CN107439373A - 一种铁皮石斛的批量育苗驯化方法 - Google Patents
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Abstract
一种铁皮石斛的批量育苗驯化方法。技术点是采集野外健康、生长性状良好的宽叶红杆型铁皮石斛作为种源，通过培育、养护、得到正宗的铁皮石斛的果荚；将种子种植于网格板中，网格中为木粉、瓜尔豆胶、膨胀珍珠岩、微量元素、氮磷钾肥组成的标准基质，每个网格为独立网格，种植1颗种子，将网格板层层堆积，培育幼苗，出苗后将网格将架开进行驯化，使其逐步适应大棚环境和栽培条件。本发明育苗驯化方法使单个的幼苗以膨胀珍珠岩的大颗粒孔为生根环境，生长成活率高、育苗均匀，易于移栽，无需瓶装，大大提高规模化育苗效率。采用本方法批量育苗驯化铁皮石斛的成活率为90%以上。
Description
技术领域
本发明涉及一种铁皮石斛的批量育苗驯化方法，属于生物工程技术领域。
背景技术
铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)，别称铁皮兰、黑节草，是兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)多年生附生草本植物，因其茎干呈铁绿色，故而得名铁皮石斛。铁皮石斛以其极高的药用价值久负盛名，具有祛痰、抗氧化、提高机体免疫功能、降血糖和抗癌等功划刳。目前市场上流通的石斛产品——铁皮枫斗，是经过加工处理后的铁皮石斛，是一味经济价值和药用价值极高的名贵中草药。
铁皮石斛是兰科石斛属多年生附生草本，具有气生根。茎直立丛生、高30~50cm，肉质稍扁，具多节、有槽沟，呈黄绿色。单叶互生，叶片革质，无叶柄，叶形狭长，椭圆形或近披针形，叶鞘抱茎。总状花序腋生，每个花序有花2~3朵，白色，先端淡紫红色。蒴果，长圆形，有4~6棱。种子多而细小。花期5~6月，果期7～8月。
野生的铁皮石斛通常附生在海拔100～3000米高度之间的树上或岩石上，喜温暖、湿润和半阴环境，不耐严寒。一般铁皮石斛的生长适温在18～30℃之间，但处于不同时期的石斛对温度的要求不同。夜间温度在10～13℃之间，10～15℃的温差为宜：白天温度超过30"C石斛的生长会受到影响，但影响不大；生长期温度16～21℃比较合适，休眠期适温为16～18"C；冬季温度不宣低于10℃，否则幼苗容易受冻。铁皮石斛的生长环境忌干燥、怕积水，在新芽开始萌发至新根形成时需充足水分。但是过于潮湿的环境下，如果遭遇低温，很容易引起腐烂。天晴干热时，要及时浇水，同时还应该多向地面洒水，保持较高的空气湿度。在栽培上石斛比较喜光，一般以散射光为宜，光照环境保持夏秋遮光50％、冬春遮光30％比较适宜。过强的光照条件下，茎部膨大、叶色黄绿。充足的光照条件下，不仅开花好，而且开花数量多。野生石斛对土肥要求不高，一般在疏松的树皮或树干上就可以生长，有的甚至在石缝中存活。铁皮石斛生境独特，对小气候要求严格。小气候中的水分是铁皮石斛生长的制约因素，尤其是空气中的湿度，致使铁皮石斛的地域分布有限。
自然条件下，铁皮石斛因种子缺乏胚乳，繁殖能力极其低下，再加上人类长期无节制采掘，野生资源日趋枯竭，目前市场上流通的铁皮石斛，基本都是人工栽培品种，但其产量仍不能满足现今的药用需求。为了保护现有野生种质资源，保持铁皮石斛的种源稳定供应，对铁皮石斛组培快繁的研究日益增多。通过组织培养获得铁皮石斛再生植株的途径主要有：1．用成熟的种子消毒后进行无菌播种产生种苗或形成原球茎并增殖，进而分化发育成完整植株。2．诱导适宜外植体(茎段、茎尖、幼芽、叶片等)形成拟原球茎或丛生芽来实现快速繁殖，从而获得大量再生植株。其中，利用丛生芽繁殖是一种芽到芽的快繁途径，不需要通过诱导原球茎分化不定芽，能够稳定遗传母本的优良特性，继而减少后代发生变异的机率。
目前，对于石斛属植物的组织培养研究已经取得了一定进展，并逐步走向成熟。利用石斛的种子、茎段、叶、根等作外植体，诱导产生胚性愈伤组织并增殖，随后形成类胚组织原球茎，进而发育成完整的再生组培苗植株，均取得了成功，但由于铁皮石斛组培苗根系纤弱不发达，加上其对生态环境要求苛刻，移栽后成活率极低。因此，如何缩短组培苗的培育周期，成为批量育苗驯化的关键。
发明内容
为克服现有技术存在的上述缺陷，本发明提供一种铁皮石斛批量育苗驯化方法。
本发明的技术方案：
一种铁皮石斛的批量育苗驯化方法，包括以下步骤：
（1）采集野外健康、生长性状良好的宽叶红杆型铁皮石斛作为种源，用其茎尖或芽尖作为外植体，先用洗衣粉清洗干净，在流动的自来水下冲洗1~2h；再用70~75%的乙醇溶液消毒浸泡30~60s，用去离子、无菌水冲洗5~10min，把外植体放入已消毒的瓶子中；接着用质量浓度为0.1%的KMnO4或HgCl2浸泡并轻摇5~12min，用去离子、无菌水冲洗5~10min。接种于下列无菌诱导培养基中：1/2 MS+NAA 0.5~1mg/L+6-BA1~2 mg/L+3%蔗糖+1~2%琼脂，培养的环境条件为：pH5.5~6.2，培养温度25℃±2℃，光照时间10～14 h/d，光照强度2800~3200 lx，空气湿度75%±5%，培养50~70天，外植体萌芽形成绿色的原球茎。
（2）将生长良好的原球茎转接于下列增殖培养基中：1/2 MS+NAA 1~1.5mg/L+6-BA2~4mg/L+3%蔗糖+1~2%琼脂+质量浓度8~20%的土豆汁，进行增殖培养，培养的环境条件为：pH5.5~6.2，培养温度25℃±2℃，光照时间为10～14 h/d，光照强度1800~2200 lx，空气湿度75%±5%，培养120~160天，得到铁皮石斛的果荚。
（3）将种子种植于网格板中，网格中为木粉、瓜尔豆胶、膨胀珍珠岩、微量元素、氮磷钾肥组成的标准基质，每个网格为独立网格，种植1颗种子，每个网格的面积为225~900cm2，将网格板层层堆积，培育幼苗，出苗后将网格将架开进行驯化，驯化时间为45~60d，使其逐步适应大棚环境和栽培条件。
（4）将培养驯化完成的铁皮石斛组培育苗移栽入大棚环境种植；大棚环境种植管理条件为：温度控制在16~30℃，空气湿度为75%±5%；由于铁皮石斛自然生长速度慢，要定期施肥提高铁皮石斛的生长速度，主要施加含N、P、K元素的无机肥和有机肥；注意病虫害防治。
上述方案中，所述网格中的标准基质的配制方法：各组分的重量百分比为木粉20~25%、瓜尔豆胶45~55%、膨胀珍珠岩15~25%、微量元素1~5%、氮磷钾肥5~10%。配置方法为：（1）将膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶充分压碎后均匀混合后堆积，备用；（2）将消毒后的木粉加入微量元素和氮磷钾肥均匀混合堆在一起，再用薄膜封盖表面，促使其发酵，发酵时间为30~50d；（3）将堆积的膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶和发酵完成的木粉均匀混合成栽培料标准基质。
上述方案中，所述的施肥包括无机肥和有机肥，所述的无机肥施肥时需要加水溶解，浓度控制在1~2g/L；所述的施肥时间为每年的4~10月，每个月施肥1~2次。
本发明中铁皮石斛批量育苗驯化过程中，管理是很重要的，关系到整个批量驯化成功与否：
温度：铁皮石斛生长的温度组好控制在15~30℃，不可长时间低于﹣5℃或高于40℃环境中，否则铁皮石斛生长不良甚至死亡。
湿度：铁皮石斛最适宜生长在凉爽、湿润、空气流畅的环境中，批量驯化过程中，保持栽培基质湿润，不积水，控制湿度保持在75%±5%。
浇水：采用喷灌，不可冲灌，不同季节浇水量也不同，夏天气温高，水分蒸发快，基本上需要每天浇水，冬天温度低，水分散失慢，保持基质湿润即可。
病害虫防治：铁皮石斛病害主要包括腐烂病、轮斑病、灰霉病等，虫害主要有蜗牛、蚜虫、毛虫、青菜虫和蛞蝓等。对于病害虫防治应掌握“预防为先，及时治理”的原则，在驯化之前，对大田环境进行杀虫消毒，使待批量驯化地无病虫害的根源。大棚采用防虫网隔离。一旦发现病害虫要及时治理。
具体实施方式
以下通过具体实施方式对本发明作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述方法思想的情况下,根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更,均应包含在本发明的范围内。
实施例1
一种铁皮石斛的批量育苗驯化方法，包括以下步骤：
步骤1：铁皮石斛的果荚的培植
（1）采集野外健康、生长性状良好的宽叶红杆型铁皮石斛作为种源，用其茎尖或芽尖作为外植体，先用洗衣粉清洗干净，在流动的自来水下冲洗1h；再用75%的乙醇溶液消毒浸泡30s，用去离子、无菌水冲洗10min，把外植体放入已消毒的瓶子中；接着用质量浓度为0.1%的HgCl2浸泡并轻摇10min，用去离子、无菌水冲洗10min。接种于下列无菌诱导培养基中：1/2 MS+NAA 0.5mg/L+6-BA1 mg/L+3%蔗糖+1%琼脂，培养的环境条件为：pH值为6，培养温度25℃±2℃，光照时间12 h/d，光照强度3000 lx，空气湿度75%±5%，培养55天，外植体萌芽形成绿色的原球茎。
（2）将生长良好的原球茎转接于下列增殖培养基中：1/2 MS+NAA 1.5mg/L+6-BA3mg/L+3%蔗糖+2%琼脂+质量浓度10%的土豆汁，进行增殖培养，培养的环境条件为：pH为6，培养温度25℃±2℃，光照时间为12h/d，光照强度2000 lx，空气湿度75%±5%，培养150天，得到铁皮石斛的果荚。
步骤2：标准基质的培植
各组分的重量百分比为木粉20%、瓜尔豆胶50%、膨胀珍珠岩20%、微量元素1%、氮磷钾肥9%。配置方法为：（1）将膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶充分压碎后均匀混合后堆积，备用；（2）将消毒后的木粉加入微量元素和氮磷钾肥均匀混合堆在一起，再用薄膜封盖表面，促使其发酵，发酵时间为45d；（3）将堆积的膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶和发酵完成的木粉均匀混合成栽培料标准基质。
步骤3：
（1）将种子种植于网格板中，网格中为木粉、瓜尔豆胶、膨胀珍珠岩、微量元素、氮磷钾肥组成的标准基质，每个网格为独立网格，种植1颗种子，每个网格的面积为400cm2，将网格板层层堆积，培育幼苗，出苗后将网格将架开进行驯化，驯化时间为50d，使其逐步适应大棚环境和栽培条件。
（2）将培养驯化完成的铁皮石斛组培育苗移栽入大棚环境种植；大棚环境种植管理条件为：温度控制在15~30℃，空气湿度为75%±5%；由于铁皮石斛自然生长速度慢，要定期施肥提高铁皮石斛的生长速度，主要施加含N、P、K元素的无机肥和有机肥，施肥时间为每年的4~10月，每个月施肥1~2次，驯化期间注意病虫害防治。
采用本方法批量育苗驯化铁皮石斛的成活率为90%以上。
实施例2
一种铁皮石斛的批量育苗驯化方法，包括以下步骤：
步骤1：铁皮石斛的果荚的培植
（1）采集野外健康、生长性状良好的宽叶红杆型铁皮石斛作为种源，用其茎尖或芽尖作为外植体，先用洗衣粉清洗干净，在流动的自来水下冲洗1h；再用75%的乙醇溶液消毒浸泡30s，用去离子、无菌水冲洗10min，把外植体放入已消毒的瓶子中；接着用质量浓度为0.1%的KMnO4浸泡并轻摇10min，用去离子、无菌水冲洗10min。接种于下列无菌诱导培养基中：1/2 MS+NAA 0.5mg/L+6-BA1 mg/L+3%蔗糖+1%琼脂，培养的环境条件为：pH值为6，培养温度25℃±2℃，光照时间12 h/d，光照强度3000 lx，空气湿度75%±5%，培养55天，外植体萌芽形成绿色的原球茎。
（2）将生长良好的原球茎转接于下列增殖培养基中：1/2 MS+NAA 1.5mg/L+6-BA2.5mg/L+3%蔗糖+2%琼脂+质量浓度12%的土豆汁，进行增殖培养，培养的环境条件为：pH为6，培养温度25℃±2℃，光照时间为12h/d，光照强度2000 lx，空气湿度75%±5%，培养155天，得到铁皮石斛的果荚。
步骤2：标准基质的培植
各组分的重量百分比为木粉22%、瓜尔豆胶45%、膨胀珍珠岩20%、微量元素2%、氮磷钾肥11%。配置方法为：（1）将膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶充分压碎后均匀混合后堆积，备用；（2）将消毒后的木粉加入微量元素和氮磷钾肥均匀混合堆在一起，再用薄膜封盖表面，促使其发酵，发酵时间为50d；（3）将堆积的膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶和发酵完成的木粉均匀混合成栽培料标准基质。
步骤3：
（1）将种子种植于网格板中，网格中为木粉、瓜尔豆胶、膨胀珍珠岩、微量元素、氮磷钾肥组成的标准基质，每个网格为独立网格，种植1颗种子，每个网格的面积为400cm2，将网格板层层堆积，培育幼苗，出苗后将网格将架开进行驯化，驯化时间为50d，使其逐步适应大棚环境和栽培条件。
（2）将培养驯化完成的铁皮石斛组培育苗移栽入大棚环境种植；大棚环境种植管理条件为：温度控制在15~30℃，空气湿度为75%±5%；由于铁皮石斛自然生长速度慢，要定期施肥提高铁皮石斛的生长速度，主要施加含N、P、K元素的无机肥和有机肥，施肥时间为每年的4~10月，每个月施肥1~2次，驯化期间注意病虫害防治。
采用本方法批量育苗驯化铁皮石斛的成活率为90%以上。
实施例3
一种铁皮石斛的批量育苗驯化方法，包括以下步骤：
步骤1：铁皮石斛的果荚的培植
（1）采集野外健康、生长性状良好的宽叶红杆型铁皮石斛作为种源，用其茎尖或芽尖作为外植体，先用洗衣粉清洗干净，在流动的自来水下冲洗1h；再用75%的乙醇溶液消毒浸泡30s，用去离子、无菌水冲洗10min，把外植体放入已消毒的瓶子中；接着用质量浓度为0.1%的HgCl2浸泡并轻摇10min，用去离子、无菌水冲洗10min。接种于下列无菌诱导培养基中：1/2 MS+NAA 0.5mg/L+6-BA1 mg/L+3%蔗糖+1%琼脂，培养的环境条件为：pH值为6，培养温度25℃±2℃，光照时间12 h/d，光照强度3000 lx，空气湿度75%±5%，培养55天，外植体萌芽形成绿色的原球茎。
（2）将生长良好的原球茎转接于下列增殖培养基中：1/2 MS+NAA 1.5mg/L+6-BA4mg/L+3%蔗糖+2%琼脂+质量浓度15%的土豆汁，进行增殖培养，培养的环境条件为：pH为6，培养温度25℃±2℃，光照时间为12h/d，光照强度2000 lx，空气湿度75%±5%，培养145天，得到铁皮石斛的果荚。
步骤2：标准基质的培植
各组分的重量百分比为木粉20%、瓜尔豆胶45%、膨胀珍珠岩20%、微量元素1.5%、氮磷钾肥13.5%。配置方法为：（1）将膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶充分压碎后均匀混合后堆积，备用；（2）将消毒后的木粉加入微量元素和氮磷钾肥均匀混合堆在一起，再用薄膜封盖表面，促使其发酵，发酵时间为50d；（3）将堆积的膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶和发酵完成的木粉均匀混合成栽培料标准基质。
步骤3：
（1）将种子种植于网格板中，网格中为木粉、瓜尔豆胶、膨胀珍珠岩、微量元素、氮磷钾肥组成的标准基质，每个网格为独立网格，种植1颗种子，每个网格的面积为400cm2，将网格板层层堆积，培育幼苗，出苗后将网格将架开进行驯化，驯化时间为50d，使其逐步适应大棚环境和栽培条件。
（2）将培养驯化完成的铁皮石斛组培育苗移栽入大棚环境种植；大棚环境种植管理条件为：温度控制在15~30℃，空气湿度为75%±5%；由于铁皮石斛自然生长速度慢，要定期施肥提高铁皮石斛的生长速度，主要施加含N、P、K元素的无机肥和有机肥，施肥时间为每年的4~10月，每个月施肥1~2次，驯化期间注意病虫害防治。
采用本方法批量育苗驯化铁皮石斛的成活率为90%以上。
实施例4
一种铁皮石斛的批量育苗驯化方法，包括以下步骤：
步骤1：铁皮石斛的果荚的培植
（1）采集野外健康、生长性状良好的宽叶红杆型铁皮石斛作为种源，用其茎尖或芽尖作为外植体，先用洗衣粉清洗干净，在流动的自来水下冲洗1h；再用75%的乙醇溶液消毒浸泡30s，用去离子、无菌水冲洗10min，把外植体放入已消毒的瓶子中；接着用质量浓度为0.1%的HgCl2浸泡并轻摇10min，用去离子、无菌水冲洗10min。接种于下列无菌诱导培养基中：1/2 MS+NAA 0.5mg/L+6-BA0.8 mg/L+3%蔗糖+1%琼脂，培养的环境条件为：pH值为6，培养温度25℃±2℃，光照时间12 h/d，光照强度3000 lx，空气湿度75%±5%，培养60天，外植体萌芽形成绿色的原球茎。
（2）将生长良好的原球茎转接于下列增殖培养基中：1/2 MS+NAA 1.5mg/L+6-BA4mg/L+3%蔗糖+2%琼脂+质量浓度15%的土豆汁，进行增殖培养，培养的环境条件为：pH为6，培养温度25℃±2℃，光照时间为12h/d，光照强度2000 lx，空气湿度75%±5%，培养145天，得到铁皮石斛的果荚。
步骤2：标准基质的培植
各组分的重量百分比为木粉20%、瓜尔豆胶45%、膨胀珍珠岩20%、微量元素2%、氮磷钾肥13%。配置方法为：（1）将膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶充分压碎后均匀混合后堆积，备用；（2）将消毒后的木粉加入微量元素和氮磷钾肥均匀混合堆在一起，再用薄膜封盖表面，促使其发酵，发酵时间为50d；（3）将堆积的膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶和发酵完成的木粉均匀混合成栽培料标准基质。
步骤3：
（1）将种子种植于网格板中，网格中为木粉、瓜尔豆胶、膨胀珍珠岩、微量元素、氮磷钾肥组成的标准基质，每个网格为独立网格，种植1颗种子，每个网格的面积为400cm2，将网格板层层堆积，培育幼苗，出苗后将网格将架开进行驯化，驯化时间为50d，使其逐步适应大棚环境和栽培条件。
（2）将培养驯化完成的铁皮石斛组培育苗移栽入大棚环境种植；大棚环境种植管理条件为：温度控制在15~30℃，空气湿度为75%±5%；由于铁皮石斛自然生长速度慢，要定期施肥提高铁皮石斛的生长速度，主要施加含N、P、K元素的无机肥和有机肥，施肥时间为每年的4~10月，每个月施肥1~2次，驯化期间注意病虫害防治。
采用本方法批量育苗驯化铁皮石斛的成活率为90%以上。
实施例5
一种铁皮石斛的批量育苗驯化方法，包括以下步骤：
步骤1：铁皮石斛的果荚的培植
（1）采集野外健康、生长性状良好的宽叶红杆型铁皮石斛作为种源，用其茎尖或芽尖作为外植体，先用洗衣粉清洗干净，在流动的自来水下冲洗1h；再用75%的乙醇溶液消毒浸泡30s，用去离子、无菌水冲洗10min，把外植体放入已消毒的瓶子中；接着用质量浓度为0.1%的HgCl2浸泡并轻摇10min，用去离子、无菌水冲洗10min。接种于下列无菌诱导培养基中：1/2 MS+NAA 0.5mg/L+6-BA1.2 mg/L+3%蔗糖+1%琼脂，培养的环境条件为：pH值为6，培养温度25℃±2℃，光照时间12 h/d，光照强度3000 lx，空气湿度75%±5%，培养60天，外植体萌芽形成绿色的原球茎。
（2）将生长良好的原球茎转接于下列增殖培养基中：1/2 MS+NAA 1.5mg/L+6-BA3.5mg/L+3%蔗糖+2%琼脂+质量浓度15%的土豆汁，进行增殖培养，培养的环境条件为：pH为6，培养温度25℃±2℃，光照时间为12h/d，光照强度2000 lx，空气湿度75%±5%，培养150天，得到铁皮石斛的果荚。
步骤2：标准基质的培植
各组分的重量百分比为木粉20%、瓜尔豆胶45%、膨胀珍珠岩20%、微量元素2%、氮磷钾肥13%。配置方法为：（1）将膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶充分压碎后均匀混合后堆积，备用；（2）将消毒后的木粉加入微量元素和氮磷钾肥均匀混合堆在一起，再用薄膜封盖表面，促使其发酵，发酵时间为50d；（3）将堆积的膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶和发酵完成的木粉均匀混合成栽培料标准基质。
步骤3：
（1）将种子种植于网格板中，网格中为木粉、瓜尔豆胶、膨胀珍珠岩、微量元素、氮磷钾肥组成的标准基质，每个网格为独立网格，种植1颗种子，每个网格的面积为400cm2，将网格板层层堆积，培育幼苗，出苗后将网格将架开进行驯化，驯化时间为50d，使其逐步适应大棚环境和栽培条件。
（2）将培养驯化完成的铁皮石斛组培育苗移栽入大棚环境种植；大棚环境种植管理条件为：温度控制在15~30℃，空气湿度为75%±5%；由于铁皮石斛自然生长速度慢，要定期施肥提高铁皮石斛的生长速度，主要施加含N、P、K元素的无机肥和有机肥，施肥时间为每年的4~10月，每个月施肥1~2次，驯化期间注意病虫害防治。
采用本方法批量育苗驯化铁皮石斛的成活率为90%以上。
实施例6
一种铁皮石斛的批量育苗驯化方法，包括以下步骤：
步骤1：铁皮石斛的果荚的培植
（1）采集野外健康、生长性状良好的宽叶红杆型铁皮石斛作为种源，用其茎尖或芽尖作为外植体，先用洗衣粉清洗干净，在流动的自来水下冲洗1h；再用75%的乙醇溶液消毒浸泡30s，用去离子、无菌水冲洗10min，把外植体放入已消毒的瓶子中；接着用质量浓度为0.1%的HgCl2浸泡并轻摇10min，用去离子、无菌水冲洗10min。接种于下列无菌诱导培养基中：1/2 MS+NAA 0.5mg/L+6-BA1 mg/L+3%蔗糖+1%琼脂，培养的环境条件为：pH值为6，培养温度25℃±2℃，光照时间12 h/d，光照强度3000 lx，空气湿度75%±5%，培养60天，外植体萌芽形成绿色的原球茎。
（2）将生长良好的原球茎转接于下列增殖培养基中：1/2 MS+NAA 1.5mg/L+6-BA3.5mg/L+3%蔗糖+2%琼脂+质量浓度15%的土豆汁，进行增殖培养，培养的环境条件为：pH为6，培养温度25℃±2℃，光照时间为12h/d，光照强度2000 lx，空气湿度75%±5%，培养155天，得到铁皮石斛的果荚。
步骤2：标准基质的培植
各组分的重量百分比为木粉20%、瓜尔豆胶45%、膨胀珍珠岩20%、微量元素2%、氮磷钾肥13%。配置方法为：（1）将膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶充分压碎后均匀混合后堆积，备用；（2）将消毒后的木粉加入微量元素和氮磷钾肥均匀混合堆在一起，再用薄膜封盖表面，促使其发酵，发酵时间为50d；（3）将堆积的膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶和发酵完成的木粉均匀混合成栽培料标准基质。
步骤3：
（1）将种子种植于网格板中，网格中为木粉、瓜尔豆胶、膨胀珍珠岩、微量元素、氮磷钾肥组成的标准基质，每个网格为独立网格，种植1颗种子，每个网格的面积为400cm2，将网格板层层堆积，培育幼苗，出苗后将网格将架开进行驯化，驯化时间为50d，使其逐步适应大棚环境和栽培条件。
（2）将培养驯化完成的铁皮石斛组培育苗移栽入大棚环境种植；大棚环境种植管理条件为：温度控制在15~30℃，空气湿度为75%±5%；由于铁皮石斛自然生长速度慢，要定期施肥提高铁皮石斛的生长速度，主要施加含N、P、K元素的无机肥和有机肥，施肥时间为每年的4~10月，每个月施肥1~2次，驯化期间注意病虫害防治。
采用本方法批量育苗驯化铁皮石斛的成活率为90%以上。
Claims (3)
1.一种铁皮石斛的批量育苗驯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）采集野外健康、生长性状良好的宽叶红杆型铁皮石斛作为种源，用其茎尖或芽尖作为外植体，先用洗衣粉清洗干净，在流动的自来水下冲洗1~2h；再用70~75%的乙醇溶液消毒浸泡30~60s，用去离子、无菌水冲洗5~10min，把外植体放入已消毒的瓶子中；接着用质量浓度为0.1%的KMnO4或HgCl2浸泡并轻摇5~12min，用去离子、无菌水冲洗5~10min；接种于下列无菌诱导培养基中：1/2 MS+NAA 0.5~1mg/L+6-BA1~2 mg/L+3%蔗糖+1~2%琼脂，培养的环境条件为：pH5.5~6.2，培养温度25℃±2℃，光照时间10～14 h/d，光照强度2800~3200 lx，空气湿度75%±5%，培养50~70天，外植体萌芽形成绿色的原球茎；
（2）将生长良好的原球茎转接于下列增殖培养基中：1/2 MS+NAA 1~1.5mg/L+6-BA2~4mg/L+3%蔗糖+1~2%琼脂+质量浓度8~20%的土豆汁，进行增殖培养，培养的环境条件为：pH5.5~6.2，培养温度25℃±2℃，光照时间为10～14 h/d，光照强度1800~2200 lx，空气湿度75%±5%，培养120~160天，得到铁皮石斛的果荚；
（3）将种子种植于网格板中，网格中为木粉、瓜尔豆胶、膨胀珍珠岩、微量元素、氮磷钾肥组成的标准基质，每个网格为独立网格，种植1颗种子，每个网格的面积为225~900cm2，将网格板层层堆积，培育幼苗，出苗后将网格将架开进行驯化，驯化时间为45~60d，使其逐步适应大棚环境和栽培条件；
（4）将培养驯化完成的铁皮石斛组培育苗移栽入大棚环境种植；大棚环境种植管理条件为：温度控制在16~30℃，空气湿度为75%±5%；由于铁皮石斛自然生长速度慢，要定期施肥提高铁皮石斛的生长速度，主要施加含N、P、K元素的无机肥和有机肥；注意病虫害防治。
2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛的批量育苗驯化方法，其特征在于，所述网格中的标准基质的配置方法：各组分的重量百分比为木粉20~25%、瓜尔豆胶45~55%、膨胀珍珠岩15~25%、微量元素1~5%、氮磷钾肥5~10%；
配制方法为：
（1）将膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶充分压碎后均匀混合后堆积，备用；
（2）将消毒后的木粉加入微量元素和氮磷钾肥均匀混合堆在一起，再用薄膜封盖表面，促使其发酵，发酵时间为30~50d；
（3）将堆积的膨胀珍珠岩、瓜尔豆胶和发酵完成的木粉均匀混合成栽培料标准基质。
3.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛的批量育苗驯化方法，其特征在于，所述的施肥包括无机肥和有机肥，所述的无机肥施肥时需要加水溶解，浓度控制在1~2g/L；所述的施肥时间为每年的4~10月，每个月施肥1~2次。
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