驳病毒和红薯黄矮病毒；
4)增殖培养：检测过确认没有病毒，就可已进入快繁阶段，一个月左右茎尖长出芽丛，待芽苗长至3厘米大小时将芽逐个切下分成单株，切去上部叶片，接种到MS，BA1mg/L，NAA0.1mg/L增殖培养基中继续增殖，每瓶放5个芽，每15-25天左右增殖1代；
5)壮苗和生根培养：将增殖苗接种到1/2MS的草莓壮苗培养基中，经过15-20天培养间培养，转接到1/2MS、NAA0.1、0.1％AC的生根培养基中，促使其生根，在温度28-30度条件下进行光照，光照保持4000勒克斯左右，培养20天；
6)驯化炼苗：把生根后的红薯脱毒苗移放温室大棚里炼苗15-20天，温度25-30℃，光照不超过1万勒克斯，20天后开瓶后再炼苗3～4天，用镊子把组培苗从培养瓶中取出，用清水洗净苗子根系上的培养基，放在800倍百菌清消毒水中浸泡10秒钟捞出放框里；
7)移栽：将基质药渣、珍珠岩、草炭按照1：1：1比例配好，直接栽在苗床上中，浇透水，再用杀菌剂消毒后，栽种红薯苗，养护温度25-30度，湿度60-90％，刚开始两周光照不高过6000勒克斯，两周后增加到10000勒克斯。
2.根据权利要求1所述的一种红薯组培苗脱毒组培方法，其特征在于：所述步骤7)中将基质药渣、珍珠岩、草炭按照1：1：1比例配好，直接栽在苗床上中，浇透水，再用杀菌剂消毒后，栽种红薯苗，养护温度26度，湿度80％，刚开始两周光照不高过6000勒克斯，两周后增加到10000勒克斯。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181207 |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |