CN102763599B - 桃儿七组培苗炼苗及移栽驯化的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种桃儿七组培苗炼苗及移栽驯化的方法，包括桃儿七组培苗幼苗在培养室内开瓶炼苗和移栽入移栽基质炼苗、大棚移栽和移栽后管理及野外驯化等步骤。本发明的方法可以提高桃儿七组培苗移栽成活率15%以上，成活后经野外驯化的桃儿七植株生长健壮，真叶可达4~5片，与相同生长年限的野外人工种植植株相比多2~3片真叶，根粗壮且数目更多。

Description

桃儿七组培苗炼苗及移栽驯化的方法

技术领域

本发明涉及桃儿七组培苗炼苗及移栽驯化的方法。

背景技术

  桃儿七（Sinopodophyllum hexandrum Royle）是小檗科桃儿七属草本植物，全球珍稀药用植物，目前已被列入《中华珍稀濒危植物名录》，国家三级保护植物。其根和根茎中含有的鬼臼毒素是合成多种抗癌药物的起始物质。自然条件下，桃儿七以种子繁殖为主，种子休眠期长(6~8个月)，发芽后生长极为缓慢，与其它一些多年生药用植物相比，它的地上部分的生活周期非常短暂，年有效生长天数仅为90~120天，5~6年才能成长为商品药材。

桃儿七的的分布海拔为1500~4300m，多集中在2000m以上的高原地区。它对环境温度、土壤条件要求极为苛刻，适宜生长在山谷林下富含腐殖质而疏松的土壤上，怕强光，喜冷凉湿润气候。由于桃儿七的获得主要依靠野外采集，过度采挖已使得野生桃儿七资源逐渐减少，分布面积不断缩小，因此挽救和保护桃儿七野生资源并扩大其种群数量迫在眉睫。

桃儿七组织培养技术的研究始于上世纪80年代，研究进展缓慢，炼苗及移栽驯化方面的技术未见系统研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种桃儿七组培苗炼苗的方法。

本发明的另一个目的是提供一种桃儿七组培苗炼苗的移栽驯化的方法。

 一种桃儿七组培苗炼苗方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

  A 瓶内炼苗

     选取具有真叶、茎、2条根以上的桃儿七完整组培苗，揭去组培瓶封口膜，在培养室内继续培养5

 天，培养室内的培养温度白天22～26℃，夜间17～21℃，光周期：10 h/d，光强：1000~1500Lux， 

 湿度：70~90%。

 B 瓶外移栽炼苗：

    从瓶中取出桃儿七组培苗，用温水洗净根及根茎部位培养基，然后移栽消过毒的移栽基质中，移栽基质为草炭土与珍珠岩按2:1混合；移栽完毕浇注1500倍的多菌灵溶液，在培养室内放置15~20天，培养室内的培养温度白天22～26℃，夜间17～21℃，光周期：10 h/d，光强：1000~1500Lux， 湿度：70~90%。

 一种桃儿七组培苗炼苗的移栽驯化的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：   

C、大棚移栽和移栽后管理：              

     a 秋冬季移栽：所述步骤B的培养室中移栽到基质中的桃儿七幼苗长出新芽新根后，在每年10~11月搬放到大棚温室中，每周浇水2次，大棚中的温湿度条件为：平均最低气温10℃，平均最高气温36℃，平均最低湿度70%，平均最高湿度98%。移栽苗经历冬季休眠期以后在次年萌发新芽后，3~4月逐级扩大移栽，移栽基质为草炭土。

 b 春季移栽：所述步骤B的培养室中移栽到基质中的桃儿七幼苗长出新芽新根后，在每年3~4月搬放到大棚温室中，大棚中的温湿度条件为：平均最低气温10℃，平均最高气温27℃，平均最低湿度60%，平均最高湿度98%。萌发新芽后逐级扩大移栽，移栽基质为草炭土。

D 野外驯化：

以上大棚移栽苗在5~6月移出温室放置于木本树木自然遮阴通风条件下或遮阴棚下，叶面喷施200倍1/2MS营养液和30mg/L 6-苄基腺嘌呤(6-BA)，1周1次。9~10月移栽至海拔2000m以上的林间空地，行株距为30×30cm，土壤覆盖根系2cm，浇足定根水。

MS营养液为现有产品。

组培快繁技术是解决桃儿七繁殖困难、促进人工栽培、扩大其种群数量、解决其资源现状的有效途径之一。而组培苗炼苗及移栽驯化技术是决定组织培养苗最终能否应用于人工栽培的关键步骤。

本发明桃儿七种子采集于中国甘肃省兰州市兴隆山，其组织培养苗是在无菌条件下萌发后，通过芽的诱导、增殖与生根等现有组织培养技术所获得。组培苗的炼苗移栽及野外驯化是决定桃儿七组培技术是否成功的最终步骤。野外驯化最终将大棚移栽苗移栽至甘肃省兰州市兴隆山。

本发明从影响桃儿七组织培养苗成活率的因素，炼苗时间与方式、移栽基质、移栽季节和移栽后的管理与野外驯化等方面入手，研究出一种桃儿七组培植株炼苗及移栽驯化的方法，成功的将桃儿七组培苗移栽成活率提高了15% 以上，成活后经野外驯化的桃儿七植株生长健壮，真叶可达4~5片，与相同生长年限的野外人工种植植株相比多2~3片真叶，根粗壮且数目更多。此方法可为桃儿七的快速繁育提供实用性较强的操作依据。 

 本发明的优点：

    1）本发明的方法中增加了炼苗步骤，改变了生长基质，使桃儿七组培苗具有更大的适应阶段，极大的提高了移栽的成活率。

 2) 桃儿七组培苗移栽初期，根及根茎最忌积水，移栽基质选用草炭土与珍珠岩按照2：1混合，既具有一定肥力又透水透气，可防止根及根茎的腐烂，提高成活率。

 3) 针对桃儿七一年有两个休眠季的生物学特性，选择两个适宜的移栽时间段进行移栽，符合桃儿七的生物学特性，与现有的组培苗移栽方式相比，可提高成活率15%以上，同时移栽时间集中可以降低西北地区温室调控成本，便于移栽后管理。

 4）针对于桃儿七生长缓慢，移栽成活后，喷施30mg/L 6-苄基腺嘌呤(6-BA)，促进叶芽形成，有利于地下部位生物量的积累而增加药用部位产量，缩短生长年限。

 5) 选择与野生桃儿七相似生境环境条件驯化，能够真正实现桃儿七组培苗移栽野外，野外驯化后的桃儿七植株，在次年生长期，真叶可达4~5片，与相同生长年限的野外人工种植植株相比多2~3片真叶，根粗壮，根数达到20~25条，平均每株带1~2个根芽，可继续进行分根繁殖，扩大种群数量，对实现保护野生桃儿七栖息地生态环境和解决其资源匮乏的现状有现实意义。

具体实施方式

以下实施例进一步说明本发明的具体实施过程，但不以任何方式限制本发明。

实施例1 桃儿七组培苗炼苗

1）瓶内炼苗：选取具有真叶、茎、2条根以上的桃儿七组培幼苗，揭去组培瓶封口膜，在培养室内继续培养5天，培养室内的培养温度白天22～26℃，夜间17～21℃，光周期：10 h/d，光强：1000~1500Lux， 湿度：70~90%。

2) 瓶外移栽炼苗：从瓶中取出桃儿七幼苗，用温水洗净根及根茎部位培养基，然后移栽至在160℃下干热灭菌2~3h的移栽基质中，培养条件与瓶内开口炼苗相同。移栽基质为草炭土与珍珠岩按2:1混合；移栽完毕浇注1500倍的多菌灵溶液，在培养室内放置15~20天，幼苗长出新叶和新根，成活率98.2%。

  实施例2 桃儿七组培苗炼苗的移栽驯化

3) 大棚移栽和移栽后管理：将实施例1培养室中移栽到基质中的桃儿七幼苗，10~11月搬放到大棚温室中。大棚中的条件为：平均最低气温10℃，平均最高气温36℃，平均最低湿度70%，平均最高湿度98%。移栽后的幼苗，每周浇水2次，20天即度过缓苗期，新叶逐渐展开，变厚成深绿色，移栽成活率为98.1%。到1月最冷月时，地上部位枯萎后，两周浇水1次，3~4月新芽出土后逐级扩大移栽，移栽基质为草炭土。

4）野外驯化：以上大棚移栽成活的幼苗，5~6月移出温室放置于木本树木自然遮阴通风条件下或遮阴棚下，叶面喷施200倍1/2MS营养液和30mg/L 6-苄基腺嘌呤(6-BA)，1周1次。9~10月移栽至海拔2000m 以上的林间空地，行株距为30×30cm，土壤覆盖根系2cm，浇足定根水。在次年生长期，真叶数达到4~5片，根数达到20~25条，最高可达32条，根粗0.3cm，平均每株带1~2个根芽。

 实施例3桃儿七组培苗炼苗的移栽驯化

3) 大棚移栽和移栽后管理：将实施例1培养室中移栽到基质中的桃儿七幼苗，3~4月搬放到大棚温室中，大棚中的温湿度条件为：平均最低气温10℃，平均最高气温27℃，平均最低湿度60%，平均最高湿度98%。移栽后的幼苗，每周浇水2次。移栽成活率为95.0%。新芽和新根长出以后，逐级扩大移栽，移栽基质为草炭土；

4）野外驯化：以上大棚移栽成活的幼苗，5~6月移出温室放置于木本树木自然遮阴通风条件下或遮阴棚下，叶面喷施200倍1/2MS营养液和30mg/L 6-苄基腺嘌呤(6-BA)，1周1次。9~10月移栽至海拔2000m 以上的林间空地，行株距为30×30cm，土壤覆盖根系2cm，浇足定根水。在次年生长期，真叶数达到4~5片，根数达到20条，根粗0.2~0.25cm，平均每株带1个根芽。

 为证明本发明效果，特做出以下10个对比例：

    对比例 1

选取具有真叶、茎、2条根以上的桃儿七组培幼苗，不经过瓶内炼苗，直接从瓶中取出桃儿七幼苗，用温水洗净培养基后移栽消过毒的基质中（草炭土与珍珠岩比例为2:1），继续放置在培养室内15~20天，大部分植株叶片迅速萎蔫，无新叶新根长出，成活率为22.3%。

对比例2 

选取具有真叶、茎、2条根以上的桃儿七组培幼苗，瓶内炼苗2天后，从瓶中取出桃儿七幼苗，用温水洗净培养基后移栽消过毒的基质中（草炭土与珍珠岩比例为2:1），继续放置在培养室内15~20天，大部分植株叶片萎蔫，无新叶新根长出，成活率为59.6%。

对比例3 

选取具有真叶、茎、2条根以上的桃儿七组培幼苗，瓶内炼苗10天后，从瓶中取出桃儿七幼苗，用温水洗净培养基后移栽消过毒的基质中（草炭土与珍珠岩比例为2:1），继续放置在培养室内15~20天，幼苗长出新叶新根，成活率为97.0%。由于炼苗时间增加了5天，培养基受到各种微生物的污染，培养基变干，将幼苗从培养瓶中取出时，幼根极易损伤。

对比例 4 

选取具有真叶、茎、2条根以上的桃儿七组培幼苗，瓶内炼苗5天后，从瓶中取出桃儿七幼苗，洗净培养基后移栽至消过毒的草炭土中，继续放置在培养室内15~20天，部分植株根部褐化腐烂，叶片枯萎，成活率为71.3%。

对比例 5

选取具有真叶、茎、2条根以上的桃儿七组培幼苗，瓶内炼苗5天后，从瓶中取出桃儿七幼苗，洗净培养基后移栽至消过毒的草炭土和蛭石按1:1比例混合的基质中，继续放置在培养室内15~20天，根部易积水腐烂，部分叶片枯萎，成活率为54.6%。

对比例6

选取具有真叶、茎、2条根以上的桃儿七组培幼苗，瓶内炼苗5天后，从瓶中取出桃儿七幼苗，洗净培养基后移栽至消过毒的草炭土和蛭石按2:1比例混合的基质中，继续放置在培养室内15~20天，根部易积水腐烂，部分叶片枯萎，成活率为50.0%。

对比例7

选取具有真叶、茎、2条根以上的桃儿七组培幼苗，瓶内炼苗5天后，从瓶中取出桃儿七幼苗，洗净培养基后移栽至消过毒的草炭土、珍珠岩和蛭石按1:1:1比例混合的基质中，继续放置在培养室内15~20天，部分植株根部褐化腐烂，叶片枯萎，成活率为77.5%。

对比例8

选取具有真叶、茎、2条根以上的桃儿七组培幼苗，瓶内炼苗5天后，从瓶中取出桃儿七幼苗，洗净培养基后移栽至消过毒的草炭土和珍珠岩按1:1比例混合的基质中，继续放置在培养室内15~20天，成活率为95.0%，植株生长势弱。

对比例 9

经过瓶内炼苗与瓶外移栽后的桃儿七幼苗(方法和条件与实施例1相同），与实施1的区别在于12月搬放到大棚温室中，大棚中的温湿度条件为：平均最低气温4℃，平均最高气温20℃，平均最低湿度88%，平均最高湿度98%，20d时成活率为56.7%。

对比列 10

经过瓶内炼苗与瓶外移栽后的桃儿七幼苗(方法和条件与实施例1相同），与实施1的区别在于5~6月搬放到大棚温室中，大棚中的温湿度条件为：平均最低气温15℃，平均最高气温46℃，平均最低湿度40%，平均最高湿度98%。20d时成活率为38.4%。

对比例1-3说明，与实施例1瓶内炼苗5d不同，不进行瓶内炼苗或只瓶内炼苗2d，桃儿七组培苗移出后不能马上适应外界环境的变化，成活率低。瓶内炼苗10d与实施例1中瓶内炼苗5d相比，桃儿七组培苗已具有一定的抵抗力，成活率较高，与实施例1仅相差1.2%，但炼苗时间增加了5天，培养基受到各种微生物的污染的机率变大，培养基变干，将幼苗从培养瓶中取出时，幼根极易损伤。

对比例4-8 说明，在瓶外移栽炼苗过程中，单独采用草炭土或者在草炭土中按一定比例加入蛭石作为桃儿七组培苗的移栽基质，桃儿七组培苗会出现不同程度的烂根，成活率低。草炭土与珍珠岩按比例1：1混合做移栽基质，与实施例1采用草炭土与珍珠岩按2：1做基质相比成活率相差仅3.2%，但珍珠岩比例过大，容易造成基质失水过快，从而增加浇水次数，使基质保肥能力下降，桃儿七植株生长势弱。

对比例9-10 说明，在与实施例2和实施例3不同的时期将经过炼苗的组培苗移入大棚，成活率较低。12月份虽然最高温度维持在15℃上，但最低温度已低于5℃，桃儿七组培苗移栽后生长代谢活动变得极为缓慢，此时的低温高湿容易造成幼根腐烂，缓苗期延长或无法度过缓苗期。5~6月份移入温室，正午温度最高时期，组培苗易失水萎蔫，成活率只有38.4%。

Claims (1)

1.一种桃儿七组培苗炼苗及移栽驯化的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

    A 瓶内炼苗

    选取具有真叶、茎、2条根以上的桃儿七完整组培苗，揭去组培瓶封口膜，在培养室内继续培养5 天，培养室内的培养温度白天22～26℃，夜间17～21℃，光周期：10 h/d，光强：1000~1500Lux，湿度：70~90%；

    B 瓶外移栽炼苗

    从瓶中取出桃儿七组培苗，用温水洗净根及根茎部位培养基，然后移栽消过毒的移栽基质中，移栽基质为草炭土与珍珠岩按2:1混合；移栽完毕浇注1500倍的多菌灵溶液，在培养室内放置15~20天，培养室内的培养温度白天22～26℃，夜间17～21℃，光周期：10 h/d，光强：1000~1500Lux， 湿度：70~90%； 

    C、对于秋冬季大棚移栽和移栽后管理

     所述步骤B的培养室中移栽到基质中的桃儿七幼苗长出新芽新根后，在10~11月搬放到大棚温室中，每周浇水2次，大棚中的温湿度条件为：平均最低气温10℃，平均最高气温36℃，平均最低湿度70%，平均最高湿度98%，移栽苗经历冬季休眠期以后在次年萌发新芽后，3~4月新芽出土后逐级扩大移栽，移栽基质为草炭土；

对于春季大棚移栽和移栽后管理

     所述步骤B的培养室中移栽到基质中的桃儿七幼苗长出新芽新根后，在3~4月搬放到大棚温室中，大棚中的温湿度条件为：平均最低气温10℃，平均最高气温27℃，平均最低湿度60%，平均最高湿度98%，萌发新芽后逐级扩大移栽，移栽基质为草炭土；

     D 野外驯化：

以上大棚移栽苗在5~6月移出温室放置于木本树木自然遮阴通风条件下或遮阴棚下，叶面喷施200倍的1/2MS营养液和30mg/L 6-苄基腺嘌呤，1周1次；9~10月移栽至海拔2000m以上的林间空地，行株距为30×30cm，土壤覆盖根系2cm，浇足定根水。