CN107517854A - 一种圆叶桉的组培快繁方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种圆叶桉的组培快繁方法，本发明选择生长良好、无病虫害的圆叶桉，选取带腋芽的茎段或顶芽为外植体，在无菌条件下依次使用75%乙醇和0.1%升汞溶液进行消毒，建立无菌体系，通过改量培养基成分和调控植物外源激素，不经过愈伤组织，直接由外植体萌发腋芽或者不定芽，经过对无菌苗的继代增殖培养、壮苗培养、生根培养、炼苗移栽，获得再生植株。本发明具有操作难度低、培养周期短、有效芽多、生根率高、移植成活率高的特点，再生植株保持了母本的优良性状，较传统培育方法大幅缩短育苗时间、节省育苗成本。
Description
技术领域
本发明涉及生物组织培养育苗技术领域，特别涉及一种圆叶桉的组培快繁方法。
背景技术
圆叶桉是常绿灌木或小乔木，株高可达3米；幼叶对生，无柄，阔卵形或阔盾形；老叶互生，呈披针形，两面均被白粉，是一种澳大利亚新南威尔士特产的桉树矮林，不耐高温，在华南地区以存高冷地栽培为佳，叶色优雅，枝叶是上等花材，市场常用做切枝，商品名为尤加利。
目前，圆叶桉的栽培以播种和扦插为主，但是由于圆叶桉奇特的叶形，播种繁殖容易产生变异，不能保持母本的优良形状，扦插虽然可以维持母本性状，但是繁殖速度慢、成活率低，大批生产速度太慢。
植物组织培养技术，是利用植物细胞的全能性，在无菌条件下，用离体的植物组织发育成完整的植株，使用植物组培技术，能够保留母本的优良性状、增加增殖速度、节省育苗成本，是大批量培养圆叶桉的有效途径。
因此，发明一种圆叶桉的组培快繁方法来解决上述问题很有必要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种圆叶桉的组培快繁方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种圆叶桉的组培快繁方法，采用带腋芽的茎段或顶芽为外植体，利用离体茎段或顶芽直接诱导无菌芽，经过无菌芽的继代增殖培养、壮苗培养、生根培养和炼苗移栽，获得再生植株，该方法的具体步骤如下：
（1）选取优良母本：优良母本是指经测算比较，生长速度快、抗虫指标好、叶片形状圆整和叶片颜色好看的植株；
（2）外植体的选择：外植体应选取新鲜的带腋芽茎段，去掉所有叶片，保留所有腋芽；
（3）外植体的预处理：外植体的预处理是指：用自来水冲洗3-5min，再用软毛刷沾取洗洁精轻轻刷洗2-3遍，用纯净水冲洗10-15min；在超净工作台上，将茎条分成每段5cm左右，带1-3个茎结的茎段，便于灭菌操作；
（4）无菌体系的建立：无菌体系的建立通过75%乙醇和0.1%升汞的处理实现，将带消毒材料用无菌水清洗2-4遍，再用75%乙醇处理15-25S，无菌水清洗3-5遍，每次浸泡清洗2-3min，洗去残留的乙醇，再用0.1%升汞溶液浸泡并适当搅拌7-10min，无菌水清洗4-6遍，每次浸泡清洗2-3min，洗去残留的升汞溶液，用灭过菌的冷却好的镊子夹取清洗好的茎段，放在无菌的接种盘上，切去茎段两端各0.5-1cm，减少升汞毒害，再切割成含有一个茎结的茎段，接种于无菌芽诱导的培养基；
（5）启动培养：外植体的腋芽或顶芽直接萌发，温度23-27℃，光照12h/d，光照强度2000-2500Lux；
（6）继代增殖培养：侧芽和不定芽不断生长，当达到1-1.5cm时，切割转接至继代增殖培养基，在温度23-27℃，光照12h/d，光照强度2000-2500Lux条件下培养，随着丛生芽的增加，反复继代，无菌芽苗数量不断增加；
（7）壮苗培养：增殖苗大多数都较为瘦弱，将增殖苗接种到壮苗培养基中，在温度23-27℃，光照12h/d，光照强度2000-2500Lux条件下培养；
（8）生根培养：当芽苗长到2.5-3cm，并且有3-4对叶片时，去除芽苗本身的根，转入生根培养基，在温度23-27℃，光照12h/d，光照强度1500-2000Lux条件下培养，当冒出根点或者短根时，调整温度23-27℃，光照12h/d，光照强度2500-3000Lux条件下培养；
（9）炼苗移栽：待观察到苗根系明显时转至大棚，进行炼苗移栽，将培养瓶移至大棚中闭瓶炼苗6天，之后打开瓶盖，加些许水，盖没培养基，防止培养基发霉，开瓶炼苗3天，将生根齐全、根系发达、高3cm以上的瓶苗，洗去培养基，移栽到用高锰酸钾消毒过的基质中，将根系发育较弱的瓶苗，洗去培养基，用生根粉浸泡10-20min，移栽到用高锰酸钾消毒过的基质中，将两种苗分开管理。
优选的，所述步骤（5）中的启动培养基为：MS+6-BA0.7-1.3mg/L+NAA0.3-0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L，PH5.8-6.0。
优选的，所述步骤（6）中的继代增殖培养基为：MS+6-BA1.3-1.7mg/L+NAA0.1-0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L，PH5.8-6.0。
优选的，所述步骤（7）中的壮苗培养基为：MS+NAA0.4-0.7mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L+活性炭0.5g/L，PH6.0-6.5。
优选的，所述步骤（8）中的生根培养基为：MS+IBA0.4-0.7mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L+活性炭0.5g/L，PH6.0-6.5。
本发明的技术效果和优点：1、采用本发明的诱导小苗培养基的诱导率高达95.7%；2、采用本发明的增殖培养基，增殖倍数达5.2倍，有效苗多；3、采用本发明的生根培养基，平均生根数达3.7根，平均根长4.3cm；4、采用本发明培育的苗成活率高达98.2%；5、在无菌条件下，直接通过离体植物器官诱导无菌苗，再经过反复增殖，快速获得大量的再生植株，达到性状稳定、育苗周期短、生产成本低、苗成活率高的目的。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完 整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部 的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性 劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
本发明提供了一种圆叶桉的组培快繁方法，采用带腋芽的茎段或顶芽为外植体，利用离体茎段或顶芽直接诱导无菌芽，经过无菌芽的继代增殖培养、壮苗培养、生根培养和炼苗移栽，获得再生植株，该方法的具体步骤如下：
（1）选取优良母本：优良母本是指经测算比较，生长速度快、抗虫指标好、叶片形状圆整和叶片颜色好看的植株；
（2）外植体的选择：外植体应选取新鲜的带腋芽茎段，去掉所有叶片，保留所有腋芽；
（3）外植体的预处理：外植体的预处理是指：用自来水冲洗3-5min，再用软毛刷沾取洗洁精轻轻刷洗2-3遍，用纯净水冲洗10-15min；在超净工作台上，将茎条分成每段5cm左右，带1-3个茎结的茎段，便于灭菌操作；
（4）无菌体系的建立：无菌体系的建立通过75%乙醇和0.1%升汞的处理实现，将带消毒材料用无菌水清洗2-4遍，再用75%乙醇处理15-25S，无菌水清洗3-5遍，每次浸泡清洗2-3min，洗去残留的乙醇，再用0.1%升汞溶液浸泡并适当搅拌7-10min，无菌水清洗4-6遍，每次浸泡清洗2-3min，洗去残留的升汞溶液，用灭过菌的冷却好的镊子夹取清洗好的茎段，放在无菌的接种盘上，切去茎段两端各0.5-1cm，减少升汞毒害，再切割成含有一个茎结的茎段，接种于无菌芽诱导的培养基；
（5）启动培养：外植体的腋芽或顶芽直接萌发，温度23℃，光照12h/d，光照强度2000-2500Lux，启动培养基为：MS+6-BA0.7-1.3mg/L+NAA0.3-0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L，PH5.8-6.0；
（6）继代增殖培养：侧芽和不定芽不断生长，当达到1-1.5cm时，切割转接至继代增殖培养基，在温度23℃，光照12h/d，光照强度2000-2500Lux条件下培养，随着丛生芽的增加，反复继代，无菌芽苗数量不断增加，继代增殖培养基为：MS+6-BA1.3-1.7mg/L+NAA0.1-0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L，PH5.8-6.0；
（7）壮苗培养：增殖苗大多数都较为瘦弱，将增殖苗接种到壮苗培养基中，在温度23℃，光照12h/d，光照强度2000-2500Lux条件下培养，壮苗培养基为：MS+NAA0.4-0.7mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L+活性炭0.5g/L，PH6.0-6.5；
（8）生根培养：当芽苗长到2.5-3cm，并且有3-4对叶片时，去除芽苗本身的根，转入生根培养基，在温度23℃，光照12h/d，光照强度1500-2000Lux条件下培养，当冒出根点或者短根时，调整温度23-27℃，光照12h/d，光照强度2500-3000Lux条件下培养，生根培养基为：MS+IBA0.4-0.7mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L+活性炭0.5g/L，PH6.0-6.5；
（9）炼苗移栽：待观察到苗根系明显时转至大棚，进行炼苗移栽，将培养瓶移至大棚中闭瓶炼苗6天，之后打开瓶盖，加些许水，盖没培养基，防止培养基发霉，开瓶炼苗3天，将生根齐全、根系发达、高3cm以上的瓶苗，洗去培养基，移栽到用高锰酸钾消毒过的基质中，将根系发育较弱的瓶苗，洗去培养基，用生根粉浸泡10min，移栽到用高锰酸钾消毒过的基质中，将两种苗分开管理。
实施例2：
本发明提供了一种圆叶桉的组培快繁方法，采用带腋芽的茎段或顶芽为外植体，利用离体茎段或顶芽直接诱导无菌芽，经过无菌芽的继代增殖培养、壮苗培养、生根培养和炼苗移栽，获得再生植株，该方法的具体步骤如下：
（1）选取优良母本：优良母本是指经测算比较，生长速度快、抗虫指标好、叶片形状圆整和叶片颜色好看的植株；
（2）外植体的选择：外植体应选取新鲜的带腋芽茎段，去掉所有叶片，保留所有腋芽；
（3）外植体的预处理：外植体的预处理是指：用自来水冲洗3-5min，再用软毛刷沾取洗洁精轻轻刷洗2-3遍，用纯净水冲洗10-15min；在超净工作台上，将茎条分成每段5cm左右，带1-3个茎结的茎段，便于灭菌操作；
（4）无菌体系的建立：无菌体系的建立通过75%乙醇和0.1%升汞的处理实现，将带消毒材料用无菌水清洗2-4遍，再用75%乙醇处理15-25S，无菌水清洗3-5遍，每次浸泡清洗2-3min，洗去残留的乙醇，再用0.1%升汞溶液浸泡并适当搅拌7-10min，无菌水清洗4-6遍，每次浸泡清洗2-3min，洗去残留的升汞溶液，用灭过菌的冷却好的镊子夹取清洗好的茎段，放在无菌的接种盘上，切去茎段两端各0.5-1cm，减少升汞毒害，再切割成含有一个茎结的茎段，接种于无菌芽诱导的培养基；
（5）启动培养：外植体的腋芽或顶芽直接萌发，温度25℃，光照12h/d，光照强度2000-2500Lux，启动培养基为：MS+6-BA0.7-1.3mg/L+NAA0.3-0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L，PH5.8-6.0；
（6）继代增殖培养：侧芽和不定芽不断生长，当达到1-1.5cm时，切割转接至继代增殖培养基，在温度25℃，光照12h/d，光照强度2000-2500Lux条件下培养，随着丛生芽的增加，反复继代，无菌芽苗数量不断增加，继代增殖培养基为：MS+6-BA1.3-1.7mg/L+NAA0.1-0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L，PH5.8-6.0；
（7）壮苗培养：增殖苗大多数都较为瘦弱，将增殖苗接种到壮苗培养基中，在温度25℃，光照12h/d，光照强度2000-2500Lux条件下培养，壮苗培养基为：MS+NAA0.4-0.7mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L+活性炭0.5g/L，PH6.0-6.5；
（8）生根培养：当芽苗长到2.5-3cm，并且有3-4对叶片时，去除芽苗本身的根，转入生根培养基，在温度25℃，光照12h/d，光照强度1500-2000Lux条件下培养，当冒出根点或者短根时，调整温度23-27℃，光照12h/d，光照强度2500-3000Lux条件下培养，生根培养基为：MS+IBA0.4-0.7mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L+活性炭0.5g/L，PH6.0-6.5；
（9）炼苗移栽：待观察到苗根系明显时转至大棚，进行炼苗移栽，将培养瓶移至大棚中闭瓶炼苗6天，之后打开瓶盖，加些许水，盖没培养基，防止培养基发霉，开瓶炼苗3天，将生根齐全、根系发达、高3cm以上的瓶苗，洗去培养基，移栽到用高锰酸钾消毒过的基质中，将根系发育较弱的瓶苗，洗去培养基，用生根粉浸泡15min，移栽到用高锰酸钾消毒过的基质中，将两种苗分开管理。
实施例3：
本发明提供了一种圆叶桉的组培快繁方法，采用带腋芽的茎段或顶芽为外植体，利用离体茎段或顶芽直接诱导无菌芽，经过无菌芽的继代增殖培养、壮苗培养、生根培养和炼苗移栽，获得再生植株，该方法的具体步骤如下：
（1）选取优良母本：优良母本是指经测算比较，生长速度快、抗虫指标好、叶片形状圆整和叶片颜色好看的植株；
（2）外植体的选择：外植体应选取新鲜的带腋芽茎段，去掉所有叶片，保留所有腋芽；
（3）外植体的预处理：外植体的预处理是指：用自来水冲洗3-5min，再用软毛刷沾取洗洁精轻轻刷洗2-3遍，用纯净水冲洗10-15min；在超净工作台上，将茎条分成每段5cm左右，带1-3个茎结的茎段，便于灭菌操作；
（4）无菌体系的建立：无菌体系的建立通过75%乙醇和0.1%升汞的处理实现，将带消毒材料用无菌水清洗2-4遍，再用75%乙醇处理15-25S，无菌水清洗3-5遍，每次浸泡清洗2-3min，洗去残留的乙醇，再用0.1%升汞溶液浸泡并适当搅拌7-10min，无菌水清洗4-6遍，每次浸泡清洗2-3min，洗去残留的升汞溶液，用灭过菌的冷却好的镊子夹取清洗好的茎段，放在无菌的接种盘上，切去茎段两端各0.5-1cm，减少升汞毒害，再切割成含有一个茎结的茎段，接种于无菌芽诱导的培养基；
（5）启动培养：外植体的腋芽或顶芽直接萌发，温度27℃，光照12h/d，光照强度2000-2500Lux，启动培养基为：MS+6-BA0.7-1.3mg/L+NAA0.3-0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L，PH5.8-6.0；
（6）继代增殖培养：侧芽和不定芽不断生长，当达到1-1.5cm时，切割转接至继代增殖培养基，在温度27℃，光照12h/d，光照强度2000-2500Lux条件下培养，随着丛生芽的增加，反复继代，无菌芽苗数量不断增加，继代增殖培养基为：MS+6-BA1.3-1.7mg/L+NAA0.1-0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L，PH5.8-6.0；
（7）壮苗培养：增殖苗大多数都较为瘦弱，将增殖苗接种到壮苗培养基中，在温度27℃，光照12h/d，光照强度2000-2500Lux条件下培养，壮苗培养基为：MS+NAA0.4-0.7mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L+活性炭0.5g/L，PH6.0-6.5；
（8）生根培养：当芽苗长到2.5-3cm，并且有3-4对叶片时，去除芽苗本身的根，转入生根培养基，在温度27℃，光照12h/d，光照强度1500-2000Lux条件下培养，当冒出根点或者短根时，调整温度23-27℃，光照12h/d，光照强度2500-3000Lux条件下培养，生根培养基为：MS+IBA0.4-0.7mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L+活性炭0.5g/L，PH6.0-6.5；
（9）炼苗移栽：待观察到苗根系明显时转至大棚，进行炼苗移栽，将培养瓶移至大棚中闭瓶炼苗6天，之后打开瓶盖，加些许水，盖没培养基，防止培养基发霉，开瓶炼苗3天，将生根齐全、根系发达、高3cm以上的瓶苗，洗去培养基，移栽到用高锰酸钾消毒过的基质中，将根系发育较弱的瓶苗，洗去培养基，用生根粉浸泡20min，移栽到用高锰酸钾消毒过的基质中，将两种苗分开管理。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种圆叶桉的组培快繁方法，其特征在于：采用带腋芽的茎段或顶芽为外植体，利用离体茎段或顶芽直接诱导无菌芽，经过无菌芽的继代增殖培养、壮苗培养、生根培养和炼苗移栽，获得再生植株，该方法的具体步骤如下：
（1）选取优良母本：优良母本是指经测算比较，生长速度快、抗虫指标好、叶片形状圆整和叶片颜色好看的植株；
（2）外植体的选择：外植体应选取新鲜的带腋芽茎段，去掉所有叶片，保留所有腋芽；
（3）外植体的预处理：外植体的预处理是指：用自来水冲洗3-5min，再用软毛刷沾取洗洁精轻轻刷洗2-3遍，用纯净水冲洗10-15min；在超净工作台上，将茎条分成每段5cm左右，带1-3个茎结的茎段，便于灭菌操作；
（4）无菌体系的建立：无菌体系的建立通过75%乙醇和0.1%升汞的处理实现，将带消毒材料用无菌水清洗2-4遍，再用75%乙醇处理15-25S，无菌水清洗3-5遍，每次浸泡清洗2-3min，洗去残留的乙醇，再用0.1%升汞溶液浸泡并适当搅拌7-10min，无菌水清洗4-6遍，每次浸泡清洗2-3min，洗去残留的升汞溶液，用灭过菌的冷却好的镊子夹取清洗好的茎段，放在无菌的接种盘上，切去茎段两端各0.5-1cm，减少升汞毒害，再切割成含有一个茎结的茎段，接种于无菌芽诱导的培养基；
（5）启动培养：外植体的腋芽或顶芽直接萌发，温度23-27℃，光照12h/d，光照强度2000-2500Lux；
（6）继代增殖培养：侧芽和不定芽不断生长，当达到1-1.5cm时，切割转接至继代增殖培养基，在温度23-27℃，光照12h/d，光照强度2000-2500Lux条件下培养，随着丛生芽的增加，反复继代，无菌芽苗数量不断增加；
（7）壮苗培养：增殖苗大多数都较为瘦弱，将增殖苗接种到壮苗培养基中，在温度23-27℃，光照12h/d，光照强度2000-2500Lux条件下培养；
（8）生根培养：当芽苗长到2.5-3cm，并且有3-4对叶片时，去除芽苗本身的根，转入生根培养基，在温度23-27℃，光照12h/d，光照强度1500-2000Lux条件下培养，当冒出根点或者短根时，调整温度23-27℃，光照12h/d，光照强度2500-3000Lux条件下培养；
（9）炼苗移栽：待观察到苗根系明显时转至大棚，进行炼苗移栽，将培养瓶移至大棚中闭瓶炼苗6天，之后打开瓶盖，加些许水，盖没培养基，防止培养基发霉，开瓶炼苗3天，将生根齐全、根系发达、高3cm以上的瓶苗，洗去培养基，移栽到用高锰酸钾消毒过的基质中，将根系发育较弱的瓶苗，洗去培养基，用生根粉浸泡10-20min，移栽到用高锰酸钾消毒过的基质中，将两种苗分开管理。
2.根据权利要求1所述的一种圆叶桉的组培快繁方法，其特征在于：所述步骤（5）中的启动培养基为：MS+6-BA0.7-1.3mg/L+NAA0.3-0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L，PH5.8-6.0。
3.根据权利要求1所述的一种圆叶桉的组培快繁方法，其特征在于：所述步骤（6）中的继代增殖培养基为：MS+6-BA1.3-1.7mg/L+NAA0.1-0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L，PH5.8-6.0。
4.根据权利要求1所述的一种圆叶桉的组培快繁方法，其特征在于：所述步骤（7）中的壮苗培养基为：MS+NAA0.4-0.7mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L+活性炭0.5g/L，PH6.0-6.5。
5.根据权利要求1所述的一种圆叶桉的组培快繁方法，其特征在于：所述步骤（8）中的生根培养基为：MS+IBA0.4-0.7mg/L+蔗糖30g/L+琼脂粉7g/L+活性炭0.5g/L，PH6.0-6.5。
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| CN105379624A (zh) * | 2015-12-10 | 2016-03-09 | 广西壮族自治区国有东门林场 | 一种粗皮桉的组培快繁方法 |
| CN105724252A (zh) * | 2016-03-02 | 2016-07-06 | 广西壮族自治区林业科学研究院 | 一种促进邓恩桉组培苗生根方法 |
-
2017
- 2017-10-10 CN CN201710936355.5A patent/CN107517854A/zh active Pending
Patent Citations (2)
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