CN104429954B - 一种建立昆明山海棠快繁体系的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种建立昆明山海棠快繁系统的方法，将昆明山海棠的顶芽或腋芽播种于诱导培养基中诱导发芽，然后将昆明山海棠小芽转先后移至继代培养基、生根培养基中继续培养，得到昆明山海棠生根组培苗，即可移栽至苗床中进行炼苗。本发明的组织培养方法简便，步骤简单，操作方便，所得昆明山海棠种苗植株健壮，生长能力强，适于规模化生产，同时还有效缩短了培养时间，降低了生产成本。
Description
技术领域
本发明涉及植物快速繁殖方法，特别是一种建立昆明山海棠快繁体系的法。
背景技术
昆明山海棠(Tripteryg ium hypoglaucum(Lv.1)Hutch)，是卫矛科(Celastraceae)雷公藤属落叶木质藤本植物。《滇南本草》中以“紫金皮”为其药物名称；昆明山海棠俗称“火把花”，始载于李时珍《本草纲目》草部毒草类钩吻条，“生滇南者花红、呼为火把花”。不同民族对该植物药用部位或为根、根皮及茎枝，民间常以木质藤茎入药，或将根及全株作为金刚藤的习用品；根皮、嫩枝叶在乡下常被农民用作植物性杀虫剂或农药使用。昆明山海棠被中医用于杀虫、舒筋活络、清热解毒、祛风除湿等，是药典品种“昆明山海棠片”的原料药材。国内研究相继发现昆明山海棠在众多自身免疫性疾病(如红斑狼疮等)、肿瘤与白血病、计划生育药物以及HIV等方面的重要价值。美、日、法等国均研究团队对该植物活性成分进行深入系统研究，并已取得许多重要成果。使之成为世界瞩目的药用植物资源。
该植物曾广泛分布于我国长江以南部分省区及西南地区如云南、四川、贵州、广西、湖南、江西等省区，四川攀西地区是主要分布区之一。药材和原料全部依赖野生资源采挖。由于疗效独特的药品市场需求增加及新药产品的开发。昆明山海棠分布区急剧萎缩。自然更新非常困难。野生资源面临危机。因此，如何保护和可持续利用昆明山海棠资源不但对中药和民族药具有重要意义，也具有重要的经济价值。
发明内容
本发明的目的是提供一种建立昆明山海棠快繁体系的方法，本发明中利用组织培养技术，不受外界自然条件影响，利用茎节扩繁，产生大量的母种，大规模的扩大种苗生产，满足种植的需求，解决资源紧缺问题。
本发明提供的技术方案是：
一种建立昆明山海棠快繁体系的方法，包括以下步骤：
步骤一、取处理过的昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽置于诱导培养基中，培养8-12天即可获得昆明山海棠小芽；其中，诱导培养基为：以N68为基本培养基，加入0.1-2.0mg/L异戊烯基腺嘌呤、0.1-1.0mg/L萘乙酸、0.5-3.0g/L赤霉素、0.5-3.0mg/L噻苯隆、30-50g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂，调整诱导培养基的pH值为5.8-6.2；
步骤二、将昆明山海棠小芽置于继代培养基中，培养25-30天获得昆明山海棠组培分化苗；其中，所述继代培养基为：继代培养基为：以white培养基为基本培养基，加入3.0-5.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、2.0-5.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、0.5-2.0mg/L萘乙酸、0.5-4.0mg/L吲哚丙酸、3-5g/L蔗糖及3.0-6.0g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值为5.8-6.2；
步骤三、将昆明山海棠组培分化苗移栽至生根培养基中，培养30-40天后，转移至自然光下照射培养25-30天，获得昆明山海棠生根组培苗；其中，所述生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入0.8-3.0g/L吲哚丁酸、1.0-5.0mg/L萘乙酸、0.5-2.0g/L赤霉素、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为5.8-6.3；
步骤四、将昆明山海棠生根组培苗移栽至苗床上，待昆明山海棠小苗生长稳定，即可移栽至大田。
优选的是，所述建立昆明山海棠快繁体系的方法中，步骤一所述取昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽置于诱导培养基之前，先将昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽用80-85％乙醇溶液浸泡1-2分钟，升汞消毒8-10分钟，清洗干净后切除昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽的边缘部分，得到处理过的昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽。
优选的是，所述建立昆明山海棠快繁体系的方法中，步骤四所述的苗床基质为：20-30树皮、10-20杂木、20-30蛭石及10-15珍珠岩。
优选的是，所述建立昆明山海棠快繁体系的方法中，步骤四中将昆明山海棠生根组培苗移栽至苗床之前，先将昆明山海棠生根组培苗根部的培养基清洗干净，晾干水汽，在移栽至苗床上。
优选的是，所述建立昆明山海棠快繁体系的方法中，所述步骤一至步骤三中，昆明山海棠于培养基中的培养条件均为：培养温度为28-32℃，光照强度为2500-3000lux，光照时间为13-15h/d。
本发明的有益效果是：本发明所述的方法能快发繁殖出大量优质的组培苗，避免因为不断的重复继代造成组培苗变异，后期通过自然光培养后，组培苗生长健壮，玻璃化变异降低。同时，提供在瓶内有大田环境相似的环境，提高了组培苗在后期的炼苗过程中成活率，生产出优质的苗满足生产需要。本发明中昆明山海棠小芽的发芽率达95％，经过继代培养后的成苗率98％，转移至生根培养基中，昆明山海棠生根组培苗的生根率为95％，最后移入大田炼苗的成活率为99％，大大提高了昆明山海棠的组织培养效率；同时本发明中经过试验成功配制出去适合用于昆明山海棠组培的培养基，有效缩短了种苗的培育时间和成本，提高了快繁的速度。
具体实施方式
下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
步骤一、先将昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽在流水下清洗干净，然后用80-85％乙醇溶液浸泡1-2分钟，升汞消毒8-10分钟，使用无菌水反复清洗干净后，切除昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽的边缘部分，得到处理过的昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽；将处理过的昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽置于诱导培养基中，在培养温度为28-32℃，光照强度为2500-3000lux，光照时间为13-15h/d的条件下，培养8-12天即可获得昆明山海棠小芽；其中，所述诱导培养基为：诱导培养基为：以N68为基本培养基，加入0.1-2.0mg/L异戊烯基腺嘌呤、0.1-1.0mg/L萘乙酸、0.5-3.0g/L赤霉素、0.5-3.0mg/L噻苯隆、30-50g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂，调整诱导培养基的pH值为5.8-6.2；其中，培养基中的异戊烯基腺嘌呤能有效刺激愈伤组织分化，诱导生芽，同时促进细胞分裂，加速昆明山海棠的新陈代谢和蛋白质合成，使昆明山海棠快小芽快速增长；萘乙酸为广谱型植物生长调节剂，能有效促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根；赤霉素为一种广泛存在的植物激素，有效刺激叶和芽的生长；噻苯隆是一种新型高效的细胞分裂素，能很好的促进黄精的芽组织分化；蔗糖为能源物质，为植物组织培养提供碳源和能源，还能很好的维持培养基内的低渗环境，同时在一定程度上还能减少微生物的污染，提高黄精的无菌环境质量；昆明山海棠的小芽出芽率为95％。
步骤二、将昆明山海棠小芽置于继代培养基中，在培养温度为28-32℃，光照强度为2500-3000lux，光照时间为13-15h/d的条件下，培养25-30天获得2-3cm高度整齐的昆明山海棠组培分化苗；其中，所述继代培养基为：以white培养基为基本培养基，加入3.0-5.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、2.0-5.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、0.5-2.0mg/L萘乙酸、0.5-4.0mg/L吲哚丙酸、3-5g/L蔗糖及3.0-6.0g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值为5.8-6.2；其中，继代培养基中，6-苄氨基腺嘌呤为植物细胞分裂素，有效促进昆明山海棠的细胞分裂；2，4-二氯苯氧乙酸是一种苯氧类植物生长调节剂，具有与生长素类似的生理效应，有效促进昆明山海棠小芽繁殖和生长；萘乙酸为广谱型植物生长调节剂，能有效促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根；吲哚丙酸为植物生长刺激素，促进组培分化苗快速生根；蔗糖为能源物质，为植物组织培养提供碳源和能源，还能很好的维持培养基内的低渗环境，同时在一定程度上还能减少微生物的污染，提高黄精的无菌环境质量；促进昆明山海棠组培分化苗的出苗率达98％。
步骤三、将昆明山海棠组培分化苗移栽至生根培养基中，在培养温度为28-32℃，光照强度为2500-3000lux，光照时间为13-15h/d的条件下，培养30-40天后，转移至自然光下照射培养25-30天，获得3-4条根的昆明山海棠生根组培苗；其中，所述生根培养基为：生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入0.8-3.0g/L吲哚丁酸、1.0-5.0mg/L萘乙酸、0.5-2.0g/L赤霉素、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为5.8-6.3；其中，生根培养基中吲哚丁酸为广谱型吲哚类植物生长调节剂，是很好的生根剂，可促进昆明山海棠的细胞分化和分裂，诱导根原体的形成；萘乙酸为广谱型植物生长调节剂，能有效促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根；赤霉素为一种广泛存在的植物激素，有效刺激叶和芽的生长；蔗糖为能源物质，为植物组织培养提供碳源和能源，还能很好的维持培养基内的低渗环境，同时在一定程度上还能减少微生物的污染，提高黄精的无菌环境质量；活性炭的加入有助于吸附一些有害的代谢物质，同时活性炭的加入使得生根培养基变黑，可模仿黑暗条件，有利于组培分化苗的生根；同时将昆明山海棠组培分化苗转移至自然光下培养，组培分化苗提供一个与外界环境相似的生长条件，促进昆明山海棠适应外界的生存环境，提高了昆明山海棠组培分化苗在后期炼苗过程中的成活率；昆明山海棠组培分化苗的生根率为95％。
步骤四、将昆明山海棠生根组培苗根部的培养基清洗干净，晾干水汽，再移栽至苗床上，所述的苗床基质为：20-30树皮、10-20杂木、20-30蛭石及10-15珍珠岩待昆明山海棠小苗生长稳定，长出新的根和芽即可移栽至大田，栽培时要适当遮阴，控制遮阴度为75％，间隔浇水，温度为28℃，超过28℃要水帘降温，防止根腐病发生。
实施例1
步骤一、先将昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽在流水下清洗干净，然后用80％乙醇溶液浸泡1分钟，升汞消毒8分钟，使用无菌水反复清洗干净后，切除昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽的边缘部分，得到处理过的昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽；将处理过的昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽置于诱导培养基中，在培养温度为28℃，光照强度为2600lux，光照时间为15h/d的条件下，培养10天即可获得昆明山海棠小芽；其中，所述诱导培养基为：以N68为基本培养基，加入0-1mg/L异戊烯基腺嘌呤、1.0mg/L萘乙酸、2.0g/L赤霉素、1.0mg/L噻苯隆、20g/L蔗糖及4.0g/L琼脂，调整诱导培养基的pH值为5.9；
步骤二、将昆明山海棠小芽置于继代培养基中，在培养温度为28-32℃，光照强度为2600lux，光照时间为15h/d的条件下，培养28天获得2-3cm高度整齐的昆明山海棠组培分化苗；其中，所述继代培养基为：继代培养基为：以white培养基为基本培养基，加入4.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、2.0mg/L萘乙酸、3.0mg/L吲哚丙酸、3g/L蔗糖及3.0g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值为5.9；
步骤三、将昆明山海棠组培分化苗移栽至生根培养基中，在培养温度为28℃，光照强度为2600lux，光照时间为15h/d的条件下，培养30天后，转移至自然光下照射培养30天，获得3-4条根的昆明山海棠生根组培苗；其中，所述生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入1.0g/L吲哚丁酸、1.0mg/L萘乙酸、1.0g/L赤霉素、3％蔗糖及0.3％活性炭，并调整生根培养基的pH值为5.9；
步骤四、将昆明山海棠生根组培苗根部的培养基清洗干净，晾干水汽，再移栽至苗床上，所述的苗床基质为：20g树皮、10g杂木、30g蛭石及15g珍珠岩待昆明山海棠小苗生长稳定，长出新的根和芽即可移栽至大田，栽培时要适当遮阴，控制遮阴度为75％，间隔浇水，温度为28℃，超过28℃要水帘降温，防止根腐病发生。
实施例2
步骤一、先将昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽在流水下清洗干净，然后用85％乙醇溶液浸泡1.5分钟，升汞消毒10分钟，使用无菌水反复清洗干净后，切除昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽的边缘部分，得到处理过的昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽；将处理过的昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽置于诱导培养基中，在培养温度为30℃，光照强度为2800lux，光照时间为14h/d的条件下，培养12天即可获得昆明山海棠小芽；其中，所述诱导培养基为：以N68为基本培养基，加入1.5mg/L异戊烯基腺嘌呤、1.0mg/L萘乙酸、2.5g/L赤霉素、2.0mg/L噻苯隆、35g/L蔗糖及5.0g/L琼脂，调整诱导培养基的pH值为6.0；
步骤二、将昆明山海棠小芽置于继代培养基中，在培养温度为28-32℃，光照强度为2800lux，光照时间为14h/d的条件下，培养30天获得2-3cm高度整齐的昆明山海棠组培分化苗；其中，所述继代培养基为：继代培养基为：以white培养基为基本培养基，加入3.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、4mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、1.5mg/L萘乙酸、1.0mg/L吲哚丙酸、3.0g/L蔗糖及3.0g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值为6.0；；
步骤三、将昆明山海棠组培分化苗移栽至生根培养基中，在培养温度为30℃，光照强度为2800lux，光照时间为14h/d的条件下，培养35天后，转移至自然光下照射培养25天，获得3-4条根的昆明山海棠生根组培苗；其中，所述生根培养基为：：以1/2MS为基本培养基，加入2.0g/L吲哚丁酸、4.0mg/L萘乙酸、1.5g/L赤霉素、5％蔗糖及0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为6.3；
步骤四、将昆明山海棠生根组培苗根部的培养基清洗干净，晾干水汽，再移栽至苗床上，所述的苗床基质为：20树皮、20杂木、25蛭石及15珍珠岩待昆明山海棠小苗生长稳定，长出新的根和芽即可移栽至大田，栽培时要适当遮阴，控制遮阴度为75％，间隔浇水，温度为28℃，超过28℃要水帘降温，防止根腐病发生。
实施例3
步骤一、先将昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽在流水下清洗干净，然后用85％乙醇溶液浸泡1分钟，升汞消毒8分钟，使用无菌水反复清洗干净后，切除昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽的边缘部分，得到处理过的昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽；将处理过的昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽置于诱导培养基中，在培养温度为32℃，光照强度为3000lux，光照时间为13h/d的条件下，培养12天即可获得昆明山海棠小芽；其中，所述诱导培养基为：以N68为基本培养基，加入0.5mg/L异戊烯基腺嘌呤、0.5mg/L萘乙酸、3.0g/L赤霉素、0.5mg/L噻苯隆、50g/L蔗糖及6.0g/L琼脂，调整诱导培养基的pH值为6.2；
步骤二、将昆明山海棠小芽置于继代培养基中，在培养温度为32℃，光照强度为3000lux，光照时间为13h/d的条件下，培养25天获得2-3cm高度整齐的昆明山海棠组培分化苗；其中，所述继代培养基为：继代培养基为：以white培养基为基本培养基，加入5.0mg/L6-苄氨基腺嘌呤、3.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙、2.0mg/L萘乙酸、0.5-4.0mg/L吲哚丙酸、4g/L蔗糖及5.0g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值为6.2；
步骤三、将昆明山海棠组培分化苗移栽至生根培养基中，在培养温度为32℃，光照强度为3000lux，光照时间为13h/d的条件下，培养40天后，转移至自然光下照射培养25天，获得3-4条根的昆明山海棠生根组培苗；其中，所述生根培养基为：生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入2.0g/L吲哚丁酸、5.0mg/L萘乙酸、2.0g/L赤霉素、5％蔗糖及0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为6.3；
步骤四、将昆明山海棠生根组培苗根部的培养基清洗干净，晾干水汽，再移栽至苗床上，所述的苗床基质为：28g树皮、15g杂木、30g蛭石及10g珍珠岩待昆明山海棠小苗生长稳定，长出新的根和芽即可移栽至大田，栽培时要适当遮阴，控制遮阴度为75％，间隔浇水，温度为28℃，超过28℃要水帘降温，防止根腐病发生。
试验比较
采用昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽作为组培材料，均是在培养条件为：在培养温度为30℃，光照强度为2800lux，光照时间为14h/d，pH为6.0的条件下进行培养，其中，
(1)组1为本发明所述建立昆明山海棠快繁体系的方法，培养基分别为：
诱导培养基为：以N68为基本培养基，加入2.0mg/L异戊烯基腺嘌呤、1.0mg/L萘乙酸、3.0g/L赤霉素、噻苯隆3.0mg/L、50g/L蔗糖及6.0g/L琼脂；
继代培养基为以white培养基为基本培养基，加入5.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、5.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、2.0mg/L萘乙酸、4.0mg/L吲哚丙酸、5g/L蔗糖及6.0g/L琼脂；
生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入3.0g/L吲哚丁酸、5.0mg/L萘乙酸、2.0g/L赤霉素、5％蔗糖及0.5％活性炭；
(2)组2的培养基分别为：
诱导培养基为：以N68为基本培养基，加入2.0mg/L异戊烯基腺嘌呤、3.0g/L赤霉素、噻苯隆3.0mg/L、50g/L蔗糖及6.0g/L琼脂；
继代培养基为以white培养基为基本培养基，加入5.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、5.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、4.0mg/L吲哚丙酸、5g/L蔗糖及6.0g/L琼脂；
生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入3.0g/L吲哚丁酸、2.0g/L赤霉素、5％蔗糖及0.5％活性炭。
(3)组3的培养基分别为：
诱导培养基为：以N68为基本培养基，加入1.0mg/L萘乙酸、3.0g/L赤霉素、3.0mg/L噻苯隆、50g/L蔗糖及6.0g/L琼脂；
继代培养基为以white培养基为基本培养基，加入5.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、2.0mg/L萘乙酸、4.0mg/L吲哚丙酸、5g/L蔗糖及6.0g/L琼脂；
生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入3.0g/L吲哚丁酸、5.0mg/L萘乙酸、2.0g/L赤霉素、5％蔗糖及0.5％活性炭。
(4)组4的培养基分别为：
诱导培养基为：以N68为基本培养基，加入2.0mg/L异戊烯基腺嘌呤、1.0mg/L萘乙酸、3.0g/L赤霉素、50g/L蔗糖及6.0g/L琼脂；
继代培养基为以white培养基为基本培养基，加入5.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、5.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、2.0mg/L萘乙酸、5g/L蔗糖及6.0g/L琼脂；
生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入5.0mg/L萘乙酸、2.0g/L赤霉素、5％蔗糖及0.5％活性炭。
(5)组5的培养基分别为：
诱导培养基为：以N68为基本培养基，加入2.0mg/L异戊烯基腺嘌呤、1.0mg/L萘乙酸、3.0mg/L噻苯隆、50g/L蔗糖及6.0g/L琼脂；
继代培养基为以white培养基为基本培养基，加入5.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸、2.0mg/L萘乙酸、4.0mg/L吲哚丙酸、5g/L蔗糖及6.0g/L琼脂；
生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入3.0g/L吲哚丁酸、5.0mg/L萘乙酸、5％蔗糖及0.5％活性炭。
得到的结果如表1所示：
表1
从表1中可以看出，组1的每一个阶段的培育效果均优于其他组，组1的培养基产生的效果最好，生产周期短最短，其他组的培养基均分别缺少了某一些原料组分，得到的组培苗质量明显低于组1，组1至组5的培养周期逐渐递增，说明培养基中每缺少一种组分原料，都会影响昆明山海棠组培苗的生长时间以及性质，由此可以得出，组1的培养基能在保持原植物的优良特性、不变异情况下，增值率高，生长快的优良培养基。
本发明建立昆明山海棠快繁体系的方法大大满足了昆明山海棠种苗的市场需求，同时方法繁殖出大量优质的组培苗，避免因为不断的重复继代造成组培苗变异，后期通过自然光培养后，组培苗生长健壮，玻璃化变异降低。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (5)
1.一种建立昆明山海棠快繁体系的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、取处理过的昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽置于诱导培养基中，培养8-12天即可获得昆明山海棠小芽；其中，所述诱导培养基为：以N68为基本培养基，加入0.1-2.0mg/L异戊烯基腺嘌呤、0.1-1.0mg/L萘乙酸、0.5-3.0g/L赤霉素、0.5-3.0mg/L噻苯隆、30-50g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂，调整诱导培养基的pH值为5.8-6.2；
步骤二、将昆明山海棠小芽置于继代培养基中，培养25-30天获得昆明山海棠组培分化苗；其中，所述继代培养基为：以white培养基为基本培养基，加入3.0-5.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤、2.0-5.0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0.5-2.0mg/L萘乙酸、0.5-4.0mg/L吲哚丙酸、3-5g/L蔗糖及3.0-6.0g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值为5.8-6.2；
步骤三、将昆明山海棠组培分化苗移栽至生根培养基中，培养30-40天后，转移至自然光下照射培养25-30天，获得昆明山海棠生根组培苗；其中，所述生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入0.8-3.0g/L吲哚丁酸、1.0-5.0/mg/L萘乙酸、0.5-2.0g/L赤霉素、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为5.8-6.3；
步骤四、将昆明山海棠生根组培苗移栽至苗床上，待昆明山海棠小苗生长稳定，即可移栽至大田。
2.如权利要求1所述建立昆明山海棠快繁体系的方法，其特征在于，步骤一所述取昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽置于诱导培养基之前，先将昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽用80-85％乙醇溶液浸泡1-2分钟，升汞消毒8-10分钟，清洗干净后切除昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽的边缘部分，得到处理过的昆明山海棠茎上的顶芽或腋芽。
3.如权利要求1所述建立昆明山海棠快繁体系的方法，其特征在于，步骤四所述的苗床基质为：20-30份树皮、10-20份杂木、20-30份蛭石及10-15份珍珠岩。
4.如权利要求1所述建立昆明山海棠快繁体系的方法，其特征在于，步骤四中将昆明山海棠生根组培苗移栽至苗床之前，先将昆明山海棠生根组培苗根部的培养基清洗干净，晾干水汽，再移栽至苗床上。
5.如权利要求1所述建立昆明山海棠快繁体系的方法，其特征在于，所述步骤一至步骤三中，昆明山海棠于培养基中的培养条件均为：培养温度为28-32℃，光照强度为2500-3000lux，光照时间为13-15h/d。
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