CN114391475A - 铁线莲克里斯帕天使的组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种铁线莲克里斯帕天使的组织培养方法，包括(1)获取外植体材料；(2)铁线莲的初代培养；(3)铁线莲的增殖培养；(4)生根壮苗培养；(5)移栽与驯化等步骤，获得驯化后铁线莲克里斯帕天使植株，完成组织培养操作。本发明移栽驯化成活率为95％以上，且植株品质良好；筛选出培养基最佳配方，获得最佳组织培养方法。
Description
技术领域
本发明涉及组织快速繁殖技术领域，尤其涉及一种铁线莲克里斯帕天使的组织培养方法。
背景技术
铁线莲隶属毛莨科铁线莲属(Clematis L.)，是一种直立、攀援草本或藤本，为世界著名的观赏植物，共约300余种，广布全球，我国种质资源丰富，约有110种，全国各地均有分布，尤以华中和西南地区分布居多。
铁线莲属植物叶对生，有柄。单叶、三出复叶或羽状复叶，全缘、有锯齿或分裂。聚伞花序、圆锥花序或单生。铁线莲属植物花色丰富；有单瓣、重瓣或半重瓣的，花型新颖别致，花朵色泽调和，优良品种花径可达20cm。花期一般是5～8月，独具风采；适应性强，并具有较强的耐寒性。在追求花卉品种划时代的今天，铁线莲属植物的观赏价值越来越受到国内喜欢爱好者的重视。
由于铁线莲种子繁殖时间长效率低，扦插繁殖受母体自身限制，利用组织培养极具应用市场前景，很多植物(如石斛，草莓，长寿花等)利用组织培养得到大规模的生产，而对铁线莲的组织培养研究较少，发展速度相对滞后，严重影响了优良铁线莲品种的产业化发展。因此，通过加快铁线莲属优良品种的繁育、栽培管理技术成果转化，不仅可以弥补国内市场不足，也可以促进生态环境建设具有重要意义。
发明内容
发明目的：针对现有技术的不足与缺陷，本发明提供一种铁线莲克里斯帕天使的组织培养方法，移栽驯化成活率为95％以上，且植株品质良好；筛选出培养基最佳配方，获得最佳组织培养方法。
技术方案：本发明的铁线莲克里斯帕天使的组织培养方法，包括下述步骤：
(1)获取外植体材料：采取时间为春季或秋季铁线莲克里斯帕天使萌发阶段剪取的外植体，清洗后称取若干剂量百菌清与多菌灵溶解至水中，置于超净工作台上，采用乙醇、0.1％HgCl2溶液依次浸泡后，用无菌水冲洗，获得外植体材料；
(2)铁线莲的初代培养：选取外植体材料带芽茎段剪成小段，接种于pH值5.6-6.0的初代培养基上，初代培养基成分为1/2MS+0.2mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.05mg/L NAA+20g/L蔗糖+6g-7g/L琼脂，初代培养时间为7d以上；
(3)铁线莲的增殖培养：选取初代培养后带有丛生芽的铁线莲，接种于pH值5.4-6.0的不定芽增殖培养基上，增殖培养基成分为1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+20g/L蔗糖+20g/L香蕉+0.1mg/Vc+6g-7g/L琼脂，增值培养光照时间为15h-17h/d，增值培养光照强度为2900lx-3100lx，增殖培养温度为23℃-26℃；
(4)生根壮苗培养：在不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后，将丛生芽剪分成单株茎段带新叶，接种于pH值5.6-6.0的生根培养基上，生根培养基成分为1/2MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+15g/L蔗糖+0.1g/L活性炭，培养时间为8d-14d；
(5)移栽与驯化：待根长为1cm-3cm时，将培养室生根苗取出，在室内炼苗4d-7d；对苗体根部琼脂进行清洗后移栽至珍珠岩-蛭石-火山岩-泥炭的混合基质中，放入温室大棚进行驯化；驯化时采用三层遮阴网，6d-8d后去除一层遮阳网，驯化空气湿度为80％以上；混合基质定期浇水，每隔6d-8d以百菌清与多菌灵混合溶液进行基质消毒，栽培14d以上喷洒磷酸二氢钾5000倍液提供营养，获得驯化后铁线莲克里斯帕天使植株。
其中，步骤(1)中清洗时采用自来水冲洗30min-60min；百菌清、多菌灵与水的使用量为百菌清与多菌灵各1g溶解至900mL-1100mL水中。优选，百菌清与多菌灵各1g溶解至1000mL水中。
其中，步骤(1)中乙醇的浸泡时间为14s-16s，0.1％HgCl2的浸泡时间为88s-92s，无菌水的冲洗次数为3次-5次。优选，乙醇的浸泡时间为15s，0.1％HgCl2的浸泡时间为90s。
其中，步骤(2)中外植体材料带芽茎段剪成0.5cm-1cm的小段。
其中，步骤(3)中增值培养光照时间为16h/d，增值培养光照强度为3000lx。
其中，步骤(5)中混合基质中珍珠岩，蛭石，火山岩，泥炭土的重量比为1:1:1:8；百菌清与多菌灵混合溶液中百菌清、多菌灵与水的使用量为百菌清与多菌灵各1g溶解至900mL-1100mL水中。优选，7d后去除一层遮阳网，每隔7d以百菌清与多菌灵混合溶液进行基质消毒，百菌清与多菌灵各1g溶解至1000mL水中。
其中，优选的：
初代培养基成分为1/2MS+0.2mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.05mg/L NAA+20g/L蔗糖+6g-7g/L琼脂，pH值为5.6。
增殖培养基成分为1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+20g/L蔗糖+20g/L香蕉+0.1mg/Vc+6g-7g/L琼脂，pH值为5.8。
生根培养基成分为1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+15g/L蔗糖+0.1g/L活性炭，pH值5.8。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有以下显著优点：本发明在对外植体消毒处理获得外植体材料，初代培养，增殖培养，生根壮苗培养后移栽与驯化，获得驯化后铁线莲克里斯帕天使植株，完成组织培养操作。获得了两个创造性效果，第一是移栽驯化成活率为95％以上，且植株品质良好；第二是筛选出培养基最佳配方，获得最佳组织培养方法。
附图说明
图1为本发明的铁线莲的增殖培养图；
图2为本发明的铁线莲的生根壮苗培养图；
图3为本发明的铁线莲的增值培养基培养图；
图4为本发明的铁线莲的生根培养基培养图；
图5为本发明的铁线莲的驯化图。
具体实施方式
下面结合附图及具体实施方式对本发明的技术方案做进一步的描述。
实施例：
本实施例的组织培养方法，包括下述步骤：
(1)获取外植体材料：采取时间为春季或秋季铁线莲克里斯帕天使萌发阶段剪取的外植体，采用自来水冲洗30min-60min后称取百菌清与多菌灵各1g溶解至1000mL水中，置于超净工作台上，采用乙醇浸泡15s，0.1％HgCl2浸泡90s后，用无菌水冲洗3次-5次，获得外植体材料；
(2)铁线莲的初代培养：选取外植体材料带芽茎段剪成0.5cm-1cm的小段，接种于pH值5.6的初代培养基上，初代培养基成分为1/2MS+0.2mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.05mg/LNAA+20g/L蔗糖+6g-7g/L琼脂，初代培养时间为7d以上；
(3)铁线莲的增殖培养：选取初代培养后带有丛生芽的铁线莲，接种于pH值5.8的不定芽增殖培养基上，增殖培养基成分为1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+20g/L蔗糖+20g/L香蕉+0.1mg/Vc+6g-7g/L琼脂，增值培养光照时间为16h/d，增值培养光照强度为3000lx，增殖培养温度为23℃-26℃；
(4)生根壮苗培养：在不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后，将丛生芽剪分成单株茎段带新叶，接种于pH值5.8的生根培养基上，生根培养基成分为1/2MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+15g/L蔗糖+0.1g/L活性炭，培养时间为8d-14d；
(5)移栽与驯化：待根长为1cm-3cm时，将培养室生根苗取出，在室内炼苗4d-7d；对苗体根部琼脂进行清洗后移栽至重量比为1:1:1:8的珍珠岩-蛭石-火山岩-泥炭的混合基质中，放入温室大棚进行驯化；驯化时采用三层遮阴网，7d后去除一层遮阳网，驯化空气湿度为80％以上；混合基质定期浇水，每隔7d以百菌清与多菌灵混合溶液(百菌清与多菌灵各1g溶解至1000mL水中)进行基质消毒，栽培14d以上喷洒磷酸二氢钾5000倍液提供营养，获得驯化后铁线莲克里斯帕天使植株。
实施例效果：
如图所示，本实施例在对外植体消毒处理获得外植体材料，初代培养，增殖培养，生根壮苗培养后移栽与驯化，获得驯化后铁线莲克里斯帕天使植株，完成组织培养操作。获得了两个创造性效果，第一是移栽驯化成活率为95％以上，且植株品质良好；第二是筛选出培养基最佳配方，获得最佳组织培养方法。
如图所示，本实施例的铁线莲组织快繁方法，繁殖周期短，繁殖系数和效率高易生根，植物的根系粗壮(图3)，瓶苗长势好(图2、图4)，茎秆粗壮，驯化易成活(图5)。得到了铁线莲繁殖效率高，组培苗质量高的有益效果，适用于大规模繁殖，解决铁线莲扦插繁殖受季节、插穗限制的缺陷，并将生根培养同时进行，驯化移栽成活率为95％以上，对铁线莲优良品种的快速繁殖和大面积推广应用提供重要保障，对促进产业化的发展具有重要意义。
Claims (5)
1.铁线莲克里斯帕天使的组织培养方法，其特征在于：包括下述步骤：
(1)获取外植体材料：采取时间为春季或秋季铁线莲克里斯帕天使萌发阶段剪取的外植体，清洗后称取若干剂量百菌清与多菌灵溶解至水中，置于超净工作台上，采用乙醇、0.1％HgCl2溶液依次浸泡后，用无菌水冲洗，获得外植体材料；
(2)铁线莲的初代培养：选取外植体材料带芽茎段剪成小段，接种于pH值5.6-6.0的初代培养基上，初代培养基成分为1/2MS+0.2mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.05mg/LNAA+20g/L蔗糖+6g-7g/L琼脂，初代培养时间为7d以上；
(3)铁线莲的增殖培养：选取初代培养后带有丛生芽的铁线莲，接种于pH值5.4-6.0的不定芽增殖培养基上，增殖培养基成分为1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+20g/L蔗糖+20g/L香蕉+0.1mg/Vc+6g-7g/L琼脂，增值培养光照时间为15h-17h/d，增值培养光照强度为2900lx-3100lx，增殖培养温度为23℃-26℃；
(4)生根壮苗培养：在不定芽增殖培养基中诱导出丛生芽后，将丛生芽剪分成单株茎段带新叶，接种于pH值5.6-6.0的生根培养基上，生根培养基成分为1/2MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+15g/L蔗糖+0.1g/L活性炭，培养时间为8d-14d；
(5)移栽与驯化：待根长为1cm-3cm时，将培养室生根苗取出，在室内炼苗4d-7d；对苗体根部琼脂进行清洗后移栽至珍珠岩-蛭石-火山岩-泥炭的混合基质中，放入温室大棚进行驯化；驯化时采用三层遮阴网，6d-8d后去除一层遮阳网，驯化空气湿度为80％以上；混合基质定期浇水，每隔6d-8d以百菌清与多菌灵混合溶液进行基质消毒，栽培14d以上喷洒磷酸二氢钾5000倍液提供营养，获得驯化后铁线莲克里斯帕天使植株。
2.根据权利要求1所述的铁线莲克里斯帕天使的组织培养方法，其特征在于：所述的步骤(1)中清洗时采用自来水冲洗30min-60min；百菌清、多菌灵与水的使用量为百菌清与多菌灵各1g溶解至900mL-1100mL水中。
3.根据权利要求1所述的铁线莲克里斯帕天使的组织培养方法，其特征在于：所述的步骤(1)中乙醇的浸泡时间为14s-16s，0.1％HgCl2的浸泡时间为88s-92s，无菌水的冲洗次数为3次-5次。
4.根据权利要求1所述的铁线莲克里斯帕天使的组织培养方法，其特征在于：所述的步骤(2)中外植体材料带芽茎段剪成0.5cm-1cm的小段。
5.根据权利要求1所述的铁线莲克里斯帕天使的组织培养方法，其特征在于：所述的步骤(5)中混合基质中珍珠岩，蛭石，火山岩，泥炭土的重量比为1:1:1:8；百菌清与多菌灵混合溶液中百菌清、多菌灵与水的使用量为百菌清与多菌灵各1g溶解至900mL-1100mL水中。
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