CN108739396B

CN108739396B - 一种红金银花茎段快速成苗方法

Info

Publication number: CN108739396B
Application number: CN201810629592.1A
Authority: CN
Inventors: 马丽; 郭学良; 韩霜; 李亚静; 肖志勇
Original assignee: Shangqiu Normal University
Current assignee: Shangqiu Normal University
Priority date: 2018-06-19
Filing date: 2018-06-19
Publication date: 2021-05-25
Anticipated expiration: 2038-06-19
Also published as: CN108739396A

Abstract

本发明属于农业栽培技术领域，特别涉及一种红金银花茎段快速成苗方法，包括采集带节间红金银花幼嫩枝条，洗衣粉浸洗后无菌水冲洗，再经乙醇、氯化汞浸泡后无菌水冲洗；分别在MS培养基中添加NAA、KT、6‑BA调制成诱导培养基、生长培养基、增殖培养基；将无菌处理后的枝条截成茎段依次接种于三种培养基中，得红金银花苗。本发明选用带腋芽红金银花茎段作为繁育材料，依次接种于添加了不同浓度的NAA、KT、6‑BA的培养基中，培育出无病毒感染、生长良好、成活快成活率高的红金银花苗。

Description

一种红金银花茎段快速成苗方法

技术领域

本发明属于农业栽培技术领域，特别涉及一种红金银花茎段快速成苗方法。

背景技术

红金银花(Lonicerajaponica var.chinensis)为忍冬科、忍冬属的半常绿灌木，是金银花(Lonicerajaponica Thund.)的变种之一。红金银花花蕾颜色富于变化，开放前由紫红色变为大红色，花开时先为粉红色，后变为红、黄、白相间，赏心悦目，非常美观，而且嫩枝和叶均为紫红色，蔓条下垂，具有优雅别致的姿态，拥有非常高的观赏价值；花香四溢，比普通金银花的香味更加浓厚，并且其花、叶、茎均可入药，是金银花中一个独特的品种。

植物组织培养技术指的是在无菌的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，在人工环境里培养成完整的植株。目前，植物组织培养应用最多、最有效的方面是植物脱毒和离体快繁技术。运用组织培养法繁殖可以不受气候、地域等其他自然环境因素的影响，比常规方法更能扩大繁殖，有效地提供大量的优质种苗，快速地进行工厂化生产。目前，对金银花的组织培养植株已经进行了较多的研究，但是对红金银花的组织培养快繁技术的研究报道却是比较少的。而且，现有红金银花主要以扦插的方式繁殖，但存在植株携带病毒、杂菌、生长发育不良，植株成活率不高的问题。为此，本申请应用植物组织培养技术设计一种红金银花茎段快速成苗方法。

发明内容

本发明选用带腋芽红金银花茎段作为繁育材料，依次接种于添加了不同浓度的NAA、KT、6-BA的培养基中，培育出无病毒感染、生长良好、成活快成活率高的红金银花苗。

本发明提供了一种红金银花茎段快速成苗方法，包括以下步骤：

S1，采集带节间红金银花幼嫩枝条，除去叶片，用洗衣粉溶液浸泡10-13min，再用自来水冲洗并浸泡，再用无菌水反复冲洗3-5次，然后于无菌环境中用乙醇浸泡15-20s，然后无菌水冲洗，再放入氯化汞溶液中，搅拌3min，捞出后用无菌水冲洗5-6次，最后用无菌滤纸吸干枝条表面水分，得无菌枝条；

S2，在MS培养基中添加蔗糖和琼脂，得基础培养基；在基础培养基中依次加入6-BA、NAA、KT，使6-BA终浓度为1.0-1.5mg/L，NAA终浓度为0.1-0.2mg/L，KT终浓度为0.5-1.5mg/L，pH值调整为6.0，得诱导培养基；

在基础培养基中依次加入6-BA、NAA、KT，使6-BA终浓度为1.0-1.5mg/L，NAA终浓度为0.1-0.2mg/L，KT终浓度为0.5-1.5mg/L，pH值调整为6.0，得生长培养基；

在基础培养基中依次加入6-BA、NAA，使6-BA终浓度为1.5mg/L，NAA终浓度为0-0.8mg/L，pH值调整为6.0，得增殖培养基；

S3，将S1中无菌枝条截成1cm长带节间茎段，接种于S2中诱导培养基中，20-23d后得愈伤茎段，选择长势良好的愈伤茎段转接进S2中生长培养基中，30-33d后得生长茎段，选择长势良好的生长茎段除去顶芽，再切割成1-2cm的腋芽茎段并接种于S2中增殖培养基中，培养7-10d，得红金银花苗。

优选的，S1中洗衣粉溶液的质量浓度为2％；自来水冲洗时间为1h，浸泡时间为30-35min；乙醇的体积浓度为75％；氯化汞溶液的质量浓度为0.2％。

优选的，S2中诱导培养基中6-BA终浓度为1.5mg/L，NAA终浓度为0.1mg/L，KT终浓度为0.5mg/L；生长培养基中6-BA终浓度为1.5mg/L，NAA终浓度为0.2mg/L，KT终浓度为1.0mg/L；增殖培养基中6-BA终浓度为1.5mg/L，NAA终浓度为0.2mg/L。

优选的，S2中蔗糖、琼脂和MS培养基的用量比为20g：7g：1L。

优选的，S3中腋芽茎段至少含一对腋芽。

优选的，S3中腋芽茎段在增殖培养基中的培养条件为：25-27℃、光照强度为2000lx、光照时间为12h/d。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

本发明选用带腋芽红金银花茎段作为繁育材料，以添加了蔗糖和琼脂的MS培养基为基础，根据不同生产阶段添加了不同浓度的6-BA、NAA、KT配制相应的培养基，培育出无病毒感染、生长良好、成活快成活率高的红金银花苗，为红金银花的离体快速成苗和工厂化生产奠定基础，有利于研究红金银花离体培养的条件筛选和利用。

附图说明

图1为本发明在增殖培养基中长势良好的茎段。

具体实施方式

下面对本发明的几个具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。

实施例1

一种红金银花茎段快速成苗方法，包括以下步骤：

S1，采集2年生带节间红金银花幼嫩枝条，除去叶片，用质量浓度为2％洗衣粉溶液浸泡10min去除表面污垢，再用自来水冲洗1h并浸泡30min，再用无菌水反复冲洗3-5次，无菌环境中用体积浓度为75％的乙醇浸泡15s，然后无菌水冲洗，再放入质量浓度为0.2％的氯化汞溶液中，搅拌3min，捞出后用无菌水冲洗5-6次，最后用无菌滤纸吸干枝条表面水分，得无菌枝条；

S2，在MS培养基中添加蔗糖和琼脂，高温高压灭菌后得基础培养基；在基础培养基中依次加入6-BA(6-苄氨基嘌呤)、NAA(萘乙酸)、KT(激动素)，使6-BA终浓度为1.5mg/L，NAA终浓度为0.1mg/L，KT终浓度为0.5mg/L，pH值调整为6.0，得诱导培养基；在基础培养基中依次加入6-BA、NAA、KT，使6-BA终浓度为1.5mg/L，NAA终浓度为0.2mg/L，KT终浓度为1.0mg/L，pH值调整为6.0，得生长培养基；在基础培养基中依次加入6-BA、NAA，6-BA终浓度为1.5mg/L，使NAA终浓度为0.2mg/L，pH值调整为6.0，得增殖培养基；

其中，其中，蔗糖、琼脂和MS培养基的用量比为20g：7g：1L；

S3，将S1中无菌枝条截成1cm长带节间茎段，接种于S2中诱导培养基中，20d后得愈伤茎段，选择长势良好的愈伤茎段转接进S2中生长培养基中，30d后得生长茎段，选择长势良好的生长茎段除去顶芽，再切割成1-2cm的腋芽茎段并接种于S2中增殖培养基中，腋芽茎段至少含一对腋芽，25℃、光照强度为2000lx、光照时间为12h/d条件下培养7d，得红金银花苗。

实施例2

一种红金银花茎段快速成苗方法，包括以下步骤：

S1，采集2年生带节间红金银花幼嫩枝条，除去叶片，用质量浓度为2％洗衣粉溶液浸泡13min去除表面污垢，再用自来水冲洗1h并浸泡35min，再用无菌水反复冲洗3-5次，无菌环境中用体积浓度为75％的乙醇浸泡20s，然后无菌水冲洗，再放入质量浓度为0.2％的氯化汞溶液中，搅拌3min，捞出后用无菌水冲洗5-6次，最后用无菌滤纸吸干枝条表面水分，得无菌枝条；

S2，在MS培养基中添加蔗糖和琼脂，高温高压灭菌后得基础培养基；在基础培养基中依次加入6-BA(6-苄氨基嘌呤)、NAA(萘乙酸)、KT(激动素)，使6-BA终浓度为1.0mg/L，NAA终浓度为0.2mg/L，KT终浓度为1.5mg/L，pH值调整为6.0，得诱导培养基；在基础培养基中依次加入6-BA、NAA、KT，使6-BA终浓度为1.0mg/L，NAA终浓度为0.1mg/L，KT终浓度为1.5mg/L，pH值调整为6.0，得生长培养基；在基础培养基中依次加入6-BA、NAA，6-BA终浓度为1.5mg/L，使NAA终浓度为0.8mg/L，pH值调整为6.0，得增殖培养基；

其中，蔗糖、琼脂和MS培养基的用量比为20g：7g：1L；

S3，将S1中无菌枝条截成1cm长带节间茎段，接种于S2中诱导培养基中，23d后得愈伤茎段，选择长势良好的愈伤茎段转接进S2中生长培养基中，33d后得生长茎段，选择长势良好的生长茎段除去顶芽，再切割成1-2cm的腋芽茎段并接种于S2中增殖培养基中，腋芽茎段至少含一对腋芽，27℃、光照强度为2000lx、光照时间为12h/d条件下培养10d，得红金银花苗。

实施例3

不同激素(6-BA、NAA、KT)在诱导培养基中最佳添加量探讨：

试验材料：实施例1的S1中带腋芽的无菌枝条截成1cm茎段；

试验方法：分别以6-BA终浓度为1.0mg/L、1.5mg/L，NAA终浓度为0.1mg/L、0.2mg/L，KT终浓度为0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L，正交组合制成12种诱导培养基。分别接种试验材料于12种诱导培养基中，计算发芽率、污染率，其中污染率＝污染数/接种数×100％，发芽率＝出芽数/(接芽总数-污染芽数)×100％，诱导培养基制备方式、培养方式均与实施例1一致结果如表1：

表1不同浓度配比的诱导培养基对红金银花的影响

由表1可知，诱导培养基可诱导产生新芽，在不同浓度梯度激素配比培养基中，6-BA浓度为1.5mg/L的培养基较于浓度为1.0mg/L的培养基，诱导生芽的长势更快，苗更加粗壮。组别7芽的诱导率最高，其出芽率高达95.8％，条件最佳。

实施例4

不同激素(6-BA、NAA、KT)在生长培养基中最佳添加量探讨：

试验材料：实施例1的S3中愈伤茎段；

试验方法：分别以6-BA终浓度为1.0mg/L、1.5mg/L，NAA终浓度为0.1mg/L、0.2mg/L，KT终浓度为0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L，组合制成6种生长培养基。分别接种试验材料于6种生长培养基中，观察茎段生长情况，生长培养基制备方式、培养方式均与实施例1一致结果如表2：

表2不同浓度配比的生长培养基对红金银花的影响

由表2可知，6-BA浓度为1.5mg/L培养基中的芽生长较快并且粗壮，可看出该浓度下的培养基配比最好，组别M5诱导生芽的时间最短，且苗生长的最粗壮，叶片完全展开，芽体生长良好，是最为理想的生芽生长培养基配方，其次生长较好的为组别M4和组别M3，其苗的长势较好，出苗快，但较于组别M5，叶子并不完全展开。

实施例5

不同激素(6-BA、NAA)在增殖培养基中最佳添加量探讨：

试验材料：实施例1的S3中腋芽茎段；

试验方法：分别以6-BA终浓度为1.5mg/L，NAA终浓度为0mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.8mg/L，组合制成5种增殖培养基。分别接种试验材料于5种增殖培养基中，观察红金银花苗生长情况，计算增殖倍数。其中，增值倍数＝出芽总数/接芽总数。增殖培养基制备方式、培养方式均与实施例1一致结果如表3：

表3不同浓度配比的增殖培养基对红金银花的影响

由表3，由前两个实验得出的结果为6-BA的浓度为1.5mg/L时芽体长势越好，所以本实施例中中直接采用6-BA的浓度为1.5mg/L。组别L3增殖系数高达4.50倍，培育的苗能够有效的进行增殖和分化，新生芽数量多、生长健壮、苗较为浓绿；其次是组别L4，叶平展，苗为淡绿色、生长较快；而高浓度的NAA反而对增殖培养起到抑制作用。如：组别L5较于组别L4来说，随着NAA浓度的升高，其增殖系数反而逐渐降低，并且培养苗的质量明显下降。

需要说明的是，本发明权利要求书中采用的步骤方法与上述实施例相同，为了防止赘述，本发明的描述了优选的实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims

1.一种红金银花茎段快速成苗方法，其特征在于，包括以下步骤：

S2，在MS培养基中添加蔗糖和琼脂，得基础培养基；在基础培养基中依次加入6-BA、NAA、KT，使6-BA终浓度为1.5mg/L，NAA终浓度为0.1mg/L，KT终浓度为0.5mg/L，pH值调整为6.0，得诱导培养基；

在基础培养基中依次加入6-BA、NAA、KT，使6-BA终浓度为1.5mg/L，NAA终浓度为0.2mg/L，KT终浓度为1.0mg/L，pH值调整为6.0，得生长培养基；

在基础培养基中依次加入6-BA、NAA，使6-BA终浓度为1.5mg/L，NAA终浓度为0.2mg/L，pH值调整为6.0，得增殖培养基；

2.如权利要求1所述的红金银花茎段快速成苗方法，其特征在于，S1中洗衣粉溶液的质量浓度为2％；自来水冲洗时间为1h，浸泡时间为30-35min；乙醇的体积浓度为75％；氯化汞溶液的质量浓度为0.2％。

3.如权利要求1所述的红金银花茎段快速成苗方法，其特征在于，S2中蔗糖、琼脂和MS培养基的用量比为20g：7g：1L。

4.如权利要求1所述的红金银花茎段快速成苗方法，其特征在于，S3中腋芽茎段至少含一对腋芽。

5.如权利要求1所述的红金银花茎段快速成苗方法，其特征在于，S3中腋芽茎段在增殖培养基中的培养条件为：25-27℃、光照强度为2000lx、光照时间为12h/d。