CN105191807A - 多倍体金线莲品种的培育方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及植物培育领域，特别涉及多倍体金线莲品种的培育方法，包括以下步骤：将二倍体金线莲的种子培养得到原球茎；将原球茎浸泡在5-15μmol/L安磺灵溶液中浸泡处理10-36h；浸泡后的原球茎继续培养，得到丛生芽；丛生芽分株后转入生根培养基中培养得到根茎叶完整的组培苗；组培苗经筛选得到多倍体植株。本发明提供的多倍体金线莲品种的培育方法，选用具有很强的分生能力的金线莲原球茎作为诱导材料，以特定浓度的安磺灵溶液对原球茎浸泡特定的时间，经过培养后得到的植株中，筛选即可得到多倍体金线莲植株，诱导率在43.2％-44.8％之间，得到的多倍体金线莲植株性状优良。

Description

多倍体金线莲品种的培育方法

技术领域

本发明涉及植物培育领域，具体而言，涉及多倍体金线莲品种的培育方法。

背景技术

金线莲是兰科(Orchidaceae)开唇兰属(Anoectochilus)的全草，别名金线兰、金丝草。是民间使用较广的一种传统珍贵药材，具有清热解毒、祛风利湿、滋阴润肺、降血压、平肝等功效。民间用于治疗肺结核、肺热咳嗽、风湿性关节炎、小儿惊风、跌打损伤、蛇伤等多种疾病，均有很好疗效。其株型小巧，叶型美观，叶脉金黄色网状排列，具有极高的观赏价值。近年来，金线莲用于治疗高血压、糖尿病及肿瘤等疑难病症方面，日益引起医药界的重视。民间称其为“神药，台湾称为“药王”。目前金线莲在台湾和东南亚地区的需求量很大，它在国内市场的售价已达2000元人民币/kg。

由于金线莲对生态环境要求严格，自然繁殖和生长缓慢，加上人类大量采集，药源濒于枯竭，人工种植成为发展金线莲产业的必然选择。但是，采用种子直播、分根繁殖、扦插繁殖等需时较长，繁殖倍率不高；金线莲株型小，导致种植者的效益不够显著。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供多倍体金线莲品种的培育方法，该方法采用安磺灵对金线莲的原球茎进行处理，使其染色体加倍，安全性高；得到的多倍体金线莲植株比二倍体亲本成倍增大，茎秆粗壮，叶片厚实，并且根、茎、叶的有效成分明显高于二倍体亲本。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

多倍体金线莲品种的培育方法，包括以下步骤：

(a)、将二倍体金线莲的种子培养得到原球茎；

(b)、将所述原球茎浸泡在5-15μmol/L安磺灵溶液中浸泡处理10-36h；

(c)、浸泡后的原球茎继续培养，得到丛生芽；

(d)、所述丛生芽分株后转入生根培养基中培养得到根茎叶完整的组培苗；

(e)、所述组培苗经筛选得到多倍体植株。

本发明提供的多倍体金线莲品种的培育方法，选用金线莲原球茎作为诱导材料，原球茎具有很强的分生能力，安磺灵溶液可抑制细胞有丝分裂，使细胞中的染色体加倍；本发明以特定浓度的安磺灵溶液对原球茎浸泡特定的时间，经过培养后得到的植株中，筛选即可得到多倍体金线莲植株，经大量试验验证，诱导率在43.2％-44.8％之间，得到的多倍体金线莲植株性状优良。

另外，本发明特定选用安磺灵，安磺灵毒性小，且性质稳定；而秋水仙素作为常用的染色体加倍剂，有剧毒，对操作人员容易造成伤害。

优选地，步骤(e)中，通过染色体检测筛选出多倍体植株。

优选地，在步骤(a)和步骤(c)中，所述培养均采用第一培养基进行；

所述第一培养基为：MS培养基中含有BA0.8-1.2mg/L、KT0.7-1.2mg/L、NAA0.05-0.15mg/L、蔗糖20-35g/L、琼脂4.5-8g/L、香蕉17-25g/L。

第一培养基营养丰富，利于金线莲种子及其原球茎的生长。

更优选地，所述第一培养基为：MS培养基中含有BA1.0mg/L、KT1.0mg/L、NAA0.1mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L、香蕉20g/L。

为了培养得到的原球茎处于更好的状态，提高诱导染色体加倍的效果，优选地，在步骤(a)中，所述培养的时间为27-40天，优选为28-32天。

为了达到更好的诱导效果，进一步地，在步骤(b)中，所述安磺灵溶液的浓度为8-10μmol/L，浸泡处理15-30h。

为了提高生根率，优选地，所述生根培养基为：MS培养基中含有NAA0.4-0.8mg/L、活性炭0.4-0.6g/L、香蕉18-25g/L。

更优选地，所述生根培养基为：MS培养基中含有NAA0.5mg/L、活性炭0.5g/L、香蕉20g/L。

进一步地，在步骤(d)中，生根培养基中培养的时间为38-45天，得到完整的植株。

进一步地，步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)均在无菌条件下进行。

优选地，步骤(a)、(c)和(d)中的培养条件均为：温度为25±2℃，湿度为58-63％，光照强度为1500-2000xl，光照时间为9-12h/天。

优选地，在步骤(b)中，所述原球茎在浸泡安磺灵溶液之前，先进行暗培养3-5天。通过暗培养增大细胞的通透性，使诱导剂更容易渗透到细胞里面，提高诱导率。

另外，本发明中的MS培养基的配方如表1所示。

表1MS培养基具体成分

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)本发明选用金线莲原球茎作为诱导材料，原球茎具有很强的分生能力，以特定浓度的安磺灵溶液对原球茎浸泡特定的时间，即可抑制细胞的有丝分裂，使细胞中的染色体成倍数性变化；从经过诱导后培养得到的植株中筛选，即可得到多倍体金线莲植株，诱导率43.2％-44.8％之间，得到的多倍体金线莲植株性状优良。

(2)本发明还限定了第一培养基和生根培养基的成分，为金线莲的生长提供更适宜的生长条件，以满足金线莲各生长阶段的生长需求。

(3)本发明中的原球茎在浸泡安磺灵溶液之前，通过暗培养增大细胞的通透性，使诱导剂更容易渗透到细胞里面，提高诱导率。

(4)本发明还限定了第一培养基的成分，并限定了将种子通过组培诱导成原球茎的时间，以使得到的原球茎具有更强的分生能力，提高诱导率。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售获得的常规产品。

实施例1

多倍体金线莲品种的培育方法，包括以下步骤：

(a)、将二倍体金线莲的种子在第一培养基上培养27天，得到原球茎，其中，第一培养基为：MS培养基中含有BA1.2mg/L、KT1.2mg/L、NAA0.15mg/L、蔗糖35g/L、琼脂5g/L、香蕉17g/L；

(b)、将原球茎暗培养3天，然后浸泡在5μmol/L安磺灵溶液中浸泡处理36h；

(c)、浸泡后的原球茎转接到第一培养基上继续培养，得到丛生芽；

(d)、丛生芽分株后转入生根培养基中培养38天得到根茎叶完整的组培苗，其中，生根培养基为：MS培养基中含有NAA0.8mg/L、活性炭0.6g/L、香蕉25g/L；

(e)、经染色体检测筛选得到多倍体植株与亲本二倍体相比，植株高大，茎段粗壮，节间长，叶大而厚，叶色深，根粗壮，诱导率为43.4％。

另外，步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)均在无菌条件下进行；步骤(a)、(c)和(d)中的培养条件均为：温度为25±2℃，湿度为58％-63％，光照强度为1500xl，光照时间为11h/天。

实施例2

多倍体金线莲品种的培育方法，包括以下步骤：

(a)、将二倍体金线莲的种子在第一培养基上培养30天，得到原球茎，其中，第一培养基为：MS培养基中含有BA1.0mg/L、KT1.0mg/L、NAA0.1mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L、香蕉20g/L；

(b)、将原球茎暗培养4天，然后浸泡在10μmol/L安磺灵溶液中浸泡处理20h；

(c)、浸泡后的原球茎转接到第一培养基上继续培养，得到丛生芽；

(d)、丛生芽分株后转入生根培养基中培养40天得到根茎叶完整的组培苗，其中，生根培养基为：MS培养基中含有NAA0.5mg/L、活性炭0.5g/L、香蕉20g/L；

(e)、经染色体检测筛选得到多倍体植株与亲本二倍体相比，植株高大，茎段粗壮，节间长，叶大而厚，叶色深，根粗壮，诱导率为44.6％。

另外，步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)均在无菌条件下进行；步骤(a)、(c)和(d)中的培养条件均为：温度为25±2℃，湿度为58-63％，光照强度为1800xl，光照时间为10h/天。

实施例3

多倍体金线莲品种的培育方法，包括以下步骤：

(a)、将二倍体金线莲的种子在第一培养基上培养32天，得到原球茎，其中，第一培养基为：MS培养基中含有BA0.8mg/L、KT0.7mg/L、NAA0.05mg/L、蔗糖20g/L、琼脂4.5g/L、香蕉25g/L；

(b)、将原球茎暗培养5天，然后浸泡在8μmol/L安磺灵溶液中浸泡处理30h；

(c)、浸泡后的原球茎转接到第一培养基上继续培养，得到丛生芽；

(d)、丛生芽分株后转入生根培养基中培养45天得到根茎叶完整的组培苗，其中，生根培养基为：MS培养基中含有NAA0.4mg/L、活性炭0.4g/L、香蕉18g/L；

(e)、经染色体检测筛选得到多倍体植株与亲本二倍体相比，植株高大，茎段粗壮，节间长，叶大而厚，叶色深，根粗壮，诱导率为43.8％。

另外，步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)均在无菌条件下进行；步骤(a)、(c)和(d)中的培养条件均为：温度为25±2℃，湿度为58-63％，光照强度为2000xl，光照时间为9h/天。

实施例4

多倍体金线莲品种的培育方法，包括以下步骤：

(a)、将二倍体金线莲的种子在第一培养基上培养40天，得到原球茎，其中，第一培养基为：MS培养基中含有BA1.0mg/L、KT0.9mg/L、NAA0.08mg/L、蔗糖32g/L、琼脂8g/L、香蕉20g/L；

(b)、将原球茎暗培养4天，然后浸泡在10μmol/L安磺灵溶液中浸泡处理15h；

(c)、浸泡后的原球茎转接到第一培养基上继续培养，得到丛生芽；

(d)、丛生芽分株后转入生根培养基中培养42天得到根茎叶完整的组培苗，其中，生根培养基为：MS培养基中含有NAA0.5mg/L、活性炭0.5g/L、香蕉23g/L；

(e)、经染色体检测筛选得到多倍体植株与亲本二倍体相比，植株高大，茎段粗壮，节间长，叶大而厚，叶色深，根粗壮，诱导率为44.1％。

另外，步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)均在无菌条件下进行；步骤(a)、(c)和(d)中的培养条件均为：温度为25±2℃，湿度为58-63％，光照强度为1700xl，光照时间为11h/天。

实施例5

多倍体金线莲品种的培育方法，包括以下步骤：

(a)、将二倍体金线莲的种子在第一培养基上培养28天，得到原球茎，其中，第一培养基为：MS培养基中含有BA1.0mg/L、KT1.0mg/L、NAA0.12mg/L、蔗糖32g/L、琼脂6g/L、香蕉20g/L；

(b)、将原球茎暗培养3天，然后浸泡在15μmol/L安磺灵溶液中浸泡处理10h；

(c)、浸泡后的原球茎转接到第一培养基上继续培养，得到丛生芽；

(d)、丛生芽分株后转入生根培养基中培养40天得到根茎叶完整的组培苗，其中，生根培养基为：MS培养基中含有NAA0.6mg/L、活性炭0.5g/L、香蕉20g/L；

(e)、经染色体检测筛选得到多倍体植株与亲本二倍体相比，植株高大，茎段粗壮，节间长，叶大而厚，叶色深，根粗壮，诱导率为44.5％。

另外，步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)均在无菌条件下进行；步骤(a)、(c)和(d)中的培养条件均为：温度为25±2℃，湿度为58-63％，光照强度为1800xl，光照时间为10h/天。

实施例6

多倍体金线莲品种的培育方法，包括以下步骤：

(a)、将二倍体金线莲的种子在第一培养基上培养35天，得到原球茎，其中，第一培养基为：MS培养基中含有BA1.0mg/L、KT1.0mg/L、NAA0.12mg/L、蔗糖32g/L、琼脂5.5g/L、香蕉21g/L；

(b)、将原球茎暗培养5天，然后浸泡在9μmol/L安磺灵溶液中浸泡处理24h；

(c)、浸泡后的原球茎转接到第一培养基上继续培养，得到丛生芽；

(d)、丛生芽分株后转入生根培养基中培养45天得到根茎叶完整的组培苗，其中，生根培养基为：MS培养基中含有NAA0.4mg/L、活性炭0.4g/L、香蕉25g/L；

(e)、经染色体检测筛选得到多倍体植株与亲本二倍体相比，植株高大，茎段粗壮，节间长，叶大而厚，叶色深，根粗壮，诱导率为44.2％。

另外，步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)均在无菌条件下进行；步骤(a)、(c)和(d)中的培养条件均为：温度为25±2℃，湿度为58-63％，光照强度为2000xl，光照时间为12h/天。

此外，实施例1-6中的步骤均在无菌条件下进行。

本发明提供的多倍体金线莲品种的培育方法，通过多次试验验证，其诱导率均维持在43.2％-44.8之间，诱导率稳定，且得到的多倍体植株与二倍体亲本相比，植株高大，茎段粗壮，节间长，叶大而厚，叶色深，根粗壮。

尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (10)

1.多倍体金线莲品种的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)、将二倍体金线莲的种子培养得到原球茎；

(b)、将所述原球茎浸泡在5-15μmol/L安磺灵溶液中浸泡处理10-36h；

(c)、浸泡后的原球茎继续培养，得到丛生芽；

(d)、所述丛生芽分株后转入生根培养基中培养得到根茎叶完整的组培苗；

(e)、所述组培苗经筛选得到多倍体植株。

2.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，在步骤(a)和步骤(c)中，所述培养均采用第一培养基进行；

所述第一培养基为：MS培养基中含有BA0.8-1.2mg/L、KT0.7-1.2mg/L、NAA0.05-0.15mg/L、蔗糖20-35g/L、琼脂4.5-8g/L、香蕉17-25g/L。

3.根据权利要求2所述的培育方法，其特征在于，所述第一培养基为：MS培养基中含有BA1.0mg/L、KT1.0mg/L、NAA0.1mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L、香蕉20g/L。

4.根据权利要求2所述的培育方法，其特征在于，在步骤(a)中，所述培养的时间为27-40d。

5.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述安磺灵溶液的浓度为8-10μmol/L，浸泡处理15-30h。

6.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述生根培养基为：MS培养基中含有NAA0.4-0.8mg/L、活性炭0.4-0.6g/L、香蕉18-25g/L。

7.根据权利要求6所述的培育方法，其特征在于，所述生根培养基为：MS培养基中含有NAA0.5mg/L、活性炭0.5g/L、香蕉20g/L。

8.根据权利要求6所述的培育方法，其特征在于，在步骤(d)中，生根培养基中培养的时间为38-45d。

9.根据权利要求1所述的培育方法，其特征在于，步骤(a)、(b)、(c)、(d)、(e)均在无菌条件下进行；步骤(a)、(c)和(d)中的培养条件均为：温度为25±2℃，湿度为58％-63％，光照强度为1500-2000xl，光照时间为9-12h/d。

10.根据权利要求1-9任一项所述的培育方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述原球茎在浸泡安磺灵溶液之前，先进行暗培养3-5d。