CN107041307A - 铁线莲亨利的组织培养方法 - Google Patents

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宋微
王磊
张虎
杨鹤同
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Abstract

本发明公开了本发明公开了铁线莲亨利Clematis ‘Henryi’的组织培养方法，包括以下步骤：（1）获取无菌苗材料；（2）初代培养；（3）增殖培养；本发明所提供的铁线莲组织培养方法，繁殖周期短，繁殖系数高，污染率、褐化率低。

Description

铁线莲亨利的组织培养方法
技术领域
本发明涉及植物栽培繁殖技术领域，具体涉及铁线莲亨利的组织培养方法。
背景技术
铁线莲隶属毛莨科(clematis fusca var.violacea)铁线莲属(Clematis.)，是一类观赏价值高、具有多种抗逆性的藤本植物。铁线莲属植物为多年生木质或草质藤本，少数为直立灌木。叶对生，有柄。单叶、三出复叶或羽状复叶，全缘、有锯齿或分裂。聚伞花序、圆锥花序或单生。铁线莲属植物花形新颖别致，变化大，花朵色泽调和，独具风采；花期较长，适应性强，并具有较强的耐寒性，在国际观赏园艺中占有重要地位。在追求花卉品种新、奇、特的今天，铁线莲属植物的观赏价值越来越受到国内外园艺界的重视。铁线莲种子繁殖率很低，扦插繁殖生根率也不高，利用组织培养和体胚发生是极具应用前景的途径，很多植物(如蝴蝶兰)利用组织培养得到大规模的生产，而对铁线莲的组织培养国内研究较少，发展速度相对滞后，严重影响了优良铁线莲品种的产业化发展。因此对铁线莲进行组织培养研究，探索高频率再生植株的形态发生途径和离体培养条件，用于指导种苗生产，同时也为研究铁线莲属植物离体再生规律提供一些资料，是十分必要的。
发明内容
发明目的：为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种繁殖周期短，繁殖系数高的铁线莲亨利Clematis‘Henryi’初代和继代组织培养方法。
技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了铁线莲亨利Clematis‘Henryi’的组织培养方法，包括以下步骤：
1)获取无菌苗材料：于春季剪取铁线莲亨利Clematis‘Henryi’新萌发的带芽茎段，自来水下冲洗60-120min后于超净工作台上，用体积浓度70～75％的乙醇浸泡15-20s，再用1％质量浓度的HgCl2溶液浸泡5-10分钟后，用无菌水冲洗5-8次，吸干带芽茎段表面水分得到无菌处理的带芽茎段；
2)初代培养：取上述无菌处理后的带芽茎段，切成2cm长的小段，每段中部带1～2枚健康芽，发育饱满，无病虫危害状，切去两端与HgCl2接触部分，上下各0.5cm茎段，余下1cm带芽茎段接于pH值为5.6-6.0的诱导培养基上，所述带芽茎段在诱导培养基诱导培养7天后开始产生丛生芽，继续培养4周后得到带有丛生芽的铁线莲；
3)增殖培养：带有丛生芽的铁线莲接种于pH值为5.8-6.2的不定芽增殖培养基上进行增殖培养，增值培养30天，每日光照16h，增殖培养温度为24-26℃，光照强度为30-40μmol/m2s。
其中，上述步骤2)中的诱导培养基成分为1/4MS+0.3mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.02mg/LNAA+2％蔗糖+0.7％琼脂；pH值为5.8。
其中，上述步骤3)中的增殖培养基成分为1/4MS+0.3mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.05mg/LNAA+3％蔗糖+0.7％琼脂+20％香蕉+0.1mgVc。
其中，上述步骤1)中的乙醇体积浓度70％。
其中，上述步骤3)中增殖培养温度为25℃，光照强度为40μmol/m2s。
其中，上述MS为自行配制，配方如下：
大量元素(mg/l)：
NH4NO3 1650
KNO3 1900
CaCl2·2H2O440
MgSO4·7H2O 370
KH2PO4170
微量元素mg/l：
KI 0.83
H3BO36.2
MnSO4·4H2O 22.3
ZnSO4·7H2O 8.6
Na2MnO4·2H2O 0.25
CuSO4·5H2O 0.025
CoCl2·6H2O 0.025
铁盐mg/l：
FeSO4·7H2O27.8
Na2-EDTA·2H2O37.3
有机物质mg/l：
肌醇 100
烟酸 0.5
盐酸吡哆醇 0.5
盐酸硫胺素 0.1
甘氨酸 2.0。
有益效果：相比现有技术，本发明所提供的铁线莲组织培养方法，繁殖周期短，繁殖系数高，污染率、褐化率低。
具体实施方式
下面对本发明技术方案进行详细说明，但是本发明的保护范围不局限于所述实施例。
试验材料：
试验材料为铁线莲亨利Clematis‘Henryi’，来源于江苏农林职业技术学院苗圃地。
本实施例的MS为自行配制，配方如下：
大量元素(mg/l)：
NH4NO3 1650
KNO3 1900
CaCl2·2H2O440
MgSO4·7H2O 370
KH2PO4 170
微量元素mg/l：
KI 0.83
H3BO36.2
MnSO4·4H2O 22.3
ZnSO4·7H2O 8.6
Na2MnO4·2H2O 0.25
CuSO4·5H2O 0.025
CoCl2·6H2O 0.025
铁盐mg/l：
FeSO4·7H2O27.8
Na2-EDTA·2H2O37.3
有机物质mg/l：
肌醇 100
烟酸 0.5
盐酸吡哆醇 0.5
盐酸硫胺素 0.1
甘氨酸 2.0。
6-BA：6-苄氨基腺嘌呤；
KT：激动素
NAA：萘乙酸；
Vc：维生素C。
实施例1
铁线莲亨利Clematis‘Henryi’组织培养方法，包括以下步骤：
(1)获取无菌苗材料：
于春季4、5月剪取铁线莲当年发的带芽茎段，自来水下冲洗60min后于超净工作台上，用体积浓度为70％的乙醇浸泡15s，再用1％质量浓度的升汞溶液浸泡8分钟后，用无菌水冲洗5次，吸干带芽茎段表面水分；
(2)初代培养：
取上述无菌处理后的带芽茎段，切成1cm长的小段，每段上至少带一枚健康芽，发育饱满，无病虫危害状，接种于pH值为5.8的诱导培养基上，所述带芽茎段在诱导培养基诱导培养后7天开始产生丛生芽，继续培养4周后，进行步骤(3)的继代增殖培养；其中，诱导培养基成分为1/4MS+0.3mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.02mg/LNAA+2％(质量浓度)蔗糖+0.7％(质量浓度)琼脂；pH值为5.8。
(3)增殖培养：
带有丛生芽的铁线莲接种于pH值为6.2的不定芽增殖培养基上进行增殖培养，增值培养30天，每日光照16h，增殖培养温度为25℃，光照强度为40μmol/m2s；其中，增殖培养基成分为1/2MS+0.3mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.05mg/LNAA+3％(质量浓度)蔗糖+0.7％(质量浓度)琼脂+20％(质量浓度)香蕉+0.1mgVc，pH值为6.2。
实施例2
铁线莲亨利Clematis‘Henryi’组织培养方法，包括以下步骤：
(1)获取无菌苗材料：
于春季剪取铁线莲新萌发的带芽茎段，自来水下冲洗120min后于超净工作台上，用(质量浓度)75％的乙醇浸泡20s，再用1％(质量浓度)的升汞溶液浸泡10分钟后，用无菌水冲洗8次，吸干带芽茎段表面水分；
(2)初代培养：
取上述无菌处理后的带芽茎段，切成1cm长的小段，每段上至少带一枚健康芽，发育饱满，无病虫危害状，接种于pH值为5.6的诱导培养基上，所述带芽茎段在诱导培养基诱导培养后7天开始产生丛生芽，继续培养4周后，进行步骤(3)的继代增殖培养；其中，诱导培养基成分为1/2MS+0.3mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.05mg/LNAA+3％(质量浓度)蔗糖+0.7％(质量浓度)琼脂；pH值为5.6。
(3)增殖培养：
带有丛生芽的铁线莲接种于pH值为6.2的不定芽增殖培养基上进行增殖培养，增值培养30天，每日光照16h，增殖培养温度为25℃，光照强度为30μmol/m2s；其中，增殖培养基成分为1/2MS+0.3mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.05mg/LNAA+3％(质量浓度)蔗糖+0.7％(质量浓度)琼脂+20％(质量浓度)香蕉+0.1mgVc，pH值为6.2。
对比例1：铁线莲亨利Clematis‘Henryi’组织培养方法，包括以下步骤：
(1)获取无菌苗材料：
于春季剪取铁线莲新萌发的带芽茎段，自来水下冲洗120min后于超净工作台上，用(质量浓度)75％的乙醇浸泡20s，再用1％(质量浓度)的升汞溶液浸泡3分钟后，用无菌水冲洗8次，吸干带芽茎段表面水分；
(2)初代培养：
取上述无菌处理后的带芽茎段，切成1cm长的小段，每段上至少带一枚健康芽，发育饱满，无病虫危害状，接种于pH值为5.6的诱导培养基上，所述带芽茎段在诱导培养基诱导培养后5天均被污染，污染菌为多种细菌和真菌，继而无法进行后期继代培养。
对比例2：铁线莲亨利Clematis‘Henryi’组织培养方法，包括以下步骤：
(1)获取无菌苗材料：
于春季剪取铁线莲新萌发的带芽茎段，自来水下冲洗120min后于超净工作台上，用(质量浓度)75％的乙醇浸泡20s，再用1％(质量浓度)的升汞溶液浸泡15分钟后，用无菌水冲洗8次，吸干带芽茎段表面水分；
(2)初代培养：
取上述无菌处理后的带芽茎段，切成1cm长的小段，每段上至少带一枚健康芽，发育饱满，无病虫危害状，接种于pH值为5.6的诱导培养基上，所述带芽茎段在诱导培养基诱导培养后7天后有零星开始产生丛生芽，但继而褐化，完全停止生长，故而无法继续培养。
通过将上述实施例1～2和对比例1～2比较发现，本发明的繁殖系数高，而且污染率和褐化率极低。数据参见表1。
表1
本发明按照上述实施例进行了说明应当理解，上述实施例不以任何形式限定本发明，凡采用等同替换或等效变换方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.铁线莲亨利Clematis ‘Henryi’的组织培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）获取无菌苗材料：于春季剪取铁线莲亨利Clematis ‘Henryi’新萌发的带芽茎段，自来水下冲洗60-120min后于超净工作台上，用体积浓度70~75%的乙醇浸泡15-20s，再用1%质量浓度的HgCl2溶液浸泡5-10分钟后，用无菌水冲洗5-8次，吸干带芽茎段表面水分得到无菌处理的带芽茎段；
2）初代培养：取上述无菌处理后的带芽茎段，切成2cm长的小段，每段中部带1~2枚健康芽，发育饱满，无病虫危害状，切去两端与HgCl2接触部分，上下各0.5cm茎段，余下1cm带芽茎段接于pH值为5.6-6.0的诱导培养基上，所述带芽茎段在诱导培养基诱导培养7天后开始产生丛生芽，继续培养4周后得到带有丛生芽的铁线莲；
3）增殖培养：带有丛生芽的铁线莲接种于pH值为5.8-6.2的不定芽增殖培养基上进行增殖培养，增值培养30天，每日光照16h，增殖培养温度为24-26℃，光照强度为30-40μmol/m2s。
2.根据权利要求1所述的铁线莲亨利Clematis ‘Henryi’的组织培养方法，其特征在于：所述步骤2）中的诱导培养基成分为1/4MS+0.3mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.02mg/LNAA+2%蔗糖+0.7% 琼脂；pH值为5.8。
3.根据权利要求1所述的铁线莲亨利Clematis ‘Henryi’的组织培养方法，其特征在于：所述步骤3）中的增殖培养基成分为1/4MS+0.3mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.05mg/LNAA+3%蔗糖+0.7%琼脂+20%香蕉+0.1mgVc。
4.根据权利要求1所述的铁线莲亨利Clematis ‘Henryi’的组织培养方法，其特征在于：所述步骤1）中的乙醇体积浓度70%。
5.根据权利要求1所述的铁线莲亨利Clematis ‘Henryi’的组织培养方法，其特征在于：所述步骤3）中增殖培养温度为25℃，光照强度为40μmol/m2s。
6.根据权利要求2或3所述的铁线莲亨利Clematis ‘Henryi’的组织培养方法，其特征在于：所述MS为自行配制，配方如下：
大量元素mg/l：
NH4NO31650
KNO3 1900
CaCl2·2H2O440
MgSO4·7H2O 370
KH2PO4170
微量元素mg/l：
KI 0.83
H3BO3 6.2
MnSO4·4H2O 22.3
ZnSO4·7H2O 8.6
Na2MnO4·2H2O 0.25
CuSO4·5H2O 0.025
CoCl2·6H2O 0.025
铁盐mg/l：
FeSO4·7H2O 27.8
Na2-EDTA·2H2O 37.3
有机物质mg/l：
肌醇 100
烟酸0.5
盐酸吡哆醇0.5
盐酸硫胺素0.1
甘氨酸2.0。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110547202A (zh) * 2019-10-09 2019-12-10 江苏农林职业技术学院 一种铁线莲增殖组培方法
CN110637722A (zh) * 2019-10-24 2020-01-03 江苏农林职业技术学院 一种铁线莲“勇士舞”愈伤组织的诱导方法
CN114391475A (zh) * 2022-01-26 2022-04-26 江苏农林职业技术学院 铁线莲克里斯帕天使的组织培养方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103461130A (zh) * 2013-09-22 2013-12-25 江苏农林职业技术学院 一种铁线莲栽培品种多变海神的组织培养方法
CN104082137A (zh) * 2014-06-26 2014-10-08 江苏农林职业技术学院 一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法
CN104206281A (zh) * 2014-09-29 2014-12-17 江苏农林职业技术学院 铁线莲优雅紫的组织培养方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103461130A (zh) * 2013-09-22 2013-12-25 江苏农林职业技术学院 一种铁线莲栽培品种多变海神的组织培养方法
CN104082137A (zh) * 2014-06-26 2014-10-08 江苏农林职业技术学院 一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法
CN104206281A (zh) * 2014-09-29 2014-12-17 江苏农林职业技术学院 铁线莲优雅紫的组织培养方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
王非等: "褐毛铁线莲茎段诱导丛生芽的研究", 《北方园艺》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110547202A (zh) * 2019-10-09 2019-12-10 江苏农林职业技术学院 一种铁线莲增殖组培方法
CN110637722A (zh) * 2019-10-24 2020-01-03 江苏农林职业技术学院 一种铁线莲“勇士舞”愈伤组织的诱导方法
CN114391475A (zh) * 2022-01-26 2022-04-26 江苏农林职业技术学院 铁线莲克里斯帕天使的组织培养方法

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