CN105340742B

CN105340742B - 一种云南樱桃成年优良单株“广州”樱的组培快繁方法

Info

Publication number: CN105340742B
Application number: CN201510787044.8A
Authority: CN
Inventors: 胡晓敏; 邓小梅; 叶小玲; 奚如春; 郑珂媛; 朱军; 唐伟洲
Original assignee: Guangzhou Mangrove Ecological Science And Technology Co Ltd; Guangzhou Trendsee Group Co Ltd; South China Agricultural University
Current assignee: Guangzhou mangrove ecological science and Technology Co Ltd; GUANGZHOU TRENDSEE GROUP CO., LTD.; South China Agricultural University
Priority date: 2015-11-16
Filing date: 2015-11-16
Publication date: 2017-12-29
Anticipated expiration: 2035-11-16
Also published as: CN105340742A

Abstract

本发明公开了一种云南樱桃成年优良单株‘广州’樱的组培快繁方法。本发明通过基本培养基设置、不同激素成份及浓度水平配比优化，以成年优株当年生半木质化枝条为外植体，经腋芽诱导、腋芽增殖和生根培养，形成完整植株，移栽到基质后，得到生长整齐、表型一致的健壮苗木。本发明具有繁殖系数高，培育周期短，不受季节限制等优点，诱导率达100％；增殖系数达4.72，增殖芽伸长生长快，培养15d芽高达3～4cm；生根培养15d，生根率可达100％，根数达5根/株以上；组培生根苗健壮、移栽成活率高达90％以上；在实际生产应用中可进行周年规模化快速育苗，生产出健壮、整齐一致的‘广州’樱幼苗，应用前景广阔。

Description

一种云南樱桃成年优良单株“广州”樱的组培快繁方法

技术领域：

本发明属于植物的组织培养技术领域，具体涉及一种云南樱桃成年优良单株‘广州’樱的组培快繁方法。

背景技术：

云南樱桃(Cerasus yunnanensis(Franch.)Yu et Li)是蔷薇科(Rosaceae)樱属(Cerasus)落叶乔木。原产于云南、四川、广西海拔2300～2600m山谷林中或山坡地边。花白色，近伞房总状花序，花叶同开或花近先叶开放。核果紫红色。原产地花期3～5月，果期5～6月。是原产地重要园林绿化树种，广植于公园、风景名胜区、学校、住宅小区、城市道路两侧。‘广州’樱是从野生云南樱桃中选育出来的一个优良速生单株，具有生长速度快、花瓣大、花色粉嫩、耐热性好、抗逆性强等优点。

‘广州’樱春芽绿色，花蕾深玫红色，开后粉红色，开放时形态奔放，花瓣几近平面，花径3.8～4.4cm，伞形花序，有花3～5朵。在广东地区的花期为2月下旬至3月中旬，果期4月下旬。已在广东的广州、东莞、佛山、韶关等地试种种植，均表现出生长速度快，组培苗种植3年后，树高达4m、地径达6～7cm、冠幅2.5～3m，其花色艳丽、花量大、耐高温、抗逆性强，是适合华南地区种植的新优樱花观赏品种。

‘广州’樱常规可采用种子繁殖，但实生苗的生长量、花型、花色分化均较大，不稳定。目前，‘广州’樱常规无性繁殖主要采用嫁接技术，研究表明嫁接所用砧木种类和穗条木质化程度对‘广州’樱嫁接成活影响很大，在广东适宜的嫁接时间为12月～1月，鉴于嫁接用母本枝条数量及嫁接时间的限制，常规扩繁速度慢，严重制约了其快速推广应用。

经过文献检索，目前尚未见关于‘广州’樱及其原生种云南樱桃组培快繁的报道。若参考现发表樱属植物相关种组培培养基对‘广州’樱进行组培快繁，会出现组培芽发黄掉叶，伸长生长慢，最后出现枯黄现象，芽小而弱，有效芽数少等情况，导致增殖系数小，成苗质量差，繁殖速度慢，生产成本高。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种云南樱桃成年优良单株‘广州’樱的组培快繁方法。该方法具有腋芽诱导快、继代周期短、增殖倍率高、芽伸长生长快、有效芽多、生根率高、生根苗根系发达健壮、移栽成活率高、可规模化生产及成本低等特点。

本发明的云南樱桃成年优良单株‘广州’樱的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、腋芽诱导：剪取‘广州’樱母株上半木质化枝条作为外植体，经消毒后接种到诱导培养基上培养得到腋芽，培养条件为：23±2℃，光照强度60μmol.m^-2.s^-1，光照时间12h/d，所述的诱导培养基为，每升含有6-BA 1.0～2.0mg、NAA 0.1～0.5mg、蔗糖20～40g、常量的琼脂，余量为YH培养基，pH为5.8～6.0；

b、增殖培养：将腋芽切下接种到增殖培养基上培养得到增殖苗，培养条件为：23±2℃，光照强度60μmol.m^-2.s^-1，光照时间12h/d，所述的增殖培养基为，每升含有6-BA 0.3～1.5mg、NAA 0.05～0.2mg、IBA 0.05～0.2mg、蔗糖20～40g、常量琼脂，余量为YH培养基，pH为5.8～6.0；

c、生根培养：从增殖苗中切取嫩茎接种到生根培养基中培养得到生根苗，培养条件为：25±2℃，光照强度80μmol.m^-2.s^-1，光照时间12h/d，所述的生根培养基为，每升含有NAA 0.1～0.5mg、IBA 0.1～0.5mg、蔗糖15～20g、常量琼脂，余量为1/2YH培养基，pH为5.8～6.0；

将生根苗移到温室中炼苗，然后取出幼苗，洗净黏在苗上的培养基，移植到按体积比泥炭土：珍珠岩：蛭石＝2:1:1的混合基质中，进行培养管理，得到‘广州’樱种苗；

所述的YH培养基，其含有以下成份：1200mg/L NH₄NO₃、600mg/L KNO₃、440mg/L Ca(NO₃)²·2H₂O、120mg/L CaCl₂·4H₂O、370mg/L MgSO₄·7H₂O、170mg/L KH₂PO₄、22.3mg/LMnSO₄·4H₂O、8.6mg/L ZnSO₄·7H₂O、6.2mg/L H₃BO₃、0.83mg/L KI、0.25mg/L Na₂MoO₄·2H₂O、0.25mg/L CuSO₄·5H₂O、0.05mg/L NiSO₄.6H₂O、0.025mg/L CoCl₂、27.8mg/L FeSO₄·7H₂O、37.3mg/L Na₂·EDTA·H₂O、100mg/L肌醇、2.0mg/L甘氨酸、0.5mg/L盐酸硫胺素、0.2mg/L烟酸、0.2mg/L盐酸吡哆醇，pH 5.8、121℃灭菌15～20min，所述的1/2YH培养基为将YH培养基中所含大量元素(NH₄NO₃、KNO₃、Ca(NO₃)₂·2H₂O、CaCl₂·4H₂O、MgSO₄·7H₂O、KH₂PO₄)的用量减半，其余成分不变。

所述的剪取‘广州’樱母株上半木质化枝条作为外植体优选在剪取外植体前，每隔7d用多菌灵、百菌清交替喷洒所选‘广州’樱母株树体4～5次，然后剪取‘广州’樱母株上半木质化枝条，除叶，用纯净水清洗干净作为外植体，低温保湿备用。

所述的消毒优选为：将外植体用质量分数0.5％～1％新洁尔灭溶液，浸泡时间为5～6min，倒掉新洁尔灭溶液后，用无菌水冲洗3～4次，然后加入质量分数0.05％～0.1％升汞溶液中，依据外植体幼嫩程度浸泡1～6min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液，再用无菌水冲洗5～6次，得到消毒后的外植体。

所述的消毒后接种到诱导培养基上优选是将消毒后的外植体用无菌刀片切除叶柄、茎段两端受伤部位后，再接种到诱导培养基上。

所述的步骤b的增殖培养优选是将腋芽切下，接种到增殖培养基上培养，腋芽分化形成新芽丛，将新芽丛中的芽高≥3cm的幼嫩枝条切割成1.0～1.5cm的茎段转再接入到新的增殖培养基中培养得到增殖苗，培养条件为：23±2℃，光照强度60μmol.m^-2.s^-1，光照时间12h/d，所述的增殖培养基为，每升含有6-BA 0.3～1.5mg、NAA 0.05～0.2mg、IBA 0.05～0.2mg、蔗糖20～40g、常量琼脂，余量为YH培养基，pH为5.8～6.0。

本发明通过基本培养基(YH培养基，专门针对‘广州’樱生理状态设定的基本培养基)设置、不同激素成份及浓度水平配比优化，以成年优株当年生半木质化枝条为外植体，经腋芽诱导、腋芽增殖和生根培养，形成完整植株，移栽到基质后，得到生长整齐、表型一致的健壮苗木。本发明具有外植体的腋芽诱导速度快，诱导率高、达100％；繁殖系数高，达4.72，培育周期短，不受季节限制等优点，增殖芽伸长生长快，培养15d芽高达3～4cm；生根培养15d，生根率可达100％，根数达5根/株以上；组培生根苗健壮、移栽成活率高达90％以上；在实际生产应用中可进行周年规模化快速育苗，生产出健壮、整齐一致的‘广州’樱幼苗，应用前景广阔。

本发明相对于现有技术，具有如下的优点及效果：诱导速度快、诱导率高；繁殖系数大、丛芽粗壮、伸长生长快；生根率高，根系发达，生根苗粗壮、移栽成活率高，苗木生长健壮整齐，生产成本低。本发明为‘广州’樱种苗的规模化苗木生产提供了有效途径，通过规模化育苗，可以大规模的获得‘广州’樱种苗，将为‘广州’樱的无性化推广提供技术支持，为广东乃至华南地区园林绿化及生态文明建设提供新优樱花品种及优质种苗，有着极其重大的意义，应用前景广阔。

附图说明：

图1和图2是不定芽诱导；

图3是增殖培养基中的增殖芽；

图4是增殖芽的芽高测量；

图5是生根培养基中的生根苗根系；

图6是组培生根苗；

图7是生根苗移栽1个月后。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。所述技术领域的普通实验人员依据以上本发明公开的内容和各参数所取范围，均可实现本发明的目的。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件。

以下实施例中的YH培养基，其含有以下成分：1200mg/L NH₄NO₃、600mg/L KNO₃、440mg/L Ca(NO₃)₂·2H₂O、120mg/L CaCl₂·4H₂O、370mg/L MgSO₄·7H₂O、170mg/L KH₂PO₄、22.3mg/L MnSO₄·4H₂O、8.6mg/L ZnSO₄·7H₂O、6.2mg/L H₃BO₃、0.83mg/L KI、0.25mg/LNa₂MoO₄·2H₂O、0.25mg/L CuSO₄·5H₂O、0.05mg/L NiSO₄.6H₂O、0.025mg/L CoCl₂、27.8mg/LFeSO₄·7H₂O、37.3mg/L Na₂·EDTA·H₂O、100mg/L肌醇、2.0mg/L甘氨酸、0.5mg/L盐酸硫胺素、0.2mg/L烟酸、0.2mg/L盐酸吡哆醇，溶剂为水。按照上述配方的成分和含量，将上述成分混合均匀，调pH 5.8、121℃灭菌15～20min，得到YH培养基，备用。所述的1/2YH培养基为将YH培养中所含大量元素(NH₄NO₃、KNO₃、Ca(NO₃)₂·2H₂O、CaCl₂·4H₂O、MgSO₄·7H₂O、KH₂PO₄)的用量减半，其余成分不变。

实施例1：

一种云南樱桃成年优良单株‘广州’樱的组培快繁方法，包括如下步骤：

(1)外植体采集：3～5月份天气晴朗的上午10时左右，从‘广州’樱母株上剪取生长健壮、无病虫害的半木质化嫩枝，保湿处理后带回实验室，将采集后的半木质化嫩枝除叶，用纯净水清洗干净后作为外植体置4℃冰箱保存备用。采集外植体前，每隔7d用多菌灵、百菌清交替喷洒萌枝4～5次。

(2)外植体表面消毒：将枝条(外植体)剪成4cm左右长的带叶腋茎段，在超净工作台上先用无菌水摖洗干净，再用质量分数0.5％新吉尔灭溶液，浸泡时间为6min，倒掉新吉尔灭溶液后，用无菌水冲洗3次，然后加入质量分数0.1％升汞溶液，根据外植体幼嫩程度浸泡1～6min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液后，再用无菌水冲洗6次。无菌滤纸吸干无菌材料表面水珠，用无菌刀片切除叶柄、茎段两端受伤部位后，再将茎段切成2cm带叶腋切断备用，得到消毒好的带叶腋切断。

(3)腋芽诱导：将消毒好的带叶腋切断(外植体)接种到诱导培养基上培养，培养条件为：23±2℃，光照强度60μmol.m^-2.s^-1，光照时间12h/d，每瓶接种一个外植体，3～5d之后，叶柄开始松动脱落，腋芽萌动，15～20d后一个叶腋能萌出多个腋芽(图1、图2)，诱导率为100％，所述的诱导培养基为，每升含有6-BA 1.0mg、NAA 0.1mg、蔗糖30g、琼脂6g(激素购自Sigma-Aldrich公司)，余量为YH培养基，pH为5.8(其配制方法为：将上述成分混合均匀后，调pH值，灭菌备用)，由此得到腋芽。

(4)增殖培养：将诱导出的腋芽截成1.0～1.5cm的茎段转接入增殖培养基上培养，培养条件为：23±2℃，光照强度60μmol.m^-2.s^-1，光照时间12h/d，所述的增殖培养基，每升含有6-BA 1.0mg、NAA 0.05mg、IBA 0.2mg、蔗糖30g、琼脂6g，余量为YH培养基，pH为5.8(其配制方法为：将上述成分混合均匀后，调pH值，灭菌备用)，15d后，单芽形成芽丛，芽伸长生长快，增殖系数(芽高≧2cm)高达4.72(图3、图4)，有效芽率达80％以上，由此得到增殖苗。

(5)生根培养：从增殖苗选取健壮的有效芽(芽高超过2cm)切取转接到生根培养基中培养，培养条件为：25±2℃，光照强度80μmol.m^-2.s^-1，光照时间12h/d，所述的生根培养基为，每升含有NAA 0.5mg、IBA 0.5mg、蔗糖15g、琼脂6g，余量为1/2YH培养基，pH为5.8(其配制方法为：将上述成分混合均匀后，调pH值，灭菌备用)，15d后，不定根的诱导率为100％，每株平均生根数达5条以上(图5、图6)。

(6)炼苗与移栽：将生根瓶苗移到温室中适应外界环境5～7d，然后将组培瓶盖从半开到全开炼苗1d，炼苗后将瓶中的幼苗小心取出，洗净黏在苗上的培养基，移植到填满泥炭土:珍珠岩:蛭石＝2:1:1(体积比)混合基质的育苗杯中，每一杯种植一株苗，移植覆土深度刚好盖住根系，一般不超过1厘米，压紧基质，使苗根和基质紧密接触，移植完成后淋透定苗水。

(7)幼苗培育：移植后，对幼苗进行水分、肥及防病菌的管理：

A、水分管理：瓶苗在移植后基质保持湿润，空气相对湿度在80％～90％为宜，前5d可通过盖膜保湿，之后通过喷雾补水，控制培养温度25±1℃，荫棚用70％的遮阳网遮光；

B、肥及防病菌的管理：在移植后第三天用质量分数0.1％百菌清或多菌灵溶液喷雾消毒灭菌，之后每隔10d喷雾一次，百菌清和多菌灵交替使用；当有新芽萌发、新根长出时，喷施1500倍营养液，根据幼苗生长状况，每隔15d喷施一次；

C、待生长稳定，长出新芽和新根后，逐步增加光照强度，直到进行全光照常规管理，移栽后一个月成活率高于90％(图7)，待幼苗长至15cm高时(‘广州’樱种苗)，可移至大田培育大苗。

实施例2：

(2)外植体表面消毒：将枝条(外植体)剪成4cm左右长的带叶腋茎段，在超净工作台上先用无菌水摖洗干净，再用质量分数1％新吉尔灭溶液，浸泡时间为5min，倒掉新吉尔灭溶液后，用无菌水冲洗4次，然后加入质量分数0.05％升汞溶液，根据外植体幼嫩程度浸泡1～6min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液后，再用无菌水冲洗5次。无菌滤纸吸干无菌材料表面水珠，用无菌刀片切除叶柄、茎段两端受伤部位后，再将茎段切成2cm带叶腋切断备用，得到消毒好的带叶腋切断。

(3)腋芽诱导：将消毒好的带叶腋切断(外植体)接种到诱导培养基上培养，培养条件为：23±2℃，光照强度60μmol.m^-2.s^-1，光照时间12h/d，每瓶接种一个外植体，3～5d之后，叶柄开始松动脱落，腋芽萌动，15～20d后一个叶腋能萌出多个腋芽，诱导率为87％，所述的诱导培养基为，每升含有6-BA 2.0mg、NAA 0.5mg、蔗糖20g、琼脂6g(激素购自Sigma-Aldrich公司)，余量为YH培养基，pH为6.0(其配制方法为：将上述成分混合均匀后，调pH值，灭菌备用)，由此得到腋芽。

(4)增殖培养：将诱导出的腋芽截成1.0～1.5cm的茎段转接入增殖培养基上培养，培养条件为：23±2℃，光照强度60μmol.m^-2.s^-1，光照时间12h/d，所述的增殖培养基，每升含有 6-BA 0.3mg、NAA 0.2mg、IBA 0.05mg、蔗糖20g、琼脂6g，余量为YH培养基，pH为6.0(其配制方法为：将上述成分混合均匀后，调pH值，灭菌备用)，15d后，单芽形成芽丛，芽伸长生长较快，增殖系数(芽高≧2cm)达2.83，有效芽率达85％，由此得到增殖苗。

(5)生根培养：从增殖苗选取健壮的有效芽(芽高超过2cm)切取转接到生根培养基中培养，培养条件为：25±2℃，光照强度80μmol.m^-2.s^-1，光照时间12h/d，所述的生根培养基为，每升含有NAA 0.1mg、IBA 0.1mg、蔗糖20g、琼脂6g，余量为1/2YH培养基，pH为6.0(其配制方法为：将上述成分混合均匀后，调pH值，灭菌备用)，15d后，不定根的诱导率为80％，每株平均生根数达3条以上。

C、待生长稳定，长出新芽和新根后，逐步增加光照强度，直到进行全光照常规管理，移栽后一个月成活率高于90％，待幼苗长至15cm高时(‘广州’樱种苗)，可移至大田培育大苗。

实施例3：

(3)腋芽诱导：将消毒好的带叶腋(外植体)切断接种到诱导培养基上培养，培养条件为：23±2℃，光照强度60μmol.m^-2.s^-1，光照时间12h/d，每瓶接种一个外植体，3～5d之后，叶柄开始松动脱落，腋芽萌动，15～20d后一个叶腋能萌出多个腋芽，诱导率为90％，所述的诱导培养基为，每升含有6-BA 1.0mg、NAA 0.1mg、蔗糖40g、琼脂6g(激素购自Sigma-Aldrich公司)，余量为YH培养基，pH为6.0(其配制方法为：将上述成分混合均匀后，调pH值，灭菌备用)，由此得到腋芽。

(4)增殖培养：将诱导出的腋芽截成1.0～1.5cm的茎段转接入增殖培养基上培养，培养条件为：23±2℃，光照强度60μmol.m^-2.s^-1，光照时间12h/d，所述的增殖培养基，每升含有6-BA 1.5mg、NAA 0.05mg、IBA 0.2mg、蔗糖40g、琼脂6g，余量为YH培养基，pH为6.0(其配制方法为：将上述成分混合均匀后，调pH值，灭菌备用)，15d后，单芽形成芽丛，芽较细，增殖系数(芽高≧2cm)达2.68以上，有效芽率达49％以上，由此得到增殖苗。

(5)生根培养：从增殖苗选取健壮的有效芽(芽高超过2cm)切取转接到生根培养基中培养，培养条件为：25±2℃，光照强度80μmol.m^-2.s^-1，光照时间12h/d，所述的生根培养基为，每升含有NAA 0.5mg、IBA 0.5mg、蔗糖15g、琼脂6g，余量为1/2YH培养基，pH为6.0(其配制方法为：将上述成分混合均匀后，调pH值，灭菌备用)，15d后，不定根的诱导率为100％，每株平均生根数达5条以上。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，本发明的保护范围由随附的权利要求书限定，任何在本发明权利要求基础上的改动都是本发明的保护范围。

Claims

1.一种云南樱桃成年优良单株‘广州’樱的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、腋芽诱导：剪取‘广州’樱母株上半木质化枝条作为外植体，经消毒后接种到诱导培养基上培养得到腋芽，所述的诱导培养基为，每升含有6-BA 1.0～2.0mg、NAA 0.1～0.5mg、蔗糖20～40g、常量的琼脂，余量为YH培养基，pH为5.8～6.0；

b、增殖培养：将腋芽切下接种到增殖培养基上培养得到增殖苗，所述的增殖培养基为，每升含有6-BA 0.3～1.5mg、NAA 0.05～0.2mg、IBA 0.05～0.2mg、蔗糖20～40g、常量的琼脂，余量为YH培养基，pH为5.8～6.0；

c、生根培养：从增殖苗中切取嫩茎接种到生根培养基中培养得到生根苗，所述的生根培养基为，每升含有NAA 0.1～0.5mg、IBA 0.1～0.5mg、蔗糖15～20g、常量的琼脂，余量为1/2YH培养基，pH为5.8～6.0；

所述的YH培养基，其含有以下成份：1200mg/L NH₄NO₃、600mg/L KNO₃、440mg/L Ca(NO₃)₂·2H₂O、120mg/L CaCl₂·4H₂O、370mg/L MgSO₄·7H₂O、170mg/L KH₂PO₄、22.3mg/LMnSO₄·4H₂O、8.6mg/L ZnSO₄·7H₂O、6.2mg/L H₃BO₃、0.83mg/L KI、0.25mg/L Na₂MoO₄·2H₂O、0.25mg/L CuSO₄·5H₂O、0.05mg/L NiSO₄.6H₂O、0.025mg/L CoCl₂、27.8mg/L FeSO₄·7H₂O、37.3mg/L Na₂·EDTA·H₂O、100mg/L肌醇、2.0mg/L甘氨酸、0.5mg/L盐酸硫胺素、0.2mg/L烟酸、0.2mg/L盐酸吡哆醇，pH 5.8，所述的1/2YH培养基为将YH培养基中所含大量元素的用量减半，其余成分不变。

2.根据权利要求1所述的云南樱桃成年优良单株‘广州’樱的组培快繁方法，其特征在于，所述的剪取‘广州’樱母株上半木质化枝条作为外植体是在剪取外植体前，每隔7d用多菌灵、百菌清交替喷洒所选‘广州’樱母株树体4～5次，然后剪取‘广州’樱母株上半木质化枝条，除叶，用纯净水清洗干净作为外植体，低温保湿备用。

3.根据权利要求1所述的云南樱桃成年优良单株‘广州’樱的组培快繁方法，其特征在于，所述的消毒为：将外植体用质量分数0.5％～1％新洁尔灭溶液，浸泡时间为5～6min，倒掉新洁尔灭溶液后，用无菌水冲洗3～4次，然后加入质量分数0.05％～0.1％升汞溶液中，依据外植体幼嫩程度浸泡1～6min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液，再用无菌水冲洗5～6次，得到消毒后的外植体。

4.根据权利要求1所述的云南樱桃成年优良单株‘广州’樱的组培快繁方法，其特征在于，所述的消毒后接种到诱导培养基上是将消毒后的外植体用无菌刀片切除叶柄、茎段两端受伤部位后，再接种到诱导培养基上。

5.根据权利要求1所述的云南樱桃成年优良单株‘广州’樱的组培快繁方法，其特征在于，所述的步骤b的增殖培养是将腋芽切下，接种到增殖培养基上培养，腋芽分化形成新芽丛，将新芽丛中的芽高≥3cm的幼嫩枝条切割成1.0～1.5cm的茎段转再接入到新的增殖培养基中培养得到增殖苗，所述的增殖培养基为，每升含有6-BA 0.3～1.5mg、NAA 0.05～0.2mg、IBA 0.05～0.2mg、蔗糖20～40g、常量琼脂，余量为YH培养基，pH为5.8～6.0。