CN110637722A - 一种铁线莲“勇士舞”愈伤组织的诱导方法 - Google Patents

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尹富闯
宋微
王磊
张虎
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Abstract

本发明公开了一种铁线莲“勇士舞”愈伤组织的诱导方法,该方法包括:(1)获取无菌材料:在冬季剪取铁线莲半木质化的带芽茎段,对其进行消毒杀菌;(2)初代培养:将消毒杀菌后的枝条切成1~2cm的茎段,每段茎段上至少带一枚健康饱满芽,将茎段接种于初代培养基上,经初代培养7天后枝条上的芽开始萌发,然后移入愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养;(3)愈伤组织培养:在愈伤组织诱导培养基中出现愈伤组织,培养20‑25天后愈伤组织上诱导出丛生芽,将丛生芽切分成单株或小的茎段,重新接种于pH为5.8‑6.2的新的的愈伤组织诱导培养中,培养20‑25天后愈伤组织大量分化出丛生芽,继续培养诱导出现不定根。

Description

一种铁线莲“勇士舞”愈伤组织的诱导方法
技术领域
本发明涉及一种铁线莲“勇士舞”愈伤组织的诱导方法,属于植物繁殖技术领域。
背景技术
铁线莲隶属毛莨科(Ranunculaceae)铁线莲属(Clematis sp.),是一类观赏价值高、具有多种抗逆性的藤本植物。铁线莲属植物为多年生木质或草质藤本,少数为直立灌木。花期较长,适应性强,并具有较强的耐寒性,在国际观赏园艺中占有重要地位。在追求花卉品种新、奇、特的今天,铁线莲属植物的观赏价值越来越受到国内外园艺界的重视。铁线莲种子繁殖率很低,扦插繁殖生根率也不高,利用组织培养和体胚发生是极具应用前景的途径,利用组织培养得到大规模的生产,而对铁线莲的组织培养国内研究较少,发展速度相对滞后,严重影响了优良铁线莲品种的产业化发展。
发明内容
发明目的:本发明所要解决的技术问题是提供一种铁线莲“勇士舞”愈伤组织的诱导方法,该方法能够得到分裂能力极强的愈伤组织,从而有效提高铁线莲组培苗的丛生芽诱导数量,提高组培增殖率。
为解决上述技术问题,本发明所采用的技术方案为:
一种铁线莲“勇士舞”愈伤组织的诱导方法,该方法以铁线莲冬季半木质化的带芽茎段作为外植体,具体包括如下步骤:
(1)获取无菌材料:
在冬季时剪取铁线莲半木质化的枝条,剪取的枝条为带芽的茎段,对其进行消毒杀菌处理;
(2)铁线莲的初代培养:
将消毒杀菌后的枝条切成1~2cm的茎段,每段茎段上至少带一枚健康饱满芽,将茎段接种于初代培养基上,经初代培养7天后枝条上的芽开始萌芽,然后将其移入愈伤组织诱导培养基中进行继代增殖培养,
初代培养基的成分为:1/2MS+0.2mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.05mg/LNAA+1.5%蔗糖+0.7%琼脂,诱导培养基的pH值为5.8~6.2;
诱导培养基的成分为:1/2MS+2mg.L-16-BA+0.5mg.L-1KT+0.1mg.L-1NAA+2%蔗糖+2%香蕉+0.7%琼脂+2%香蕉+0.1mg/LVc;
(3)愈伤组织培养:
继代增殖培养20~25d后60%以上植株得到胚性愈伤组织,愈伤组织上诱导出大量丛生芽,将丛生芽切分成单株或小的茎段,重新接种于新更换的pH为5.8-6.2愈伤组织诱导培养基中,再持续培养20~25d,愈伤组织持续分化出丛生芽,继续培养20~25天诱导出现不定根。
本发明步骤(3)将生根和壮苗培养同时进行,有效提高了培养效率。
其中,步骤(1)中,消毒杀菌处理具体为:将剪取的半木质化茎段先用0.1%洗衣粉浸泡8~10min,再用自来水冲洗60min;冲洗后先用0.1-0.2%百菌清浸泡5~10min,浸泡后用无菌水冲洗3次,接着用多菌灵浸泡5~10min,再用流水冲洗3次,最后将其置于超净工作台上,用质量分数75%的乙醇浸泡30~60s,浸泡完用无菌水冲洗3次,再用加入1滴吐温80的质量分数为0.1%的升汞溶液浸泡6~8min,最后再用无菌水冲洗3次后接种。
其中,步骤(2)中,继代增殖培养的温度为24~26℃,光照强度为3000~4000Lux。
其中,步骤(3)中,将丛生芽切分成单株或小的茎段,单株茎段或小的茎段的长度为2.0~3.5cm。
有益效果:本发明方法能够得到铁线莲“勇士舞”具有极强分化能力的愈伤组织,即胚性愈伤组织,该愈伤组织能够不断分化出丛生芽,从而有效提高铁线莲组培苗的丛生芽诱导数量,并且由于愈伤组织分裂能力强,因此对其分化出来的根进行驯化栽培后的成活率能达到80%以上。
附图说明
图1为采用本发明诱导培养基诱导出的愈伤组织分化出的丛生芽照片(图片中箭头所指为丛生芽)。
具体实施方式
实施例1
本发明铁线莲“勇士舞”(‘Krakowiak’)愈伤组织的诱导方法,具体包括如下步骤:
(1)获取无菌材料:
在冬季时剪取铁线莲半木质化的枝条,剪取的枝条为带芽的茎段,对其进行消毒杀菌处理;消毒杀菌处理具体为:将剪取的半木质化茎段先用0.1%洗衣粉浸泡8~10min,再用自来水冲洗60min;冲洗后先用0.1-0.2%百菌清浸泡5~10min,浸泡后用无菌水冲洗3次,接着用多菌灵浸泡5~10min,再用流水冲洗3次,最后将其置于超净工作台上,用质量分数75%的乙醇浸泡30~60s,浸泡完用无菌水冲洗3次,再用加入1滴吐温80的质量分数为0.1%的升汞溶液浸泡6~8min,最后再用无菌水冲洗3次后接种;
(2)铁线莲的初代培养:
将消毒杀菌后的枝条切成1~2cm的茎段,每段茎段上至少带一枚健康饱满芽,将茎段接种于初代培养基上,经初代培养7天后枝条上的芽开始萌芽,然后将茎段移入愈伤组织诱导培养基中进行继代增殖培养(愈伤组织诱导培养),继代增殖培养的温度为24~26℃,光照强度为3000~4000Lux;
初代培养基的成分为:1/2MS+0.2mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.05mg/LNAA+1.5%蔗糖+0.7%琼脂,诱导培养基的pH值为5.8~6.2;
诱导培养基的成分为:1/2MS+2mg.L-16-BA+0.5mg.L-1KT+0.1mg.L-1NAA+2%蔗糖+2%香蕉+0.7%琼脂+2%香蕉+0.1mg/LVc;
(3)愈伤组织培养:
在愈伤组织诱导培养基中诱导培养20~25d后,60%以上的植株均得到胚性愈伤组织,愈伤组织上诱导出大量丛生芽,将丛生芽切分成单株或小的茎段,单株茎段或小的茎段的长度为2.0~3.5cm,将茎段重新接种于新更换的pH为5.8-6.2愈伤组织诱导培养基中,再持续培养20~25d,愈伤组织大量分化出丛生芽,继续培养20~25天诱导出现不定根。
表1不同激素组合培养20天后愈伤组织诱导率比较
Figure BDA0002246097580000031
由表1可知,c14激素组合对应的诱导培养基胚性愈伤组织的诱导率最高,而其他激素组合对应的培养基胚性愈伤组织诱导率很低或得到的植株长势很弱。

Claims (4)

1.一种铁线莲“勇士舞”愈伤组织的诱导方法,其特征在于,具体包括如下步骤:
(1)获取无菌材料:
在冬季时剪取铁线莲半木质化的枝条,剪取的枝条为带芽的茎段,对其进行消毒杀菌处理;
(2)铁线莲的初代培养:
将消毒杀菌后的枝条切成1~2cm的茎段,每段茎段上至少带一枚健康饱满芽,将茎段接种于初代培养基上,经初代培养7天后枝条上的芽开始萌芽,然后将其移入愈伤组织诱导培养基中进行继代增殖培养,
初代培养基的成分为:1/2MS+0.2mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.05mg/LNAA+1.5%蔗糖+0.7%琼脂,诱导培养基的pH值为5.8~6.2;
诱导培养基的成分为:1/2MS+2mg.L-16-BA+0.5mg.L-1KT+0.1mg.L-1NAA+2%蔗糖+2%香蕉+0.7%琼脂+2%香蕉+0.1mg/LVc;
(3)愈伤组织培养:
继代增殖培养20~25d后60%以上植株得到胚性愈伤组织,在愈伤组织诱导出丛生芽后,将丛生芽切分成单株或小的茎段,重新接种于新更换的pH为5.8-6.2愈伤组织诱导培养基中,再持续培养20~25d,愈伤组织持续分化出丛生芽,继续培养20~25天诱导出现不定根。
2.根据权利要求1所述的铁线莲“勇士舞”愈伤组织的诱导方法,其特征在于:步骤(1)中,消毒杀菌处理具体为:将剪取的半木质化茎段先用0.1%洗衣粉浸泡8~10min,再用自来水冲洗60min;冲洗后先用0.1-0.2%百菌清浸泡5~10min,浸泡后用无菌水冲洗3次,接着用多菌灵浸泡5~10min,再用流水冲洗3次,最后将其置于超净工作台上,用质量分数75%的乙醇浸泡30~60s,浸泡完用无菌水冲洗3次,再用加入1滴吐温80的质量分数为0.1%的升汞溶液浸泡6~8min,最后再用无菌水冲洗3次后接种。
3.根据权利要求1所述的种铁线莲“勇士舞”愈伤组织的诱导方法,其特征在于:步骤(2)中,继代增殖培养的温度为24~26℃,光照强度为3000~4000Lux。
4.根据权利要求1所述的种铁线莲愈伤组织的诱导方法,其特征在于:步骤(3)中,将丛生芽切分成单株或小的茎段,单株茎段或小的茎段的长度为2.0~3.5cm。
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