CN110447539B - 一种紫花白及种苗的组培方法 - Google Patents
一种紫花白及种苗的组培方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及白及种植技术领域,具体涉及一种紫花白及种苗的组培方法。本发明通过人工授粉和种子培养,将优良的紫花白及花粉授粉到其他白及花蕊上,再配合种子培养技术,进而培育出优良的紫花白及种子作母本;所述母本种子在从白及果夹中取出前先进行带夹催种,进而提高母本种子在瓶装组培时的萌发力,尽快发芽分化;在组培过程中,经两代组培,第一代培育出较细幼苗,制得大量一代幼苗,再将一代幼苗连同芽孢转移至另一组培瓶进行二代组培,并配合液体菌剂的作用,提高幼苗的抗病变力,使得二代组培芽孢速分化,种苗迅速生长,并长出根茎;两代组培的配合作用,大大地缩短组培周期,快速得到紫花白及种苗。
Description
技术领域
本发明涉及白及种植技术领域,具体涉及一种紫花白及种苗的组培方法。
背景技术
白及是兰科,白及属的一种。据《中国植物志》记载,全世界约有6种白及,分布于亚洲的缅甸北部经我国至日本。我国产4种,分别为白及、华北白及、小白及和黄花白及,我国目前栽培的白及品种有紫花白及、黄花白及和少量的小白及。
白及以干燥块茎药用,具有收敛止血、清热利湿、消肿生肌之功效,临床上广泛用于治疗咳血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒、肺结核咳血、溃疡病出血等病症,具有很大的商品开发潜力。近几年,随着对白及药物成分的进一步分析,发现了它富含很多特殊的药用成分,包括白及联菲、白及联菲醇、白及双菲醚、白及二氢菲并吡喃酚、白及菲螺醇,这些成分很难被其他物种替代,并且有很重要的利用价值。因此,白及野生资源已远远不能满足市场需求,价格逐步攀升。
紫花白及作为白及属的一种,其具有普通白及所不具备的特殊药用价值。但是,紫花白及培育周期很长,特别是将种子直接露天播种的情况下,需要生长多年才能开花和长出块根,同时生长存活率很低,费时费力,严重影响了经济效益;除此之外,白及分株繁殖效果也不太明显,白及长势也达不到理想状态,培育周期长。
发明内容
为了解决上述问题,缩短紫花白及的培育周期,提高移栽后白及的长势及其抗病变力,本发明提供了一种紫花白及种苗的组培方法。
一种紫花白及种苗的组培方法,包括以下步骤:
a、授粉制种:2~4月份,待紫花白及花朵盛开时节,选择长势良好、无病害的紫花白及,人工收集花粉,并收集到的花粉对其他无病害紫花白及进行人工授粉,授粉结束后作种子培养;
b、取种精制:同年10~11月份,收集授粉后白及生长出的成熟白及果夹,筛分,除去不饱满和空壳果夹,破开果夹,取白及种子;
同时取升汞溶液、医用酒精、蒸馏水放在无菌的超净台上吹一段时间后,再放于无菌环境中烘干备用;取白及种子置于0.2~0.5%升贡溶液中浸泡3~5min,取出沥干后置于无水乙醇中浸泡8~10min,取出沥干后再置于蒸馏水中清洗3~5次,沥干后无菌烘干,制得精制白及种备用;
c、一代组培:向组培瓶中盛放4~6cm厚的刚配置的组培基质,扒平,消毒灭菌后撒入精制白及种,密闭组培瓶,于温度25~30℃、湿度35~45%、光照5000~8000LX的条件下培育至白及种子长出芽孢,种苗长2~4cm,培育的一代白及苗;
d、二代组培:向另一组培瓶中放置4~6cm厚的刚配置的组培基质,消毒灭菌;同时剪取一代白及苗及其芽孢,控制每个芽孢上包括一根白及幼苗,除去枯黄幼苗叶,每根幼苗上仅留下一片鲜嫩的幼苗叶;选用无菌清水冲洗干净芽孢后,滤纸吸干水分,再将芽孢置于液体菌剂中浸泡15~20s,提出沥干,移植到组培瓶中,密闭组培瓶,于温度25~30℃、湿度35~50%、光照5000~8000LX的条件下培育至白及芽孢膨胀至原来的2~5倍,种苗长5~7cm,培育得二代白及苗;
e、驯化:将上述二代白及苗移植至培养基质中,于温度20~30℃、湿度35~50%、光照5000~8000LX的条件下驯化15~30d,即得可移栽的紫花白及种苗。
优选的,所述人工授粉方法如下:
在待人工授粉的紫花白及花朵刚绽放时节,选用柔软的细毛刷刷除花蕊上的花粉,套袋,待花朵完全绽放后,选用另一细毛刷蘸取收集到的花粉,人工将花粉刷凃在待授粉的花蕊上,套袋,浇一次透根营养水,培育1~3d,去袋,培育至授粉后白及植株长出果夹。
进一步地,所述透根营养水为薏仁米淘米水的500倍稀释液,还包括占稀释液总重0.9~1.5%的磷酸二氢钾、0.5~0.8%的硫酸铝。
优选的,所述种子培养方法如下:
待紫花白及人工授粉结束7d后,进行一次除草,并浅翻种植地土壤3~5cm,避免弄伤白及根茎;并选用赤霉素的4000~5000倍稀释液喷施白及植株。
优选的,所述所述赤霉素的稀释液中还含有占稀释液总重3~5‰的过磷酸钙、2~4‰的氮源、1~2‰的钾源。
优选的,所述组培基质为常规MS培养基与大豆蛋白、多肽、枫叶干粉末按100:7:1:2的比例混合加工制成;
其中,所述干枫叶粉末粒度≤0.1mm。
优选的,所述液体菌剂由下述方法制备而成:
在纯净薏仁米淘米水中,接种占淘米水总重3~5‰的植物乳杆菌、7~9‰的酵母菌、2~4‰的赤霉素、5~9%辣木叶粉,混拌均匀后于温度28~32℃、湿度40~50%的条件下无氧发酵2~4d,再于相同条件下有氧发酵3~5d,经325目筛网过滤制得。
优选的,所述二代白及苗移植过程中,还需控制移植的每根白及苗包括一个芽孢,并控制芽孢上包括至少1根长有白毛的须根;
同时修剪掉二代白及苗枯黄叶片。
本发明的有益效果是:
与现有技术相比,本发明通过人工授粉和种子培养,将优良的紫花白及花粉授粉到其他白及花蕊上,再配合种子培养技术,进而培育出优良的紫花白及种子作母本;所述母本种子在从白及果夹中取出前先进行带夹催种,进而提高母本种子在瓶装组培时的萌发力,尽快发芽分化;
其次,在组培过程中,经两代组培,第一代培育出较细幼苗,制得大量一代幼苗,再将一代幼苗连同芽孢转移至另一组培瓶进行二代组培,并配合液体菌剂的作用,提高幼苗的抗病变力,使得二代组培芽孢速分化,种苗迅速生长,并长出根茎;两代组培的配合作用,大大地缩短组培周期,快速得到紫花白及种苗;
最后,经过对白及种苗进行人工驯化,有效让白及种苗在移栽前就适宜露天栽培环境,进而提高种苗后期的移栽存活率,使得移栽后的种苗快速生根发芽。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进一步作详细的说明,但本发明提供的技术方案不仅包括实施例中展现的内容。
实施例1
本实施例提供了一种紫花白及种苗的组培方法,具体过程如下:
a、授粉制种:3月份,待紫花白及花朵盛开时节,选择长势良好、无病害的紫花白及,人工收集花粉,并收集到的花粉对其他无病害紫花白及进行人工授粉,待紫花白及人工授粉结束7d后,进行一次除草,并浅翻种植地土壤5cm,避免弄伤白及根茎;并选用赤霉素的4000倍稀释液喷施白及植株;所述所述赤霉素的稀释液中还含有占稀释液总重3‰的过磷酸钙、4‰的氮源、1‰的钾源;
所述人工授粉方法为:在待人工授粉的紫花白及花朵刚绽放时节,选用柔软的细毛刷刷除花蕊上的花粉,套袋,待花朵完全绽放后,选用另一细毛刷蘸取收集到的花粉,人工将花粉刷凃在待授粉的花蕊上,套袋,浇一次透根营养水,培育3d,去袋,培育至授粉后白及植株长出果夹;所述透根营养水为薏仁米淘米水的500倍稀释液,还包括占稀释液总重1.5%的磷酸二氢钾、0.5%的硫酸铝;
b、取种精制:同年11月份,收集授粉后白及生长出的成熟白及果夹,筛分,除去不饱满和空壳果夹,破开果夹,取白及种子;
同时取升汞溶液、医用酒精、蒸馏水放在无菌的超净台上吹一段时间后,再放于无菌环境中烘干备用;取白及种子置于0.3%升贡溶液中浸泡3min,取出沥干后置于无水乙醇中浸泡10min,取出沥干后再置于蒸馏水中清洗5次,沥干后无菌烘干,制得精制白及种备用;
c、一代组培:向组培瓶中盛放6cm厚的刚配置的组培基质,扒平,消毒灭菌后撒入精制白及种,密闭组培瓶,于温度27℃左右、湿度40%左右、光照7000LX左右的条件下培育至白及种子长出芽孢,种苗长2cm至4cm不等,培育的一代白及苗;
d、二代组培:向另一组培瓶中放置6cm厚的刚配置的组培基质,消毒灭菌;同时剪取一代白及苗及其芽孢,控制每个芽孢上包括一根白及幼苗,除去枯黄幼苗叶,每根幼苗上仅留下一片鲜嫩的幼苗叶;选用无菌清水冲洗干净芽孢后,滤纸吸干水分,再将芽孢置于液体菌剂中浸泡20s,提出沥干,移植到组培瓶中,密闭组培瓶,于温度27℃左右、湿度45%左右、光照8000LX左右的条件下培育至白及芽孢膨胀至原来的2至5倍,种苗长5cm至7cm不等,培育得二代白及苗;
e、驯化:将上述二代白及苗移植至培养基质中,移植前修剪掉二代白及苗枯黄叶片,控制移植的每根白及苗包括一个芽孢,并控制芽孢上包括至少1根长有白毛的须根;抑移植结束后于温度25±5℃、湿度40%左右、光照8000LX左右的条件下驯化30d,即得可移栽的紫花白及种苗。
在本实施例中,所述组培基质为常规MS培养基与大豆蛋白、多肽、枫叶干粉末按100:7:1:2的比例混合加工制成;
其中,所述干枫叶粉末粒度为0.1mm。
在本实施例中,所述液体菌剂由下述方法制备而成:
在纯净薏仁米淘米水中,接种占淘米水总重3‰的植物乳杆菌、7‰的酵母菌、4‰的赤霉素、9%辣木叶粉,混拌均匀后于温度28℃、湿度40%的条件下无氧发酵4d,再于相同条件下有氧发酵3d,经325目筛网过滤制得。
实施例2
本实施例提供了一种紫花白及种苗的组培方法,具体过程如下:
a、授粉制种:4月份前,待紫花白及花朵盛开时节,选择长势良好、无病害的紫花白及,人工收集花粉,并收集到的花粉对其他无病害紫花白及进行人工授粉,待紫花白及人工授粉结束7d后,进行一次除草,并浅翻种植地土壤3cm,避免弄伤白及根茎;并选用赤霉素的5000倍稀释液喷施白及植株;所述所述赤霉素的稀释液中还含有占稀释液总重5‰的过磷酸钙、2‰的氮源、2‰的钾源;
所述人工授粉方法为:在待人工授粉的紫花白及花朵刚绽放时节,选用柔软的细毛刷刷除花蕊上的花粉,套袋,待花朵完全绽放后,选用另一细毛刷蘸取收集到的花粉,人工将花粉刷凃在待授粉的花蕊上,套袋,浇一次透根营养水,培育1d及以上,去袋,培育至授粉后白及植株长出果夹;所述透根营养水为薏仁米淘米水的500倍稀释液,还包括占稀释液总重0.9%的磷酸二氢钾、0.8%的硫酸铝;
b、b、取种精制:同年10月份,收集授粉后白及生长出的成熟白及果夹,筛分,除去不饱满和空壳果夹,破开果夹,取白及种子;
同时取升汞溶液、医用酒精、蒸馏水放在无菌的超净台上吹一段时间后,再放于无菌环境中烘干备用;取白及种子置于0.2%升贡溶液中浸泡5min,取出沥干后置于无水乙醇中浸泡8min,取出沥干后再置于蒸馏水中清洗3次,沥干后无菌烘干,制得精制白及种备用;
c、一代组培:向组培瓶中盛放4cm厚的刚配置的组培基质,扒平,消毒灭菌后撒入精制白及种,密闭组培瓶,于温度30℃、湿度45%、光照5000LX的条件下培育至白及种子长出芽孢,种苗长2cm,培育的一代白及苗;
d、二代组培:向另一组培瓶中放置4cm厚的刚配置的组培基质,消毒灭菌;同时剪取一代白及苗及其芽孢,控制每个芽孢上包括一根白及幼苗,除去枯黄幼苗叶,每根幼苗上仅留下一片鲜嫩的幼苗叶;选用无菌清水冲洗干净芽孢后,滤纸吸干水分,再将芽孢置于液体菌剂中浸泡15s,提出沥干,移植到组培瓶中,密闭组培瓶,于温度25℃、湿度50%、光照8000LX的条件下培育至白及芽孢膨胀至原来的4倍左右,种苗长5cm以上,培育得二代白及苗;
e、驯化:将上述二代白及苗移植至培养基质中,移植前修剪掉二代白及苗枯黄叶片,控制移植的每根白及苗包括一个芽孢,并控制芽孢上包括至少1根长有白毛的须根;抑移植结束后于温度25℃左右、湿度40%左右、光照7000LX左右的条件下驯化15d,即得可移栽的紫花白及种苗。
在本实施例中,所述组培基质为常规MS培养基与大豆蛋白、多肽、枫叶干粉末按100:7:1:2的比例混合加工制成;
其中,所述干枫叶粉末粒度为0.05mm。
在本实施例中,所述液体菌剂由下述方法制备而成:
在纯净薏仁米淘米水中,接种占淘米水总重5‰的植物乳杆菌、7‰的酵母菌、2‰的赤霉素、5%辣木叶粉,混拌均匀后于温度32℃、湿度50%的条件下无氧发酵2d,再于相同条件下有氧发酵5d,经325目筛网过滤制得。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明作任何形式上的限制,任何未脱离本发明技术方案内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (1)
1.一种紫花白及种苗的组培方法,其特征在于,包括以下步骤:
a、授粉制种:2~4月份,待紫花白及花朵盛开时节,选择长势良好、无病害的紫花白及,人工收集花粉,并对收集到的花粉对其他无病害紫花白及进行人工授粉,授粉结束后作种子培养;
b、取种精制:同年10~11月份,收集授粉后白及生长出的成熟白及果荚,筛分,除去不饱满和空壳果荚,破开果荚,取白及种子;
同时取升汞溶液、医用酒精、蒸馏水放在无菌的超净台上吹一段时间后,再放于无菌环境中烘干备用;取白及种子置于0.2~0.5%升汞溶液中浸泡3~5min,取出沥干后置于无水乙醇中浸泡8~10min,取出沥干后再置于蒸馏水中清洗3~5次,沥干后无菌烘干,制得精制白及种备用;
c、一代组培:向组培瓶中盛放4~6cm厚的刚配置的组培基质,扒平,放在高温灭菌锅中进行高温杀菌消毒,冷却、制成无菌组培培养基;均匀撒入精制白及种,密闭组培瓶,于温度25~30℃、湿度35~45%、光照5000~8000LX的条件下无氧培育至白及种子长出芽孢,种苗长2~4cm,培育的一代白及苗;
d、二代组培:向另一组培瓶中放置4~6cm厚的刚配置的组培基质,消毒灭菌;同时剪取一代白及苗及其芽孢,控制每个芽孢上包括一根白及幼苗,除去枯黄幼苗叶,每根幼苗上仅留下一片鲜嫩的幼苗叶;选用无菌清水冲洗干净芽孢后,滤纸吸干水分,再将芽孢置于液体菌剂中浸泡15~20s,提出沥干,移植到组培瓶中,密闭组培瓶,于温度25~30℃、湿度35~50%、光照5000~8000LX的条件下培育至白及芽孢膨胀至原来的2~5倍,种苗长5~7cm,培育得二代白及苗;
e、驯化:将上述二代白及苗移植至培养基质中,移植过程中控制移植的每根白及苗包括一个芽孢,并控制芽孢上包括至少1根长有白毛的须根;同时修剪掉二代白及苗枯黄叶片,于温度20~30℃、湿度35~50%、光照5000~8000LX的条件下驯化15~30d,即得可移栽的紫花白及种苗;
其中,所述人工授粉方法如下:
在待人工授粉的紫花白及花朵刚绽放时节,选用柔软的细毛刷刷除花蕊上的花粉,套袋,待花朵完全绽放后,选用另一细毛刷蘸取收集到的花粉,人工将花粉刷涂 在待授粉的花蕊上,套袋,浇一次透根营养水,培育1~3d,去袋,培育至授粉后白及植株长出果荚;
所述透根营养水为薏仁米淘米水的500倍稀释液,还包括占稀释液总重0.9~1.5%的磷酸二氢钾、0.5~0.8%的硫酸铝;
所述种子培养方法如下:
待紫花白及人工授粉结束7d后,进行一次除草,并浅翻种植地土壤3~5cm,避免弄伤白及根茎;并选用赤霉素的4000~5000倍稀释液喷施白及植株;
所述赤霉素的稀释液中还含有占稀释液总重3~5‰的过磷酸钙、2~4‰的氮源、1~2‰的钾源;
所述组培基质为常规MS培养基与大豆蛋白、多肽、枫叶干粉末按100:7:1:2的比例混合加工制成;干枫叶粉末粒度≤0.1mm;
所述液体菌剂由下述方法制备而成:
在纯净薏仁米淘米水中,接种占淘米水总重3~5‰的植物乳杆菌、7~9‰的酵母菌、2~4‰的赤霉素、5~9%辣木叶粉,混拌均匀后于温度28~32℃、湿度40~50%的条件下无氧发酵2~4d,再于相同条件下有氧发酵3~5d,经325目筛网过滤制得。
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