CN116369203B - 一种石蒜属植物小花再生培养基及小花再生方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于植物繁殖栽培技术领域，具体涉及一种石蒜属植物小花再生培养基及小花再生方法。本发明的石蒜属植物的再生培养基包括诱导培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基；或包括诱导培养基、分化培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基。再生培养基在KT、2,4‑D、6‑BA、IBA和NAA共同作用下利于诱导石蒜属植物愈伤组织形成、增殖和分化和生根，再结合蔗糖这种能源物质，共同提高石蒜属植物的繁殖系数和繁殖效率，获得大量的石蒜属植物组培苗。

Description

一种石蒜属植物小花再生培养基及小花再生方法
技术领域
本发明属于植物繁殖栽培技术领域，具体涉及一种石蒜属植物小花再生培养基及小花再生方法。
背景技术
石蒜属（Lycoris Herb.）隶属石蒜科（Amaryllidaceae），是多年生草本植物。石蒜属为东亚植物的特有属。石蒜属全世界约有20种，在我国的石蒜属植物种类最多有16种。我国华东地区是石蒜属植物分布多样性中心。石蒜属植物地下具有卵球形鳞茎，叶带状基生，春季或秋冬季出叶；伞形花序有小花5~6朵；其花被裂片呈中度至强度反卷和皱缩；花期为7~9月。石蒜属植物所有种类均花茎挺拔，花形优美，花色艳丽，具有很高的观赏价值，本属植物具有独特的“花叶不相见”的特性，现已逐渐成为新型的鲜切花、园林地被和盆栽的球根花卉。
自然状态下，石蒜属植物一般以自然分球繁殖为主，但其繁殖系数相当低，一个开花球平均每年分生1~2个球，子球开花需3~4年时间；但是，由于部分石蒜属植物起源于天然杂交而无法正常结实，即使正常结实的石蒜属植物，采用种子繁殖的方式进行繁殖，从种子萌发到开花一般需要5~6年的时间。因此，繁殖速度慢，繁殖周期长，是整个石蒜属植物的推广应用中面临的最大难题。
近年来，陆续建立了以鳞茎盘为外植体，诱导丛生芽，实现石蒜属植物的组培快繁技术体系，但普遍存在诱导率不高导致的繁殖效率不高的问题。因此，急需对石蒜属植物的再生培养基进行改进。
发明内容
本发明的目的是提供一种石蒜属植物花序再生培养基，应用本发明提供的再生培养基以石蒜属植物的花序为外植体进行石蒜属植物组培快繁提高石蒜属植物的繁殖系数和繁殖效率。
为了解决上述问题，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种石蒜属植物花序再生培养基，所述再生培养基包括丛生芽诱导培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基；或者，
所述再生培养基包括愈伤组织诱导培养基、分化培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基；
所述丛生芽诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：5.0~15.0mg/L6-BA、1.0~3.0mg/L2,4-D、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；
或所述丛生芽诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：5.0~15.0mg/L6-BA、5.0~15.0mg/LNAA、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；
所述愈伤组织诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：4.0~8.0mg/LKT、1.0~3.0mg/L2,4-D、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；
所述分化培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：2.0~3.0mg/L6-BA、0.5~1.5mg/LNAA、30g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂；
所述不定芽壮芽培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：0.2~1.0mg/LNAA、2.0~3.0mg/L6-BA、60~90g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂；
所述壮芽生根培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：2.0~3.0mg/L 6-BA、0.2~0.5mg/LNAA、1.0~3.0mg/L IBA、60~90g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂。
优选的，所述石蒜属植物为石蒜、长筒石蒜或忽地笑时，所述再生培养基包括丛生芽诱导培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基；
所述石蒜属植物为换锦花时所述再生培养基包括愈伤组织诱导培养基、分化培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基。
本发明提供了一种石蒜属植物花序再生方法，以石蒜属植物花序作为外植体采用上述技术方案所述的再生培养基进行。
优选的，当所述再生培养基包括丛生芽诱导培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基时，所述花序再生方法包括以下步骤：
将石蒜属植物的花序接种在丛生芽诱导培养基上进行丛生芽诱导培养，得到花序不定芽；
将所述花序不定芽接种于不定芽壮芽培养基中进行壮芽培养，得到仔球；
将所述仔球转接到壮芽生根培养基上进行壮芽生根培养，得到试管苗；
当所述再生培养基包括愈伤组织诱导培养基、分化培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基，所述花序再生方法包括以下步骤：
将石蒜属植物的花序接种在愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导培养，得到花序愈伤组织；
将所述花序愈伤组织接种于分化培养基进行分化培养，得到愈伤组织不定芽；
将所述愈伤组织不定芽接种于不定芽壮芽培养基中进行壮芽培养，得到仔球；
将所述仔球转接到壮芽生根培养基上进行壮芽生根培养，得到试管苗。
优选的，在愈伤组织诱导培养或丛生芽诱导培养前，还包括：将花序中的小花分成单朵后消毒；所述消毒包括：用75%的酒精漂洗30~45s，无菌水冲洗2~3次，然后采用有效氯含量2%~3%的含氯消毒剂灭菌10~15 min，无菌水冲洗4~5次。
优选的，所述花序在石蒜属植物的花苔高度为花序开放后花苔高度40%~60%的期间采集；
所述花序的采集通过如下方式获得：在石蒜属植物花序轴1.0~1.5cm处，剪下整个花序，将花序中的小花分成单朵接种在再生培养基上。
优选的，所述愈伤组织诱导培养为暗培养；所述分化培养、壮芽培养和壮芽生根培养均为光培养，所述光照的时间独立为12~16h/d，所述光照的强度100~300 µmol•m-2•s-1。
优选的，所述愈伤组织诱导培养的时间为70~80d；所述分化培养的时间为30~35d；所述壮芽培养的时间为30~60d；所述壮芽生根培养的时间为25~35d。
优选的，在所述丛生芽诱导培养过程中，还包括将诱导培养40~50d的培养产物转接至新的诱导培养基进行继代培养，得到花序不定芽。
优选的，所述花序不定芽和愈伤组织不定芽的长度分别大于0.3cm。
本发明的有益效果：本发明提供了一种石蒜属植物花序再生培养基，所述再生培养基包括丛生芽诱导培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基；或者，
所述再生培养基包括愈伤组织诱导培养基、分化培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基；
所述丛生芽诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：5.0~15.0mg/L6-BA、1.0~3.0mg/L2,4-D、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；
或所述丛生芽诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：5.0~15.0mg/L6-BA、5.0~15.0mg/LNAA、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；
所述愈伤组织诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：4.0~8.0mg/LKT、1.0~3.0mg/L2,4-D、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；
所述分化培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：2.0~3.0mg/L6-BA、0.5~1.5mg/LNAA、30g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂；
所述不定芽壮芽培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：0.2~1.0mg/LNAA、2.0~3.0mg/L6-BA、60~90g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂；
所述壮芽生根培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：2.0~3.0mg/L 6-BA、0.2~0.5mg/LNAA、1.0~3.0mg/L IBA、60~90g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂。
在本发明提供的再生培养基中，KT（激动素）和2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）促进石蒜属植物愈伤组织的形成；6-BA（6-苄氨基嘌呤）刺激细胞分裂促进石蒜属植物生长和发育，促进愈伤组织的形成；NAA（阿尔法-萘乙酸）促进石蒜属植物发芽和生长；IBA的作用为生根，
在KT、2,4-D、6-BA、IBA和NAA共同作用下利于诱导石蒜属植物愈伤组织形成、增殖、分化和生根，再结合蔗糖这种能源物质，共同提高石蒜属植物的繁殖系数和繁殖效率，获得大量的石蒜属植物组培苗。实施例结果表明：利用本发明的再生培养基可以获得大量的石蒜属植物组培苗，提高石蒜属植物的繁殖系数和繁殖效率。可见本发明通过所述诱导培养基、分化培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基的各个组分之间相互协同作用，在适宜的组分浓度控制下提高石蒜属植物的繁殖系数和繁殖效率。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为实施例1石蒜花序不定芽的诱导第45d的情况；丛生芽发生的位置为花瓣基部；
图2为实施例2换锦花花序愈伤组织的诱导第41d情况；愈伤组织发生的位置为花瓣基部；
图3为实施例2换锦花花序不定芽诱导（花瓣）第43d情况；丛生芽发生的位置为花瓣；
图4为实施例2换锦花花序不定芽的诱导（花瓣基部）第42d情况；丛生芽发生的位置为花瓣基部；
图5为实施例3长筒石蒜花序基部不定芽的诱导第48d情况；丛生芽发生的位置为花瓣基部和子房；
图6为实施例4忽地笑花序不定芽的诱导第44d情况；丛生芽发生的位置为花瓣基部。
具体实施方式
本发明提供了一种石蒜属植物花序再生培养基，所述再生培养基包括丛生芽诱导培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基；或者，
所述再生培养基包括愈伤组织诱导培养基、分化培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基；
所述丛生芽诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：5.0~15.0mg/L6-BA、1.0~3.0mg/L2,4-D、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；
或所述丛生芽诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：5.0~15.0mg/L6-BA、5.0~15.0mg/LNAA、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；
所述愈伤组织诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：4.0~8.0mg/LKT、1.0~3.0mg/L2,4-D、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；
所述分化培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：2.0~3.0mg/L6-BA、0.5~1.5mg/LNAA、30g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂；
所述不定芽壮芽培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：0.2~1.0mg/LNAA、2.0~3.0mg/L6-BA、60~90g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂；
所述壮芽生根培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：2.0~3.0mg/L6-BA、0.2~0.5mg/LNAA、1.0~3.0mg/L IBA、60~90g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂。
本发明提供的丛生芽诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：5.0~15.0mg/L6-BA、1.0~3.0mg/L2,4-D、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；更优选为以B5培养基为基本培养基，还仅含有：5.0~15.0mg/L6-BA、1.0~3.0mg/L2,4-D、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L。在本发明中，所述丛生芽诱导培养基中6-BA的浓度为5.0~15.0mg/L，优选为5.5~10.0mg/L，更优选为6.0 mg/L。所述丛生芽诱导培养基中2,4-D的浓度为1.0~3.0mg/L，优选为1.5~2.5mg/L，更优选为2mg/L。所述诱导培养基中琼脂的浓度为6.5~8.0g/L，更优选7.5g/L。
或者，本发明提供的丛生芽诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：5.0~15.0mg/L6-BA、5.0~15.0mg/LNAA、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；更优选为以B5培养基为基本培养基，还仅含有：5.0~15.0mg/L6-BA、5.0~15.0mg/LNAA、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L。在本发明中，所述诱导培养基中6-BA的浓度为5.0~15.0mg/L，优选为6.0~12.0mg/L，更优选为10.0mg/L。所述诱导培养基中NAA的浓度为5.0~15.0mg/L，优选为7.0~12.0mg/L，更优选为10.0mg/L。所述诱导培养基中琼脂的浓度为6.5~8.0g/L，更优选7.5g/L。
本发明提供的愈伤组织诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：4.0~8.0mg/L KT、1.0~3.0 mg/L2,4-D、蔗糖30 g/L和琼脂6.5~8.0g/L；更优选为以B5培养基为基本培养基，还仅含有：4.0~8.0 mg/LKT、1.0~3.0 mg/L2,4-D、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L。在本发明中，所述诱导培养基中KT的浓度为4.0~8.0 mg/L，优选为4.5~7.5mg/L，更优选为5.0mg/L。所述诱导培养基中2,4-D的浓度为1.0~3.0 mg/L，优选为1.5~2.5mg/L，更优选为2.0mg/L。所述诱导培养基中琼脂的浓度为6.5~8.0g/L，更优选7.5 g/L。
本发明中6-BA、KT和2,4-D、NAA在适当浓度配比下能够共同促进石蒜属植物的不定芽萌发和愈伤组织的形成。
在本发明中，所述愈伤组织诱导培养基或丛生芽诱导培养基的pH值优选为5.75~5.85，更优优选为5.80。
在本发明中，所述分化培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：2.0~3.0mg/L6-BA、0.5~1.5mg/LNAA、30g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂；优选为以MS培养基为基本培养基，还仅含有：2.0~3.0mg/L6-BA、0.5~1.5mg/LNAA、30g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂。在本发明中，所述分化培养基中的6-BA浓度为2.0~3.0 mg/L，优选为2.2~2.8mg/L6-BA，更优选为2.5mg/L6-BA。所述分化培养基中NAA浓度为0.5~1.5mg/L，优选为0.7~1.2mg/LNAA，更优选0.8 mg/LNAA。所述分化培养基中琼脂浓度为6.5~8.0 g/L琼脂，更优选为7.5 g/L琼脂。
在本发明中，所述分化培养基的pH值优选为5.75~5.85，更优优选为5.80。
在本发明中，所述不定芽壮芽培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：0.2~1.0mg/LNAA、2.0~3.0 mg/L6-BA、60~90 g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂；更优选为以MS培养基为基本培养基，还仅含有：0.2~1.0 mg/LNAA、2.0~3.0 mg/L 6-BA、60~90 g/L蔗糖和6.5~8.0 g/L琼脂。在本发明中，所述不定芽壮芽培养基中6-BA浓度为2.0~3.0mg/L ，优选为2.0~2.8mg/L 6-BA，更优选为2.5mg/L 6-BA。所述不定芽壮芽培养基中NAA浓度为0.2~1.0mg/L，优选为0.3~0.9mg/LNAA，更优选为0.5mg/L或0.8mg/L。所述不定芽壮芽培养基中蔗糖为60~90g/L，优选为68~80 g/L，更优选为70g/L或75g/L。所述壮芽生根培养基中琼脂浓度为6.5~8.0g/L，更优选为7.5g/L。本发明中，6-BA能够刺激细胞分裂促进石蒜属植物的生长和发育，促进愈伤组织的形成；NAA能够促进石蒜属植物的发芽和生长，不定芽膨大获得仔球。
在本发明中，所述不定芽壮芽培养基的pH值优选为5.75~5.85，更优选为5.80。
在本发明中，所述壮芽生根培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：2.0~3.0mg/L 6-BA、0.2~0.5mg/LNAA、1.0~3.0mg/L IBA、60~90g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂；更优选为以MS培养基为基本培养基，还仅含有：2.0~3.0mg/L 6-BA、0.2~0.5mg/LNAA、1.0~3.0mg/LIBA、60~90g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂。在本发明中，所述壮芽生根培养基中6-BA浓度为2.0~3.0mg/L，优选为2.2~2.8mg/L 6-BA，更优选为2.5mg/L 6-BA。在本发明实施例中，所述壮芽生根培养基中6-BA浓度优选为2.0mg/L或3.0mg/L。
所述壮芽生根培养基中NAA浓度为0.2~0.5mg/L，优选为0.3~0.45mg/LNAA，更优选为0.4mg/L。所述壮芽生根培养基中蔗糖为60~90g/L，优选为70~85g/L，更优选为75g/L。所述壮芽生根培养基中琼脂浓度为6.5~8.0g/L，更优选为7.5g/L。本发明中，6-BA能够刺激细胞分裂促进石蒜属植物的生长和发育，促进愈伤组织的形成；NAA能够促进石蒜属植物的发芽和生长，不定芽膨大获得仔球；吲哚丁酸IBA能够促进石蒜属植物生根。
本发明提供的丛生芽诱导培养基或愈伤组织诱导培养基、分化培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基中均含有蔗糖，蔗糖可以植物生长所需的碳源，促进愈伤组织的发生和不定芽的萌发、生长；本发明在植物生长调节剂KT、2,4-D、6-BA、NAA、IBA和蔗糖的共同作用下促进石蒜属植物的芽的生长和分化、试管苗的生根。本发明提供的再生培养基应用效果好，可以同时获得大量的试管苗，缩短了石蒜属植物育苗的时间和降低了育苗的成本。本发明所述丛生芽为一丛不定芽。
本发明对所述B5培养基、MS培养基、KT、2,4-D、6-BA、NAA、IBA、蔗糖和琼脂的来源没有特殊的限定，采用常规的市售产品即可。
在本发明中，所述石蒜属植物优选的包括石蒜、长筒石蒜、忽地笑或换锦花；所述石蒜属植物为石蒜、长筒石蒜或忽地笑时，所述组培快繁培养基优选包括丛生芽诱导培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基；所述石蒜属植物为换锦花时所述再生培养基优选包括愈伤组织诱导培养基、分化培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基。本发明根据石蒜属植物的不同生长特性选择不同的再生培养基。
本发明还提供了一种石蒜属植物花序再生方法，所述花序再生方法采用上述技术方案所述的组培快繁培养基，
所述组培快繁培养基包括丛生芽诱导培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基时，花序再生方法包括以下步骤：
将石蒜属植物花序接种在丛生芽诱导培养基上进行丛生芽诱导培养，得到花序不定芽；
将所述花序不定芽接种于不定芽壮芽培养基中进行壮芽培养，得到仔球；
将所述仔球转接到壮芽生根培养基上进行壮芽生根培养，得到试管苗。
所述再生培养基包括愈伤组织诱导培养基、分化培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基，花序再生方法包括以下步骤：将石蒜属植物花序接种在愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织的诱导培养，得到花序愈伤组织；
将所述花序愈伤组织接种于分化培养基进行分化培养，得到愈伤组织不定芽；
将所述愈伤组织不定芽接种于不定芽壮芽培养基中进行壮芽培养，得到仔球；
将所述仔球转接到壮芽生根培养基上进行壮芽生根培养，得到试管苗。
本发明所述再生培养基包括愈伤组织诱导培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基时，花序再生方法包括以下步骤：将石蒜属植物花序接种在愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导培养，得到花序不定芽；将所述花序不定芽接种于不定芽壮芽培养基中进行壮芽培养，得到仔球；将所述仔球转接到壮芽生根培养基上进行壮芽生根培养，所述壮芽生根培养后进行炼苗和移栽培养；
本发明石蒜属植物花序接种在丛生芽诱导培养基上进行诱导培养，得到花序不定芽。本发明优选以石蒜属植物花序作为外植体进行育苗。在本发明中，所述石蒜属植物花序优选为石蒜属植物的花苔高度为花序开放后花苔高度的40%~60%的期间内采集，更优选为石蒜属植物的花苔高度为花序开放后花苔高度的50%的期间内采集；本发明所述石蒜属植物花序优选石蒜属植物花葶露出地面20~45cm开始花序取样，一直到花序第一朵花盛开结束取样。本发明所述花序的采集优选通过如下方式获得：在石蒜属植物花序轴1.0~1.5cm处，剪下整个花序，将花序中的小花分成单朵接种在再生培养基上。本发明所述花序采集时间的选择是为了提高花序愈伤组织或不定芽的诱导率。
将花序中的小花分成单朵后，本发明优选花序中的小花接种在诱导培养基之前进行清洗和消毒。本发明所述清洗优选包括去离子水冲洗，本发明对所述清洗方式没有特殊限定，保证清洗干净即可。本发明对所述消毒的方式优选包括：体积百分含量为70~75%乙醇和有效氯质量含量2%~3%的含氯消毒剂，更优选为75%乙醇和有效氯含量为2.5%的次氯酸钠溶液。本发明所述消毒方式先用体积百分75%酒精优选浸泡30~45 s，进一步优选为38~42s，更优选为40s，再优选用无菌水冲洗2~3次；再优选用有效氯质量含量为2.5%次氯酸钠溶液浸泡10~15min，进一步优选为11~14min，更优选为12min；最后优选用无菌水冲洗4~5次，更优选为冲洗4次。
现有技术中石蒜属植物组培快繁的方式大多以鳞茎盘为外植体，诱导产生从生芽，进而壮芽、诱导生根，从而建立其快繁技术体系。此技术最大的缺点是污染率高。由于鳞茎盘是石蒜属植物高度缩短的茎，又多年生长于地下，携带大量的寄生和共生菌，常用消毒剂很难较彻底的无菌化。采用生长周期较短的花部器官为外植体进行组培快繁，普通含氯消毒剂即可进行彻底的无菌化处理，可以有效的解决污染率高的问题。除此之外，以花部器官为外植体，完整的保留鳞茎，不进行破坏性取样，对于采用优选株系方法培育石蒜属优良新品种的快繁和扩繁，具有重要的意义。本发明以花序作为外植体进行组织培养快繁育苗，解决了现有技术中利用鳞茎盘为外植体进行组培育苗时的污染率高的技术问题。
本发明所述花序中的小花清洗和消毒之后，优选将花序中的小花接种到诱导培养基进行诱导培养。本发明对每个诱导培养基中接种的小花数量无特殊限定。在本发明中，所述丛生芽诱导培养的温度优选为24~26℃，更优选为25℃。本发明所述诱导培养优选在无光照的条件下进行，所述诱导培养的时间优选为70~80 d，更优选为75d。本发明在所述诱导培养过程中，优选还包括将诱导培养40~50 d的培养产物转接至新的诱导培养基进行继代培养，得到不定芽；更优选为诱导培养45d后在花瓣基部、花瓣与子房相连的部位或者花瓣中下部出现白色的凸起，将所述所述白色的凸起按照诱导培养基进行继代培养1次，白色的凸起逐渐分化成不定芽。本发明所述继代培养优选为更换培养基，继代培养的培养基同诱导培养基。本发明所述诱导培养的时间从小花接种于诱导培养基开始计算至得到长度大于0.3cm的不定芽为止。
诱导培养得到长度大于0.3cm的花序不定芽后；本发明将所述花序不定芽接种于不定芽壮芽培养基中进行不定芽壮芽培养，得到仔球。
在本发明中，所述不定芽壮芽培养的温度优选为24~26℃，更优选为25℃。在本发明中，所述不定芽壮芽培养优选在光照条件下进行的，所述光照的时间分别优选为12~16h/d，进一步优选为14~16h/d，更优选为16h/d；所述光照的强度优选为100~300µmol•m-2•s-1，进一步优选为160~260µmol•m-2•s-1，更优选为250µmol•m-2•s-1。本发明所述不定芽壮芽培养的培养时间优选为30~60d，更优选为60d。
花序不定芽壮芽培养后得到仔球，本发明所述仔球的直径优选不小于0.2cm。得到石蒜属植物直径不小于0.2cm的仔球后，本发明将所述仔球转接到壮芽生根培养基上进行壮芽生根培养。在本发明中，所述壮芽生根培养的温度优选为24~26℃，更优选为25℃。在本发明中，所述壮芽生根培养优选在光照条件下进行的，所述光照的时间分别优选为12~16h/d，进一步优选为14~16h/d，更优选为16h/d；所述光照的强度优选为100~300 µmol•m-2•s-1，进一步优选为140~270 µmol•m-2•s-1，更优选为260 µmol•m-2•s-1。本发明所述壮芽生根培养的培养时间优选为25~35 d，更优选为30d。在本发明中，所述萌发培养、愈伤组织诱导和增殖培养、愈伤组织分化培养和壮芽生根培养优选在组培瓶中进行，所述组培瓶优选为直径7.5cm高11.0cm的圆柱瓶子，所述培养瓶中培养基的厚度优选为2.0~2.5cm。
本发明诱导培养、继代培养、分化培养、不定芽壮芽培养和壮芽生根培养的组培瓶规格相同。本发明所述愈伤组织诱导培养基、丛生芽诱导培养基、分化培养基、不定芽壮芽培养基、壮芽生根培养基灭菌后倒入组培瓶中，本发明对所述灭菌的方式没有特殊限定，采用常规的方式即可。
本发明壮芽生根培养后优选得到鳞茎直径0.3~0.5cm、根系3~5条的石蒜属植物试管苗。本发明所述试管苗的鳞茎直径优选为0.3~0.5cm，更优选为0.4cm，本发明所述试管苗的根系优选为3~5条，更优选为4条。本发明所述壮芽生根培养后得到试管苗，所述试管苗同时鳞茎直径0.3~0.5cm、根系3~5条两个条件后进行炼苗移栽和移栽培养，提高试管苗的成活率。
得到试管苗后，本发明优选对所述试管苗进行炼苗和移栽培养。在本发明中，所述炼苗优选在室内完成，所述炼苗的温度优选为石蒜属植物生长的温度为10℃以上即可，所述炼苗的时间优选为2~3d，更优选为2.5d。本发明优选炼苗时将壮芽生根培养组培瓶松盖后，置于自然散射光下放置2~3d。
在本发明中，所述移栽培养优选在室内完成，所述移栽培养时优选将炼苗后的试管苗洗净根部后移栽至基质中培养，所述移栽培养用基质优选包括以下体积份的组分：泥炭土0.5~1.5份、珍珠岩0.5~1.5份和田园土0.5~1.5份。本发明所述泥炭土、珍珠岩和田园土的体积比优选为（0.5~1.5）：（0.5~1.5）：（0.5~1.5），进一步优选为（0.8~1.3）：（0.8~1.3）：（0.8~1.3），更优选为1：1：1；所述移栽培养的温度优选为夜间温度不低于10℃即可，所述移栽培养的温度优选为10℃~28℃，进一步优选为15℃~25℃，更优选为20℃。移栽培养间，本发明优选对所述基质进行消毒，本发明对所述消毒的方式没有特殊限定，本发明优选应用800倍~1000倍多菌灵对基质进行消毒处理，更优选为900倍多菌灵。
本发明对所述移栽培养时应用的穴盘的来源和规格没有特殊限定，采用常规产品即可。本发明中所述应用的穴盘规格优选为10行×10列，高度为10cm。本发明优选每个穴盘中栽100株试管苗。
本发明所述再生培养基包括愈伤组织诱导培养基、分化培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基，花序再生方法包括以下步骤：将石蒜属植物花序接种在愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导培养，得到花序愈伤组织；
将所述花序愈伤组织接种于分化培养基进行分化培养，得到愈伤组织不定芽；
将所述愈伤组织不定芽接种于不定芽壮芽培养基中进行壮芽培养，得到仔球；
将所述仔球转接到壮芽生根培养基上进行壮芽生根培养，所述壮芽生根培养后进行炼苗和移栽培养。
本发明将石蒜属植物花序接种在诱导培养基上进行诱导培养，得到花序愈伤组织，本发明所述花序的采集、清洗和消毒参数参见上文的优选值，在此不再赘述。本发明所述诱导培养的参数参见上文的优选值，在此不再赘述。本发明在所述愈伤组织诱导培养过程中，优选还包括将诱导培养40~50d的培养产物转接至新的诱导培养基进行继代培养，得到愈伤组织，更优选为诱导培养45 d后在花瓣基部、花瓣与子房相连的部位出现淡黄色的凸起，所述淡黄色凸起按照诱导培养基进行继代培养1次，淡黄色的凸起逐渐分化成愈伤组织。本发明所述诱导培养的时间从小花接种于诱导培养基开始计算至得到淡黄色的凸起分化成愈伤组织为止。
愈伤组织诱导培养后，得到直径不小于1.0 cm的愈伤组织，本发明优选还包括对花序愈伤组织进行增殖培养。本发明所述增殖培养过程中还包括继代培养，本发明所述继代培养优选为只更换培养基，本发明所述继代培养的周期优选为30d。本发明所述增殖培养的培养基同诱导培养基。在本发明中，所述增殖培养的温度优选为24~26℃，更优选为25℃。本发明所述增殖培养优选在无光照的条件下进行，本发明所述增殖培养优选为得到直径不小于1.5cm的花序愈伤组织团块为止。本发明所述增殖培养的培养时间优选为30~60d，更优选为60d。本发明所述愈伤组织增殖30~35d后，按照原配方继续继代培养1~2次，花序愈伤组织继续膨大、增殖。本发明所述愈伤组织诱导时间从花序愈伤组织诱导生成后开始计算。
得到花序愈伤组织后，本发明将所述花序愈伤组织接种于分化培养基进行分化培养，得到愈伤组织不定芽。本发明所述接种前优选将花序愈伤组织优选分成直径为1.0~1.5cm的小块接种到分化培养基中，更优选为直径为1.3cm。
在本发明中，所述分化培养的温度优选为24~26℃，更优选为25℃。在本发明中，所述分化培养优选在光照条件下进行的，所述光照的时间分别优选为12~16 h/d，进一步优选为12~13 h/d，更优选为12 h/d；所述光照的强度优选为100~300 µmol•m-2•s-1，进一步优选为180~240 µmol•m-2•s-1，更优选为220 µmol•m-2•s-1。本发明所述分化培养的培养时间优选为30~35d，更优选为33d。
愈伤组织分化培养得到愈伤组织不定芽；本发明优选愈伤组织不定芽的长度大于0.3cm后进行不定芽壮芽培养。本发明所述不定芽的壮芽培养的参数优选值在上文已经论述，在此不再赘述。
不定芽壮芽培养后，不定芽膨大成直径不小于0.2 cm的仔球，本发明对所述仔球进行壮芽生根培养。本发明所述壮芽生根培养的参数优选值在上文已经论述，在此不再赘述。
壮芽生根培养后得到试管苗，本发明优选对所述试管苗进行炼苗和移栽得到组培苗，本发明所述炼苗和移栽的参数优选值在上文已经论述，在此不再赘述。
本发明优选花序不定芽培养得到的试管苗和愈伤组织不定芽培养得到的试管苗炼苗和移栽后，得到石蒜属植物组培苗。本发明优选对石蒜属植物组培苗进行常规管理。在本发明中，所述常规管理优选包括组培苗的水分管理和施肥管理。所述水分管理优选包括组培苗定植后优选白天每3~4小时喷雾水0.5~1 min；生根后白天每6~8小时喷雾水0.5~1.0min；休眠期白天每10~12小时喷雾水0.5~1.0 min。本发明喷水后达到土壤湿润状态即可。本发明所述施肥管理优选包括移栽后第一个到第二个生长季不施肥，移栽至大田种植后，休眠期施有机肥1000kg/ha；叶期施用氮、磷、钾复合肥，氮肥中N的施用量为150kg/ha，磷肥中P2O5的施用量为150kg/ha，钾肥中K2O的施用量为50kg/ha；根据N、P2O5、K2O的施用量及施用的成品肥料中的N、P2O5、K2O的质量含量计算出需要施用的成品肥料的施用量即可，秋出叶石蒜属植物如石蒜、忽地笑分3次施入，春出叶石蒜属植物如换锦花、长筒石蒜分两次施入。
本发明所述生长季为营养生长期，确切说为有叶子的时期。石蒜属分秋出叶和春出叶两种类型。秋出叶种类的营养生长季一般是从9月到次年4月；春出叶种类的营养生长季是元月中下旬到5月；本发明的技术方案采用石蒜属植物花序中未开放的小花为外植体、保留鳞茎而不进行破坏性的取样，采用含氯消毒剂如次氯酸钠消毒灭菌，有效地降低了污染率，避免使用剧毒的消毒剂如HgCl2，对于石蒜属组培快繁技术的推广应用十分有利。
本发明中换锦花诱导培养后只得到了愈伤组织，石蒜、长筒石蒜和忽地笑诱导培养后只获得了丛生芽，本发明中所述的愈伤组织诱导培养或者丛生芽诱导培养的选择与石蒜的品种相关。
本发明的创新点是在于采用花序（未开放小花）为外植体，采用特定生长调节剂组合，进行丛生芽或愈伤组织的诱导。现有技术中的石蒜属植物采用鳞茎盘为外植体，主要是因为鳞茎盘生长在土壤中，寄生和共生的微生物种类和数量都非常对，彻底消毒很难做到。鳞茎盘为外植体育苗时即使初代培养无污染，随着培养时间的延长，污染率也会增加。以花序为外植体进行快繁和其他科学研究，随着培养时间的延长，除去操作因素（如霉菌污染），污染几乎没有再次出现。同时本发明技术方案以花序为外植体进行育苗，提高了繁殖系数和繁殖效率。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1 以石蒜花序为外植体的快繁技术体系的建立
（1）外植体的准备。花序的采集：在9月中旬的石蒜花期采集花序。花序采集的具体过程如下：选取花苔高度28cm的石蒜植株，在花序轴距离花序1.2cm处，剪下整个花序。花序带回实验室后，去掉花序总苞片，去离子水冲洗2次，洗净表面的灰尘；然后剪去花序轴，将花序中的小花分成单朵，备用。
（2）外植体的灭菌。将步骤（1）的石蒜小花转移至在超净工作台上先用75%的酒精漂洗40s，无菌水冲洗2次；然后用有效氯含量2.5%的次氯酸钠灭菌11min，无菌水冲洗4次，无菌吸水纸吸干表面的水分，备用。
（3）丛生芽的诱导。将步骤（2）的已灭菌的小花，以水平方式放置于芽诱导培养基上，经过45d培养后，从花瓣基部、花瓣与子房相连的部位或者花瓣中下部出现白色的凸起。之后，利用相同的培养基配方（即芽诱导培养基）进行继代培养1次，继代培养的时间为30d。白色的凸起逐渐分化成不定芽。丛生芽诱导培养温度为25±1℃，无光照。丛生芽诱导培养基的组成为以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、5.0mg/L6-BA和2.0mg/L2,4-D；芽诱导培养基的pH值为5.80。
（4）不定芽的壮芽培养。步骤（3）直接由花序诱导出丛生芽的长度大于0.3cm后转接到壮芽培养基上进行壮芽培养。壮芽培养温度为25±1℃，光照强度为100~300 µmol·m-2·s-1，光照时间为16h。壮芽培养共1个周期（1个周期为30 d），直至不定芽膨大成直径不小于0.2 cm的仔球。不定芽壮芽培养基组成为：以MS为基本培养基，还仅在培养基中添加蔗糖70g/L、琼脂7.5g/L、2.0mg/L6-BA和0.5mg/LNAA；培养基的pH值为5.80。
（5）壮芽和生根培养。将步骤（4）获得的仔球转接到壮芽生根培养基上进行壮芽和生根培养。壮芽和生根培养的温度为25±1℃，光照强度100~300 µmol·m-2·s-1，光照时间16h。培养30d后，仔球即可长成鳞茎直径约0.3cm、根系3~5条的试管苗。壮芽生根培养基组成为：以MS为基础培养基，还仅在培养基中添加蔗糖70g/L、琼脂7.5g/L、2.0mg/L6-BA、0.5 mg/LNAA和2.0mg/L IBA；培养基的pH值为5.80。
（6）炼苗和移栽。将步骤（5）获得的试管苗进行炼苗和移栽。炼苗在室内进行，炼苗具体过程为：将组培瓶盖拧松，置于自然散射光下，放置3d；然后，把瓶盖打开，再放置2天；炼苗温度为室温。炼苗完成后，用镊子将试管苗取出，洗去根部的培养基，移栽到10×10的穴盘中进行移栽培养。移栽培养温度为夜晚15℃，白天不高于25℃，时间为10月。移栽培养的栽培基质为泥炭土：珍珠岩和田园土，泥炭土：珍珠岩和田园土的体积比为1:1:1，栽培基质须经800-1000倍多菌灵消毒处理。炼苗和移栽后进行正常的水肥管理。组培苗定植后正常的水分管理：白天每3-4小时喷雾0.5-1 min；生根后每6-8小时喷雾0.5-1.0min；休眠期每10-12小时喷雾0.5-1.0min。施肥策略：移栽后第一到二个生长季不施肥。从移栽至大田种植后，休眠期施有机肥1000 kg/ha。叶期施用氮、磷、钾复合肥，氮肥中N的施用量为150kg/ha，磷肥中P2O5的施用量为150kg/ha，钾肥中K2O的施用量为50kg/ha；分3次施入。
对比例1-1
同实施例1，唯一的区别在于外植体为鳞茎，外植体用质量浓度为0.1%升汞灭菌30min。
对比例1-2
只进行了外植体的准备、外植体的灭菌、丛生芽的诱导，操作步骤同实施例1，唯一的区别在于丛生芽诱导培养基的基础培养基为MS。
对比例1-3
只进行了外植体的准备、外植体的灭菌、丛生芽的诱导，操作步骤同实施例1，唯一的区别在于丛生芽诱导培养基的基础培养基为1/2MS。
对比例1-4
只进行了外植体的准备、外植体的灭菌、丛生芽的诱导，操作步骤同实施例1，唯一的区别在于丛生芽诱导培养基的基础培养基为DKW。
对比例1-5
只进行了外植体的准备、外植体的灭菌、丛生芽的诱导，操作步骤同实施例1，唯一的区别在于丛生芽诱导培养基的基础培养基为WPM。
对比例1-6
只进行了外植体的准备、外植体的灭菌、丛生芽的诱导，操作步骤同实施例1，唯一的区别在于丛生芽诱导培养基的基础培养基为N6。
实施例2以换锦花花序为外植体的换锦花再生体系的建立
（1）外植体的准备。花序的采集时间为7月下旬的换锦花花期。花序采集的具体过程如下：选取的花苔高度为30cm的换锦花植株，在花序轴距离花序1.3cm处，剪下整个花序，带回实验室；去掉花序总苞片，去离子水冲洗3次，洗净表面的灰尘；然后剪去花序轴，将花序中的小花分成单朵，备用。
（2）外植体的灭菌。将步骤（1）的换锦花小花转移至在超净工作台上用75%的酒精漂洗35s，无菌水冲洗2次；然后采用有效氯含量2.5%的含氯消毒剂灭菌12min，无菌水冲洗4次，无菌吸水纸吸干表面的水分，备用。
（3）愈伤组织的诱导。将步骤（2）已灭菌的小花，以水平方式接种到愈伤组织诱导培养基上经过41d的培养后，从花瓣基部、花瓣与子房相连的部位出现淡黄色的凸起。之后，相同的培养基配方（即愈伤组织诱导培养基）进行继代培养1次为30d，继代培养后淡黄色的凸起分化成愈伤组织。愈伤组织的诱导培养温度25±1℃，无光照。愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、6.0 mg/L KT和2.0mg/L 2,4-D；培养基的pH值为5.80。
（4）愈伤组织的增殖培养。步骤（3）的愈伤组织诱导生成后，继续原配方即愈伤组织诱导培养基进行增殖培养，每30 d继代培养一次，直至愈伤组织增殖成直径不小于1.5cm的团块。经过两个周期60d的培养。增殖培养温度25±1℃，无光照。
（5）愈伤组织的分化培养。将步骤（4）的直径不小于1.5cm的愈伤组织从外植体上切下，分成直径1.0-1.5 cm的小块，转接到愈伤组织分化培养基上，进行芽分化培养，培养温度为25±1℃，光照强度为100~300 µmol·m-2·s-1，光照时间为12h。芽分化培养的时间为32d，芽分化培养至长度大于0.3cm为止。
芽分化培养的培养基组成为：以MS为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、2.5 mg/L 6-BA和0.8mg/L NAA；培养基的pH值为5.80。
（6）不定芽的壮芽培养。在芽分化完成后，获得的不定芽均转接到壮芽培养基上进行壮芽培养。壮芽培养温度为25±1℃，光照强度为100~300 µmol·m-2·s-1，光照时间为16h。共培养2个周期60d，直至不定芽膨大成直径不小于0.2 cm的仔球。壮芽培养培养基组成为：以MS为基本培养基，再添加蔗糖70g/L、琼脂7.5g/L、2.0 mg/L 6-BA 和0.5 mg/LNAA；培养基的pH值为5.80。
（7）壮芽和生根培养。将步骤（6）获得的仔球转接到壮芽生根培养基上进行壮芽和生根培养。壮芽和生根培养温度为25±1℃，光照强度为100~300 µmol·m-2·s-1，光照时间为16 h。壮芽和生根培养30d后，仔球即可长成鳞茎直径约0.3cm、根系3-5条的试管苗。壮芽生根培养基的配方为：以MS为基本培养基，再添加蔗糖70g/L、琼脂7.5g/L、2.0mg/L6-BA、0.5mg/LNAA和2.5mg/LIBA；培养基的pH值为5.80。
（8）炼苗和移栽。炼苗在室内进行。将组培瓶拧松，置于自然散射光下，放置2d；然后，把瓶盖打开，再放置3天；炼苗温度为室温。炼苗完成后，用镊子将试管苗取出，洗去根部的培养基，移栽到10×10的穴盘中进行移栽培养。移栽培养温度为白天25℃、夜间15℃，时间为10月。栽培基质为泥炭土：珍珠岩和田园土的体积比为1:1:1，栽培基质须经800倍多菌灵消毒处理。炼苗和移栽之后进行正常的水肥管理。组培苗定植后正常的水分管理：白天每3~4小时喷雾0.5~1 min；生根后每6~8小时喷雾0.5~1.0min；休眠期每10~12小时喷雾0.5~1.0min。施肥策略：移栽后第一到二个生长季不施肥。从移栽至大田种植后，休眠期施有机肥1000 kg/ha。叶期施用氮、磷、钾复合肥，氮肥中N的施用量为150kg/ha，磷肥中P2O5的施用量为150kg/ha，钾肥中K2O的施用量为50kg/ha；分2次施入。
实施例2-2
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、4.0 mg/L KT和1.0mg/L 2,4-D。
实施例2-3
同实施例2-2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、8.0 mg/L KT和1.0mg/L 2,4-D。
实施例2-4
同实施例2-2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、4.0 mg/L KT和2.0mg/L 2,4-D。
实施例2-5
同实施例2-2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、6.0 mg/L KT和2.0mg/L 2,4-D。
实施例2-6
同实施例2-2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、8.0 mg/L KT和2.0mg/L 2,4-D。
实施例2-7
同实施例2-2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、4.0 mg/L KT和3.0mg/L 2,4-D。
实施例2-8
同实施例2-2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、6.0 mg/L KT和3.0mg/L 2,4-D。
实施例2-9
同实施例2-2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、8.0 mg/L KT和3.0mg/L 2,4-D。
对比例2-1
同实施例2，唯一的区别在于外植体为鳞茎，外植体用质量浓度为0.1%升汞灭菌32min。
对比例2-2
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、2.0 mg/L KT和0.5mg/L 2,4-D。
对比例2-3
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、4.0 mg/L KT和0.5mg/L 2,4-D。
对比例2-4
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、6.0 mg/L KT和0.5mg/L 2,4-D。
对比例2-5
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、8.0 mg/L KT和0.5mg/L 2,4-D。
对比例2-6
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、10.0 mg/L KT和0.5mg/L 2,4-D。
对比例2-7
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、2.0 mg/L KT和1.0mg/L 2,4-D。
对比例2-8
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、10.0 mg/L KT和1.0mg/L 2,4-D。
对比例2-9
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、2.0 mg/L KT和2.0mg/L 2,4-D。
对比例2-10
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、10.0 mg/L KT和2.0mg/L 2,4-D。
对比例2-11
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、2.0 mg/L KT和3.0mg/L 2,4-D。
对比例2-12
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、10.0 mg/L KT和3.0mg/L 2,4-D。
对比例2-13
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、2.0 mg/L KT和4.0mg/L 2,4-D。
对比例2-14
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、4.0 mg/L KT和4.0mg/L 2,4-D。
对比例2-15
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、6.0 mg/L KT和4.0mg/L 2,4-D。
对比例2-16
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、8.0 mg/L KT和4.0mg/L 2,4-D。
对比例2-17
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，3个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（3）中的诱导愈伤组织诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、10.0 mg/L KT和4.0mg/L 2,4-D。
对比例2-18
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导、（4）愈伤组织的增殖培养、（5）愈伤组织的分化培养5个步骤。上述5个步骤同实施例2，唯一的区别在于步骤（5）中的芽分化培养的培养基组成为：以MS为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、2.5 mg/L 6-BA 和0.8mg/L IBA。
对比例2-19
同对比例2-18，唯一的区别在于步骤（5）中的芽分化培养的培养基组成为：以MS为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、2.5 mg/L 6-BA 和0.8mg/L IAA。
对比例2-20
同对比例2-18，唯一的区别在于步骤（5）中的芽分化培养的培养基组成为：以MS为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、2.5 mg/L TDZ 和0.8mg/L NAA。
对比例2-21
同对比例2-18，唯一的区别在于步骤（5）中的芽分化培养的培养基组成为：以MS为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、2.5 mg/L TDZ 和0.8mg/L IBA。
对比例2-22
同对比例2-18，唯一的区别在于步骤（5）中的芽分化培养的培养基组成为：以MS为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、2.5 mg/L TDZ 和0.8mg/L IAA。
对比例2-23
同对比例2-18，唯一的区别在于步骤（5）中的芽分化培养的培养基组成为：以MS为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、2.5 mg/L KT 和0.8mg/L NAA。
对比例2-24
同对比例2-18，唯一的区别在于步骤（5）中的芽分化培养的培养基组成为：以MS为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、2.5 mg/L KT 和0.8mg/L IBA。
对比例2-25
同对比例2-18，唯一的区别在于步骤（5）中的芽分化培养的培养基组成为：以MS为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、2.5 mg/L KT 和0.8mg/L IAA。
实施例3 以长筒石蒜花序为外植体的长筒石蒜快繁体系的建立
（1）外植体的准备。花序的采集：在7月上旬的长筒石蒜花期采集花序。花序采集的具体过程如下：选取花苔高度43cm的长筒石蒜植株，在花序轴距离花序1.5cm处，剪下整个花序。花序带回实验室后，去掉总苞片，去离子水冲洗3次，洗净表面的灰尘；然后剪去花序轴，将花序中的小花分成单朵，备用。
（2）外植体的灭菌。将步骤（1）的花序小花在超净工作台上用75%的酒精漂洗45s，无菌水冲洗3次；然后采用有效氯含量3%的次氯酸钠灭菌14 min，无菌水冲洗5次，无菌吸水纸吸干表面的水分，备用。
（3）丛生芽的诱导。将步骤（2）已灭菌的长筒石蒜小花，切掉小花花柄，进保留花被片和子房，以水平方式直接接种到芽诱导培养基上培养48d后，从花瓣基部、花瓣与子房相连的部位或者花瓣中下部出现白色的凸起。之后，相同的培养基配方（即芽诱导培养基）进行继代培养，白色的凸起逐渐分化成不定芽。丛生芽的诱导培养温度为25±1℃，无光照。芽诱导培养基的组成为以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、11.0mg/L6-BA和9.0 mg/L NAA；芽诱导培养基的pH值为5.78。
（4）不定芽的壮芽培养。在芽分化完成，长度大于0.3cm的不定芽均转接到壮芽培养基上进行壮芽培养。培养温度为25±1℃，光照强度为100~300µmol·m-2·s-1，光照时间为16h。经过两个培养周期60d的培养，直至不定芽膨大成直径不小于0.2 cm的仔球。壮芽培养基组成为：以MS为基本培养基，还仅在培养基中添加蔗糖85g/L、琼脂7.5g/L、3.0mg/L6-BA和0.8mg/LNAA；培养基的pH值为5.79。
（5）壮芽和生根培养。将步骤（4）获得的仔球转接到壮芽生根培养基上进行壮芽和生根培养。壮芽生根培养基组成为：以MS为基本培养基，还再培养基中添加蔗糖90 g/L、琼脂7.5g/L、3.0 mg/L 6-BA、0.5 mg/L NAA和2.0 mg/L IBA。壮芽和生根培养温度为25±1℃，光照强度为100~300µmol·m-2·s-1，光照时间为16h。壮芽和生根培养30d后，仔球即可长成鳞茎直径0.5cm、根系3-5条的试管苗。
（6）炼苗和移栽。将步骤（5）获得的试管苗进行炼苗和移栽。炼苗在室内进行，炼苗具体过程为：将组培瓶开盖，置于自然散射光下，放置2d；然后，把瓶盖打开，再放置3天；炼苗温度为室温。炼苗完成后，用镊子将试管苗取出，洗去根部的培养基，移栽到10×10的穴盘中进行移栽培养。移栽培养温度为白天25℃、夜间15℃，时间为10月。移栽培养的栽培基质为体积比为1:1:1的泥炭土：珍珠岩和田园土，栽培基质须经800-1000倍多菌灵消毒处理。炼苗和移栽后进行正常的水肥管理。水肥管理同实施例2。
实施例3-2
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，同实施例3，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：
以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、5.0mg/L6-BA和5.0 mg/L NAA。
实施例3-3
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、7.0mg/L6-BA和5.0 mg/L NAA。
实施例3-4
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、9.0mg/L6-BA和5.0 mg/L NAA。
实施例3-5
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、11.0mg/L6-BA和5.0 mg/L NAA。
实施例3-6
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、13.0mg/L6-BA和5.0 mg/L NAA。
实施例3-7
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、15.0mg/L6-BA和5.0 mg/L NAA。
实施例3-8
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、5.0mg/L6-BA和7.0 mg/L NAA。
实施例3-9
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、7.0mg/L6-BA和7.0 mg/L NAA。
实施例3-10
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、9.0mg/L6-BA和7.0 mg/L NAA。
实施例3-11
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、11.0mg/L6-BA和7.0 mg/L NAA。
实施例3-12
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、13.0mg/L6-BA和7.0 mg/L NAA。
实施例3-13
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、15.0mg/L6-BA和7.0 mg/L NAA。
实施例3-14
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、5.0mg/L6-BA和9.0 mg/L NAA。
实施例3-15
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、7.0mg/L6-BA和9.0 mg/L NAA。
实施例3-16
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、9.0mg/L6-BA和9.0 mg/L NAA。
实施例3-17
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、11.0mg/L6-BA和9.0 mg/L NAA。
实施例3-18
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、13.0mg/L6-BA和9.0 mg/L NAA。
实施例3-19
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、15.0mg/L6-BA和9.0 mg/L NAA。
实施例3-20
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、5.0mg/L6-BA和11.0 mg/L NAA。
实施例3-21
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、7.0mg/L6-BA和11.0 mg/L NAA。
实施例3-22
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、9.0mg/L6-BA和11.0 mg/L NAA。
实施例3-23
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、11.0mg/L6-BA和11.0 mg/L NAA。
实施例3-24
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、13.0mg/L6-BA和11.0 mg/L NAA。
实施例3-25
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、15.0mg/L6-BA和11.0 mg/L NAA。
实施例3-26
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、5.0mg/L6-BA和13.0 mg/L NAA。
实施例3-27
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、7.0mg/L6-BA和13.0 mg/L NAA。
实施例3-28
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、9.0mg/L6-BA和13.0 mg/L NAA。
实施例3-29
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、11.0mg/L6-BA和13.0 mg/L NAA。
实施例3-30
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、13.0mg/L6-BA和13.0 mg/L NAA。
实施例3-31
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、15.0mg/L6-BA和13.0 mg/L NAA。
实施例3-32
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、5.0mg/L6-BA和15.0 mg/L NAA。
实施例3-33
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、7.0mg/L6-BA和15.0 mg/L NAA。
实施例3-34
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、9.0mg/L6-BA和15.0 mg/L NAA。
实施例3-35
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、11.0mg/L6-BA和15.0 mg/L NAA。
实施例3-36
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、13.0mg/L6-BA和15.0 mg/L NAA。
实施例3-37
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、15.0mg/L6-BA和15.0 mg/L NAA。
对比例3-1
同实施例3，唯一的区别在于外植体为鳞茎，外植体用质量浓度为0.1%升汞灭菌35min。
对比例3-2
只进行了外植体的准备、外植体的灭菌、丛生芽的诱导，操作步骤同实施例3，唯一的区别在于丛生芽诱导培养基的基础培养基为MS。
对比例3-3
只进行了外植体的准备、外植体的灭菌、丛生芽的诱导，操作步骤同实施例3，唯一的区别在于丛生芽诱导培养基的基础培养基为1/2MS。
对比例3-4
只进行了外植体的准备、外植体的灭菌、丛生芽的诱导，操作步骤同实施例3，唯一的区别在于丛生芽诱导培养基的基础培养基为DKW。
对比例3-5
只进行了外植体的准备、外植体的灭菌、丛生芽的诱导，操作步骤同实施例3，唯一的区别在于丛生芽诱导培养基的基础培养基为WPM。
对比例3-6
只进行了外植体的准备、外植体的灭菌、丛生芽的诱导，操作步骤同实施例3，唯一的区别在于丛生芽诱导培养基的基础培养基为N6。
对比例3-7
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、5.0mg/L6-BA和3.0 mg/L NAA。
对比例3-8
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、7.0mg/L6-BA和3.0 mg/L NAA。
对比例3-9
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、9.0mg/L6-BA和3.0 mg/L NAA。
对比例3-10
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、11.0mg/L6-BA和3.0 mg/L NAA。
对比例3-11
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、13.0mg/L6-BA和3.0 mg/L NAA。
对比例3-12
同实施例3-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，基本培养基中再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、15.0mg/L6-BA和3.0 mg/L NAA。
实施例4 以忽地笑花序为外植体的忽地笑快繁体系的建立
（1）外植体的准备。花序的采集：在9月上旬的忽地笑花期采集花序。花序采集的具体过程如下：选取花苔高度约40cm的忽地笑植株，在花序轴距离花序1.3cm处，剪下整个花序，带回实验室，去掉总苞片，去离子水冲洗3次，洗净表面的灰尘；然后切去花序轴，将花序中的小花分成单朵，备用。
（2）外植体的灭菌。将步骤（1）上述花序小花材料在超净工作台上用75%的酒精漂洗45s，无菌水冲洗3次；然后采用有效氯含量3%的次氯酸钠灭菌15 min，无菌水冲洗5次，无菌吸水纸吸干表面的水分，备用。
（3）丛生芽的诱导。将步骤（2）已灭菌的小花，以水平方式放置于芽诱导培养基上。若小花花柄长度超过1.0cm，可在子房处将其切下，单独作为外植体。芽诱导培养基的组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、11.0mg/L6-BA和2.0 mg/L2,4-D。在芽诱导培养基培养44d后，从花瓣基部、花瓣与子房相连的部位出现白色的凸起。之后，相同的培养基配方（芽诱导培养基）进行继代培养31d，白色的凸起逐渐分化成不定芽，不定芽的长度大于0.3cm后转接到不定芽的壮芽培养基。培养温度25±1℃，无光照。
（4）不定芽的壮芽培养。在芽分化完成，将丛生芽（丛生芽为一丛不定芽）切下，转接到壮芽培养基上进行壮芽培养。壮芽培养基的组成为：以MS培养基为基本培养基，再添加蔗糖75g/L、琼脂7.5g/L、2.5 mg/L 6-BA 和0.5 mg/L NAA。壮芽培养的温度为25±1℃，光照强度为100~300µmol·m-2·s-1，光照时间为16h。共培养2个周期60d，直至不定芽膨大成直径不小于0.2 cm的仔球。
（5）壮芽和生根培养。将步骤（4）获得的仔球转接到壮芽生根培养基上进行壮芽和生根培养。壮芽生根培养基的组成为：以MS为基本培养基，再添加蔗糖75g/L、琼脂7.5g/L、3.0mg/L 6-BA、0.4mg/L NAA和2.0mg/L IBA。壮芽和生根培养温度为25±1℃，光照强度为100~300 µmol·m-2·s-1，光照时间为16 h。壮芽和生根培养30d后，即可长成鳞茎直径0.3cm、根系3-5条的试管苗。
（6）炼苗和移栽。将步骤（5）获得的试管苗进行炼苗和移栽。炼苗在室内进行，炼苗具体过程为：将组培瓶开盖，置于自然散射光下，将组培瓶盖拧松，放置2d后，再将瓶盖打开，放置3d，炼苗即完成。炼苗温度为室温。炼苗完成后，用镊子将试管苗取出，洗去根部的培养基，移栽到10×10的穴盘中进行移栽培养。移栽培养夜间温度为20℃，白天温度不高于25℃，时间为秋季。移栽培养的栽培基质为泥炭土：珍珠岩和田园土，泥炭土：珍珠岩和田园土的体积比为1:1:1，栽培基质须经800多菌灵消毒处理。炼苗和移栽之后进行正常的水肥管理。水肥管理同实施例1。
实施例4-2
只进行了（1）外植体的准备、（2）外植体的灭菌、（3）愈伤组织的诱导共3个步骤，同实施例3，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、5.0mg/L6-BA和1.0 mg/L2,4-D。
实施例4-3
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、7.0mg/L6-BA和1.0 mg/L2,4-D。
实施例4-4
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、9.0mg/L6-BA和1.0 mg/L2,4-D。
实施例4-5
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、11.0mg/L6-BA和1.0 mg/L2,4-D。
实施例4-6
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、13.0mg/L6-BA和1.0 mg/L2,4-D。
实施例4-7
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、15.0mg/L6-BA和1.0 mg/L2,4-D。
实施例4-8
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、5.0mg/L6-BA和2.0 mg/L2,4-D。
实施例4-9
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、7.0mg/L6-BA和2.0 mg/L2,4-D。
实施例4-10
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、9.0mg/L6-BA和2.0 mg/L2,4-D。
实施例4-11
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、13.0mg/L6-BA和2.0 mg/L2,4-D。
实施例4-12
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、15.0mg/L6-BA和2.0 mg/L2,4-D。
实施例4-13
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、5.0mg/L6-BA和3.0 mg/L2,4-D。
实施例4-14
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、7.0mg/L6-BA和3.0 mg/L2,4-D。
实施例4-15
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、9.0mg/L6-BA和3.0 mg/L2,4-D。
实施例4-16
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、11.0mg/L6-BA和3.0 mg/L2,4-D。
实施例4-17
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、13.0mg/L6-BA和3.0 mg/L2,4-D。
实施例4-18
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、15.0mg/L6-BA和3.0 mg/L2,4-D。
对比例4-1
同实施例4，唯一的区别在于外植体为鳞茎，外植体用质量浓度为0.1%升汞灭菌34min。
对比例4-2
只进行了外植体的准备、外植体的灭菌、丛生芽的诱导，操作步骤同实施例4，唯一的区别在于丛生芽诱导培养基的基础培养基为MS。
对比例4-3
只进行了外植体的准备、外植体的灭菌、丛生芽的诱导，操作步骤同实施例4，唯一的区别在于丛生芽诱导培养基的基础培养基为1/2MS。
对比例4-4
只进行了外植体的准备、外植体的灭菌、丛生芽的诱导，操作步骤同实施例4，唯一的区别在于丛生芽诱导培养基的基础培养基为DKW。
对比例4-5
只进行了外植体的准备、外植体的灭菌、丛生芽的诱导，操作步骤同实施例4，唯一的区别在于丛生芽诱导培养基的基础培养基为WPM。
对比例4-6
只进行了外植体的准备、外植体的灭菌、丛生芽的诱导，操作步骤同实施例4，唯一的区别在于丛生芽诱导培养基的基础培养基为N6。
对比例4-7
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、3.0mg/L6-BA和0.5 mg/L2,4-D。
对比例4-8
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、5.0mg/L6-BA和0.5 mg/L2,4-D。
对比例4-9
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、7.0mg/L6-BA和0.5 mg/L2,4-D。
对比例4-10
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、9.0mg/L6-BA和0.5 mg/L2,4-D。
对比例4-11
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、11.0mg/L6-BA和0.5 mg/L2,4-D。
对比例4-12
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、13.0mg/L6-BA和0.5 mg/L2,4-D。
对比例4-13
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、15.0mg/L6-BA和0.5 mg/L2,4-D。
对比例4-14
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、17.0mg/L6-BA和0.5 mg/L2,4-D。
对比例4-15
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、3.0mg/L6-BA和1.0mg/L2,4-D。
对比例4-16
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、17.0mg/L6-BA和1.0mg/L2,4-D。
对比例4-17
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、3.0mg/L6-BA和2.0mg/L2,4-D。
对比例4-18
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、17.0mg/L6-BA和2.0mg/L2,4-D。
对比例4-19
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：
以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、3.0mg/L6-BA和3.0mg/L2,4-D。
对比例4-20
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、17.0mg/L6-BA和3.0mg/L2,4-D。
对比例4-21
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、3.0mg/L6-BA和4.0mg/L2,4-D。
对比例4-22
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、5.0mg/L6-BA和4.0mg/L2,4-D。
对比例4-23
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、7.0mg/L6-BA和4.0mg/L2,4-D。
对比例4-24
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、9.0mg/L6-BA和4.0mg/L2,4-D。
对比例4-25
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、11.0mg/L6-BA和4.0mg/L2,4-D。
对比例4-26
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、13.0mg/L6-BA和4.0mg/L2,4-D。
对比例4-27
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、15.0mg/L6-BA和4.0mg/L2,4-D。
对比例4-28
同实施例4-2，唯一的区别在于步骤（3）中的芽诱导培养基组成为：以B5为基本培养基，再添加蔗糖30g/L、琼脂7.5g/L、17.0mg/L6-BA和4.0mg/L2,4-D。
对上述实施例和对比例的污染率、诱导率和繁殖系数进行计算，计算公式如下：结果见表1~表6。
污染率（%）= 污染的外植体数*100/接种的外植体总数;
繁殖系数=每个外植体萌发的芽数;
诱导率=出愈外植体数*100/接种的外植体总数或出芽外植体数*100/接种的外植体总数。
表1 以忽地笑花序为外植体丛生芽诱导培养基激素浓度范围的确定（单位：mg/L）
表2 以长筒石蒜花序为外植体丛生芽诱导培养基激素浓度范围的确定（单位：mg/L）
表3以换锦花花序为外植体愈伤组织诱导培养基的激素浓度范围的确定
表4 以鳞茎盘和花序为外植体污染率对比
表5实施例1和对比例1-2~对比例1-6、实施例3和对比例3-2~对比例3-6、实施例4和对比例4-2~对比例4-6基本培养基类型对以花序为外植体石蒜属丛生芽诱导培养基诱导率的影响
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表6换锦花花序愈伤组织分化培养基激素种类的确定（单位：mg/L）
根据表1-表6可知，采用石蒜花序为外植体无需使用剧毒的消毒物质污染率低，诱导率高、繁殖倍数高，提高了石蒜繁殖效率。
综上所述，利用本发明的技术方案可以降低石蒜属植物组培的污染率，提高石蒜属植物的繁殖效率和繁殖系数。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (9)

1.一种石蒜属植物小花再生培养基，其特征在于，所述再生培养基包括丛生芽诱导培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基；或者，
所述再生培养基包括愈伤组织诱导培养基、分化培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基；
所述丛生芽诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：5.0~15.0mg/L 6-BA、1.0~3.0mg/L 2,4-D、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；
或所述丛生芽诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：5.0~15.0mg/L 6-BA、5.0~15.0mg/L NAA、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；
所述愈伤组织诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：4.0~8.0mg/L KT、1.0~3.0mg/L 2,4-D、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；
所述分化培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：2.0~3.0mg/L 6-BA、0.5~1.5mg/LNAA、30g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂；
所述不定芽壮芽培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：0.2~1.0mg/L NAA、2.0~3.0mg/L 6-BA、60~90g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂；
所述壮芽生根培养基以MS培养基为基本培养基，还包括：2.0~3.0mg/L 6-BA、0.2~0.5mg/L NAA、1.0~3.0mg/L IBA、60~90g/L蔗糖和6.5~8.0g/L琼脂；
所述石蒜属植物为石蒜、长筒石蒜或忽地笑时，所述再生培养基包括丛生芽诱导培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基；所述石蒜属植物为石蒜或忽地笑时，所述丛生芽诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：5.0~15.0mg/L 6-BA、1.0~3.0mg/L 2,4-D、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；
所述石蒜属植物为长筒石蒜时，所述丛生芽诱导培养基以B5培养基为基本培养基，还包括：5.0~15.0mg/L 6-BA、5.0~15.0mg/L NAA、蔗糖30g/L和琼脂6.5~8.0g/L；
所述石蒜属植物为换锦花时所述再生培养基包括愈伤组织诱导培养基、分化培养基、不定芽壮芽培养基和壮芽生根培养基。
2.一种石蒜属植物小花再生方法，其特征在于，以石蒜属植物小花作为外植体采用权利要求1所述的再生培养基进行。
3.根据权利要求2所述的小花再生方法，其特征在于，当所述石蒜属植物为石蒜、长筒石蒜或忽地笑时，所述小花再生方法包括以下步骤：
将石蒜属植物的小花接种在丛生芽诱导培养基上进行丛生芽诱导培养，得到小花不定芽；
将所述小花不定芽接种于不定芽壮芽培养基中进行壮芽培养，得到仔球；
将所述仔球转接到壮芽生根培养基上进行壮芽生根培养，得到试管苗；
当所述石蒜属植物为换锦花时，所述小花再生方法包括以下步骤：
将石蒜属植物的小花接种在愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导培养，得到小花愈伤组织；
将所述小花愈伤组织接种于分化培养基进行分化培养，得到愈伤组织不定芽；
将所述愈伤组织不定芽接种于不定芽壮芽培养基中进行壮芽培养，得到仔球；
将所述仔球转接到壮芽生根培养基上进行壮芽生根培养，得到试管苗。
4.根据权利要求3所述的小花再生方法，其特征在于，在愈伤组织诱导培养或丛生芽诱导培养前，还包括：将小花分成单朵后消毒；所述消毒包括：用75%的酒精漂洗30~45s，无菌水冲洗2~3次，然后采用有效氯含量2%~3%的含氯消毒剂灭菌10~15 min，无菌水冲洗4~5次。
5.根据权利要求2所述的小花再生方法，其特征在于，将花序中的小花分成单朵接种在再生培养基上；所述花序在石蒜属植物的花苔高度为花序开放后花苔高度40%~60%的期间采集；
所述花序的采集通过如下方式获得：在石蒜属植物花序轴1.0~1.5cm处，剪下整个花序，将花序中的小花分成单朵接种在再生培养基上。
6.根据权利要求3所述的小花再生方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养为暗培养；所述分化培养、壮芽培养和壮芽生根培养均为光培养，光照的时间独立为12~16h/d，所述光照的强度100~300 µmol•m-2•s-1。
7.根据权利要求3所述的小花再生方法，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养的时间为70~80d；所述分化培养的时间为30~35d；所述壮芽培养的时间为30~60d；所述壮芽生根培养的时间为25~35d。
8.根据权利要求3所述的小花再生方法，其特征在于，在所述丛生芽诱导培养过程中，还包括将诱导培养40~50d的培养产物转接至新的诱导培养基进行继代培养，得到小花不定芽。
9.根据权利要求3所述的小花再生方法，其特征在于，所述小花不定芽和愈伤组织不定芽的长度分别大于0.3cm。
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