CN110432146A - 一种滇重楼育苗及规模化种植方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物繁殖技术领域，且公开了一种滇重楼的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：选取滇重楼的叶片为起始材料，用流水冲洗30min后，使用无菌滤纸吸干水分，拿取一个100ML的玻璃皿，加入比例为以7:3配比的酒精和清水，使用无菌水冲洗五遍，再使用0.1％的升汞浸泡10min后无菌水冲洗5次，即可作为组培用的外植体。该滇重楼的组织培养快速繁殖方法，通过添加有NAA萘乙酸，NAA是一种广谱植物生长调节剂，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根增加座果，防止落果，改变雌和雄花比率等，可经叶片和树枝的嫩表皮，种子进入到植株内，随营养流输导到全株，达到增快滇重楼组织生长的速度，使滇重楼组织培养能更快速，有利于提高企业的竞争力。
Description
技术领域
本发明涉及植物繁殖技术领域，具体为一种滇重楼的组织培养快速繁殖方法。
背景技术
滇重楼是兰科滇重楼属的多年生附生兰，株型小巧玲珑，叶片革质青翠，肥厚肉质，花型奇特，花瓣反卷，犹如迎风而来的玉精灵，花色洁白无瑕，花香迷人，阵阵幽香，发达的气生根也惹人瞩目；滇重楼的根、茎、叶和花均具有较高的观赏价值，并能吸收环境中的污染物质，净化空气，味道清幽，闻起来舒适宜人，风韵高雅别致，也被称为“轩兰”和“富贵兰”，也有一定的药用价值，滇重楼在日本和韩国等有大量栽培，我国栽培较少，但是越来越受到人们的青睐和瞩目，市场潜力巨大，前景广阔。
例如中国专利CN106106167B中公开的一种滇重楼的组织培养快速繁殖方法，该培育方法改变了传统的滇重楼培育方法，使滇重楼的培育速度得以提高，但是该滇重楼培育方法在培育当中，滇重楼的繁殖成本较高，我国椰子并不盛产，在用来培育滇重楼上需要较多的资金，且量产所需的资金更大，无法提高企业的竞争力，故而提出了一种滇重楼的组织培养快速繁殖方法来解决上述提出的问题。
发明内容
解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种滇重楼的组织培养快速繁殖方法，具备快速繁殖等优点，解决了市场上用于滇重楼的组织培养快速繁殖方法，在实际应用中，传统的分株繁殖方法，繁殖系数低，增殖速度慢，远远不能满足人们的需要；若用种子播种，种子又存在发育不完全，难以萌发，变异变化大，难以保存亲本的优良性状；滇重楼的繁殖系数低，成为制约其研究开发的瓶颈的问题。
(二)技术方案
为实现上述改善睡眠目的，本发明提供如下技术方案：一种滇重楼的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一：外植体的选择及处理
选取滇重楼的叶片为起始材料，用流水冲洗30min后，使用无菌滤纸吸干水分，拿取一个100ML的玻璃皿，加入比例为以7:3配比的酒精和清水，将滇重楼叶片浸入20s～30s后，使用无菌水冲洗五遍，再使用0.1％的升汞浸泡10min后无菌水冲洗5次，即可作为组培用的外植体；
步骤二：类原球茎的诱导
拿取一个100ML的培养基瓶，调节PH值到5.4，再依次放入蔗糖20％-50％、琼脂粉15％-20％、活性炭5％-15％和苹果泥10％-15％、NAA0.5mg/L和6-BA4mg/L，将步骤一中经过消毒处理的外植体接种在培养基瓶上进行培养，使环境的温度保持在20±2℃，光照强度为1500Lx，光照时间12h/d，75d后叶片基部逐渐形成胚性愈伤组织，胚性愈伤组织逐渐形成类原球茎；
步骤三：类原球茎的增殖
拿取一个100ML的培养基瓶，调节PH值到5.4，再依次放入蔗糖20％-50％、琼脂粉15％-20％、活性炭5％-15％和苹果泥10％-15％、NAA0.2mg/L和6-BA3mg/L，将步骤二中的类原球茎转接到培养基瓶上，使环境的温度保持在20±2℃，光照强度为1500Lx，光照时间12h/d，30d后类原球茎通过重复发生和循环发生实现有效增殖，并逐渐形成不定芽；
步骤四：生根成苗
拿取一个100ML的培养基瓶，调节PH值到5.4，再依次放入蔗糖20％-50％、琼脂粉15％-20％、活性炭5％-15％和苹果泥10％-15％、NAA0.5mg/L和6-BA1mg/L，将步骤三诱导出的不定芽和类原球茎转接到生根培养基进行培养，培养15d后，不定芽长出多条肉质不定根，经过炼苗和缓苗，生根苗移栽至消毒后的碎松树皮中，保温保湿培养90d后，成活率100％。
优选的，所述炼苗和缓苗具体为：先在组培室打开瓶盖炼苗3天，然后将其移至温室或荫棚，再炼苗3天；然后将组培苗从培养瓶中取出，洗净其表面的琼脂，移栽到培养基质中进行缓苗，然后正常培养。
优选的，所述步骤一、步骤二、步骤三和步骤四中的培养基的基质均为苔藓，琼脂粉均为凝固剂。
优选的，所述炼苗和缓苗步骤中的培养基的基质可为苔藓和松针、珍珠岩和草灰石以及珍珠岩、松针和椰糠3种基质。
优选的，在步骤二中类原球茎的诱导过程中，在类原球茎的茎尖顶端使用手术刀慢划几次，所述培养基质含水量25％以内，空气相对湿度80～90％，遮光50％。
(三)有益效果
与现有技术相比，本发明提供了一种滇重楼的组织培养快速繁殖方法，具备以下有益效果：
1、该滇重楼的组织培养快速繁殖方法，通过添加有NAA萘乙酸，NAA是一种广谱植物生长调节剂，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根增加座果，防止落果，改变雌和雄花比率等，可经叶片和树枝的嫩表皮，种子进入到植株内，随营养流输导到全株，达到增快滇重楼组织生长的速度，使滇重楼组织培养能更快速，有利于提高企业的竞争力。
2、该滇重楼的组织培养快速繁殖方法，通过添加苹果泥，将普通苹果压成烂泥后加入培养基中，调整酸碱度后进行灭菌，苹果泥可提供滇重楼培育过程中的有机营养物质，使滇重楼组织繁殖提供营养，通过添加有活性炭，能够有效的去除培养基内部的有机污染物和无机物，能为滇重楼组织繁殖提供一个良好的生产环境，同时添加有6-BA，6-BA是6-苄氨基腺嘌呤，是一种细胞分裂素，能促进芽的形成，也可以诱导愈伤组织发生，可用于提高无根芽的培育，有利于提高滇重楼组织的繁殖速度，使企业培育滇重楼的过程更简短，提高了企业的生产力和竞争力。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一：该滇重楼的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一：外植体的选择及处理
选取滇重楼的叶片为起始材料，用流水冲洗30min后，使用无菌滤纸吸干水分，拿取一个100ML的玻璃皿，加入比例为以7:3配比的酒精和清水，将滇重楼叶片浸入20s后，使用无菌水冲洗五遍，再使用0.1％的升汞浸泡10min后无菌水冲洗5次，即可作为组培用的外植体；
步骤二：类原球茎的诱导
拿取一个100ML的培养基瓶，调节PH值到5.4，再依次放入蔗糖20％-50％、琼脂粉15％、活性炭5％和苹果泥10％、NAA0.5mg/L和6-BA4mg/L，将步骤一中经过消毒处理的外植体接种在培养基瓶上进行培养，使环境的温度保持在18℃，光照强度为1500Lx，光照时间12h/d，75d后叶片基部逐渐形成胚性愈伤组织，胚性愈伤组织逐渐形成类原球茎，在步骤二中类原球茎的诱导过程中，在类原球茎的茎尖顶端使用手术刀慢划几次，培养基质含水量25％以内，空气相对湿度80，遮光50％；
步骤三：类原球茎的增殖
拿取一个100ML的培养基瓶，调节PH值到5.4，再依次放入蔗糖20％-50％、琼脂粉15％、活性炭5％和苹果泥10％、NAA0.2mg/L和6-BA3mg/L，将步骤二中的类原球茎转接到培养基瓶上，使环境的温度保持在18℃，光照强度为1500Lx，光照时间12h/d，30d后类原球茎通过重复发生和循环发生实现有效增殖，并逐渐形成不定芽，愈伤增殖系数6.84，丛芽发生率98.96；
步骤四：生根成苗
拿取一个100ML的培养基瓶，调节PH值到5.4，再依次放入蔗糖20％、琼脂粉15％、活性炭5％和苹果泥10％、NAA0.5mg/L和6-BA1mg/L，将步骤三诱导出的不定芽和类原球茎转接到生根培养基进行培养，培养15d后，不定芽长出多条肉质不定根，经过炼苗和缓苗，生根苗移栽至消毒后的碎松树皮中，保温保湿培养90d后，成活率100％，炼苗和缓苗具体为：先在组培室打开瓶盖炼苗3天，然后将其移至温室或荫棚，再炼苗3天；然后将组培苗从培养瓶中取出，洗净其表面的琼脂，移栽到培养基质中进行缓苗，然后正常培养，步骤一、步骤二、步骤三和步骤四中的培养基的基质均为苔藓，琼脂粉均为凝固剂，炼苗和缓苗步骤中的培养基的基质可为苔藓和松针、珍珠岩和草灰石以及珍珠岩、松针和椰糠3种基质。
实施例二：该滇重楼的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一：外植体的选择及处理
选取滇重楼的叶片为起始材料，用流水冲洗30min后，使用无菌滤纸吸干水分，拿取一个100ML的玻璃皿，加入比例为以7:3配比的酒精和清水，将滇重楼叶片浸入25s后，使用无菌水冲洗五遍，再使用0.1％的升汞浸泡10min后无菌水冲洗5次，即可作为组培用的外植体；
步骤二：类原球茎的诱导
拿取一个100ML的培养基瓶，调节PH值到5.4，再依次放入蔗糖35％、琼脂粉17.5％、活性炭10％和苹果泥17.5％、NAA0.5mg/L和6-BA4mg/L，将步骤一中经过消毒处理的外植体接种在培养基瓶上进行培养，使环境的温度保持在20℃，光照强度为1500Lx，光照时间12h/d，75d后叶片基部逐渐形成胚性愈伤组织，胚性愈伤组织逐渐形成类原球茎，在步骤二中类原球茎的诱导过程中，在类原球茎的茎尖顶端使用手术刀慢划几次，培养基质含水量25％以内，空气相对湿度85％，遮光50％；
步骤三：类原球茎的增殖
拿取一个100ML的培养基瓶，调节PH值到5.4，再依次放入蔗糖35％、琼脂粉17.5％、活性炭10％和苹果泥17.5％、NAA0.2mg/L和6-BA3mg/L，将步骤二中的类原球茎转接到培养基瓶上，使环境的温度保持在20℃，光照强度为1500Lx，光照时间12h/d，30d后类原球茎通过重复发生和循环发生实现有效增殖，并逐渐形成不定芽，愈伤增殖系数6.84，丛芽发生率98.96；
步骤四：生根成苗
拿取一个100ML的培养基瓶，调节PH值到5.4，再依次放入蔗糖35％、琼脂粉17.5％、活性炭10％和苹果泥17.5％、NAA0.5mg/L和6-BA1mg/L，将步骤三诱导出的不定芽和类原球茎转接到生根培养基进行培养，培养15d后，不定芽长出多条肉质不定根，经过炼苗和缓苗，生根苗移栽至消毒后的碎松树皮中，保温保湿培养90d后，成活率100％，炼苗和缓苗具体为：先在组培室打开瓶盖炼苗3天，然后将其移至温室或荫棚，再炼苗3天；然后将组培苗从培养瓶中取出，洗净其表面的琼脂，移栽到培养基质中进行缓苗，然后正常培养，步骤一、步骤二、步骤三和步骤四中的培养基的基质均为苔藓，琼脂粉均为凝固剂，炼苗和缓苗步骤中的培养基的基质可为苔藓和松针、珍珠岩和草灰石以及珍珠岩、松针和椰糠3种基质。。
实施例三：该滇重楼的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
步骤一：外植体的选择及处理
选取滇重楼的叶片为起始材料，用流水冲洗30min后，使用无菌滤纸吸干水分，拿取一个100ML的玻璃皿，加入比例为以7:3配比的酒精和清水，将滇重楼叶片浸入30s后，使用无菌水冲洗五遍，再使用0.1％的升汞浸泡10min后无菌水冲洗5次，即可作为组培用的外植体；
步骤二：类原球茎的诱导
拿取一个100ML的培养基瓶，调节PH值到5.4，再依次放入蔗糖50％、琼脂粉20％、活性炭15％和苹果泥20％、NAA0.5mg/L和6-BA4mg/L，将步骤一中经过消毒处理的外植体接种在培养基瓶上进行培养，使环境的温度保持在22℃，光照强度为1500Lx，光照时间12h/d，75d后叶片基部逐渐形成胚性愈伤组织，胚性愈伤组织逐渐形成类原球茎，在步骤二中类原球茎的诱导过程中，在类原球茎的茎尖顶端使用手术刀慢划几次，培养基质含水量25％以内，空气相对湿度90％，遮光50％；
步骤三：类原球茎的增殖
拿取一个100ML的培养基瓶，调节PH值到5.4，再依次放入蔗糖50％、琼脂粉20％、活性炭15％和苹果泥20％、NAA0.2mg/L和6-BA3mg/L，将步骤二中的类原球茎转接到培养基瓶上，使环境的温度保持在22℃，光照强度为1500Lx，光照时间12h/d，30d后类原球茎通过重复发生和循环发生实现有效增殖，并逐渐形成不定芽，愈伤增殖系数6.84，丛芽发生率98.96；
步骤四：生根成苗
拿取一个100ML的培养基瓶，调节PH值到5.4，再依次放入蔗糖50％、琼脂粉20％、活性炭15％和苹果泥20％、NAA0.5mg/L和6-BA1mg/L，将步骤三诱导出的不定芽和类原球茎转接到生根培养基进行培养，培养15d后，不定芽长出多条肉质不定根，经过炼苗和缓苗，生根苗移栽至消毒后的碎松树皮中，保温保湿培养90d后，成活率100％，炼苗和缓苗具体为：先在组培室打开瓶盖炼苗3天，然后将其移至温室或荫棚，再炼苗3天；然后将组培苗从培养瓶中取出，洗净其表面的琼脂，移栽到培养基质中进行缓苗，然后正常培养，步骤一、步骤二、步骤三和步骤四中的培养基的基质均为苔藓，琼脂粉均为凝固剂，炼苗和缓苗步骤中的培养基的基质可为苔藓和松针：珍珠岩和草灰石：珍珠岩、松针和椰糠3种基质。
本发明的有益效果是：通过添加有NAA萘乙酸，NAA是一种广谱植物生长调节剂，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根增加座果，防止落果，改变雌和雄花比率等，可经叶片和树枝的嫩表皮，种子进入到植株内，随营养流输导到全株，达到增快滇重楼组织生长的速度，使滇重楼组织培养能更快速，有利于提高企业的竞争力，通过添加苹果泥，将普通苹果压成烂泥后加入培养基中，调整酸碱度后进行灭菌，苹果泥可提供滇重楼培育过程中的有机营养物质，使滇重楼组织繁殖提供营养，通过添加有活性炭，能够有效的去除培养基内部的有机污染物和无机物，能为滇重楼组织繁殖提供一个良好的生产环境，同时添加有6-BA，6-BA是6-苄氨基腺嘌呤，是一种细胞分裂素，能促进芽的形成，也可以诱导愈伤组织发生，可用于提高无根芽的培育，有利于提高滇重楼组织的繁殖速度有利于提高滇重楼组织的繁殖速度，使企业培育滇重楼的过程更简短，提高了企业的生产力和竞争力。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (5)
1.一种滇重楼的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：外植体的选择及处理
选取滇重楼的叶片为起始材料，用流水冲洗30min后，使用无菌滤纸吸干水分，拿取一个100ML的玻璃皿，加入比例为以7:3配比的酒精和清水，将滇重楼叶片浸入20s～30s后，使用无菌水冲洗五遍，再使用0.1％的升汞浸泡10min后无菌水冲洗5次，即可作为组培用的外植体；
步骤二：类原球茎的诱导
拿取一个100ML的培养基瓶，调节PH值到5.4，再依次放入蔗糖20％-50％、琼脂粉15％-20％、活性炭5％-15％和苹果泥10％-15％、NAA 0.5mg/L和6-BA 4mg/L，将步骤一中经过消毒处理的外植体接种在培养基瓶上进行培养，使环境的温度保持在20±2℃，光照强度为1500Lx，光照时间12h/d，75d后叶片基部逐渐形成胚性愈伤组织，胚性愈伤组织逐渐形成类原球茎；
步骤三：类原球茎的增殖
拿取一个100ML的培养基瓶，调节PH值到5.4，再依次放入蔗糖20％-50％、琼脂粉15％-20％、活性炭5％-15％和苹果泥10％-15％、NAA 0.2mg/L和6-BA 3mg/L，将步骤二中的类原球茎转接到培养基瓶上，使环境的温度保持在20±2℃，光照强度为1500Lx，光照时间12h/d，30d后类原球茎通过重复发生和循环发生实现有效增殖，并逐渐形成不定芽；
步骤四：生根成苗
拿取一个100ML的培养基瓶，调节PH值到5.4，再依次放入蔗糖20％-50％、琼脂粉15％-20％、活性炭5％-15％和苹果泥10％-15％、NAA 0.5mg/L和6-BA 1mg/L，将步骤三诱导出的不定芽和类原球茎转接到生根培养基进行培养，培养15d后，不定芽长出多条肉质不定根，经过炼苗和缓苗，生根苗移栽至消毒后的碎松树皮中，保温保湿培养90d后，成活率100％。
2.根据权利要求1所述的一种滇重楼的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述炼苗和缓苗具体为：先在组培室打开瓶盖炼苗3天，然后将其移至温室或荫棚，再炼苗3天；然后将组培苗从培养瓶中取出，洗净其表面的琼脂，移栽到培养基质中进行缓苗，然后正常培养。
3.根据权利要求1所述的一种滇重楼的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤一、步骤二、步骤三和步骤四中的培养基的基质均为苔藓，琼脂粉均为凝固剂。
4.根据权利要求1所述的一种滇重楼的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述炼苗和缓苗步骤中的培养基的基质可为苔藓和松针、珍珠岩和草灰石以及珍珠岩、松针和椰糠3种基质。
5.根据权利要求1所述的一种滇重楼的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，在步骤二中类原球茎的诱导过程中，在类原球茎的茎尖顶端使用手术刀慢划几次，所述培养基质含水量25％以内，空气相对湿度80～90％，遮光50％。
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