CN105145372A - 一种纯色万代兰叶片诱导类原球茎的方法 - Google Patents

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韦莹
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Abstract

一种纯色万代兰叶片诱导类原球茎的方法，包括如下步骤：(1)取纯色万代兰无菌试管苗接种到MS繁殖培养基上培养获得无菌丛生芽叶片；(2)用解剖刀在所述无菌丛生芽叶片背面划伤后置于MS繁殖培养基中培养，诱导获得类原球茎。采用本发明得到的纯色万代兰类原球茎繁殖系数高，类原球茎粗壮，经复壮后获得健壮植株，在短期内提供健壮的纯色万代兰优质种苗，有效解决了纯色万代兰的规模化育苗问题。

Description

一种纯色万代兰叶片诱导类原球茎的方法
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种纯色万代兰叶片诱导类原球茎的方法。
背景技术
纯色万代兰(VandasubconcolorT.TangetF.T.Wang)为兰科万代兰属附生草本植物，属于热带附生兰，具有较强的抗旱能力，容易栽培，叶片和根都很有特色，叶片呈棒状，生长在直立的茎两旁，花序从叶腋中长出，四季都可以开花；若光照充足，一年可以开2-3次花；花期长，花色艳丽繁多，花姿奔放，是世界级的花卉名品，富有极高的观赏价值。纯色万代兰的种子细小，本身无法储存养分，自然条件下，其种子萌发阶段完全依靠菌根真菌为其提供养分，自然繁殖率低，种子种苗稀缺，资源更新非常困难。
发明内容
本发明的目的是提供一种纯色万代兰叶片诱导类原球茎的方法，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良纯色万代兰种苗、满足生产需要。
本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种纯色万代兰叶片诱导类原球茎的方法，包括以下步骤：
(1)无菌叶片的获得：取纯色万代兰无菌试管苗，接种到MS繁殖培养基上，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为6-8小时/天的条件下培养60天得到无菌丛生芽叶片，其中MS培养基中添加0.2mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.6mg/L的激动素KT、3.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(2)叶片诱导获得类原球茎：将步骤(1)得到的无菌丛生芽叶片用解剖刀在叶片背面以#字形划伤后平铺在MS繁殖培养基上，在培养温度为23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为6-8小时/天的条件下培养60天得到试管苗丛生芽，其中MS培养基中添加0.2-0.6mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2-0.6mg/L的激动素KT、3.0-5.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
本发明的突出优点在于：
(1)采用生物技术对纯色万代兰进行组织培养快速繁殖，能够在短时间内培育出大量适合栽培种植的纯色万代兰幼苗，保障纯色万代兰种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
(2)通过幼嫩叶片为外植体诱导分化获得大量的类原球茎，为获得珍稀濒危植物纯色万代兰组培苗提供了新的途径。
(31)采用本发明得到的纯色万代兰类原球茎的增殖个数达到30-40个，类原球茎粗壮，复壮后获得健壮植株。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
实施例1
本发明所述的纯色万代兰叶片诱导类原球茎的方法的一个实例，包括以下步骤：
(1)无菌叶片的获得：取纯色万代兰无菌试管苗，接种到MS繁殖培养基上，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为6-8小时/天的条件下培养60天得到无菌丛生芽叶片，其中MS培养基中添加0.2mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.6mg/L的激动素KT、3.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(2)叶片诱导获得类原球茎：将步骤(1)得到的无菌丛生芽叶片，用解剖刀在叶片背面以#字形划伤后平铺在MS繁殖培养基上，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为6-8小时/天的条件下培养60天得到试管苗丛生芽，其中MS培养基中添加0.2mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.4mg/L的激动素KT、3.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，类原球茎增殖个数为37个。
实施例2
本发明所述的纯色万代兰叶片诱导类原球茎的方法的另一个实例，包括以下步骤：
(1)无菌叶片的获得：取纯色万代兰无菌试管苗，接种到MS繁殖培养基上，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为6-8小时/天的条件下培养60天得到无菌丛生芽叶片，其中MS培养基中添加0.2mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.6mg/L的激动素KT、3.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(2)叶片诱导获得类原球茎：将步骤(1)得到的无菌丛生芽叶片，用解剖刀在叶片背面以#字形划伤后平铺在MS繁殖培养基上，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为6-8小时/天的条件下培养60天得到试管苗丛生芽，其中MS培养基中添加0.2mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的激动素KT、4.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，类原球茎增殖个数为28个。
实施例3
本发明所述的纯色万代兰叶片诱导类原球茎的方法的再一个实例，包括以下步骤：
(1)无菌叶片的获得：取纯色万代兰无菌试管苗，接种到MS繁殖培养基上，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为6-8小时/天的条件下培养60天得到无菌丛生芽叶片，其中MS培养基中添加0.2mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.6mg/L的激动素KT、3.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(2)叶片诱导获得类原球茎：将步骤(1)得到的无菌丛生芽叶片，用解剖刀在叶片背面以#字形划伤后平铺在MS繁殖培养基上，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为6-8小时/天的条件下培养60天得到试管苗丛生芽，其中MS培养基中添加0.6mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的激动素KT、5.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，类原球茎增殖个数为30个。
实施例4
本发明所述的纯色万代兰叶片诱导类原球茎的方法的又一个实例，包括以下步骤：
(1)无菌叶片的获得：取纯色万代兰无菌试管苗，接种到MS繁殖培养基上，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为6-8小时/天的条件下培养60天得到无菌丛生芽叶片，其中MS培养基中添加0.2mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.6mg/L的激动素KT、3.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(2)叶片诱导获得类原球茎：将步骤(1)得到的无菌丛生芽叶片，用解剖刀在叶片背面以#字形划伤后平铺在MS繁殖培养基上，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为6-8小时/天的条件下培养60天得到试管苗丛生芽，其中MS培养基中添加0.4mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.6mg/L的激动素KT、4.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，类原球茎增殖个数为45个。

Claims (1)

1.一种纯色万代兰叶片诱导类原球茎的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
(1)无菌叶片的获得：取纯色万代兰无菌试管苗，接种到MS繁殖培养基上，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为6-8小时/天的条件下培养60天得到无菌丛生芽叶片，其中MS培养基中添加0.2mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.6mg/L的激动素KT、3.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；
(2)叶片诱导获得类原球茎：将步骤(1)得到的无菌丛生芽叶片，用解剖刀在叶片背面以#字形划伤后平铺在MS繁殖培养基上，在培养温度23-27℃，光照强度1500lux，光照时间为6-8小时/天的条件下培养60天得到试管苗丛生芽，其中MS培养基中添加0.2-0.6mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2-0.6mg/L的激动素KT、3.0-5.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
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