CN105941152B - 一种石刁柏全雄育种方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种石刁柏全雄育种方法，该育种方法详细步骤包括：（1）花药选材与预处理；（2）配制石刁柏花药诱导培养基；（3）花药高糖处理后消毒接种；（4）花药诱导培养；（5）愈伤分化培养；（6）绿芽扩繁增殖生根；（7）炼苗与移栽；（8）染色体倍性观察，剔除非二倍体植株，辨别超雄株和雌株；（9）石刁柏超雄株和雌株的筛选与杂交。本发明的全雄育种方法通过高效花培途径获得了石刁柏花培植株，剔除非二倍体植株后获得二倍体超雄株和雌株，进而选择农艺性状优良的石刁柏超雄株和雌株，杂交获得了高产优质、长速快、抗病性强的F1代全雄系。本发明石刁柏超雄株和雌株诱导率高，杂株少，所得全雄系品质优良，产业价值极大。

Description

一种石刁柏全雄育种方法
技术领域
本发明涉及农业高新技术领域，尤其涉及一种通过石刁柏高效花培途径培育二倍体超雄株和雌株，筛选农艺性状优良的石刁柏超雄株和雌株，杂交获得优良F1代全雄系的石刁柏全雄育种方法。
背景技术
石刁柏（Asparagus officinalis L.），又名芦笋、龙须菜、露笋，是百合科天门冬属的多年生宿根性草本植物，雌雄异株植物，其食用部位以抽生的嫩茎为主。芦笋嫩茎质地细腻，纤维柔软可口，风味鲜美，有独特的芳香味，是一种营养价值极高的保健蔬菜，已被列为世界“十大名菜”之一，在国际市场上享有“蔬菜之王”的美称。
芦笋嫩茎中有丰富的蛋白质、维生素、人体所需的微量元素和多种活性成分，如活性酶、芦笋多糖、皂角苷、脂肪酸、氨基酸等。芦笋嫩茎中维生素含量是一般蔬菜的2~5倍。芦笋嫩茎中还含有丰富的黄酮类化合物-芦丁。芦丁是维生素P的重要组成成分，具有提高心血管系统活性、抗炎镇痛性、保肝活性等药理作用。因此，芦笋具有抗癌、提高免疫功能、抗疲劳、保肝、降血脂等作用。石刁柏作为高级的营养蔬菜和保健食品，深受消费者的欢迎。
石刁柏原产于欧洲地中海沿岸和小亚细亚一带，最早把石刁柏作为蔬菜食用的是古希腊人。到约16世纪，荷兰人首先驯化出石刁柏的栽培品种，此后，欧洲大陆各国便开始大量栽培。约在17世纪，石刁柏随欧洲移民传入美洲，接着便向许多国家和地区传播。19世纪末引种到我国并迅速得以传播。目前我国栽培面积已逾十万公顷，成为世界上石刁柏生产第一大国和第一出口国，广泛分布于浙江、江苏、安徽、山东、福建、山西、河北、四川、河南、湖北等20多个省份。
石刁柏作为一种品味兼优药食兼用的营养保健名贵蔬菜，目前在国际市场上备受人们喜爱，畅销美、欧洲国家及日本、东南亚地区。据报道，石刁柏国际年需求量逾7万吨，我国作为最大的生产和出口国，开发出了多种石刁柏产品出口，有很大的发展潜力。此外，我国内销市场也非常巨大，为石刁柏生产、加工和综合利用的发展提供了可能。充分利用石刁柏的优良特性及其本身所含有的活性物质，开发保健产品，加强芦笋及其枝叶、茎干的综合利用，增加石刁柏的附加值，未来发展石刁柏产业，具有广泛的市场前景。
美、德、法、荷、日等国的石刁柏育种工作开展较早，已有100余年历史。美国在1900年后培育出的抗锈病、综合性状优良的石刁柏品种“玛丽华盛顿”，至今仍是一些地区的芦笋主栽品种。我国引种栽培石刁柏历史短，育种工作滞后，生产用种基本上是从国外引入。
石刁柏的性别遗传特点是雌雄异株，雌株纯合型，雄株杂合型。石刁柏雌株细小，而雄株枝繁叶茂、光合面积大、同化产物多、不结籽、消耗养分少、植株寿命长、早熟、高产，雄株的产量一般比雌株高20%~30%。在石刁柏育种实践中，主要是应用“全雄系”制种法生产全雄种子。因此培育全雄系品种己成为国内外石刁柏育种的重要目标。目前市面上全雄杂交种有西德全雄、西班牙全雄、荷兰全雄等，其中以荷兰全雄“吉利木”、“硕丰”较为突出，抗病性和产量比常规品种高60%左右，但因制种困难，种子价格昂贵，每公斤种子价格往往达到几万元。
利用石刁柏雄性雌雄株培育超雄株纯系，需要连续自交 6 代以上，耗时耗力，而采用雄株花药培养，培育二倍体超雄株和雌株，一代就可纯合，可以大大节约了选育时间。我国相关的研究机构从1990年代开始对石刁柏花药培养开展了广泛的研究，在花培程序、培养基类型及组分和培养条件等方面取得了重大的进展，并获得少量的花培植株，但近年来研究处于半停滞状态，相关的报道较少。整体上，目前石刁柏花药培养的效率并不高，愈伤组织诱导率低、绿苗分化率低、体细胞干扰严重、再生植株发根困难等问题仍然有待克服。近年来由于出口需求的增加，国内种植面积不断扩大，对于种苗的需求也逐年扩大，石刁柏育种相关研究重新得到重视。
本研究团队在前人工作的基础上，针对石刁柏全雄育种的关键限制因素，在提高石刁柏花药诱导率、愈伤分化率、单倍体加倍效率、幼苗生根方面着手，多年来不断测验培养基组分，并在培养基活性添加物的筛选、培养条件的优化上进行广泛的试验，最终将石刁柏花培效率进行了极大的提高，建立起了优良的石刁柏花培体系，可以高效培育二倍体超雄株和雌株，进而筛选农艺性状优良的石刁柏超雄株和雌株，杂交获得了高产优质、长速快、抗病性强的F1代全雄系。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术存在的缺陷，提供了一种通过石刁柏高效花培途径培育二倍体超雄株和雌株，筛选农艺性状优良的石刁柏超雄株和雌株，杂交获得优良F1代全雄系的石刁柏全雄育种方法。
本发明的目的是通过以下技术方案解决的：
一种石刁柏全雄育种方法，其特征在于：该育种方法的详细步骤如下：
（1）花药选材与预处理
在春季石刁柏雄株母茎抽生开花时，上午8-10点、下午4-5点取材，选择1.5-2.5mm的花蕾，湿纱布包裹带回实验室，4℃低温预处理4-5d；
（2）配制石刁柏花药诱导培养基
石刁柏花药诱导培养基按每升蒸馏水中由以下物质配制而成：
大量元素：KNO3 2500～2700mg/L，NH4NO3 1600～1800mg/L，KH2PO4 440～480mg/L，MgSO4∙7H2O 350～390mg/L，CaCl2∙2H2O 820～860mg/L；
微量元素：MnSO4∙4H2O 20～25mg/L，ZnSO4∙7H2O 8.0～9.0mg/L，H3BO3 6.0～6.5mg/L，KI 0.8～0.85mg/L，CuSO4∙5H2O 0.02～0.03mg/L，CoCl∙6H2O 0.02～0.03mg/L，NaMoO4∙2H2O 0.2～0.3mg/L；
铁盐：Na2-EDTA∙2H2O 35～40mg/L，FeSO4∙7H2O 25～30mg/L；
有机成分：肌醇 90～110mg/L，维生素B1 0.09～0.11mg/L，维生素B6 0.45～0.55mg/L，维生素C 0.35～0.45mg/L，烟酸 0.45～0.55mg/L，甘氨酸 1.8～2.2mg/L，谷氨酞胺 0.75～0.85mg/L；
激素：NAA 1.4～1.6mg/L，KT 0.75～0.85mg/L；
凝固剂：植物凝胶 6.0～6.5g/L；
活性添加剂：椰乳14～16g/L，甘露醇13～17g/L，水解酪蛋白 0.35～0.45g/L，活性炭 0.5～0.6g/L；
碳源：蔗糖27～33g/L，麦芽糖13～17g/L；
将大量元素、微量元素、铁盐、有机成分和激素先分别配制成一定浓度倍数的母液贮备，配制时，分别加入大量元素、微量元素、铁盐、有机成分、活性添加剂，定容，加热至60-80℃，然后加入碳源、凝固剂和激素，搅拌至沸腾后，待培养基完全融解，停止加热，调节pH为5.7-5.9，然后将培养基分装于500ml的三角瓶中，每瓶盛120ml～150ml的培养基，密封后置于温度为121℃、压力为15kPa高压蒸汽条件下灭菌20min，自然冷却凝固；
（3）花药高糖处理后消毒接种
低温预处理后，将石刁柏花蕾用自来水冲洗2-4h后，筛选花药处于单核晚期的花蕾，浸泡于1mol/L的高糖溶液中20min，转移入超净工作台无菌条件下，先用75%酒精消毒30s，再用0.1%升汞+2-3滴吐温-80消毒10min，无菌水冲洗3～4次后，从花蕾中取出花药，接种到步骤（2）的石刁柏花药诱导培养基上；
（4）花药诱导培养
将接种花药后的培养基置于25-27℃、黑暗状态培养5d后，转移到33-35℃高温黑暗环境下热激培养5d，然后置于适温、光暗交替的环境中进行花药诱导培养，15d后开始诱导出石刁柏花药愈伤；
（5）愈伤分化培养
无菌条件下将诱导成功的直径为0.8-2.0cm的胚性愈伤组织转接到分化培养基上，置于26-28℃、光照强度2500-3000lx、光周期光照12h/黑暗12h环境下进行愈伤组织分化培养，17d后开始分化出石刁柏绿芽；
（6）绿芽扩繁增殖生根
从培养基中挑选高度大于2.5cm的绿芽，切下转移入生根培养基，生根培养25天后，绿芽发育出白色粗壮的根；
（7）炼苗与移栽
待石刁柏幼苗根长至5-6cm后，将三角瓶封口膜打开炼苗，4～8d后将幼苗从三角瓶中取出，清洗掉根部的培养基残留，移栽入移栽到灭过菌的营养土中，放入到温室中使幼苗逐渐适应外界环境，把完全适应、生长旺盛的再生植株移栽到大田，适当遮荫，精心管理；
（8）染色体倍性观察，剔除非二倍体植株，辨别超雄株和雌株
采用根尖压片法观察所得石刁柏植株的倍性，剔除非二倍体植株和体细胞杂株，分辨超雄株和雌株并标识；
（9）石刁柏超雄株和雌株的筛选与杂交
将大田栽培的超雄株和雌株进行农艺性状筛选，选择农艺性状优良的石刁柏超雄株和雌株，杂交获得F1代全雄系。
所述步骤（2）的石刁柏花药诱导培养基的最佳配方为：
按每升蒸馏水中由以下物质配制而成：
大量元素：KNO3 2600mg/L，NH4NO3 1700mg/L，KH2PO4 460mg/L，MgSO4∙7H2O 370mg/L，CaCl2∙2H2O 840mg/L；
微量元素：MnSO4∙4H2O 22.5mg/L，ZnSO4∙7H2O 8.5mg/L，H3BO3 6.25mg/L，KI0.825mg/L，CuSO4∙5H2O 0.025mg/L，CoCl∙6H2O 0.025mg/L，NaMoO4∙2H2O 0.25mg/L；
铁盐：Na2-EDTA∙2H2O 37.5mg/L，FeSO4∙7H2O 27.5mg/L；
有机成分：肌醇 100mg/L，维生素B1 0.1mg/L，维生素B6 0.5mg/L，维生素C0.4mg/L，烟酸 0.5mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，谷氨酞胺 0.8mg/L；
激素：NAA 1.5mg/L，KT 0.8mg/L；
凝固剂：植物凝胶 6.25g/L；
活性添加剂：椰乳15g/L，甘露醇15g/L，水解酪蛋白 0.4g/L，活性炭 0.55g/L；
碳源：蔗糖30g/L，麦芽糖15g/L。
所述步骤（4）中的适温、光暗交替的花药诱导培养环境控制为：温度26-28℃，光照强度为800-1200lx，光周期为24h光照/24h黑暗。
所述步骤（5）中分化培养基配方为：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.4mg/L+秋水仙素0.05mg/L+DMSO 0.5g/L。
所述步骤（6）中生根培养基配方为：1/2MS+IAA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L+NAA0.2mg/L+KT 0.2mg/L+吡啶醇0.1mg/L+烯效唑0.1mg/L。
本发明相比现有技术有如下优点：
本发明探索出适用于石刁柏花培途径的诱导培养基、分化培养基，显著提高了石刁柏花药诱导率、愈伤分化率和单倍体加倍效率，石刁柏花培效率的提高，为全雄育种提供了大量的二倍体超雄株和雌株，使得石刁柏通过花培途径进行全雄育种达到了产业化应用效率。
本发明进一步优化了石刁柏花药和后续培养条件，花药低温预处理、接种前花药高糖处理、接种后热激处理并光暗交替的弱光诱导等新措施的实施显著提高了石刁柏花培效率，为高效石刁柏花培体系的建立做出了贡献。
本发明通过花培途径获得大量的石刁柏二倍体超雄株和雌株，由于石刁柏花药基本不带病毒，因此，石刁柏二倍体超雄株和雌株均完全脱毒，脱毒株的品质均较常规方法筛选的超雄株和雌株更优质。由于花培途径会有较高比例的突变株的出现，因此，从大田栽培的二倍体超雄株和雌株筛选的农艺性状优良的石刁柏超雄株和雌株，其种质就已经比原石刁柏进行了改良，超雄株和雌株进一步杂交，获得的F1代杂交种均为高产优质、长速快、抗病性强的全雄种子。
具体实施方式
下面结合实施案例对本发明作进一步说明，而非限制本发明。
实施例1
2010年，采用本发明的技术路线，选用美国品种阿波罗和荷兰品种硕丰进行全雄育种，其详细步骤如下：
（1）花药选材与预处理
2012年4月25日在石刁柏母茎抽生开花时，上午9点左右从阿波罗和硕丰雄株上选择1.5-2.5mm的花蕾取材，用湿纱布包裹带回实验室，4℃低温预处理；
（2）配制石刁柏花药诱导培养基
石刁柏花药诱导培养基按每升蒸馏水中由以下物质配制而成：
大量元素：KNO3 2600mg/L，NH4NO3 1700mg/L，KH2PO4 460mg/L，MgSO4∙7H2O 370mg/L，CaCl2∙2H2O 840mg/L；
微量元素：MnSO4∙4H2O 22.5mg/L，ZnSO4∙7H2O 8.5mg/L，H3BO3 6.25mg/L，KI0.825mg/L，CuSO4∙5H2O 0.025mg/L，CoCl∙6H2O 0.025mg/L，NaMoO4∙2H2O 0.25mg/L；
铁盐：Na2-EDTA∙2H2O 37.5mg/L，FeSO4∙7H2O 27.5mg/L；
有机成分：肌醇 100mg/L，维生素B1 0.1mg/L，维生素B6 0.5mg/L，维生素C0.4mg/L，烟酸 0.5mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，谷氨酞胺 0.8mg/L；
激素：NAA 1.5mg/L，KT 0.8mg/L；
凝固剂：植物凝胶 6.25g/L；
活性添加剂：椰乳15g/L，甘露醇15g/L，水解酪蛋白 0.4g/L，活性炭 0.55g/L；
碳源：蔗糖30g/L，麦芽糖15g/L；
将大量元素、微量元素、铁盐、有机成分和激素先分别配制成一定浓度倍数的母液贮备，配制时，分别加入大量元素、微量元素、铁盐、有机成分、活性添加剂，定容，加热至60-80℃，然后加入碳源、凝固剂和激素，搅拌至沸腾后，待培养基完全融解，停止加热，调节pH为5.8，然后将培养基分装于500ml的三角瓶中，每瓶盛120ml～150ml的培养基，密封后置于温度为121℃、压力为15kPa高压蒸汽条件下灭菌20min，自然冷却凝固；
（3）花药高糖处理后消毒接种
低温预处理4d后，将阿波罗和硕丰花药从冰箱中取出，将花药用自来水冲洗3h后，筛选花药处于单核晚期的花蕾，浸泡于1mol/L的高糖溶液中20min，然后转移入超净工作台无菌条件下，先用75%酒精消毒30s，再用0.1%升汞+2-3滴吐温-80消毒10min，无菌水冲洗3～4次后，从花蕾中取出花药，接种到步骤（2）的石刁柏花药诱导培养基上；
（4）花药诱导培养
将接种花药后的培养基置于25-27℃、黑暗状态培养5d后，转移到33-35℃高温黑暗环境下热激培养5d，然后置于温度26-28℃、光照强度为800-1200lx、光周期为24h光照/24h黑暗的培养环境下进行花药诱导培养，15d后开始诱导出淡绿色的石刁柏花药愈伤，25天后愈伤普遍且增长较大，此时统计愈伤组织诱导率，阿波罗和硕丰愈伤诱导率达到38.8%和45.2%；
（5）愈伤分化培养
无菌条件下将诱导成功的直径为0.8-2.0cm的胚性愈伤组织转接到分化培养基上（分化培养基配方为：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.4mg/L+秋水仙素 0.05mg/L+DMSO 0.5g/L），置于27℃、光照强度2800lx、光周期光照12h/黑暗12h环境下进行愈伤组织分化培养，17d左右开始分化出石刁柏绿芽，25天后绿芽茂盛出现，此时统计愈伤分化率，阿波罗和硕丰愈伤分化率分别为62.6%和71.5%；
（6）绿芽扩繁增殖生根
从培养基中挑选高度大于2.5cm的绿芽，切下转移入生根培养基（生根培养基配方为：1/2MS+IAA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L+KT 0.2mg/L+吡啶醇0.1mg/L+烯效唑0.1mg/L），生根培养25天后，绿芽发育出白色粗壮的根；
（7）炼苗与移栽
待石刁柏幼苗根长至5-6cm后，将三角瓶封口膜打开炼苗，6d后将幼苗从三角瓶中取出，清洗掉根部的培养基残留，移栽入移栽到灭过菌的营养土中，放入到温室中使幼苗逐渐适应外界环境，把完全适应、生长旺盛的再生植株移栽到大田，适当遮荫，精心管理，一个月后石刁柏幼苗发育良好，统计移栽成活率，阿波罗和硕丰分别为91.5%和93.4%；
（8）染色体倍性观察，剔除非二倍体植株，辨别超雄株和雌株
采用根尖压片法观察所得石刁柏植株的倍性，剔除非二倍体植株和体细胞杂株，分辨超雄株和雌株并标识，统计各种染色体类型的石刁柏植株比例，如下表1；
（9）石刁柏超雄株和雌株的筛选与杂交
2011年将大田栽培的阿波罗和硕丰超雄株和雌株进行农艺性状筛选，选择农艺性状优良的石刁柏超雄株和雌株，超雄株和雌株分别杂交获得阿波罗和硕丰F1代全雄系，将所收获的阿波罗和硕丰F1代全雄系种子于2012年种植，同时种植阿波罗和硕丰作为对照，2015年阿波罗、硕丰和阿波罗和硕丰全雄系种子进入稳产阶段，统计产量，结果如下表2。
由表2可以发现，采用本发明的石刁柏全雄育种方法所收获的石刁柏F1代全雄系种子的产量较常规品种具有极大的增加，而将阿波罗和硕丰分别进行花药培养发现，本发明的花培效率比常规的石刁柏花培效率亦具有了极大的提升，石刁柏高效花培体系的建立为石刁柏全雄育种提供了较大的花培群体，由于本发明调整了花药愈伤分化培养基，使得花培群体中二倍体超雄株和雌株的比例获得了提升，石刁柏幼苗移栽成活率也得到了保证。总之，采用本发明的石刁柏全雄育种方法可以高效的培育优良石刁柏F1代全雄系，具有重要的产业意义。
上述实例只是为说明本发明的技术构思以及技术特点，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明的实质所做的等效变换或修饰，都应该涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种石刁柏全雄育种方法，其特征在于：该育种方法的详细步骤如下：
（1）花药选材与预处理
在春季石刁柏雄株母茎抽生开花时，上午8-10点、下午4-5点取材，选择1.5-2.5mm的花蕾，湿纱布包裹带回实验室，4℃低温预处理4-5d；
（2）配制石刁柏花药诱导培养基
石刁柏花药诱导培养基按每升蒸馏水中由以下物质配制而成：
大量元素：KNO3 2500～2700mg/L，NH4NO3 1600～1800mg/L，KH2PO4 440～480mg/L，MgSO4∙7H2O 350～390mg/L，CaCl2∙2H2O 820～860mg/L；
微量元素：MnSO4∙4H2O 20～25mg/L，ZnSO4∙7H2O 8.0～9.0mg/L，H3BO3 6.0～6.5mg/L，KI 0.8～0.85mg/L，CuSO4∙5H2O 0.02～0.03mg/L，CoCl2∙6H2O 0.02～0.03mg/L，Na2MoO4∙2H2O 0.2～0.3mg/L；
铁盐：Na2-EDTA∙2H2O 35～40mg/L，FeSO4∙7H2O 25～30mg/L；
有机成分：肌醇90～110mg/L，维生素B1 0.09～0.11mg/L，维生素B6 0.45～0.55mg/L，维生素C 0.35～0.45mg/L，烟酸0.45～0.55mg/L，甘氨酸1.8～2.2mg/L，谷氨酞胺0.75～0.85mg/L；
激素：NAA 1.4～1.6mg/L，KT 0.75～0.85mg/L；
凝固剂：植物凝胶 6.0～6.5g/L；
活性添加剂：椰乳14～16g/L，甘露醇13～17g/L，水解酪蛋白 0.35～0.45g/L，活性炭0.5～0.6g/L；
碳源：蔗糖27～33g/L，麦芽糖13～17g/L；
将大量元素、微量元素、铁盐、有机成分和激素先分别配制成一定浓度倍数的母液贮备，配制时，分别加入大量元素、微量元素、铁盐、有机成分、活性添加剂，定容，加热至60-80℃，然后加入碳源、凝固剂和激素，搅拌至沸腾后，待培养基完全融解，停止加热，调节pH为5.7-5.9，然后将培养基分装于500ml的三角瓶中，每瓶盛120ml～150ml的培养基，密封后置于温度为121℃、压力为15kPa高压蒸汽条件下灭菌20min，自然冷却凝固；
（3）花药高糖处理后消毒接种
低温预处理后，将石刁柏花蕾用自来水冲洗2-4h后，筛选花药处于单核晚期的花蕾，浸泡于1mol/L的高糖溶液中20min，转移入超净工作台无菌条件下，先用75%酒精消毒30s，再用0.1%升汞+2-3滴吐温-80消毒10min，无菌水冲洗3～4次后，从花蕾中取出花药，接种到步骤（2）的石刁柏花药诱导培养基上；
（4）花药诱导培养
将接种花药后的培养基置于25-27℃、黑暗状态培养5d后，转移到33-35℃高温黑暗环境下热激培养5d，然后置于适温、光暗交替的环境中进行花药诱导培养，15d后开始诱导出石刁柏花药愈伤；其中适温、光暗交替的花药诱导培养环境控制为：温度26-28℃，光照强度为800-1200lx，光周期为24h光照/24h黑暗；
（5）愈伤分化培养
无菌条件下将诱导成功的直径为0.8-2.0cm的胚性愈伤组织转接到分化培养基上，置于26-28℃、光照强度2500-3000lx、光周期光照12h/黑暗12h环境下进行愈伤组织分化培养，17d后开始分化出石刁柏绿芽；所述分化培养基配方为：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.4mg/L+秋水仙素0.05mg/L+DMSO 0.5g/L；
（6）绿芽扩繁增殖生根
从培养基中挑选高度大于2.5cm的绿芽，切下转移入生根培养基，生根培养25天后，绿芽发育出白色粗壮的根；所述生根培养基配方为：1/2MS+IAA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L+NAA0.2mg/L+KT 0.2mg/L+吡啶醇0.1mg/L+烯效唑0.1mg/L；
（7）炼苗与移栽
待石刁柏幼苗根长至5-6cm后，将三角瓶封口膜打开炼苗，4～8d后将幼苗从三角瓶中取出，清洗掉根部的培养基残留，移栽到灭过菌的营养土中，放入到温室中使幼苗逐渐适应外界环境，把完全适应、生长旺盛的再生植株移栽到大田，适当遮荫，精心管理；
（8）染色体倍性观察，剔除非二倍体植株，辨别超雄株和雌株
采用根尖压片法观察所得石刁柏植株的倍性，剔除非二倍体植株和体细胞杂株，分辨超雄株和雌株并标识；
（9）石刁柏超雄株和雌株的筛选与杂交
将大田栽培的超雄株和雌株进行农艺性状筛选，选择农艺性状优良的石刁柏超雄株和雌株，杂交获得F1代全雄系；
所述石刁柏的品种为美国品种阿波罗和荷兰品种硕丰。
2.根据权利要求1所述的石刁柏全雄育种方法，其特征在于：所述步骤（2）的石刁柏花药诱导培养基的配方为：
按每升蒸馏水中由以下物质配制而成：
大量元素：KNO3 2600mg/L，NH4NO3 1700mg/L，KH2PO4 460mg/L，MgSO4∙7H2O 370mg/L，CaCl2∙2H2O 840mg/L；
微量元素：MnSO4∙4H2O 22.5mg/L，ZnSO4∙7H2O 8.5mg/L，H3BO3 6.25mg/L，KI 0.825mg/L，CuSO4∙5H2O 0.025mg/L，CoCl2∙6H2O 0.025mg/L，Na2MoO4∙2H2O 0.25mg/L；
铁盐：Na2-EDTA∙2H2O 37.5mg/L，FeSO4∙7H2O 27.5mg/L；
有机成分：肌醇100mg/L，维生素B1 0.1mg/L，维生素B6 0.5mg/L，维生素C 0.4mg/L，烟酸0.5mg/L，甘氨酸2.0mg/L，谷氨酞胺0.8mg/L；
激素：NAA 1.5mg/L，KT 0.8mg/L；
凝固剂：植物凝胶6.25g/L；
活性添加剂：椰乳15g/L，甘露醇15g/L，水解酪蛋白0.4g/L，活性炭0.55g/L；
碳源：蔗糖30g/L，麦芽糖15g/L。
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