CN107466861A - 一种小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法 - Google Patents

一种小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107466861A
CN107466861A CN201710894314.4A CN201710894314A CN107466861A CN 107466861 A CN107466861 A CN 107466861A CN 201710894314 A CN201710894314 A CN 201710894314A CN 107466861 A CN107466861 A CN 107466861A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seedling
seed
little hua
ages
aseptic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710894314.4A
Other languages
English (en)
Inventor
史月龙
曾宋君
吴坤林
吴英亮
刘文斌
郑枫
汤静
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Great Beach Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Nanjing Great Beach Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Great Beach Biotechnology Co Ltd filed Critical Nanjing Great Beach Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201710894314.4A priority Critical patent/CN107466861A/zh
Publication of CN107466861A publication Critical patent/CN107466861A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H1/00—Processes for modifying genotypes ; Plants characterised by associated natural traits
    • A01H1/02—Methods or apparatus for hybridisation; Artificial pollination ; Fertility
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明提供了小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，包括选取材料、人工授粉、种子悬浮液制备、无菌播种、自然光照培养室建造、原球茎诱导培养、小苗培养、大苗培养、瓶苗移栽的步骤。本发明利用自交的种子繁殖后代种苗，以保证物种的自然繁殖方式和遗传方式，提供了小花万代兰种苗的成活率。

Description

一种小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法
技术领域
本发明属于植物保护生物学和生物技术领域，具体涉及小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法。
背景技术
小花万代兰(Vanda coerulescens Griff.)小花万代兰是兰科万代兰属植物，分布云南西镇康、澜沧、墨江、思茅、景洪、勐海、勐腊、元江、元阳等县；分布于印度东北部、缅甸、泰国。生于海拔700-1600米，附生于疏林中树干上。为附生兰，茎粗壮，长8-30厘米，叶多枚，二列，先端有不规则缺刻；总状花序1-2个，长达36厘米，具多花，花色白色带淡蓝色花期3-5月，国家二级保护植物，具有重要的育种、观赏、科研、保护等价值。但由于人们过度的采伐以及其生境发生变化，野外的小花万代兰种源稀缺，因而需要对其进行人工繁殖，一方面除了满足市场以及育种、科研的需求外，另一方面可将人工繁殖的种苗回归原产地放养，令其能自然繁殖，扩大其种群数量，极好地保护该物种的多样性。
目前世界上还没有小花万代种苗繁殖专利和文献报道。本专利采用成熟的蒴果进行无菌播种、一次培养成苗，具有繁殖速度快、种苗品质优良、生长成本低等特点，只需要简单的组织培养设备就可以完成。
发明内容
本发明的目的是提供一种小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，利用自交的种子繁殖后代种苗，以保证物种的自然繁殖方式和遗传方式。
一种小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)选取材料：选取生长健壮的小花万代兰；
(2)人工授粉：于小花万代兰开花季节，选取确认花粉有活力后将其异花授于同一植株的另一朵花的柱头上；
(3)种子悬浮液制备：选取果龄为120-150天的蒴果为外植体，在酒精中浸泡，再用升汞溶液消毒，无菌水冲洗，于超净工作台上无菌条件下用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分，接着用无菌手术刀切开蒴果，将蒴果内的种子全部洗脱至一装有无菌水的容器中，每个蒴果的种子对应洗脱至一瓶装有无菌水的容器，制成种子悬浮液；然后稀释制成接种用的种子悬浮液；
(4)无菌播种：无菌条件下用移液枪吸取接种用的种子悬浮液2毫升至装有150毫升的一次成苗固体培养基的兰花培养瓶中，每瓶小花万代兰的种子数量40-60粒；
(5)自然光照培养室建造：使用钢化玻璃建成透光的培养室，并配备遮阳系统、降温设备、培养架；遮阳系统包括内外遮阳网，通过调控内外遮阳网使培养室内顶层培养架的光照强度为3000～5000Lux，顶层往下的第二、三层培养架光照强度为1000～3000Lux，底层即顶层下第四层光照强度100～1000Lux；
(6)原球茎诱导培养：将种子悬浮液均匀分布培养基表面上，将此培养瓶放置全自然光培养室中的第四层培养架上，保持其光照强度在100～1000Lux，保持培养室温度在26±2℃；此条件下培养60～90天，种子萌发形成原球茎，原球茎长出根和叶片；
(7)小苗培养：将小苗移动至培养架的第二或第三层，加强其自然光照培养，促进小苗生长，此时期培养时间为90天，小苗长成大苗，其中，培养温度为26±2℃；
(8)大苗培养：将大苗移动至培养架的第一层，在高自然光光强下进行培养，此时期培养60天，达到出苗的标准，其中，培养温度为26±2℃；
(9)瓶苗移栽：移栽时，从培养瓶中取出生根苗，洗净附着的培养基后，用高锰酸钾溶液浸泡，然后将生根苗晾干至根变白，种植基质采用已经消毒处理的水苔，置于阴凉通风处栽培，30d左右成活后的植株能产生新的根系，此时移入大棚进行正常水、肥、药管理。
所述步骤(1)中，小花万代兰为中国科学院华南植物园玻璃温室内的小花万代兰。
所述步骤(2)中，授粉后套袋，约1星期后去袋，挂上标签，标签上授粉日期和授粉人等信息，注意观察杂交蒴果的发育情况，在授粉后4个月后采集蒴果进行无菌播种。
所述步骤(3)中，酒精为70％酒精，浸泡30秒，升汞溶液的质量浓度为0.1％，消毒15～20分钟；无菌水冲洗4～5次。
所述步骤(3)中，种用的种子悬浮液的制备方法为：制成种子悬浮液后，对每个蒴果种子悬浮液进行种子密度的检测，在摇匀情况下用无菌移液枪吸取20微升于生物显微镜下计算其种子数量，每瓶种子悬浮液重复取10次计算其平均每毫升种子数，根据每瓶悬浮液种子浓度用无菌水进一步稀释成种子浓度为20-30粒/毫升的接种用的种子悬浮液。
所述步骤(4)中，一次成苗培养基的组成为：每升含花宝1号1～2g，花宝2号1～2g，蛋白胨0.5～2g，土豆泥40～80g，香蕉泥50～100g，苹果泥10～20g，活性碳500～1000mg，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，6-苄基嘌呤0.05～0.1毫克，萘乙酸(NAA)0.2～2mg，蔗糖15～30g，琼脂6～7g，pH 5.4-5.6。
所述步骤(5)中，降温设备采用冷暖两用空调，能够将玻璃培养室的温度控制在20～30℃；培养架共四层，每层的宽为60厘米，高为200厘米，层距60厘米，第四层离地面最近，离底面距离为10厘米。
所述步骤(7)中，大苗的标准是：苗高3～5cm，3～5片叶片，3～5条根须，根长1～3厘米。
所述步骤(8)中，出苗的标准是：苗高5～7cm，4片以上叶片，3条以上根，茎粗3.0mm以上。
所述步骤(9)中，高锰酸钾溶液的质量浓度为千分之一，浸泡5min。
有益效果：本发明的小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，利用自交的种子繁殖后代种苗，保证了物种的自然繁殖方式和遗传方式，小花万代兰种苗的成活率可达98％以上。
具体实施方式
本发明的小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，利用自交的种子繁殖后代种苗，具体包括以下步骤：
一种小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)选取材料：选取生长健壮的小花万代兰；优选的，选取中国科学院华南植物园玻璃温室内的小花万代兰；
(2)人工授粉：于小花万代兰开花季节，选取确认花粉有活力后将其异花授于同一植株的另一朵花的柱头上；授粉后套袋，约1星期后去袋，挂上标签，标签上授粉日期和授粉人等信息，注意观察杂交蒴果的发育情况，在授粉后4个月后采集蒴果进行无菌播种；
(3)种子悬浮液制备：选取果龄为120-150天的蒴果为外植体，在70％酒精中浸泡30秒，再用0.1％升汞溶液消毒15～20分钟，无菌水冲洗4～5次，于超净工作台上无菌条件下用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分，接着用无菌手术刀切开蒴果，将蒴果内的种子全部洗脱至一装有200毫升无菌水的三角瓶中，每个蒴果的种子对应洗脱至一瓶装有200毫升无菌水的三角瓶，制成种子悬浮液；对每个蒴果种子悬浮液进行种子密度的检测，在摇匀情况下用无菌移液枪吸取20微升于生物显微镜下计算其种子数量，每瓶种子悬浮液重复取10次计算其平均每毫升种子数。根据每瓶悬浮液种子浓度用无菌水进一步稀释成种子浓度为20-30粒/毫升的接种用的种子悬浮液；
(4)无菌播种：无菌条件下用移液枪吸取接种用的种子悬浮液2毫升至装有150毫升的一次成苗固体培养基的兰花培养瓶中，每瓶小花万代兰的种子数量40-60粒；一次成苗培养基的组成为：每升含花宝1号1～2g，花宝2号1～2g，蛋白胨0.5～2g，土豆泥40～80g，香蕉泥50～100g，苹果泥10～20g，活性碳500～1000mg，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，6-苄基嘌呤0.05～0.1毫克，萘乙酸(NAA)0.2～2mg，蔗糖15～30g，琼脂6～7g，pH 5.4-5.6；
(5)自然光照培养室建造：使用钢化玻璃建成透光的培养室，并配备遮阳系统、降温设备、培养架；遮阳系统包括内外遮阳网，通过调控内外遮阳网使培养室内顶层培养架的光照强度为3000～5000Lux，顶层往下的第二、三层培养架光照强度为1000～3000Lux，底层即顶层下第四层光照强度100～1000Lux；降温设备采用冷暖两用空调，能够将玻璃培养室的温度控制在20～30℃；培养架共四层，每层的宽为60厘米，高为200厘米，层距60厘米，第四层离地面最近，离底面距离为10厘米；
(6)原球茎诱导培养：将种子悬浮液均匀分布培养基表面上，将此培养瓶放置全自然光培养室中的第四层培养架上，保持其光照强度在100～1000Lux，保持培养室温度在26±2℃；此条件下培养60～90天，种子萌发形成原球茎，原球茎长出根和叶片；
(7)小苗培养：将小苗移动至培养架的第二或第三层，加强其自然光照培养，促进小苗生长，此时期培养时间为90天，小苗长成大苗，苗高3～5cm，3～5片叶片，3～5条根须，根长1～3厘米；其中，培养温度为26±2℃；
(8)大苗培养：将大苗移动至培养架的第一层，在高自然光光强下进行培养，既可以促进大苗的生长，又可以达到炼苗的效果；此时期培养60天，苗高5～7cm，4片以上叶片，3条以上根，茎粗3.0mm以上，达到出苗的标准，其中，培养温度为26±2℃；
(9)瓶苗移栽：移栽时，从培养瓶中取出生根苗，洗净附着的培养基后，用质量浓度为千分之一的高锰酸钾溶液浸泡5min，然后将生根苗晾干至根变白，种植基质采用已经消毒处理的水苔，注意保持适宜湿度和温度，置于阴凉通风处栽培，成活率可达98％以上；30d左右成活后的植株能产生新的根系，此时移入大棚进行正常水、肥、药管理。
根据下述实施例，可以更好的理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1
(1)材料：开花时选取生长健壮的小花万代兰进行人工授粉，授粉后150天选择种子基本成熟而未开裂的蒴果为外植体用于无菌播种。
(2)种子悬浮液制备：选取果龄为150天的蒴果为外植体，在70％酒精中浸泡30秒，再用0.1％升汞溶液消毒15～20分钟，无菌水冲洗4～5次，于超净工作台上无菌条件下用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分。接着用无菌手术刀切开蒴果，将蒴果内的种子全部洗脱至一装有200毫升无菌水的三角瓶中，每个蒴果的种子对应洗脱至一瓶装有200毫升无菌水的三角瓶，制成种子悬浮液。对每个蒴果种子悬浮液进行种子密度的检测，在摇匀情况下用无菌移液枪吸取20微升于生物显微镜下计算其种子数量，每瓶种子悬浮液重复取10次计算其平均每毫升种子数。根据每瓶悬浮液种子浓度用无菌水进一步稀释成种子浓度为30粒/毫升的接种用的种子悬浮液。
(3)无菌播种：无菌条件下用移液枪吸取接种用的种子悬浮液2毫升至装有150毫升的一次成苗固体培养基的兰花培养瓶中，每瓶小花万代兰的种子数量60粒。一次成苗培养基：每升含花宝1号1.5g，花宝2号1.5g，蛋白胨2g，土豆泥80g，香蕉泥100g，苹果泥10g，活性碳500mg，肌醇100mg，甘氨酸2.0mg，盐酸硫胺素(VB1)0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg，烟酸0.5mg，6-苄基嘌呤0.05毫克，萘乙酸(NAA)1.0mg，蔗糖20g，琼脂6.0g，pH 5.4。
(4)自然光照培养室建造：使用钢化玻璃建成透光的培养室，配备遮阳系统、降温设备、培养架。遮阳系统包括内外遮阳网，通过调控内外遮阳网使培养室内顶层培养架的光照强度为3000～5000Lux，顶层往下的第二、三层培养架光照强度为1000～3000Lux，底层即顶层下第四层光照强度100～1000Lux。降温设备采用冷暖两用空调，可将玻璃培养室的温度控制在20～30℃。培养架宽为60厘米，高为200厘米，离地面10厘米为第四层，层距60厘米，共四层，培养架长度可根据培养室的大小而定。
(5)原球茎诱导培养：将种子悬浮液均匀分布培养基表面上，将此培养瓶放置全自然光培养室中的第四层培养架上，保持其光照强度在100～1000Lux，保持培养室温度在26±2℃。此条件下培养60～90天，种子萌发形成原球茎，原球茎长出根和叶片。
(6)小苗培养：将小苗移动至培养架的第二或第三层，加强其自然光照培养，促进小苗生长，此时期培养时间为90天，小苗长成大苗，苗高3～5cm，3～5片叶片，3～5条根须，根长1～3厘米。其中，培养温度为26±2℃。
(7)大苗培养：将大苗移动至培养架的第一层，在高自然光光强下进行培养，既可以促进大苗的生长，又可以达到炼苗的效果。此时期培养60天，苗高5～7cm，4片以上叶片，3条以上根，茎粗3.0mm以上，达到出苗的标准。其中，培养温度为26±2℃。
(8)瓶苗移栽：移栽时，从培养瓶中取出生根苗，洗净附着的培养基后，用质量浓度为千分之一的高锰酸钾溶液浸泡5min，然后将生根苗晾干至根变白，种植基质采用已经消毒处理的水苔，注意保持适宜湿度和温度，置于阴凉通风处栽培，成活率可达95％以上。30d左右成活后的植株能产生新的根系，此时可移入大棚进行正常水、肥、药管理。
实施例2
(1)材料及人工授粉：于小花万代兰开花季节，选取确认花粉有活力后将其异花授于同一植株的另一朵花的柱头上。授粉后套袋，约1星期后去袋，挂上标签，标签上授粉日期和授粉人等信息。注意观察杂交蒴果的发育情况，在授粉后4个月后可采集蒴果进行无菌播种。
(2)种子悬浮液制备：选取果龄为140天的蒴果为外植体，在70％酒精中浸泡30秒，再用0.1％升汞溶液消毒15～20分钟，无菌水冲洗4～5次，于超净工作台上无菌条件下用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分。接着用无菌手术刀切开蒴果，将蒴果内的种子全部洗脱至一装有200毫升无菌水的三角瓶中，每个蒴果的种子对应洗脱至一瓶装有200毫升无菌水的三角瓶，制成种子悬浮液。对每个蒴果种子悬浮液进行种子密度的检测，在摇匀情况下用无菌移液枪吸取20微升于生物显微镜下计算其种子数量，每瓶种子悬浮液重复取10次计算其平均每毫升种子数。根据每瓶悬浮液种子浓度用无菌水进一步稀释成种子浓度为25粒/毫升的接种用的种子悬浮液。
(3)无菌播种：
无菌条件下用移液枪吸取接种用的种子悬浮液2毫升至装有150毫升的一次成苗固体培养基的兰花培养瓶中，每瓶小花万代兰的种子数量50粒。一次成苗培养基：每升含花宝1号2.0g，花宝2号2.0g，蛋白胨2g，土豆泥40g，香蕉泥80g，苹果泥10g，活性碳500mg，肌醇100mg，甘氨酸2.0mg，盐酸硫胺素(VB1)0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg，烟酸0.5mg，6-苄基嘌呤0.05毫克，萘乙酸(NAA)1.0mg，蔗糖20g，琼脂6.0g，pH 5.4。
(4)自然光照培养室建造：使用钢化玻璃建成透光的培养室，配备遮阳系统、降温设备、培养架。遮阳系统包括内外遮阳网，通过调控内外遮阳网使培养室内顶层培养架的光照强度为3000～5000Lux，顶层往下的第二、三层培养架光照强度为1000～3000Lux，底层即顶层下第四层光照强度100～1000Lux。降温设备采用冷暖两用空调，可将玻璃培养室的温度控制在20～30℃。培养架宽为60厘米，高为200厘米，离地面10厘米为第四层，层距60厘米，共四层，培养架长度可根据培养室的大小而定。
(5)原球茎诱导培养：将种子悬浮液均匀分布培养基表面上，将此培养瓶放置全自然光培养室中的第四层培养架上，保持其光照强度在100～1000Lux，保持培养室温度在26±2℃。此条件下培养60～90天，种子萌发形成原球茎，原球茎长出根和叶片。
(6)小苗培养：将小苗移动至培养架的第二或第三层，加强其自然光照培养，促进小苗生长，此时期培养时间为90天，小苗长成大苗，苗高3～5cm，3～5片叶片，3～5条根须，根长1～3厘米。其中，培养温度为26±2℃。
(7)大苗培养：将大苗移动至培养架的第一层，在高自然光光强下进行培养，既可以促进大苗的生长，又可以达到炼苗的效果。此时期培养60天，苗高5～7cm，4片以上叶片，3条以上根，茎粗3.0mm以上，达到出苗的标准。其中，培养温度为26±2℃。
(8)瓶苗移栽：移栽时，从培养瓶中取出生根苗，洗净附着的培养基后，用千分之一的高锰酸钾溶液浸泡5min，然后将生根苗晾干至根变白，种植基质采用已经消毒处理的水苔，注意保持适宜湿度和温度，置于阴凉通风处栽培，成活率可达98％以上。30d左右成活后的植株能产生新的根系，此时可移入大棚进行正常水、肥、药管理。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)选取材料：选取生长健壮的小花万代兰；
(2)人工授粉：于小花万代兰开花季节，选取确认花粉有活力后将其异花授于同一植株的另一朵花的柱头上；
(3)种子悬浮液制备：选取果龄为120-150天的蒴果为外植体，在酒精中浸泡，再用升汞溶液消毒，无菌水冲洗，于超净工作台上无菌条件下用无菌滤纸吸干蒴果表面的水分，接着用无菌手术刀切开蒴果，将蒴果内的种子全部洗脱至一装有无菌水的容器中，每个蒴果的种子对应洗脱至一瓶装有无菌水的容器，制成种子悬浮液；然后稀释制成接种用的种子悬浮液；
(4)无菌播种：无菌条件下用移液枪吸取接种用的种子悬浮液2毫升至装有150毫升的一次成苗固体培养基的兰花培养瓶中，每瓶小花万代兰的种子数量40-60粒；
(5)自然光照培养室建造：使用钢化玻璃建成透光的培养室，并配备遮阳系统、降温设备、培养架；遮阳系统包括内外遮阳网，通过调控内外遮阳网使培养室内顶层培养架的光照强度为3000～5000Lux，顶层往下的第二、三层培养架光照强度为1000～3000Lux，底层即顶层下第四层光照强度100～1000Lux；
(6)原球茎诱导培养：将种子悬浮液均匀分布培养基表面上，将此培养瓶放置全自然光培养室中的第四层培养架上，保持其光照强度在100～1000Lux，保持培养室温度在26±2℃；此条件下培养60～90天，种子萌发形成原球茎，原球茎长出根和叶片；
(7)小苗培养：将小苗移动至培养架的第二或第三层，加强其自然光照培养，促进小苗生长，此时期培养时间为90天，小苗长成大苗，其中，培养温度为26±2℃；
(8)大苗培养：将大苗移动至培养架的第一层，在高自然光光强下进行培养，此时期培养60天，达到出苗的标准，其中，培养温度为26±2℃；
(9)瓶苗移栽：移栽时，从培养瓶中取出生根苗，洗净附着的培养基后，用高锰酸钾溶液浸泡，然后将生根苗晾干至根变白，种植基质采用已经消毒处理的水苔，置于阴凉通风处栽培，30d左右成活后的植株能产生新的根系，此时移入大棚进行正常水、肥、药管理。
2.根据权利要求1所述的小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(1)中，小花万代兰为中国科学院华南植物园玻璃温室内的小花万代兰。
3.根据权利要求1所述的小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(2)中，授粉后套袋，约1星期后去袋，挂上标签，标签上授粉日期和授粉人等信息，注意观察杂交蒴果的发育情况，在授粉后4个月后采集蒴果进行无菌播种。
4.根据权利要求1所述的小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(3)中，酒精为70％酒精，浸泡30秒，升汞溶液的质量浓度为0.1％，消毒15～20分钟；无菌水冲洗4～5次。
5.根据权利要求1所述的小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(3)中，种用的种子悬浮液的制备方法为：制成种子悬浮液后，对每个蒴果种子悬浮液进行种子密度的检测，在摇匀情况下用无菌移液枪吸取20微升于生物显微镜下计算其种子数量，每瓶种子悬浮液重复取10次计算其平均每毫升种子数，根据每瓶悬浮液种子浓度用无菌水进一步稀释成种子浓度为20-30粒/毫升的接种用的种子悬浮液。
6.根据权利要求1所述的小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(4)中，一次成苗培养基的组成为：每升含花宝1号1～2g，花宝2号1～2g，蛋白胨0.5～2g，土豆泥40～80g，香蕉泥50～100g，苹果泥10～20g，活性碳500～1000mg，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素(VB1)0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇(VB6)0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，6-苄基嘌呤0.05～0.1毫克，萘乙酸(NAA)0.2～2mg，蔗糖15～30g，琼脂6～7g，pH5.4-5.6。
7.根据权利要求1所述的小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(5)中，降温设备采用冷暖两用空调，能够将玻璃培养室的温度控制在20～30℃；培养架共四层，每层的宽为60厘米，高为200厘米，层距60厘米，第四层离地面最近，离底面距离为10厘米。
8.根据权利要求1所述的小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(7)中，大苗的标准是：苗高3～5cm，3～5片叶片，3～5条根须，根长1～3厘米。
9.根据权利要求1所述的小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(8)中，出苗的标准是：苗高5～7cm，4片以上叶片，3条以上根，茎粗3.0mm以上。
10.根据权利要求1所述的小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤(9)中，高锰酸钾溶液的质量浓度为千分之一，浸泡5min。
CN201710894314.4A 2017-09-28 2017-09-28 一种小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法 Pending CN107466861A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710894314.4A CN107466861A (zh) 2017-09-28 2017-09-28 一种小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710894314.4A CN107466861A (zh) 2017-09-28 2017-09-28 一种小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107466861A true CN107466861A (zh) 2017-12-15

Family

ID=60604688

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710894314.4A Pending CN107466861A (zh) 2017-09-28 2017-09-28 一种小花万代兰种苗无菌播种快速繁殖方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107466861A (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103004604A (zh) * 2012-12-27 2013-04-03 福建农林大学 一种万代兰品种的繁育方法
CN106386482A (zh) * 2016-08-31 2017-02-15 南京仙草堂生物科技有限公司 铁皮石斛优质种苗自然光培养一次成苗快速繁殖方法
CN106472308A (zh) * 2016-09-30 2017-03-08 中国科学院华南植物园 一种兰花种子的保存及育苗方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103004604A (zh) * 2012-12-27 2013-04-03 福建农林大学 一种万代兰品种的繁育方法
CN106386482A (zh) * 2016-08-31 2017-02-15 南京仙草堂生物科技有限公司 铁皮石斛优质种苗自然光培养一次成苗快速繁殖方法
CN106472308A (zh) * 2016-09-30 2017-03-08 中国科学院华南植物园 一种兰花种子的保存及育苗方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103704130B (zh) 一种春兰与大花蕙兰杂交种育苗的方法
CN104855292B (zh) 一种牛樟茎段组培快繁的方法
CN103125386B (zh) 工厂化山葵种植方法
CN104542281B (zh) 地中海荚蒾的组培繁殖方法
CN106258956B (zh) 一种铁皮石斛纯种繁育和野外移植方法
CN108419675A (zh) 一种紫果西番莲顶梢的组培育苗方法
CN106332716A (zh) 香樟树的扦插方法
CN106258960B (zh) 一种蕙兰种子萌发快繁方法
CN105918121A (zh) 一种利用走马胎叶片快速繁殖种苗的方法
CN107197746A (zh) 一种杉木野外优异资源的繁育方法
CN105379624A (zh) 一种粗皮桉的组培快繁方法
CN106069748B (zh) 美国红枫十月辉煌的商用组织培养种苗繁育方法
CN107079817A (zh) 兜兰新品种“优优兜兰”组培快繁方法
CN107211896A (zh) 一种露地菊花瓣组织培养的培养基及方法
CN106489730B (zh) 一种火焰兰一次成苗快速繁殖方法及培养基
CN105028213A (zh) 铁皮石斛组培快繁方法
CN105075860B (zh) 一种灯盏花组培育苗方法
CN105104200B (zh) 一种合柱金莲木的组织培养快速繁殖方法
CN106577280A (zh) 一种利用驼峰藤幼嫩茎段及叶片快速繁殖无菌苗
CN106489737A (zh) 一种大花月季组织培养的培养基及方法
CN109479692A (zh) 一种适宜于实验室条件下的柑橘实生幼苗水培的装置及方法
CN104488711A (zh) 一种快速获得洋桔梗品种间杂交种的方法
CN108849500A (zh) 一种莲胚拯救及后代快速生长发育的培养基和方法
CN105284621B (zh) 一种通过体胚培养获得大量小蓬竹再生植株的方法
CN107439373A (zh) 一种铁皮石斛的批量育苗驯化方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20171215

RJ01 Rejection of invention patent application after publication