CN107996399A - 一种石斛多倍体植株的培育方法 - Google Patents

一种石斛多倍体植株的培育方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种石斛多倍体植株的培育方法，涉及石斛多倍体技术领域。本发明通过将消毒后的石斛种子在秋水仙素中发生纺锤体的破裂，于MS培养液中培养后再置于萌发培养基中培养成幼苗，然后转接到增值培养基中稳定扩繁，得到性状稳定的多倍体，培养基中培养得到多倍体植株幼苗。本发明的石斛多倍体植株培育方法操作简单，可以快速实现石斛新品种的选育，缩短了育种周期，性状优良，有效提高了培育速率。

Description

一种石斛多倍体植株的培育方法
技术领域：
本发明涉及石斛多倍体技术领域，具体涉及一种石斛多倍体植株的培育方法。
背景技术：
多倍体育种是中药材良种培育的一个重要途径，倍性育种创造出来的多倍体植物具有植株粗壮、叶质增宽厚、适应性增强及次生代谢物质积累高等特点。石斛属兰科石斛属植物，是名贵的滋补中药材，自然条件下生长缓慢，株形矮小，产量满足不了日益扩大的市场需求。多倍体育种拓宽了种质资源，防止了由于长期的栽培而导致的药用植物品种退化。可以预见，生物技术在中药材品种改良方面具有很好的应用前景，将随着人类对其应用价值认识的提高，以及有关新技术方法的应用，从而带动未来药用植物的可持续、高效发展。
发明内容：
本发明所要解决的技术问题在于提供一种石斛多倍体植株的培育方法，方法操作简单，可以快速实现石斛新品种的选育，缩短了育种周期，性状优良，有效提高了培育速率。
本发明所要解决的技术问题采用以下的技术方案来实现：
一种石斛多倍体植株的培育方法，包括以下步骤：
(1)将消毒后的石斛种子抖入秋水仙素溶液中，黑暗条件下培养6～10d后，离心、洗涤去除秋水仙素；所述秋水仙素溶液浓度为0.1～0.4％，pH为5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液；
(2)将秋水仙素处理过的石斛种子转接到石斛种子萌发培养基中，先于培养箱中黑暗条件下培养5～8d，再移至培养室，培养温度23～28℃，光照度2000～2800lx，光照12h/d，培养三个月得到多倍体石斛幼苗；所述石斛种子萌发培养基组成如下：1-萘乙酸0.2～0.5mg/L，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液；
(3)将上述培养得到的石斛幼苗，挑选出茎变粗、叶片加厚、叶色加深的植株，转接到石斛增殖培养基中进行稳定扩繁，选取2～3代性状稳定的植株进行多倍体的鉴定；所述石斛增殖培养基组成如下：6-苄氨基嘌呤1.0～2.0mg/L，1-萘乙酸0.1～0.5mg/L，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液；
(4)鉴定为多倍体的植株转接到生根壮苗培养基中进行培养，即获得石斛多倍体植株的幼苗；所述生根壮苗培养基组成如下：1-萘乙酸0.5～0.6mg/L，香蕉汁5～10％，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液。
优选地，所述MS培养液包括：BA 0.8～1.2mg/L、KT 0.7～1.2mg/L、蔗糖30～40g/L、琼脂6～8g/L、葡萄汁10～22g/L。
优选地，所述石斛种子的消毒方法是将石斛蒴果使用5～8％的双氧水溶液浸泡6～12min，清水冲洗，再用无菌水冲洗，0.1％升汞消毒5～10min，无菌吸水纸将蒴果表面残留的水分吸干即可。
优选地，所述步骤(4)的培养条件为：温度25±2℃，湿度55～65％，光照强度1600～2000Lux，光照时间9～12h/d。
本发明的有益效果是：本发明的石斛多倍体的培育方法，通过将消毒后的石斛种子在秋水仙素中发生纺锤体的破裂，于MS培养液中培养后再置于萌发培养基中培养成幼苗，然后转接到增值培养基中稳定扩繁，得到性状稳定的多倍体，培养基中培养得到多倍体植株幼苗。本发明方法操作简单，可以快速实现石斛新品种的选育，缩短了育种周期，性状优良，有效提高了培育速率。
具体实施方式：
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1
一种石斛多倍体植株的培育方法，包括以下步骤：
(1)将消毒后的石斛种子抖入秋水仙素溶液中，黑暗条件下培养8d后，离心、洗涤去除秋水仙素；所述秋水仙素溶液浓度为0.2％，pH为5.9，溶剂为1/2MS或MS培养液。其中，石斛种子的消毒方法是将石斛蒴果使用6％的双氧水溶液浸泡10min，清水冲洗，再用无菌水冲洗，0.1％升汞消毒8min，无菌吸水纸将蒴果表面残留的水分吸干即可。
(2)将秋水仙素处理过的石斛种子转接到石斛种子萌发培养基中，先于培养箱中黑暗条件下培养6d，再移至培养室，培养温度25℃，光照度2000～2800lx，光照12h/d，培养三个月得到多倍体石斛幼苗；所述石斛种子萌发培养基组成如下：1-萘乙酸0.2～0.5mg/L，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液。其中，所述MS培养液包括：BA 0.8～1.2mg/L、KT 0.7～1.2mg/L、蔗糖30～40g/L、琼脂6～8g/L、葡萄汁10～22g/L。
(3)将上述培养得到的石斛幼苗，挑选出茎变粗、叶片加厚、叶色加深的植株，转接到石斛增殖培养基中进行稳定扩繁，选取2～3代性状稳定的植株进行多倍体的鉴定；所述石斛增殖培养基组成如下：6-苄氨基嘌呤1.0～2.0mg/L，1-萘乙酸0.1～0.5mg/L，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液；
(4)鉴定为多倍体的植株转接到生根壮苗培养基中进行培养，即获得石斛多倍体植株的幼苗；所述生根壮苗培养基组成如下：1-萘乙酸0.5～0.6mg/L，香蕉汁5～10％，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液。其中，培养条件为：温度25±2℃，湿度55～65％，光照强度1600～2000Lux，光照时间9～12h/d。
本实施例石斛多倍体幼苗的移栽成活率为92％。
实施例2
一种石斛多倍体植株的培育方法，包括以下步骤：
(1)将消毒后的石斛种子抖入秋水仙素溶液中，黑暗条件下培养10d后，离心、洗涤去除秋水仙素；所述秋水仙素溶液浓度为0.1～0.4％，pH为5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液。其中，石斛种子的消毒方法是将石斛蒴果使用8％的双氧水溶液浸泡7min，清水冲洗，再用无菌水冲洗，0.1％升汞消毒10min，无菌吸水纸将蒴果表面残留的水分吸干即可。
(2)将秋水仙素处理过的石斛种子转接到石斛种子萌发培养基中，先于培养箱中黑暗条件下培养8d，再移至培养室，培养温度28℃，光照度2000～2800lx，光照12h/d，培养三个月得到多倍体石斛幼苗；所述石斛种子萌发培养基组成如下：1-萘乙酸0.2～0.5mg/L，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液。其中，所述MS培养液包括：BA 0.8～1.2mg/L、KT 0.7～1.2mg/L、蔗糖30～40g/L、琼脂6～8g/L、葡萄汁10～22g/L。
(3)将上述培养得到的石斛幼苗，挑选出茎变粗、叶片加厚、叶色加深的植株，转接到石斛增殖培养基中进行稳定扩繁，选取2～3代性状稳定的植株进行多倍体的鉴定；所述石斛增殖培养基组成如下：6-苄氨基嘌呤1.0～2.0mg/L，1-萘乙酸0.1～0.5mg/L，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液；
(4)鉴定为多倍体的植株转接到生根壮苗培养基中进行培养，即获得石斛多倍体植株的幼苗；所述生根壮苗培养基组成如下：1-萘乙酸0.5～0.6mg/L，香蕉汁5～10％，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液。其中，培养条件为：温度25±2℃，湿度55～65％，光照强度1600～2000Lux，光照时间9～12h/d。
本实施例石斛多倍体幼苗的移栽成活率为90％。
实施例3
一种石斛多倍体植株的培育方法，包括以下步骤：
(1)将消毒后的石斛种子抖入秋水仙素溶液中，黑暗条件下培养6d后，离心、洗涤去除秋水仙素；所述秋水仙素溶液浓度为0.4％，pH为5.8，溶剂为1/2MS或MS培养液。其中，石斛种子的消毒方法是将石斛蒴果使用8％的双氧水溶液浸泡7min，清水冲洗，再用无菌水冲洗，0.1％升汞消毒8min，无菌吸水纸将蒴果表面残留的水分吸干即可。
(2)将秋水仙素处理过的石斛种子转接到石斛种子萌发培养基中，先于培养箱中黑暗条件下培养8d，再移至培养室，培养温度28℃，光照度2000～2800lx，光照12h/d，培养三个月得到多倍体石斛幼苗；所述石斛种子萌发培养基组成如下：1-萘乙酸0.2～0.5mg/L，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液。其中，所述MS培养液包括：BA0.8～1.2mg/L、KT 0.7～1.2mg/L、蔗糖30～40g/L、琼脂6～8g/L、葡萄汁10～22g/L。
(3)将上述培养得到的石斛幼苗，挑选出茎变粗、叶片加厚、叶色加深的植株，转接到石斛增殖培养基中进行稳定扩繁，选取2～3代性状稳定的植株进行多倍体的鉴定；所述石斛增殖培养基组成如下：6-苄氨基嘌呤1.0～2.0mg/L，1-萘乙酸0.1～0.5mg/L，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液；
(4)鉴定为多倍体的植株转接到生根壮苗培养基中进行培养，即获得石斛多倍体植株的幼苗；所述生根壮苗培养基组成如下：1-萘乙酸0.5～0.6mg/L，香蕉汁5～10％，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液。其中，培养条件为：温度25±2℃，湿度55～65％，光照强度1600～2000Lux，光照时间9～12h/d。
本实施例石斛多倍体幼苗的移栽成活率为88％。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (4)

1.一种石斛多倍体植株的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将消毒后的石斛种子抖入秋水仙素溶液中，黑暗条件下培养6～10d后，离心、洗涤去除秋水仙素；所述秋水仙素溶液浓度为0.1～0.4％，pH为5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液；
(2)将秋水仙素处理过的石斛种子转接到石斛种子萌发培养基中，先于培养箱中黑暗条件下培养5～8d，再移至培养室，培养温度23～28℃，光照度2000～2800lx，光照12h/d，培养三个月得到多倍体石斛幼苗；所述石斛种子萌发培养基组成如下：1-萘乙酸0.2～0.5mg/L，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液；
(3)将上述培养得到的石斛幼苗，挑选出茎变粗、叶片加厚、叶色加深的植株，转接到石斛增殖培养基中进行稳定扩繁，选取2～3代性状稳定的植株进行多倍体的鉴定；所述石斛增殖培养基组成如下：6-苄氨基嘌呤1.0～2.0mg/L，1-萘乙酸0.1～0.5mg/L，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液；
(4)鉴定为多倍体的植株转接到生根壮苗培养基中进行培养，即获得石斛多倍体植株的幼苗；所述生根壮苗培养基组成如下：1-萘乙酸0.5～0.6mg/L，香蕉汁5～10％，pH5.8～6.2，溶剂为1/2MS或MS培养液。
2.根据权利要求1所述的石斛多倍体植株的培育方法，其特征在于，所述MS培养液包括：BA 0.8～1.2mg/L、KT 0.7～1.2mg/L、蔗糖30～40g/L、琼脂6～8g/L、葡萄汁10～22g/L。
3.根据权利要求1所述的石斛多倍体植株的培育方法，其特征在于，所述石斛种子的消毒方法是将石斛蒴果使用5～8％的双氧水溶液浸泡6～12min，清水冲洗，再用无菌水冲洗，0.1％升汞消毒5～10min，无菌吸水纸将蒴果表面残留的水分吸干即可。
4.根据权利要求1所述的石斛多倍体植株的培育方法，其特征在于，所述步骤(4)的培养条件为：温度25±2℃，湿度55～65％，光照强度1600～2000Lux，光照时间9～12h/d。
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